СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ У ЖЕНЩИН Российский патент 2004 года по МПК G01N33/49 A61B5/02 

Изобретение относится к медицине, а именно к внутренним болезням.

Эндотелиальная выстилка сосудов регулирует местные процессы гемостаза, пролиферации, миграции клеток в сосудистую стенку и сосудистый тонус. Сформировалось представление о дисфункции эндотелия, под которой понимают дисбаланс между факторами, обеспечивающими все эти процессы (Gibbons G.H. Endothelial function as a determinant of vascular function and structure: a new therapeutic target. Am J Cardiol 1997; 79:3-8.; Quyyumi A.A. Endothelial function in health and disease: new insights into the genesis of cardiovascular disease: new insights into the genesis of cardiovascular disease. Am J Med 1998; 105: 32S-39S.). В качестве маркера повреждения эндотелия было предложено обнаружение в периферической крови циркулирующих эндотелиальных клеток (Hiadovec J. Circulating endothelial cells as a sign of vessel wall lesions. Physiol Bohemoslov 1978; 27:2:140-144). Повышение количества циркулирующих эндотелиальных клеток в крови, отмеченное у больных ишемической болезнью сердца (Hiadovec J. et al. Circulating endothelial cells in acute myocardial infarction and angina pectoris. Klin. Wochenschr. 1978 Oct.: 15; 56:20:1033-36.; Bory M. et al. Detection of circulating cells: a new diagnostic test of angina at rest. Arch. Mat. Coeur. Vaiss. 1995 Dec.: 88:12:1827-31.), эссенциальной гипертензией (Zhu Z. Changes in circulating endothelial cells in patients with essential hypertension. Chung Hua Hsin Hsueh Kuan Ping Tsa Chin: 1991 Aug: 19:4:217-8.), у больных хирургического профиля (Yang Y. et al. Circulating endothelial cells in surgical patients. Cor-Vasa: 1992:34(4):359-64.), у пациентов с посттромбофлеботическим синдромом (Montecchio g.P. et al. Centella Asiatica Triterpenic Fraction (CATTF) reduces the number of circulating endothelial cells subjects with post phlebitic syndrome. Haemotologica 1991 May-Jun.: 76(3):256-9.), при хронической никотиновой интоксикации (Davis J.W. et al. Lack of effect of aspirin on cigarette smoce - induced increase in circulating endothelial cells. Heamostasis. 1887: 17:1-2,66-9.) и при некоторых других патологических процессах, отражает степень поражения сосудов и позволяет судить о тяжести течения заболевания, об эффективности проводимой терапии.

Методические подходы, используемые для определения циркулирующих в крови клеток эндотелия, разнообразны и включают в себя количественное определение эндотелиальных клеток (Hladovec J., 1978), иммуноцитометрические и иммуномагнитные методы (Bory M. et al. Detection of circulating cells: a new diagnostic test of angina at rest. Arch. Mal. Coeur. Vaiss. 1995 Dec.: 88:12:1827-31; Drancourt M. et al. Diagnosis of Mediterranenean spotted fever by indirect immunofluorescence of Rickettsia conorii in circulating endothelial cells isolated with monoclonal antibody coated immunomagnetic beads. J. Infect. Dis. 1992 Sep.: 166(3):660-3.; George F. et al. Demonstration of Rickettsia conorii - induced endothelial injury in vivo by measuring circulating endothelial cells, thrombomodulin and von Willebrand factor in patients with Mediterranean spotted fever. Blood. 1993 Oct. 1:82(7):2109-16). Наиболее простым и вместе с тем чувствительным и информативным методом является определение циркулирующих в крови клеток эндотелия методом Hiadovec J.(1978). Принцип метода основан на выделении эндотелиоцитов вместе с тромбоцитами с последующим осаждением тромбоцитов при помощи АДФ. Венозная кровь в объемах 4-5 мл отбирается в пробирки, в качестве стабилизатора используется 3,8% раствор цитрата натрия из расчета 1:9. Тромбоцитарная масса отделяется центрифугированием (1000 оборотов, 10 мин). Тромбоциты отделяются путем добавления раствора АДФ (из расчета 0,4 мл раствора АДФ на 1 мл супернатата), перемешивания смеси в течение 10 мин и центрифугирования (1000 оборотов, 10-15 мин). Бестромбоцитарная плазма осторожно отделяется от осажденных тромбоцитов и повторно центрифугируется (1000 оборотов, 20 мин). Полученная надосадочная жидкость сливается и к осадку добавляется 0,1 мл 0,9% раствора натрия хлорида, осадок осторожно отделяется стеклянной палочкой от стенок и дна пробирки. Подсчет количества клеток эндотелия осуществляется в двух сетках камеры Горяева с последующим пересчетом на 1 литр плазмы с учетом объема камеры Горяева и изменения концентрации плазмы в процессе проведения вышеописанной методики.

Несмотря на высокую чувствительность метода, в некоторых случаях в крови определяется нормальное количество эндотелиоцитов. Однако при этом не всегда возможно исключить наличие у пациента эндотелиальной дисфункции, что подтверждалось использованием ряда других специальных методик. Ввиду этого возникла необходимость в создании метода, позволяющего определить скрытую эндотелиальную дисфункцию в комплексе с уже известным методом Hladovec J., (1978).

Технический результат предлагаемого способа диагностики заключается в создании положительного давления в области плеча и после декомпрессии выявления в венозной крови повышенного количества десквамированных эндотелиоцитов или фрагментов эндотелия.

Способ диагностики скрытой эндотелиальной дисфункции осуществляется следующим образом: на область плеча накладывается манжета, в которой посредством нагнетания воздуха создается положительное давление, превышающее систолическое артериальное давление на 40-50 мм рт. ст. Через 4 минуты производится декомпрессия, после чего осуществляется забор крови из подкожной локтевой вены и определяется количество десквамированных эндотелиоцитов методом Hladovec J. в пересчете на 1 литр плазмы. В случае выявления фрагментов эндотелия производится подсчет клеток, составляющих данный фрагмент. Полученные результаты сравниваются с исходным количеством эндотелиальных клеток. В таблице представлены количественные характеристики уровня десквамированных эндотелиоцитов в плазме у больных и лиц контрольной группы исходно и после пробы с компрессией сосудов плеча.

В исследование включены 51 человек женщин, находившихся на лечении в кардиотерапевтическом отделении областной клинической больницы г. Иваново по поводу ИБС, артериальной гипертонии, имеющие компоненты метаболического синдрома в возрасте от 32 до 54 лет. Средний возраст больных составил 44,47± 0,91 лет. В контрольную группу вошли 51 человек практически здоровых женщин в возрасте от 21 до 55 лет. Средний возраст составил 41,6± 1,23 лет. Наряду с определением количества эндотелиоцитов в крови вышеописанным методом проведено общеклиническое обследование больных, определялись уровни липидов крови, содержание глюкозы в крови натощак, тест толерантности к глюкозе, уровни метаболитов оксида азота в цельной крови и эритроцитах, содержание L-аргинина в сыворотке крови, проводилась проба с реактивной гиперемией по Целермайеру-Хаютину, выполнялись Эхо КГ, ВЭМП, КВГ. Для оценки распределения подкожно-жировой клетчатки использовали соотношение ОТ/ОБ10, показатели ИМТ.

Исходно количество десквамированных эндотелиоцитов у больных не превышало нормальных значений у 18 (35,29%) человек, однако средние значения показателей у группы в целом были выше нормальных значений, составляя в среднем 2,21· 10⁵±^{0,35· 105 в 1 литре плазмы, что обусловлено исходно высоким уровнем эндотелиоцитов у 33 (64,7%) больных. У лиц контрольной группы эти значения составили 0,73· 105±0,08· 105 в 1 литре плазмы; р меньше 0,001. После проведения пробы с компрессией сосудов плеча количество десквамированных эндотелиоцитов было значительно повышено у 48 (94,11%) больных, составляя в среднем 6,86· 105±0,40· 105. При этом у лиц контрольной группы происходил незначительный прирост количества циркулирующих десквамированных эндотелиоцитов, составляя в среднем 1,22· 105±0,09· 105 в 1 литре плазмы; р меньше 0,001. При исходно высоком количестве десквамированных эндотелиоцитов у больных их число также возрастало после проведения пробы, что подтверждало наличие у исследуемых эндотелиальной дисфункции. Исходя из полученных результатов, обнаружено, что в группе наблюдения, в отличие от контрольной, значительное повышение в высоком проценте случаев количества циркулирующих в крови эндотелиоцитов после пробы с компрессией сосудов плеча свидетельствует о тенденции их к десквамации при незначительных механических воздействиях (внешних - компрессия; внутренних - напряжение сдвига после декомпрессии), что свидетельствует о дисфункции эндотелия. При анализе каждого показателя в отдельности выявлено, что значения 2,77· 105 и 3,05· 105 встречаются как у больных, так и у здоровых: 2,77· 105 - у 2 больных и у 1 здорового и 3,05· 105 - у 2 больных и у 1 здорового (диаграмма, см. чертеж). На основании проведенных исследований следует считать, что повышение количества циркулирующих десквамированных эндотелиоцитов выше 2,77· 105 в 1 литре плазмы после пробы с кратковременной компрессией сосудов плеча является диагностическим критерием эндотелиальной дисфункции, при этом точность диагностики составляет 96,08%, а вероятность ошибки составляет 1,96%. На основании комплекса проведенных общеклинических и специальных методов исследования у пациентов в исследуемой группе было подтверждено наличие эндотелиальной дисфункции, что подчеркивает диагностическую значимость, информативность и высокую чувствительность предложенного нами метода.}

Клинический пример

1. Больная Филиппова О.В., 39лет, история болезни №372, поступила на лечение в кардиотерапевтическое отделение ОКБ г. Иваново 18.04.2001 г. с диагнозом: ИБС. Стенокардия напряжения III ФК. Постинфарктный кардиосклероз. Гипертоническая болезнь III ст. Артериальная гипертензия II степени. Желудочковая экстрасистолия. Дислипопротеинемия. H₁ При поступлении предъявляла жалобы на давящие боли за грудиной с иррадиацией в левую руку, возникающие при ходьбе до 150-200 метров, средней интенсивности, купирующиеся после прекращения физической нагрузки или приема 1 таб. нитроглицерина под язык через 1-2 минуты. Подобные жалобы беспокоят на протяжении последних 2-3 месяцев. В анамнезе: в январе 1998 г. и в октябре 2000 г. инфаркты миокарда, лечилась в условиях стационара. На протяжении последних 5 лет отмечает частые головные боли на фоне повышения артериального давления, максимальные цифры которого составляли 220/100 мм рт. ст. Регулярно лекарственных препаратов не принимает. Менструальная функция сохранена. Гинекологической патологии нет. Наследственность отягощена по ИБС. Мать и отец перенесли инфаркты миокарда и умерли в возрасте 52 и 53 года, соответственно. В результате комплекса проведенных лабораторных и инструментальных методов исследования диагноз был подтвержден. У больной исходно определялось количество циркулирующих десквамированных эндотелиоцитов методом Hiadovec J., которое составляло 0,83· 10⁵ клеток в 1 литре плазмы. Затем на область плеча накладывалась манжета, в которой посредством нагнетания воздуха создавалось положительное давление 170 мм рт. ст. (превышающее систолическое артериальное давление на 40 мм рт. ст.) Через 4 минуты производилась декомпрессия и забор 4,5 мл крови из подкожной локтевой вены другой руки. Кровь помещалась в пробирку с добавлением 0,5 мл 3,8% цитрата натрия в качестве стабилизатора. Затем определялось количество циркулирующих десквамированных эндотелиоцитов методом Hiadovec J., которое составляло 12,2· 10⁵ клеток в 1 литре плазмы. Полученные результаты свидетельствуют о наличии у больной эндотелиальной дисфункции, что было подтверждено другими общеклиническими и специальными методами исследования. Представленный пример наиболее ярко демонстрирует количественный прирост клеток эндотелия после кратковременной компрессии сосудов плеча, значительно превышая диагностические критерии показателей.

Таким образом, подсчет циркулирующих в крови десквамированных эндотелиоцитов у женщин после проведения пробы с кратковременной компрессией сосудов плеча позволяет выявить скрытую эндотелиальную дисфункцию.

Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики. Для диагностики эндотелиальной дисфункции у женщин в области плеча создают положительное давление, превышающее систолическое артериальное давление на 40-50 мм рт.ст., через 4 минуты производят декомпрессию, после чего осуществляют забор венозной крови с последующим определением количества десквамированных эндотелиоцитов и при значении показателя, превышающем 2,77·10⁵ в 1 литре плазмы, диагностируют эндотелиальную дисфункцию. Способ обладает высокой чувствительностью и позволяет диагностировать скрытую эндотелиальную дисфункцию. 1 ил., 1 табл.

Способ диагностики эндотелиальной дисфункции у женщин, включающий определение количества десквамированных эндотелиоцитов в крови, отличающийся тем, что в области плеча дополнительно создают положительное давление, превышающее систолическое артериальное давление на 40-50 мм рт.ст., через 4 мин производят декомпрессию, после чего осуществляют забор венозной крови с последующим определением количества десквамированных эндотелиоцитов и при значении показателя, превышающем 2,77·10⁵ в 1 л плазмы, диагностируют эндотелиальную дисфункцию.