СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗДЕЙСТВИЯ БЕЛКА БТШ70 НА ТКАНЬ МОЗГА Российский патент 2009 года по МПК G01N33/68 G01N33/483 

Изобретение относится к физиологии и фармацевтике, в частности к способу определения воздействия белка на ткань мозга в эксперименте in vitro.

Известен способ определения воздействия белка теплового шока с молекулярной массой 70 кДа (БТШ70) на ткань мозга [1], принятый за прототип, включающий подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации в среде с исследуемым белком и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных и после воздействия.

Цель - определение воздействия БТШ70 на ткань мозга при моделировании эпилептического приступа.

Сущность предложенного способа определения воздействия белка на ткань мозга, включающего подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации срезов в среде с коразолом и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных с последующими, состоит в том, что срезы после их приготовления помещают в хемоконвульсант коразол [2] в эпилептогенной концентрации 1-10 мкг/мл, растворенный в инкубационной среде объемом 1 мл, и выдерживают в течение 15 мин. Затем действие коразола прекращают и на срезы воздействуют БТШ70 в концентрации 1 мг/мл в течение 30 мин. Далее срезы отмывают физиологическим раствором и регистрируют вызванную биоэлектрическую активность клеток. По наличию или отсутствию эпилептических разрядов (ЭР) определяют воздействие БТШ70 на защиту нервных клеток при смоделированном эпилептическом приступе.

Способ поясняется примером определения воздействия БТШ70 на ткань мозга при моделировании эпилептического приступа.

Пример

Свойства БТШ70 были исследованы в такой схеме: индукция в срезах ЭР и последующее воздействие БТШ70. Такая схема наиболее приближена к клиническим условиям возникновения эпилепсии. Срезы перфузировали инкубационной средой с коразолом в эпилептогенной концентрации 1 мкг/мл в течение 15 мин. В них регистрировали и анализировали частоту появления ЭР и латентный период их возникновения. Затем действие коразола прекращали, и на них воздействовали БТШ70 в дозе 1 мкг/мл в течение 30 мин.

Предложенный способ определения воздействия БТШ70 на ткань мозга поясняется таблицами.

Таблица 1 Антиэпилептический эффект БТШ70 при действии низкой дозы коразола (1 мкг/мл). Воздействие на срезы мозга Латентный период возникновения ЭР (мин) Число ЭР в мин Коразол (1 мкг/мл, 15 мин) 7,0±0,6 17,0±7,0 Коразол, БТШ70 (1 мкг/мл) 0,0 0,0 Отмывание (20 мин) 0,0±0,0 0,0±0,0

Как видно из данных, приведенных в таблице 1, воздействие БТШ70 на нервные клетки, у которых возникло эпилептическое состояние, надежно блокирует развитие эпилепсии в них.

Таблица 2 Антиэпилептический эффект БТШ70 при действии высокой дозы коразола (10 мкг/мл). Воздействие на срезы мозга Латентный период возникновения ЭР (мин) Число ЭР в мин Коразол (10 мкг/мл, 15 мин) 4,0±06 33,0±9,0 Коразол, БТШ70 (1 мкг/мл) 0,0 0,0 Отмывание (20 мин) 0,0±0,0 0,0±0,0

Как видно из представленных данных в таблице 2, воздействие БТШ70 на нервные клетки при провоцирующем действии более высоких доз хемоконвульсанта и возникновении сильных ЭР также протектирует функционирование механизмов электрогенеза нервных клеток срезов, блокирует развитие эпилепсии в них, как и при действии низких доз коразола.

Необходимо отметить, что БТШ70 имеет эндогенное происхождение и, следовательно, не будет вызывать негативных побочных эффектов при его использовании в качестве антиэпилептического терапевтического средства в эксперименте и клинике.

Таким образом, представленные данные свидетельствуют о том, что БТШ70, являющийся эндогенным веществом, блокирует возникновение эпилептических разрядов в нервных клетках после возникновения в них устойчивой эпилепсии, т.е. в условиях наиболее приближенной к клиническим проявлениям возникновения эпилепсии.

Изобретение позволяет рекомендовать использование БТШ70 в качестве антиэпилептического терапевтического препарата для блокирования генерализованных судорог при проведении преклинических испытаний.

Литература

1. Мокрушин А.А., Павлинова Л.И., Гужова И.В., Маргулис Б.А. Белок теплового шока (Hsp70) протектирует активность глутаматергической синаптической передачи в обонятельной коре мозга крыс in vitro от тяжелой аноксии. // ДАН, 2004, т.394, №3, с.419-422. Прототип.

2. Галкина О.В., Ещенко Н.Д., Путилина Ф.Е., Флеров М.А. Перекисное окисление липидов в нейронах и нейроглии при моделировании эпилептических судорог. // Сб.: Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты. Москва. 2005. С.158.

Изобретение относится к физиологии и фармацевтике. Для осуществления способа подготавливают переживающие срезы мозга, регистрируют исходные и последующие параметры после инкубации срезов в среде с коразолом и определяют воздействия по сопоставлению параметров, исходных с последующими. Для этого срезы после их приготовления помещают в коразол (хемоконвульсант) в эпилептогенной концентрации 1-10 мкг/мл, растворенный в инкубационной среде объемом 1 мл, и выдерживают в течение 15 мин. Затем воздействие коразола прекращают и на них воздействуют БТШ70 в концентрации 1 мг/мл в течение 30 мин. Далее срезы отмывают физиологическим раствором и регистрируют вызванную биоэлектрическую активность клеток. По наличию или отсутствию эпилептических разрядов определяют воздействие БТШ70 на сохранность нервных клеток при смоделированном эпилептическом приступе. Использование способа позволяет определять активность конкретной партии белка БТШ70. 2 табл.

Способ определения воздействия белка БТШ70 на ткань мозга, включающий подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации срезов в инкубационной среде с белком БТШ70 и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных и после его воздействия, отличающийся тем, что
помещают срезы в коразол в дозе 1-10 мг/мл на 15 мин;
выдерживают срезы в инкубационном растворе с БТШ70 в дозе 1 мг/мл 30 мин;
отмывают срезы физиологическим раствором;
регистрируют возникновение эпилептических разрядов;
определяют способность БТШ70 блокировать эпилептические разряды в клетках мозга при смоделированной эпилептической атаке по наличию или отсутствию разрядов в них.