СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОСЛЕДСТВИЙ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ ЛЕГКОЙ СТЕПЕНИ У ДЕТЕЙ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, педиатрии, иммунологии, детской психиатрии. Оно может быть использовано в клинике для диагностики последствий перинатальных поражений центральной нервной системы /ППП ЦНС/ легкой степени у детей.

Известен способ диагностики ППП ЦНС легкой степени по клиническим признакам, согласно которому ППП ЦНС дифференцируют от детского церебрального паралича /ДЦП/, психических заболеваний детского возраста, вегетативно-дизрегуляторного и гипертензионно-гидроцефального синдромов, обусловленных соматической патологией либо другими заболеваниями головного мозга. В силу большого количества синдромальных клинических проявлений ППП ЦНС для постановки диагноза требуется применение множества специальных методов исследования: РЭГ, КИГ, КТ головного мозга, ЭЭГ, УЗИ головного мозга.

Эти показатели в сочетании с данными, полученными при изучении клинической картины и анамнеза, заключениями окулиста, ортопеда, психиатра позволяют с большей достоверностью установить наличие ППП ЦНС легкой степени как последствий перинатального поражения ЦНС (Скворцов И.А., Ермоленко И.А. Развитие нервной системы у детей в норме и патологии. М.: МЕДпресс-информ, 2003. - С.168).

Недостатками используемых методов диагностики ППП ЦНС являются большая продолжительность по времени, связанная с применением большого количества методик, отсутствие четких критериев, большая стоимость, привлечение консультирующих врачей других специальностей, отсутствием, в большинстве случаев, медицинской документации, содержащей полноценный перинатальный анамнез; кроме того, данные исследования отличаются высокой стоимостью.

Нервная система (НС) и иммунная система (ИС) имеют тесные взаимоотношения через продукцию и секрецию множества клеточных медиаторов, включая цитокины, интегрины, хемокины и др. молекулы. Нервные и иммунные клетки присутствуют в большинстве висцеральных органов, где они способны вырабатывать регуляторные пептиды и биогенные амины, идентичные пептидам, синтезируемым в ЦНС и ИС.

Целью изобретения является повышение эффективности диагностики ППП ЦНС легкой степени по уровню ИЛ-1β в сыворотке крови, что обеспечит ускорение постановки диагноза, обеспечит экономичность, а также своевременное и рациональное проведение комплекса терапевтических мероприятий.

Сущность предложенного способа диагностики состоит в том, что в сыворотке крови детей методом иммуноферментного анализа /ИФА/ определяют уровень ИЛ-1β и при уровне ИЛ-1β выше 7,08 пг/мл диагностируют наличие ППП ЦНС легкой степени.

ИЛ-1β - гормоноподобный полипептид, обладающий широким спектром иммунологической и неиммунологической активности. Прежде всего это провоспалительный цитокин, который продуцируется активированными иммунными клетками в ответ на воспалительные стимулы. Под действием ИЛ-1β усиливается синтез ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-10 и ИЛ-12, что приводит к повышению пролиферации различных видов иммунокомпетентных клеток и секреции самых разнообразных биологически активных соединений. Кроме того, биологическое действие ИЛ-1β может распространяться на многие другие процессы, связанные с ростом и дифференцировкой различных типов неиммунных клеток организма, в том числе и нейроцитов. Если допустить, что основой неспецифической компоненты иммунного ответа при ППП ЦНС является воспаление, как наиболее ранняя и универсальная клеточная реакция на повреждение, не зависящая на ранних этапах от характера повреждения и агрессивных агентов, то определение уровня ИЛ-1β как маркера неспецифического воспаления может быть дополнительным критерием в диагностике ППП ЦНС легкой степени. Полученные данные показали, что при ППП ЦНС легкой степени уровень ИЛ-1β в сыворотке крови достоверно увеличивался, следовательно, ИЛ-1β можно считать маркером ППП ЦНС легкой степени.

Способ осуществляется следующим образом.

У пациентов берут кровь из вены и определяют уровень ИЛ-1β методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа /ИФА/ с помощью наборов «R@D» (США) по следующей схеме.

Фаза 1

Контроли и предварительно разбавленные пробы пациентов добавляются в микроячейки. Любые присутствующие антитела связываются с иммобилизированными антигенами. После 30-минутной инкубации промываются, а промывочный раствор удаляет несвязавшиеся компоненты сыворотки.

Фаза 2

Раствор конъюгата - античеловечьего - IgG или IgM - пероксидаза хрена добавляется в ячейки для определения аутоантител, связанных с иммобилизированными антигенами. После 15-минутной инкубации избыточный ферментный конъюгат удаляется промывочным раствором.

Фаза 3

Хромогенный раствор субстрата, содержащий ТМБ, добавляется в ячейки. В течение 15-минутной инкубации цвет раствора становится голубым. Развитие окраски останавливается добавлением 1 М моляной кислоты в качестве стоп-раствора. Раствор меняет цвет на желтый.

Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации IgG или IgM в образце. Оптическую плотность немедленно измеряют на ридере при 450 нм.

ПРИМЕР

У пациента Д., 4 лет, на момент обращения к детскому неврологу были жалобы на периодические, с частотой 1-2 раза в неделю, резкие головные боли, сопровождающиеся головокружением, тошнотой. Со слов родителей головные боли чаще всего появлялись после нагрузки, а их приступы учащались при смене погоды.

При сборе анамнеза выяснилось, что ребенок родился в срок, с массой 3250 гр. В процессе родов развилась слабость родовой деятельности, поэтому проводилась родостимуляция. Околоплодные воды были зеленоватого цвета. Родившись, ребенок закричал сразу, оценен по шкале Апгар 8-9, к груди приложен на 2-е сутки. Мать сообщила, что ребенок часто и несколько необычно запрокидывал голову назад в первые месяцы жизни. Кроме того, у него наблюдался тремор рук и подбородка при плаче и действии сильных внезапных раздражителей (свет, звук и т.д.). Была выставлена группа риска по перинатальной энцефалопатии. Психомоторное и речевое развитие ребенка было нормальным.

Впервые головные боли появились в 3,5 года, когда ребенок пошел в детский сад. Одновременно с этим родители обратили внимание на необъяснимые периоды вялости, сонливости, во время которых усиливались головные боли, появлялась тошнота.

Объективно на момент осмотра: кожные покровы бледные, АД 100/60 мм рт.ст., ЧДД 18 в мин.

Неврологический статус: глазные щели симметричны, D=S; зрачки обычной формы и размеров, D=S; фотореакция сохранена. Движения глазных яблок в полном объеме. Точки выхода тройничного нерва безболезненны. Нижнечелюстной рефлекс оживлен. Лицо симметрично, носогубные складки D=S. Язык по средней линии. Мышечный тонус S=D, не изменен. Мышечная сила в конечностях 4-5 баллов. Сухожильные рефлексы высокие, D=S; кожные брюшные рефлексы угнетены. Патологических рефлексов нет. Чувствительных расстройств не выявлено. Динамические координаторные пробы выполняет уверенно, в позе Ромберга устойчив, отмечается тремор пальцев вытянутых рук. Дермографизм белый, нестойкий; коэффициент Хильдебранта 3,5. Вегетативный индекс Кредо 17. Выражен дистальный гипергидроз.

Общие анализы крови, мочи, биохимический анализ крови без патологии.

Заключение окулиста: диски зрительных нервов бледно-розовые, границы четкие, артерии сетчатки сужены.

ЭКГ - синусовый ритм, обменно-восстановительные изменения миокарда.

РЭГ - тонус вен снижен, пульсовое кровенаполнение повышено.

КИГ - исходный вегетативный тонус - гиперсимпатикотонический, ИН 2=105 (при ЧСС=90), вегетативная реактивность - асимпатикотоническая.

ЭЭГ - умеренные общемозговые изменения (ближе к легким), регулярного характера. Межполушарной асимметрии не выявлено. Эпиактивности не выявлено.

Заключение по скрининг - таблице оценки вегетативного тонуса - симпатикотония.

КТ головного мозга не проводилось.

Уровень ИЛ-1β, определенный методом ИФА, был 32,67 пг/мл.

Диагноз. Последствия перинатального поражения центральной нервной системы в форме синдрома вегетативной неуточненной дизрегуляции.

У здоровых детей уровень ИЛ-1β не превышает 7,08 пг/мл. Данные показывают, что ИЛ-1β может служить маркером ППП ЦНС.

Способ диагностики последствий перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени у детей по уровню ИЛ-1β в сыворотке крови был апробирован на 31 ребенке с диагнозом ППП ЦНС легкой степени (основная группа). Контрольную группу составили 12 детей с первой группой здоровья, с перинатальным анамнезом без особенностей.

Всем обследованным производился забор крови и определение уровня ИЛ-1β перечисленным выше способом.

Результаты проведенного исследования представлены в таблице. Для обработки полученного материала и проведения статистического анализа в исследованных группах была использована программа статистической обработки информации «Statgraphics Plus 5.0 for Windows XP». Вычисляли среднюю и ошибку средней (M±m). Сравнение в исследуемых группах проводилось попарно при помощи параметрических методов, так как изучаемые выборки могут быть аппроксимированы нормальным законом распределения. Сравнение осуществлялось с помощью критериев Стьюдента (t) (сравнение средних) и Фишера (сравнение средних квадратических отклонений). Уровень достоверности оценивался значением «р». Различия при сравнении считались достоверными с вероятностью более 95% при р<0,05.

Использование предложенного способа диагностики имеет следующие преимущества:

1) высокую достоверность в диагностике ППП ЦНС легкой степени;

2) быструю диагностику;

3) обеспечивает своевременное и рациональное проведение комплекса терапевтических мероприятий в раннем детском возрасте.

ТаблицаСПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОСЛЕДСТВИЙ ПЕРИНАТАЛЬНОГО ПОРАЖЕНИЯ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ ЛЕГКОЙ СТЕПЕНИ У ДЕТЕЙУровень ИЛ-1β у детей с последствиями перинатального поражения ЦНС легкой степени (пг/мл)Уровень ИЛ-1β у здоровых детей (пг/мл)М±mnМ±mn58,62±4,51*315,86±0,61*12Примечание: * - р<0,01 - достоверность различия в группах при сравнении

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностическим методам. Для диагностики последствий перинатальных поражений центральной нервной системы легкой степени у детей проводят определение уровня ИЛ-1β в сыворотке крови и при содержании его выше 7,08 пг/мл считают подтвержденным наличие последствий перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени у детей. Способ позволяет быстро и с высокой достоверностью установить диагноз ППП ЦНС легкой степени, что дает возможность провести своевременный и рациональный комплекс терапевтических мероприятий. 1 табл.

Способ диагностики последствий перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени, отличающийся тем, что проводят определение уровня ИЛ-1β в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа и при содержании ИЛ-1β выше 7,08 пг/мл считают наличие последствий перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени подтвержденным.