ПРИМЕНЕНИЕ ЧЕТВЕРТИЧНЫХ СОЛЕЙ ПИРИДИНИЯ В КАЧЕСТВЕ ВАЗОПРОТЕКТОРНЫХ СРЕДСТВ Российский патент 2009 года по МПК A61K31/4425 A61P3/10 A61P3/04 A61P1/04 A61P9/10 

Настоящее изобретение относится к использованию некоторых четвертичных солей пиридиния для получения вазопротекторного средства для лечения и/или профилактики состояний или заболеваний, связанных с дисфункцией эндотелия сосудов, окислительным стрессом, и/или недостаточной продукцией эндотелиального простациклина (PGI₂), особенно, но неисключительно, если вышеописанное сочетается с гиперхолестеринемией/гипертриглицеридемией, а также применению солей пиридиния для перорального приема в составе диетической добавки.

Существует все больше указаний на то, что дисфункция эндотелия играет ключевую роль в формировании и развитии атеросклеротической бляшки. Дисфункция эндотелия за последнее время приобрела диагностическое, прогностическое и терапевтическое значение при тромбозе артерии, пораженной атеросклерозом (Heitzer T., Schlinzig T., Krohn K., Meinertz T., Munzel T. Endothelial dysfunction, oxidative stress, and risk of cardiovascular events in patients with coronary artery disease. Circulation 2001; 104: 2673-2678; Schachinger V., Britten M.B., Zeiher A.M. Prognostic impact of coronary vasodilator dysfunction on adverse long-term outcome of coronary heart disease. Circulation 2000; 101: 1899-1906; Perticone F., Ceravolo R., Pujia A., Ventura G., Iacopino S., Scozzafava A., Ferraro A., Chello M., Mastroroberto P., Verdecchia P., Schillaci G. Prognostic significance of endothelial dysfunction in hypertensive patients. Circulation 2001; 104: 191-196; Suwaidi J.A., Hamasaki S., Higano S.T., Nishimura R.A., Holmes D.R., Jr., Lerman A. Long-term follow-up of patients with mild coronary artery disease and endothelial dysfunction. Circulation 2000; 101: 948-954). Клинически дисфункцию эндотелия определяют как снижение биологической активности NO, что диагностируется как снижение сосудорасширяющей активности NO.

Снижение активности NO сопровождается окислительным стрессом (Heitzer T., Schlinzig T., Krohn K., Meinertz T., Munzel T. Endothelial dysfunction, oxidative stress, and risk of cardiovascular events in patients with coronary artery disease. Circulation 2001; 104: 2673-2678) и снижением синтеза PGI₂ (Kyrle P.A., Minar E., Brenner B., Eichler H.G., Heistinger M., Marosi L., Lechner K. Thromboxane A₂ and prostacyclin generation in the microvasculature of patients with atherosclerosis-effect of low-dose aspirin. Thromb Haemost 1989; 61: 374-377), хотя общий уровень PGI₂ может быть повышен. Действительно, несколько лет назад было выдвинуто предположение, что повышенное перекисное окисление липидов может способствовать развитию атеросклероза вследствие избирательного снижения синтеза простациклина клетками эндотелия и последующей активации тромбоцитов (Gryglewski R.J. Prostacyclin and atherosclerosis. TIPS 1980; 1: 164-168; Gryglewski R.J. Prostaglandins, platelets, and atherosclerosis. CRC Crit Rev Biochem 1980; 7: 291-338; Gryglewski R.J, Szczeklik A. Prostacyclin and atherosclerosis - experimental and clinical approach. 1983; 213-226). Затем эта идея была подтверждена экспериментально. В настоящее время очевидно, что снижение синтеза PGI₂ в эндотелии может приводить к чрезмерной стимуляции рецепторов TP в эндотелии и клетках гладкой мышцы сосуда посредством TXA₂, PGH₂ или других эйкозаноидов и к последующему сужению кровеносных сосудов, агрегации тромбоцитов и эндотелиальной воспалительной реакции, а также к эндотелиальному апоптозу (Chlopicki S., Gryglewski R.J. Endothelial secretory function and atherothrombosis in "The Eicosanoids", chapter 23, 267-276. ed. P. Curtis-Prior, John Wiley and Sons, Ltd, 2004). Это означает, что дефицит PGH₂ может вызвать или усилить воспалительный и тромбозный процессы в стенке сосуда, которые в настоящее время считаются ключевыми элементами атеросклероза.

Общеизвестно, что повышенные уровни липопротеидов низкой плотности (LDL) и/или триглицеридов плазмы крови представляют собой факторы высокого риска развития атеросклероза. (Levine G.N., Keaney J.F. Jr., Vita J.A. Cholesterol reduction in cardiovascular disease. Clinical benefits and possible mechanisms. N Engl J Med 1995; 332: 512-521). Более того, низкий уровень в плазме крови липопротеидов высокой плотности (HDL) представляет собой важный независимый фактор риска развития атеросклероза. HDL имеют потенциальное свойство предотвращать и корректировать дисфункцию эндотелия посредством возрастающего использования NO и PGI₂. (Ng DS. Treating low HDL-from bench to bedside. Clin Biochem 2004; 37: 649-659; Chapman M.J., Assman G., Fruchart J.C., Shepherd J., Sirtoti C. Raising high-density lipoprotein cholesterol with reduction of cardiovascular risk: the role of nicotinic acid-a position paper developed by the European Consensus Panel on HDL-C. Curr Med Res Opin 2004; 20:1253-1268; Calabresi L., Gomarashi M., Franceschini G. Endothelial protection by high-density lipoproteins. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2003; 290: 2292-2300).

В публикации международной заявки WO 00/40559 раскрыто лечебное и косметическое применение некоторых производных никотинамида, 1,3-двузамещенных солей пиридиния, включая соли 1-метилникотинамида (MNA⁺) и l-метил-N'-(гидроксиметил)никотинамида (MNAF⁺). Сообщались данные о том, что указанные производные имеют применение при местном лечении заболеваний кожи, в частности изъязвлений на ногах, угревой сыпи, псориаза, атопического дерматита, витилиго, а также ожогов и ожогов горячей водой или паром и для заживления мелких ран. Указанные производные также имеют действие, стимулирующее восстановление роста волос, таким образом они используются при лечении выпадения волос различного генеза. Описаны различные виды лекарственных форм этих композиций для наружного применения на коже или поверхности слизистой оболочки, например шампунь, мази, кремы, гели, лосьоны, растворы, аэрозоли и тому подобное, и для перорального применения при лечении заболеваний кожи. Также описано косметическое действие этих композиций, в частности регенерация и выравнивание кожи.

Действия 1-метилникотинамид хлорида (MNA⁺) при некоторых кожных заболеваниях описаны в недавней публикации (Gebicki J., Sysa-Jedrzejowska A., Adamus J., Wozniacka A., Rybak M., Zielonka J. 1-Methylnicotinamide: a potent anti-inflammatory agent of vitamin origin. Pol J Pharmacol 2003; 55: 109-112). Предполагается, что MNA⁺ проявляет противовоспалительное действие, хотя механизм этого действия не объяснен.

Соль 1-метил-3-ацетилпиридиния (MAP⁺) описана в публикации (Takashi Sakurai, Haruo Hosoya. Charge transfer complexes of nicotinamide-adenine dinucleotide analogs and flavine mononucleotide. Biochim. Biophys. Acta 1966; 112 (3): 359-468).

В настоящее время известно, что MAP⁺ и некоторые из композиций, описанных в публикации международной заявки WO 00/40559, в частности MNA⁺ и MNAF⁺, обладают уникальными фармакологическими свойствами, связанными с их способностью высвобождать эндогенный простациклин (PGI₂) из сосудистого эндотелия, это свойство отличает их от близко структурно родственных никотинамида, никотиновой кислоты, тригонеллина и эндогенных метаболитов MNA⁺, таких как 1-метил-2-пиридон-5-карбоксиамид (2-PYR) и 1-метил-4-пиридон-3-карбоксиамид (4-PYR). Как обнаружено авторами настоящего изобретения, некоторые соединения наделены способностью корректировать липопротеиновый профиль, в частности снижать уровень LDL и/или TG в плазме крови и поднимать уровень HDL в плазме крови, обеспечивая антиатеросклеротические эффекты. Независимо, эффект на липопротеиновый профиль некоторых четвертичных солей пиридиния по настоящему изобретению, увеличение синтеза PGI₂ посредством четвертичных солей пиридиния, обнаруженный авторами настоящего изобретения, могут проявлять лечебные возможности при многих заболеваниях, как рассматривается далее, где дисфункция эндотелия, окислительный стресс, и/или дефицит PGI₂ играют патогенетическую роль, в том числе те, которые ассоциированы с гиперхолестеринемией/гипертриглицеридемией.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

Фиг.1. Схема метода для in vivo определения тромболитического действия лекарственных средств у крыс (согласно Gryglewski).

Фиг.2. Тромболитическая реакция, индуцированная внутривенным введением MNA⁺ in vivo (30 мг/кг).

Фиг.3. Изменения в плазме крови уровней 6-кето-PGF_lα(●) и TXB₂(○) после внутривенного введения MNA⁺ (30 мг/кг).

Фиг.4. Отсутствие тромболитической реакции после внутривенного введения никотинамида или никотиновой кислоты (30 мг/кг).

Фиг.5. Отсутствие тромболитической реакции после внутривенного введения 2-PYR или тригонеллина (30 мг/кг).

Фиг.6. Тромболитическая реакция, индуцированная внутривенным введением MAP⁺ in vivo (30 мг/кг).

Фиг.7. Изменения в плазме крови уровней 6-кето-PGF_lα(●) и TXB₂(○) после внутривенного введения MAP⁺ in vivo (30 мг/кг).

Фиг.8. Тромболитическая реакция, индуцированная внутривенным введением MNAF⁺ (30 мг/кг).

Фиг.9. Отсутствие действия MNA⁺ на агрегацию тромбоцитов, индуцированную коллагеном (1 мг/мл).

Фиг.10. Отсутствие действия MNA⁺ на активацию нейтрофилов, индуцированную латексом.

В своем первом аспекте настоящее изобретение обеспечивает использование четвертичных солей пиридиния формулы I:

где R представляет собой NH₂, CH₃, или N(H)CH₂ОН группу, и X является фармацевтически приемлемым противоионом,

для получения вазопротекторного средства для лечения или профилактики заболеваний, связанных с дисфункцией сосудистого эндотелия, окислительным стрессом, и/или недостаточной продукцией эндотелиального простациклина PGI₂.

Предпочтительно, вышеуказанные дисфункция сосудистого эндотелия, окислительный стресс, и/или недостаточная продукция эндотелиального простациклина PGI₂, сопровождаются гиперхолестеринемией, гипертриглицеридемией или низким уровнем HDL.

В частности, предпочтительное действие соединений формулы I заключается в их эндотелиальной активности, связанной с выбросом PGI₂, в результате чего вышеуказанные соединения формулы I могут улучшать тканевую перфузию, проявлять антиаггрегационную, тромболитическую, антиапоптотическую, антиатеросклеротическую активность и защищать гастроинтестинальную слизистую оболочку.

Преимущество данного изобретения заключается в том, что тромболитическое действие соединений формулы I не сопровождается гипотензивным действием.

В одном варианте осуществления данного изобретения вышеуказанным состоянием или заболеванием является атеросклероз любого сосудистого русла, включая хроническую ишемическую болезнь сердца, ишемический цереброваскулярный приступ или атеросклероз конечностей, включая облитерирующий тромбоангиит.

В другом варианте осуществления вышеуказанное состояние или заболевание представляет собой острый сердечно-сосудистый приступ, связанный с атеросклерозом, в частности внезапная сердечная смерть, острый коронарный синдром (включая нестабильную болезнь коронарных артерий, инфаркт миокарда), необходимость коронарной ангиопластики (PCI), аортокоронарного шунтирования (CABG), ишемический инсульт, или реваскуляризация периферического кровообращения.

В еще одном варианте осуществления вышеуказанное состояние или заболевание выбрано из группы факторов риска развития атеросклероза, включающей: гиперхолестеринемию, артериальную гипертензию, курение, гипергомоцистеинемию, резистентность к инсулину, диабет, климактерический период, пожилой возраст, ожирение, нервно-психическое напряжение, инфекции, воспалительные состояния, включая заболевания периодонта, ревматоидный артрит, ангиопатию в результате аллотрансплантации или толерантность к нитратам.

В еще одном варианте осуществления вышеуказанным состоянием или заболеванием является дислипидемия, в частности гиперхолестеринемия или гипертриглицеридемия, в частности связанная с низким уровнем HDL в плазме крови.

В еще одном варианте осуществления вышеуказанным состоянием или заболеванием является тромбоз, который непосредственно не связан с атеросклерозом, в частности тромбоз, связанный с имплантацией металлических сосудистых протезов (стентов), аортокоронарным шунтированием (CABG), любым видом операций с искусственным кровообращением, гемодиализом, венозной тромбоэмболической болезнью.

В еще одном варианте осуществления вышеуказанное состояние или заболевание выбрано из следующей группы: хроническая сердечная недостаточность, легочная гипертензия, микрососудистые осложнения при диабете, например диабетическая ретинопатия и нефропатия, диабетическая нейропатия, нефротический синдром, хроническая почечная недостаточность, синдром расстройства дыхания у взрослых (ARDS), кистозный фиброз, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), преэклампсия/эклампсия, эректильная дисфункция, синдром Штейна-Левенталя, апное во сне, системная красная волчанка, серповидноклеточная анемия, неспецифическое воспалительное заболевание кишечника, язва желудка или двенадцатиперстной кишки, глаукома, хроническое заболевание печени, первичный амилоидоз, нейродегенеративные заболевания, в частности нейродегенеративное заболевание, выбранное из мультиинфарктной деменции, болезни Альцгеймера и болезни Паркинсона.

Также благоприятным является применение соединений формулы I для получения лекарственного средства для профилактики или лечения язвы желудка или двенадцатиперстной кишки.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления вышеуказанным состоянием или заболеванием является хроническое заболевание печени, в частности хронический вирусный гепатит.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления вышеуказанным состоянием или заболеванием является хроническое обструктивное заболевание легких (COPD).

Вышеуказанное лекарственное средство может быть в форме, подходящей для любого пути введения, например перорального, парентерального, интраназального или ингаляционного пути. Разумеется, такой путь введения будет зависеть от конкретного состояния или заболевания, которое подвергается лечению.

В случае, когда лекарственное средство предназначено для лечения хронического обструктивного заболевания легких (COPD), оно предпочтительно будет представлено в форме, пригодной для введения в организм посредством ингаляций через ингаляционный путь введения.

Согласно вышеприведенному определению Х - может быть любым физиологически приемлемым противоионом. Таким образом, соли формулы I могут быть получены из любой физиологически приемлемой кислоты, как органической, так и неорганической. Приемлемыми солями неорганических кислот являются, например, хлориды, бромиды, иодиды и карбонаты; приемлемыми солями органических кислот могут быть соли моно-, ди- и трикарбоновых кислот, например ацетаты, бензоаты, салицилататы, гидроксиацетаты, малонаты и цитраты. Предпочтительными солями являются хлориды, бензоаты, салицилаты, ацетаты, цитраты и лактаты; особенно предпочтительными являются хлориды.

Конкретными соединениями формулы (I) являются соли 1-метилникотинамида (MNA⁺), соли 1-метил-3-ацетилпиридиния (MAP⁺) и соли 1-метил-N'-(гидроксиметил)никотинамида (MNAF⁺).

Данное изобретение во втором аспекте обеспечивает способ лечения и/или профилактики состояний или заболеваний, связанных с дисфункцией сосудистого эндотелия, окислительным стрессом, и/или недостаточной продукцией эндотелиального PGI₂ (связанного или нет с гиперхолестеринемией, гипертриглицеридемией или низким уровнем HDL), в частности таковыми, как обсуждалось выше, включающий в себя введение в организм пациента, нуждающегося в таком лечении, терапевтически эффективного количества четвертичной соли пиридиния формулы I, как определено выше.

В одном варианте осуществления этого способа лечения в соответствии с данным изобретением вышеуказанным состоянием или заболеванием является атеросклероз любого сосудистого русла, включая хроническую ишемическую болезнь сердца, ишемический цереброваскулярный приступ или атеросклероз конечностей, включая облитерирующий тромбоангиит.

В другом варианте осуществления способа лечения в соответствии с данным изобретением вышеуказанным состоянием или заболеванием является острый сердечнососудистый приступ, связанный с атеросклерозом, в частности внезапная сердечная смерть, острый коронарный синдром (включая нестабильную болезнь коронарных артерий, инфаркт миокарда), необходимость коронарной ангиопластики (PCI), аортокоронарного шунтирования (CABG), ишемический инсульт, или реваскуляризация периферического кровообращения.

В еще одном варианте осуществления способа лечения в соответствии с данным изобретением вышеуказанное состояние или заболевание выбрано из группы факторов риска для развития атеросклероза, включающей: гиперхолестеринемию, артериальную гипертензию, курение, гипергомоцистеинемию, резистентность к инсулину, диабет, климактерический период, пожилой возраст, ожирение, нервно-психическое напряжение, инфекции, воспалительные состояния, включая заболевания периодонта, ревматоидный артрит, ангиопатию в результате аллотрансплантации или толерантность к нитратам.

В еще одном варианте осуществления способа лечения в соответствии с данным изобретением вышеуказанным состоянием или заболеванием является дислипидемия, в частности гиперхолестеринемия или гипертриглицеридемия. В частности, связанная с низким уровнем HDL в плазме крови.

В еще одном варианте осуществления способа лечения в соответствии с данным изобретением вышеуказанное состояние или заболевание представляет собой тромбоз, который непосредственно не связан с атеросклерозом, в частности тромбоз, связанный с имплантацией металлических сосудистых протезов (стентов), аортокоронарным шунтированием (CABG), любым видом операций с искусственным кровообращением, гемодиализом, венозной тромбоэмболической болезнью.

В еще одном варианте осуществления способа лечения в соответствии с данным изобретением вышеуказанное состояние или заболевание выбрано из следующей группы: хроническая сердечная недостаточность, легочная гипертензия, микрососудистые осложнения при диабете, например диабетическая ретинопатия и нефропатия, диабетическая нейропатия, нефротический синдром, хроническая почечная недостаточность, синдром расстройства дыхания у взрослых (ARDS), кистозный фиброз, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), преэклампсия/эклампсия, эректильная дисфункция, синдром Штейна-Левенталя, апное во сне, системная красная волчанка, серповидноклеточная анемия, неспецифические воспалительные заболевания кишечника, язва желудка или двенадцатиперстной кишки, глаукома, хроническое заболевание печени, первичный амилоидоз, нейродегенеративные заболевания, в частности нейродегенеративное заболевание, выбранное из мультиинфарктной деменции, болезни Альцгеймера и болезни Паркинсона.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления вышеуказанным состоянием или заболеванием является хроническое заболевание печени, в частности хронический вирусный гепатит.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления вышеуказанным состоянием или заболеванием является хроническое обструктивное заболевание легких (COPD).

Также благоприятным является применение соединений формулы I в способе профилактики или лечения язвы желудка или двенадцатиперстной кишки.

Четвертичные соли пиридиния формулы I могут применяться самостоятельно или в комбинации с другим сердечно-сосудистым средством.

Соли пиридиния формулы I могут вводиться в организм, в частности перорально, в форме обычно применяемых лекарственных препаратов для перорального применения, как, например, таблетки, капсулы, пероральные растворы/суспензии в фармацевтически приемлемом жидком носителе. Вышеуказанные композиции могут быть получены с использованием общепринятых способов, известных в уровне техники, и включают в себя общепринятые фармацевтические инертные наполнители или носители.

Соли пиридиния формулы I также могут вводиться в организм парентерально, в форме инъекций, включая подкожные и внутривенные инъекции и инфузии.

Другими предусмотренными путями введения являются ингаляционный, интраназальный и ректальный.

В любом случае путь введения будет, безусловно, зависеть от конкретного заболевания, подвергающегося лечению.

Например, при лечении хронического обструктивного заболевания легких (COPD) соли пиридиния предпочтительно будут представлены в форме, пригодной для введения в организм посредством ингаляций через ингаляционный путь введения.

Ежедневная доза солей пиридиния формулы I может быть в пределах от 10 до 1000 мг и может вводиться однократно или дробными дозами.

Настоящее изобретение относится также к способу увеличения уровней простациклина у млекопитающих, который включает в себя введение эффективного количества четвертичной соли пиридиния формулы I согласно вышеприведенному определению.

Настоящее изобретение также обеспечивает четвертичные соли пиридиния формулы I согласно вышеприведенному определению для использования в пероральной диетической добавке. Соли пиридиния формулы I, при использовании в пероральной диетической добавке, увеличивают уровень простациклина, таким образом, действуют как вазопротекторные средства.

Настоящее изобретение обеспечивает, кроме того, использование солей пиридиния формулы I согласно вышеприведенному определению для получения питательного продукта для защиты сосудов у млекопитающих при состояниях или заболеваниях, связанных с дисфункцией сосудистого эндотелия, окислительным стрессом, и/или недостаточной продукцией эндотелиального простациклина (PGI₂), в частности связанного с гиперхолестеринемией, гипертриглицеридемией или низким уровнем HDL.

Вышеуказанное состояние или заболевание, при котором может быть использован питательный продукт, представляет собой атеросклероз, особенно у пациентов с хронической ишемической болезнью сердца, ишемическим цереброваскулярным приступом или атеросклероз конечностей, включая облитерирующий тромбоангиит.

Вышеуказанное состояние или заболевание, при котором может быть использован питательный продукт, также может быть выбрано из группы факторов риска для развития атеросклероза, включающей: гиперхолестеринемию, артериальную гипертензию, курение, гипергомоцистеинемию, резистентность к инсулину, диабет, климактерический период, пожилой возраст, ожирение, нервно-психическое напряжение, инфекции, воспалительные состояния, включая заболевания периодонта, ревматоидный артрит, ангиопатию в результате аллотрансплантации или толерантность к нитратам.

Вышеуказанным состоянием или заболеванием, при котором может быть использован питательный продукт, является дислипидемия, в частности гиперхолестеринемия или гипертриглицеридемия, в частности связанная с низким уровнем HDL в плазме крови.

Вышеуказанным состоянием или заболеванием, при котором может быть использован питательный продукт, также может быть тромбоз, который непосредственно не связан с атеросклерозом, в частности тромбоз, связанный с имплантацией металлических сосудистых протезов (стентов), аортокоронарным шунтированием (CABG), любым видом операций с искусственным кровообращением, гемодиализом, венозной тромбоэмболической болезнью.

Конкретными солями пиридиния для использования в биологически активной добавке и/или в качестве питательного продукта являются соединения формулы (I), где R является CH₃ группой.

Конкретными солями пиридиния для использования в биологически активной добавке и/или в качестве питательного продукта являются соединения формулы (I), где R является NH₂ группой.

Конкретными солями пиридиния для использования в биологически активной добавке и/или в качестве питательного продукта являются соединения формулы (I), где R является N(H)CH₂ОН группой.

Биологически активные добавки и питательные продукты могут иметь форму, пригодную для перорального приема внутрь, как, например, таблетки, капсулы, растворы и суспензии для питья, и, аналогично, быть общепринятыми и известными в области фармацевтики и приготовленными в соответствии с технологиями, известными в уровне техники с использованием общепринятых инертных наполнителей и носителей.

Предпочтительно, биологически активная добавка или питательный продукт могут содержать, по меньшей мере, 5% по массе соли пиридиния формулы I.

Данное изобретение далее иллюстрируется следующими Примерами, которые демонстрируют фармакологическое действие солей пиридиния.

Пример 1

Тромболитическая активность

Тромболитическую активность четвертичных солей пиридиния оценивали, используя оригинальный способ Gryglewski et al., (Gryglewski R.J., Korbut R., Ocetkiewicz A., Stachura J. In vivo method for quantitation for anti-platelet potency of drugs. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 1978; 302: 25-30), схема которого представлена на фиг.1.

Крыс Wistar с массой тела 300-350 г анастезировали (тиопентал 30 мг·кг^-1 интраперитонеально) и гепаринизировали (нефракционированный гепарин 800 МЕ·кг^-l внутривенно).

Внутриартериальное кровяное давление измеряли в канюллированной правой сонной артерии, и экстракорпоральное кровообращение создавали между левой сонной артерией и левой яремной веной. Коллагеновую полоску из ахиллового сухожилия кролика переливали с артериальной кровью со скоростью 1,5 мл/мин^-1 и непрерывно контролировали ее массу с использованием ауксотонического трансдуктора Харварда.

В течение первых 20-30 минут переливания эта полоска увеличивалась в размере на 80-120 мг вследствие оседания богатых тромбоцитами тромбов, а затем в контрольных условиях оставалась неизмененной в течение следующих 3-5 часов.

Тромболитическую реакцию определяли по уменьшению массы тромбов. Также проводили мониторинг внутриартериального кровяного давления, таким образом эта модель позволяет анализировать тромболитическое и гипотензивное действие соединения (Фиг.1).

Анализ тромболитической реакции в этой экспериментальной модели был дополнен анализом 6-кето-PGF_1α, TXB₂ и PGE₂ в плазме артериальной крови. Для этой цели образцы крови (500 мкл) собирали в пробирки Eppendorff с индометацином в конечной концентрации 10 мкМ, и с EDTA в конечной концентрации 1 мМ.

Затем образцы крови центрифугировали в течение 5 минут при 2000g. Образцы плазмы хранили при -70°C. Анализ простаноидов проводили с использованием наборов для иммуноферментного анализа с аффинной хроматографией (Cayman Chemical Co, Ann Arbor, MI).

Внутривенное введение MNA⁺ (3-30 мг/кг) приводит к дозозависимому тромболизису у крыс Wistar с экстракорпоральным кровообращением. Максимальный ответ наблюдали при дозировке MNA⁺ 30 мг/кг. Однократная инъекция MNA⁺ в дозировке 30 мг/кг индуцировала продолжительную тромболитическую реакцию на уровне 42±4% и оставалась приблизительно на том же уровне в течение 2-3 часов периода наблюдения. В отличие от MNA⁺, никотинаммид, никотиновая кислота, тригонеллин и 2-PYR (эндогенный метаболит MNA⁺), каждое в дозировке 30 мг/кг, не индуцировали значимую тромболитическую реакцию. Реакции, индуцированные никотинамидом и никотиновой кислотой, были кратковременными (меньше чем 15-20 минут) и их максимальное значение составляет всего лишь 9±0,6%, 5±0,9% соответственно. Тригонеллин не приводил ни к какой тромболитической реакции, а реакция на 2-PYR также была очень слабой (<10%) и кратковременной(<15 минут). Мощность и длительность тромболитических реакций на MNA⁺, никотинамид и никотиновую кислоту соответствовали характеру выброса 6-кето-PGF_1α в артериальную плазму, индуцированного этими соединениями. MNA⁺ (30 мг/кг) индуцирует значительное увеличение уровней 6-кето-PGF_1α уже через 15 минут после инъекции лекарственного средства (от 104±7 до 460±58 пг/мл), который затем достигает плато около 400 пг/мл в течение, по крайней мере, одного часа. С другой стороны, ни уровень TXB₂, ни уровень PGE₂ значительно не изменялись в ответ на введение MNA⁺. Незначительный рост уровня TXB₂ зависел от времени и также наблюдался после инъекции физиологического раствора. Уровни 6-кето-PGF_1α не повышались после инъекции никотинамида или после инъекции никотиновой кислоты (30 мг/кг).

В присутствии индометацина (5 мг/кг) тромболитическая реакция на MNA⁺ была отменена, также как и MNA-индуцированный выброс 6-кето-PGF_1α. Важно отметить, что тромболизис, индуцированный MNA⁺ (30 мг/кг) не был связан с падением внутриартериального кровяного давления. Индуцированная коллагеном агрегация в плазме, богатой тромбоцитами, in vitro не поддается действию MNA⁺ в концентрации до 10 мM, это исключает возможность того, что растворение тромбов, богатых тромбоцитами in vivo происходило в результате прямого воздействия MNA⁺ на тромбоциты. Более того, MNA⁺ (1 мМ) не ингибировал активацию нейтрофилов, индуцированную латексом, это указывает на возможную избирательность MNA⁺ в отношении эндотелия.

На Фиг.2 представлена тромболитическая реакция in vivo, индуцированная MNA⁺, а на Фиг.3 показано сопутствующее повышение уровня 6-кето-PGF_1α (стабильный метаболит PGI₂) в крови. Никотинамид, никотиновая кислота (фиг. 4), тригонеллин и 2-PYR (фиг. 5) не проявляли значимой тромболитической активности. Однако MAP⁺ (30 мг/кг) и MNAF⁺ (30 мг/кг), каждый, индуцировал тромболитическую реакцию (фиг. 6 и фиг. 8), которая была сопоставима с реакцией, индуцированной 30 мг/кг MNA⁺. Тромболизис, индуцированный MAP⁺, сопровождался выбросом PGI₂ (фиг. 7), схожим образом, как в случае тромболизиса, индуцированного MNA⁺. MNA⁺ (30-300 мг/кг) не вызывает гипотензию. Как показано на фиг.9 и фиг.10, MNA⁺ не ингибирует агрегацию тромбоцитов, индуцированную коллагеном, и активацию нейтрофилов, индуцированную латексом. Первоначальный ответ зависит от COX1-TXA₂ и отменяется приемом аспирина, тогда как поздний ответ зависит от NADPH оксидазы и отменяется DPI или апоцинином.

Пример 2

Антиатерогенное действие in vivo у больных

Антиатерогенное действие MNA⁺ изучали у 15 пациентов с дислипидемией.

Критериями отбора были следующие: высокий уровень TG (≥250 мг/дл) и низкий уровень HDL (≤35 мг/дл у мужчин, ≤ 45 мг/дл у женщин). Средний возраст пациентов был 61,4 (диапазон 45-81 лет).

Пациенты получали MNA⁺ в течение 2 недель. MNA⁺ назначали перорально, три раза в день, по одной капсуле (30 мг MNA⁺) после еды.

Уровни TC, TG, HDL в плазме крови измеряли на начальном этапе и через 2 недели лечения. Уровень LDL измеряли в тех случаях, когда это было возможно (вследствие высокого уровня TG).

Было обнаружено, что MNA⁺ снижает уровень TC (267,0 против 225,1 мг/дл) (-15,7%) и TG (472,6 против 249,9 мг/дл) (-47,1%) между начальным этапом и 2-недельным наблюдением. Также наблюдали повышение уровня HDL (39,2 против 53,4 мг/дл) (36,2%) после 2 недель лечения. Наблюдали значительное уменьшение отношения TG/HDL (13,9 против 5,8).

Предложено применение четвертичных солей пиридиния формулы (1), MNA⁺, где R-NH₂, CH₃, N(H)CH₂OH группа, Х - противоион, для получения вазопротекторного средства для лечения (профилактики) состояний (заболеваний), связанных с дисфункцией сосудистого эндотелия, окислительным стрессом, и/или недостаточной продукцией эндотелиального простациклина PGI₂, где указанное состояние (заболевание) является атеросклерозом, дислипидемией, гиперхолестеринемией или гипертриглицеридемией, низким уровнем HDL в плазме крови, или тромбозом, который непосредственно не связан с атеросклерозом, или заболевание выбрано из группы: легочная гипертензия, хроническое обструктивное заболевание легких, язва желудка или двенадцатиперстной кишки, хроническое заболевание печени; также применение для производства пищевой добавки вышеуказанного назначения, соответствующий способ лечения (профилактики), и способ увеличения уровней простациклина. Показано антиатерогенное и тромболитическое действие MNA⁺, повышение уровня HDL в крови. 4 н. и 45 з.п. ф-лы, 10 ил.

1. Применение четвертичных солей пиридиния формулы I

где R представляет собой NH₂, CH₃, или N(Н)CH₂ОН группу, и Х является фармацевтически приемлемым противоионом,
для получения вазопротекторного средства для лечения или предупреждения состояний или заболеваний, связанных с дисфункцией сосудистого эндотелия, окислительным стрессом, и/или недостаточной продукцией эндотелиального простациклина PGI₂, где указанное состояние или заболевание является атеросклерозом, дислипидимией, гиперхолестеринемией, гипертриглицеридемией или низким уровнем HDL; или тромбозом, который непосредственно не связан с атеросклерозом, или заболеванием, выбранным из следующей группы: легочная гипертензия, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), язва желудка или двенадцатиперстной кишки и хроническое заболевание печени.

2. Применение по п.1, где указанное состояние или заболевание является атеросклерозом.

3. Применение по п.1, где указанное состояние или заболевание представляет собой атеросклероз, связанный с острым сердечно-сосудистым приступом, в частности внезапную сердечную смерть, острый коронарный синдром, нестабильную болезнь коронарных артерий, инфаркт миокарда, необходимость коронарной ангиопластики (PCI), аортокоронарное шунтирование (CABG), операции любого вида с экстракорпоральным кровообращением, ишемический удар, или реваскуляризация периферического кровообращения.

4. Применение по п.1, где указанным состоянием или заболеванием является атеросклероз у пациентов с хронической ишемической болезнью сердца, ишемическим цереброваскулярным приступом, атеросклероз конечностей, или облитерирующий тромбоангиит.

5. Применение по п.1 для предупреждения атеросклероза, где факторы риска для развития атеросклероза выбирают из группы, включающей гиперхолестеринемию, артериальную гипертензию, курение, гипергомоцистеинемию, климактерический период, пожилой возраст, ожирение, нервно-психическое напряжение, инфекции, ангиопатию в результате аллотрансплантации и толерантность к нитратам.

6. Применение по п.1, где указанным состоянием или заболеванием является дислипидемия, гиперхолестеринемия, гипертриглицеридемия, или гипертриглицеридемия, связанная с низким уровнем HDL в плазме крови.

7. Применение по п.1, где указанным тромбозом, который непосредственно не связан с атеросклерозом, является тромбоз, связанный с имплантацией металлических сосудистых протезов (стентов), аортокоронарным шунтированием (CABG), гемодиализ или венозная тромбоэмболическая болезнь.

8. Применение по п.1, где указанное состояние или заболевание является хроническим обструктивным заболеванием легких.

9. Применение по п.1, где указанное состояние или заболевание является хроническим заболеванием печени, в частности вирусным гепатитом.

10. Применение по п.1, где указанное заболевание представляет собой язву желудка или двенадцатиперстной кишки.

11. Применение по п.1, где указанное вазопротекторное средство находится в форме для перорального применения.

12. Применение по п.1, где указанное вазопротекторное средство находится в форме для парентерального введения.

13. Применение по п.1, где указанное вазопротекторное средство находится в форме для введения через дыхательные пути посредством ингаляции.

14. Применение по п.1, где указанное состояние или заболевание представляет собой хроническое обструктивное заболевание легких, и средство находится в форме для введения посредством ингаляции.

15. Применение по п.1, где R является CH₃.

16. Применение по п.1, где R является NH₂.

17. Применение по п.1, где R является группой N(H)CH₂OH.

18. Применение по п.1, где указанная четвертичная соль пиридиния представляет собой соль 1-метилникотинамида, а указанное состояние или заболевание представляет собой гиперхолестеринемию, гипертриглицеридемию или низкий уровень HDL.

19. Применение по п.1, где указанное вазопротекторное средство находится в форме пищевой добавки.

20. Способ лечения или предупреждения состояний или заболеваний, связанных с дисфункцией сосудистого эндотелия, окислительным стрессом, и недостаточной продукцией эндотелиального PGI₂, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту терапетвически эффективного количества четвертичной соли пиридиния формулы I

где R является NH₂, CH₃, или N(H)CH₂OH группой, а Х является фармацевтически приемлемым противоионом, где указанное состояние или заболевание является атеросклерозом, дислипидимией, гиперхолестеринемией, гипертриглицеридемией или низким уровнем HDL; тромбозом, который непосредственно не связан с атеросклерозом, или заболеванием, выбранным из следующей группы: легочная гипертензия, хроническая обструктивное заболевание легких (COPD), язва желудка или двенадцатиперстной кишки и хронического заболевания печени.

21. Способ по п.20, где указанным состоянием или заболеванием является атеросклероз.

22. Способ по п.20, где указанное состояние или заболевание представляет атеросклероз, связанный с острым сердечно-сосудистым приступом, в частности внезапную сердечную смерть, острый коронарный синдром, нестабильную болезнь коронарных артерий, инфаркт миокарда, необходимость коронарной ангиопластики (PCI), аортокоронарного шунтирования (CABG), ишемический удар, или реваскуляризацию периферического кровообращения.

23. Способ по п.20, где указанное состояние или заболевание представляет собой атеросклероз у пациентов с хронической ишемической болезнью сердца, ишемическим цереброваскулярным приступом или атеросклероз конечностей, включая облитерирующий тромбоангиит.

24. Способ по п.20 для предотвращения атеросклероза, где факторы риска развития атеросклероза выбраны из группы, включающий гиперхолестеринемию, артериальную гипертензию, курение, гипергомоцистеинемию, климактерический период, пожилой возраст, ожирение, нервно-психическое напряжение, инфекции, ангиопатию в результате аллотрансплантации и толерантность к нитратам.

25. Способ по п.20, где указанным состоянием или заболеванием является дислипидемия, гиперхолестеринемия, гипертриглицеридемия, или гипертриглицеридемия, связанная с низким уровнем HDL в плазме крови.

26. Способ по п.20, где указанным тромбозом, который непосредственно не связан с атеросклерозом, является тромбоз, связанный с имплантацией металлических сосудистых протезов (стентов), аортокоронарным шунтированием (CABG), любым видом операций с экстракорпоральным кровообращением, гемодиализом или венозной тромбоэмболической болезнью.

27. Способ по п.20, где указанным заболеванием является язва желудка или двенадцатиперстной кишки.

28. Способ по п.20, где указанным состоянием или заболеванием является хроническое обструктивное заболевание легких.

29. Способ по п.20, где указанным состоянием или заболеванием является хроническое заболевание печени, в частности вирусный гепатит.

30. Способ по п.20, где соль пиридиния формулы I вводят орально.

31. Способ по п.20, где соль пиридиния формулы I вводят парентерально.

32. Способ по п.20, где соль пиридиния формулы I вводят через дыхательные пути посредством ингаляции.

33. Способ по п.20, где указанным состоянием или заболеванием является хроническое обструктивное заболевание легких, и соль пиридиния формулы I представлена в форме, предназначенной для введения в организм посредством ингаляции.

34. Способ по п.20, где R является CH₃.

35. Способ по п.20, где R является NH₂.

36. Способ по п.20, где R является N(H)CH₂OH.

37. Способ по п.20, где производное пиридиния вводят в организм вместе с сердечно-сосудистым средством.

38. Способ по п.20, где указанная четвертичная соль пиридиния представляет собой соль 1-метилникотинамида, указанным состоянием или заболеванием является гиперхолестеринемия, гипертриглицеридемия или низкий уровень HDL.

39. Способ увеличения уровней простациклина у млекопитающих, включающий оральное введение эффективного количества четвертичной соли пиридиния формулы I

где R является NH₂, CH₃, или N(H)CH₂OH группой, а Х является фармацевтически приемлемым противоионом.

40. Применение четвертичных солей формулы I

где R является NH₂, CH₃, или N(H)CH₃OH, а Х является фармацевтически приемлемым противоионом, пригодным для потребления, для получения пищевой добавки для защиты сосудов у млекопитающих при состояниях или заболеваниях, связанных с дисфункцией сосудистого эндотелия, окислительным стрессом, и/или недостаточной продукцией эндотелиального простациклина, где указанное состояние или заболевание является атеросклерозом, дислипидимией, гиперхолестеринемией, гипертриглицеридемией или низким уровнем HDL; или тромбозом, который непосредственно не связан с атеросклерозом, или заболеванием, выбранным из следующей группы: легочная гипертензия, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), язва желудка или двенадцатиперстной кишки и хронического заболевания печени.

41. Применение по п.40, где указанным состоянием или заболеванием является атеросклероз у пациентов с хронической ишемической болезнью сердца, ишемическим цереброваскулярным приступом или атеросклероз конечностей, включая облитерирующий тромбоангиит.

42. Применение по п.40 для предупреждения атеросклероза, где факторы риска развитиия атеросклероза выбраны из группы, включающей гиперхолестеринемию, артериальную гипертензию, курение, гипергомоцистеинемию, климактерический период, пожилой возраст, ожирение, нервно-психическое напряжение, инфекции, ангиопатию в результате аллотрансплантации или толерантность к нитратам.

43. Применение по п.40, где указанным состоянием или заболеванием является дислипидемия, гиперхолестеринемия, гипертриглицеридемия, или гипертриглицеридемия, связанная с низким уровнем HDL в плазме крови.

44. Применение по п.40, где указанный тромбоз, который непосредственно не связан с атеросклерозом, является тромбозом, связанным с имплантацией металлических сосудистых протезов (стентов), аортокоронарным шунтированием (CABG), любым видом операций с искусственным кровообращением, гемодиализом, венозной тромбоэмболической болезнью.

45. Применение по п.40, где недостаточная продукция эндотелиального простациклина связана с пожилым возрастом.

46. Применение по п.40, где R является CH₃.

47. Применение по п.40, где R является NH₂.

48. Применение п.40, где R является N(H)CH₂OH.

49. Применение по п.40, где указанная четвертичная соль пиридиния представляет собой соль 1-метилникотинамида, а указанным состоянием или заболеванием является гиперхолестеринемия, гипертриглицеридемия или низкий уровень HDL.