СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗДЕЙСТВИЯ БЕЛКА НА ТКАНЬ МОЗГА Российский патент 2009 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к физиологии, в частности к способу определения воздействия белка на ткани мозга в эксперименте in vitro.

Известен способ определения воздействия белка теплового шока с молекулярной массой 70 кДа (БТШ70) на ткани мозга [1], принятый за прототип, включающий подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации в срезе с исследуемым белком и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных и после воздействия.

Цель - определение воздействия БТШ70 на ткань мозга при моделировании геморрагического инсульта.

Сущность предложенного способа определения воздействия белка на ткани мозга, включающего подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации срезов в среде с исследуемым белком и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных с последующими, состоит в том, что срезы после их приготовления помещают в БТШ70 в концентрации 1 мг/мл, растворенный в инкубационной среде объемом 1 мл, и выдерживают там в течение 30 мин. Затем срезы помещают в аутокровь объемом 2 мл (что моделирует геморрагический инсульт). Срезы выдерживают в аутокрови в течение 360 мин. Затем срезы отмывают физиологическим раствором от крови и регистрируют вызванную биоэлектрическую активность клеток. По снижению биоэлектрической активности определяют воздействие БТШ70 на сохранность нервных клеток при смоделированном геморрагическом инсульте.

Способ поясняется примером определения воздействия БТШ70 на ткань мозга при моделировании геморрагического инсульта.

Пример 1.

Определение воздействия белка БТШ70 на ткани мозга по параметрам биоэлектрической активности - отдельным компонентам фокальных потенциалов (ФП). Срезы выдерживались в инкубационной среде с БТШ70 в течение 30 мин, это время установлено эмпирически. Срезы выдерживались в аутокрови в течение 360 мин, указанное время соответствует «терапевтическому окну», после которого наступают необратимые нарушения функционирования нервных клеток.

Таблица 1
Параметры ФП исходные, после инкубации срезов в физиологическом растворе с БТШ70 (1 мг/мл) 30 мин и в аутокрови (2 мл) в течение 360 мин. Параметры ФП Исходные данные (мкВ) После инкубации в аутокрови (мкВ) После инкубации с БТШ70 и в аутокрови (мкВ) ПД ЛОТ 350 170 311 АМПА ВПСП 300 80 267 НМДА ВПСП 130 30 110 ТПСПм 30 0 25

Как видно из представленных данных в таблице, воздействие БТШ70 до действия аутокрови протектирует функционирование отдельных механизмов электрогенеза нервных клеток срезов. Так, активность пресинаптических процессов, оцениваемых по величине ПД ЛОТ, уменьшается на 11%. Постсинаптические (АМПА и НМДА ВПСП), в отличие от пресинаптических процессов, уменьшаются на 14%, 15%, соответственно. Активность тормозных механизмов, определяемых по амплитуде ТПСПм, снижается на 18%. Статистически эти отличия от исходных величин недостоверны (n=8, контроль; n=18, БТШ70, U=59, p≥0,05).

Представленные данные демонстрируют, что предварительное воздействие БТШ70 на нервные клетки срезов мозга защищают их функционирование от разрушающего действия аутокрови. Следовательно, БТШ70 выполняет функцию нейропротективного вещества при развитии негативных последствий геморрагического инсульта.

Необходимо отметить, что БТШ70 имеет эндогенное происхождение и, следовательно, не будет вызывать негативных побочных эффектов при его использовании в качестве антигеморрагического терапевтического средства.

Изобретение позволяет испытать БТШ70 в качестве антигеморрагического препарата для проведения преклинических испытаний.

Литература

1. Мокрушин А.А., Павлинова Л.И., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Белок теплового шока (Hsp70) протектирует активность глутаматергической синаптической передачи в обонятельной коре мозга крыс in vitro от тяжелой аноксии // ДАН, 2004, т.394, №3, с.419-422. Прототип.

Изобретение относится к медицине, а именно к физиологии и фармацевтике, и может быть использовано при изучении патофизиологических процессов в тканях мозга. Подготавливают переживающие срезы мозга. Помещают часть срезов в инкубационный раствор с БТШ70 в концентрации 1 мг/мл на 30 мин. Помещают все срезы в аутокровь объемом 2 мл на 360 мин. Отмывают все срезы физиологическим раствором. Регистрируют параметры вызванной биоэлектрической активности срезов после инкубации в аутокрови. Регистрируют параметры вызванной биоэлектрической активности срезов после инкубации с БТШ70 и в аутокрови. Сопоставляют параметры вызванной биоэлектрической активности срезов, инкубировавшихся в инкубационной среде с белком и в аутокрови, и параметры вызванной биоэлектрической активности срезов, инкубировавшихся только в аутокрови, с исходными параметрами вызванной биоэлектрической активности срезов. Способ позволяет определить антигеморрагическое воздействие белка на ткань мозга при моделировании геморрагического инсульта. 1 табл.

Способ определения нейропротективного воздействия белка на ткань мозга при моделировании геморрагического инсульта, включающий подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации срезов в инкубационной среде с белком, и определение воздействия по сопоставлению исходных параметров и параметров после воздействия белком, отличающийся тем, что
помещают часть срезов в инкубационный раствор с БТШ70 в концентрации 1 мг/мл на 30 мин,
помещают все срезы в аутокровь объемом 2 мл на 360 мин,
отмывают все срезы физиологическим раствором,
регистрируют параметры вызванной биоэлектрической активности срезов после инкубации в аутокрови,
регистрируют параметры вызванной биоэлектрической активности срезов после инкубации с БТШ70 и в аутокрови,
определяют воздействие БТШ70 на сохранность нервных клеток при сопоставлении параметров вызванной биоэлектрической активности срезов, инкубировавшихся в инкубационной среде с белком и в аутокрови и параметров вызванной биоэлектрической активности срезов, инкубировавшиеся только в аутокрови, с исходными параметрами вызванной биоэлектрической активности срезов.