НОВОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИ ЭФФЕКТИВНЫХ ПЕПТИДОВ Российский патент 2012 года по МПК A61K38/06 A61P9/00 A23C9/123 A23L1/305 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к профилактике и лечению эндотелиальной дисфункции с помощью биологически активных пептидов и их содержащих продуктов. Было обнаружено, что продукт, имеющий высокое содержание короткоцепочечных пептидов, особенно эффективен для применения в соответствии с настоящим изобретением.

Продукт, применяемый в соответствии с настоящим изобретением, может быть изготовлен, например, как продукт питания для здорового образа жизни или фармацевтический продукт. Он содержит низкомолекулярные пептиды, такие как трипептиды Ile-Pro-Pro (IPP), Val-Pro-Pro (VPP) или их содержащие смеси, либо концентраты, и действует путем улучшения эпителиальной функции и излечивания заболеваний, с нею связанных. Конкретной целью настоящего изобретения является снижение жесткости и, таким образом, повышение эластичности кровеносных сосудов с применением низкомолекулярных пептидов, таких как трипептиды Ile-Pro-Pro (IPP), Val-Pro-Pro (VPP) или смеси, концентраты и другие продукты, их содержащие.

Уровень техники

Сосудистый эндотелий локально регулирует сосудистый тонус посредством высвобождения сосудорасширяющих веществ, таких как эндотелиальный релаксирующий фактор (EDRF), оксид азота, простациклин и эндотелиальный гиперполяризующий фактор (EDHF), и сосудосуживающих веществ, таких как тромбоксан A₂, свободные радикалы и эндотелин. В нескольких клинических исследованиях была показана важность оксида азота как в базальном, так и индуцированном контроле сосудистого тонуса в больших эпикардиальных коронарных артериях и в коронарной микроциркуляции (см. обзорные работы Vapaatalo H, Mervaala E. Clinically important factors influencing endothelial function. Med Sci Monit 2001; 7(5): 1075-1085. Drexler H, Hornig B. Endothelial dysfunction: a novel therapeutic target. J Mol Cell Cardiol 1999; 31: 51-60). Вышеупомянутые релаксирующие факторы эндотелиального происхождения корректируют эндотелиальную дисфункцию, например, при атеросклерозе. Эндотелий связан с регуляцией сосудистого тонуса, модуляцией свертывания крови, стимулированием и предотвращением роста сосудов, модуляцией воспаления и действием в качестве объекта воздействия и нежелательных эффектов лекарственных препаратов. Высвобождение EDRF стимулируется увеличением в сосудах притока, например, брадикинина, тромбина, ацетилхолина и серотонина.

Эндотелий контролирует тонус нижележащей гладкой мускулатуры в ответ на определенные фармакологические и физиологические стимулы. Функционально эндотелий участвует в сосудистом росте, адгезии лимфоцитов и иммунологической регуляции, метаболизме циркулирующих аминов, метаболизме липопротеинов и интеграции и передаче гемопоэтических сигналов.

Эндотелиальная дисфункция характеризуется пониженной секрецией сосудорасширяющих медиаторов, повышенной продукцией сосудосуживающих веществ, повышенной чувствительностью к сосудосуживающим веществам и/или устойчивостью гладкой мускулатуры сосудов к эндотелиальным сосудорасширяющим веществам.

Дисфункция является следствием нарушения баланса между релаксирующими и сокращающими факторами, либо агентами, стимулирующими и ингибирующими рост. Воспаление, окисление липопротеинов или другие реакции окислительного стресса являются факторами, влияющими на развитие и поддержание эндотелиальной дисфункции. Теоретически, наиболее отчетливыми и прямыми показателями эндотелиальной дисфункции являются оксид азота и его метаболиты, равно как и циклический ГМФ.

Эндотелиальная дисфункция может быть как причиной, так и следствием нескольких клинических состояний, таких как гипертензия, атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, сердечная недостаточность, диабет и высокое содержание холестерина в крови. Наиболее прямым свидетельством эндотелиальной дисфункции являются нарушения баланса между сниженными продукцией или функционированием рецепторов к сосудорасширяющим факторам, таким как оксид азота, простациклин, эндотелиальный гиперполяризующий фактор (EDHF), и натрийуретическими пептидами; или повышенными образованием либо чувствительностью к сосудосуживающим агентам, таким как эндотелин-1, ангиотензин II, эндопероксиды и тромбоксан A₂.

Лечение эндотелиальной дисфункции может осуществляться несколькими известными препаратами, наиболее важными из которых являются ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента (ACE), блокаторы рецептора ангиотензина II, препараты нитратов и препараты, понижающие холестерин. Эффект ингибиторов ACE главным образом основан на их способности улучшать действие брадикинина, который усиливает синтез оксида азота в эндотелии. Индуцированная и/или усиленная продукция оксида азота или добавление нитратов может сбалансировать недостаточную внутреннюю продукцию оксида азота. Лекарства и нитраты выступают в качестве экзогенного EDRF и расширяют кровеносные сосуды, в дополнение, они активны как антитромботическое соединение в поврежденных венах.

В WO 02/34767 A1, Selwood и др., описаны пептиды, являющиеся фрагментами фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF) и пригодные для подавления ангиогенеза. В соответствии с изобретением, пептиды содержат от трех до восьми аминокислот, и ключевой особенностью аминокислотной последовательности является наличие и расположение основных остатков, в частности остатков аргинина (Arg) и/или лизина (Lys). Документ включает описание нескольких пептидов, содержащих от шести до шестнадцати аминокислот. Ни один из них не содержит последовательности Изолейцин-Пролин-Пролин (IPP) или Валин-Пролин-Пролин (VPP). Согласно публикации, пептиды могут быть полезны при болезнях, где ангиогенез играет в патологии значительную роль. Подобные заболевания могут включать диабетическую ретинопатию, возрастную дистрофию желтого пятна (ARDS), рак, эндометриоз, псориаз и ревматоидный артрит.

В WO 99/45941, Sandberg и др., описана композиция, применяемая для улучшения пластичности, эластичности или внешнего вида ткани. Композиция составлена из пептидов, которые относятся к какому-либо из 41 петидного фрагмента, полученных при термолитическом расщеплении эластина. Предпочтительно, композиция содержит полипептид, имеющий формулу R1-валил-валил-пролил-глутамин-R2, где R1 является амино-концевой частью пептида, а R2 является карбокси-концевой частью пептида. Композиция предпочтительно наносится на кожу человека в составе косметической композиции. В соответствии с документом, композиция также может быть полезна при лечении гипертензии, ишемической болезни сердца, артериосклерозе, стенокардии, тромбозе коронарных артерий, хроническом обструктивном заболевании легких и рестенозе после ангиопластических операций.

WO 01/91700 A2 и патент США 6962904 B1, Mitts и др., частично основаны на тех же исследованиях, что и WO 99/45941, Sandberg и др. Документы описывают композиции для повышения эластичности ткани, и данные композиции составлены из пептидов, соответствующих последовательностям, найденным в эластине, в частности, последовательностям -Валин-Валин-Пролин- и -Валин-Валин-Пролин-Аспарагин-. Указанные композиции полезны для улучшения продукции эластина в тканях. Согласно публикациям, основным практическим применением опять же является использование в косметических средствах, но также указывается, что композиции могут быть полезны при лечении, например, гипертензии, ишемической болезни сердца, артериосклероза, стенокардии, тромбоза коронарных артерий, хронического обструктивного заболевания легких и рестеноза после ангиопластических операций.

Описанные пептидные фрагменты эластина содержат большое количество остатков глицина и/или пролина по сравнению с другими аминокислотными последовательностями. Фрагменты не включают последовательности Изолейцин-Пролин-Пролин (IPP) и/или Валин-Пролин-Пролин (VPP).

Изготовление биологически активных пептидов ферментацией хорошо изучено и описано в предшествующем уровне техники, при этом особенный интерес представляют пептиды, выделенные из молока. Было показано, что они обладают, к примеру, способностями к связыванию опиоидного рецептора, активностью ингибитора ACE и антимикробными свойствами. Были проведены некоторые исследования в связи с, например, гипертензией, но эффекты данных пептидов на функции эндотелия не были описаны. В частности, эффекты трипептидов Валин-Пролин-Пролин (VPP) и Изолейцин-Пролин-Пролин (IPP) и продуктов, их содержащих, на функции эндотелия не были описаны в предшествующем уровне техники.

Трипептиды VPP и IPP являются известными соединениями, которые были описаны как ингибиторы ACE, имеющие антигипертензивное действие (снижающие кровяное давление). К примеру, в работе J Dairy Sci 78 (1995) 777-783, Nakamura и др. описывают применение закваски, содержащей Lactobacillus helveticus и Saccharomyces cerevisiae, для получения двух ингибиторов ACE. Оба соединения были идентифицированы как трипептиды, Val-Pro-Pro и Ile-Pro-Pro. Хотя данная публикация не описывает антигипертензивный эффект трипептидов in vivo, предусмотрено, что это является следующей целью исследований.

В патенте США 5449661, Nakamura и др., раскрыто получение пептида, содержащего последовательность трипептида Val-Pro-Pro, и его применение для снижения высокого кровяного давления. Пептид получен ферментацией порошка обезжиренного молока с помощью штамма JCM-1004 Lactobacillus helveticus, после чего пептид очищается хроматографически и лиофилизируется.

В WO 99/16862, Yamamoto и др., описывают штамм CM4, FERM BP-6060 Lactobacillus helveticus, который способен производить трипептиды Val-Pro-Pro и/или Ile-Pro-Pro в больших количествах.

В WO 01/32905, Valio, описан продукт, обладающий антигипертензивными свойствами, и его получение. Продукт производится ферментацией казеинсодержащего исходного сырья с помощью молочнокислых бактерий, и проведением нанофильтрации полученного продукта ферментации, содержащего пептид. Антигипертензивные свойства продукта проявляются, в частности, благодаря содержанию в нем трипептидов IPP и VPP. В WO 03/070267, Valio, описано применение IPP и VPP, также как и продукта, описанного в WO 01/32905, в получении продукта, повышающего доступность минералов. Данный продукт может применяться, например, для усиления остеогенеза (костеобразования), укрепления скелетной системы и лечения или профилактики остеопороза.

Кровеносные сосуды участвуют в заболеваниях, связанных с упруго-эластичными свойствами, включая гипертензию, артериосклероз, ангину, ангиогенез, инфаркт миокарда, тромбоз коронарных артерий, рестеноз после ангиопластических операций и хроническое обструктивное заболевание легких. Сердечно-сосудистые заболевания являются одними из наиболее распространенных заболеваний в мире, и они в списке пяти наиболее опасных для жизни заболеваний во многих странах. К сожалению, с повышением стандартов жизни также повышается риск указанных заболеваний, и, следовательно, они будут иметь еще большее значение в будущем. В настоящее время в дополнение к общепринятым лекарственным препаратам, потребителю предложена привлекательная альтернатива в виде функциональных продуктов.

Функциональные продукты, улучшающие эластичность кровеносных сосудов и улучшающие и нормализующие функцию эндотелия, будут, таким образом, приветствоваться как часть регулярной диеты. Кроме того, достойно рассмотрения введение в качестве медицинского или фармацевтического продукта пептидов с полезными свойствами в отношении жесткости артерий.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Таким образом, целью настоящего изобретения является предоставление продукта, который, в качестве части регулярной диеты либо лекарственного и фармацевтического продукта, улучшает или нормализует эндотелиальную функцию и, следовательно, способен предотвращать, облегчать или излечивать расстройства и заболевания, связанные с эндотелиальной дисфункцией. Эндотелиальная дисфункция играет значительную роль в определении жесткости или эластичности кровеносных сосудов, что, в свою очередь, весьма важно при многих тяжелых заболеваниях, например, ишемической болезни сердца, артериосклерозе, стенокардии, тромбозе коронарных артерий, хроническом обструктивном заболевании легких и рестенозе после ангиопластических операций. Следовательно, способность повышать эластичность кровеносных сосудов является особенно важным свойством настоящего изобретения.

Продукт, который будет применяться согласно изобретению, состоит из либо содержит пептиды, улучшающие эндотелиальную функцию.

Следующей целью настоящего изобретения является предоставление продукта, как такового, в качестве агента, улучшающего эндотелиальную функцию, либо для применения для изготовления функциональных продуктов питания или лекарств, предназначенных для потребления.

Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление способа предупреждения, облегчения или лечения эндотелиальной дисфункции, а также и расстройств и заболеваний, с нею связанных, путем назначения индивидууму, нуждающемуся в таком лечении, пептидов, улучшающих эндотелиальную функцию, или продукта, содержащего их в достаточном для достижения желаемого эффекта количестве.

Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление способа предупреждения, облегчения или лечения эндотелиальной дисфункции, также как и расстройств и заболеваний, с нею связанных, путем введения индивидууму продукта с высоким содержанием низкомолекулярных пептидов, являющихся производными казеина и полученных путем ферментации казеинсодержащего исходного сырья с помощью штамма LBK-16H, DSM 13137 Lactobacillus helveticus, или штамма LB 1936, DSM 17754 Lactobacillus helveticus, и, необязательно, частичного или полного удаления казеина и/или других белков молока и/или лактозы, в достаточном для достижения желаемого эффекта количестве. В предпочтительном варианте осуществления продукт ферментации также подвергается нанофильтрации.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В соответствии с настоящим изобретением, к удивлению, было обнаружено, что вышеуказанные цели достигаются с применением низкомолекулярных пептидов, в частности, трипептидов Ile-Pro-Pro (IPP), Val-Pro-Pro (VPP). В настоящее время доказано, что указанные пептиды способны нормализовать эндотелиальные функции, улучшая эластичность кровеносных сосудов и противодействовать жесткости артерий.

Пептиды, применяемые в соответствии с настоящим изобретением, являются биологически активными пептидами, соответствующими таковым, полученным при гидролизе казеина или казеинсодержащего сырья, такого как молоко. В качестве пригодных рассматриваются короткоцепочечные пептиды ди-, три- и тетрапептиды и их смеси. В частности, пептиды представляют собой трипептиды IPP и VPP, смеси пептидов, включающие IPP и VPP, и продукты и композиции, их содержащие.

Предпочтительный вариант осуществления предоставляет прекрасные возможности для нормализации эндотелиальной дисфункции и связанных с эндотелием нарушений.

Таким образом, изобретение относится к применению низкомолекулярных, выделенных из казеина пептидов для изготовления продукта, улучшающего эндотелиальную функцию.

Далее, изобретение относится к применению продукта, содержащего низкомолекулярные, выделенные из казеина пептиды, для изготовления продукта, улучшающего эндотелиальную функцию.

Предпочтительно, низкомолекулярные, выделенные из казеина пептиды включают ди-, три- и тетрапептиды и их смеси. Наиболее предпочтительно высокое содержание IPP и VPP.

Далее, изобретение относится к применению продукта с высоким содержанием низкомолекулярных, полученных из казеина пептидов, которые были получены ферментацией казеинсодержащего исходного сырья с помощью молочнокислых бактерий, и, возможно, нанофильтрации полученного пептидсодержащего продукта ферментации, в изготовлении конечного продукта, улучшающего эндотелиальную функцию.

В качестве предпочтительного варианта осуществления изобретение относится к применению композиции закваски, которая содержит пептиды, выделенные из казеина, минералы и живые молочнокислые бактерии для изготовления продукта, улучшающего эндотелиальную функцию.

Изобретение также относится к способу нормализации эндотелиальной функции и зависимых от эндотелия нарушений путем назначения индивидууму пептидов, нормализующих эндотелиальную функцию и зависимые от эндотелия нарушения, либо продукта, содержащего их в количестве, достаточном для достижения желаемого эффекта.

В первую очередь, индивидуумом является человек. Положительные эффекты применения продуктов согласно изобретению, естественно, также полезны для животных, особенно домашних животных и сельскохозяйственных животных. Примеры таковых включают собак, кошек, кроликов, лошадей, коров, свиней, коз, овец и птиц.

Трипептиды VPP и IPP могут быть получены синтетически или путем гидролиза сырья, содержащего указанные последовательности. В предпочтительном варианте осуществления пептиды получены из казеина или казеинсодержащего исходного сырья путем ферментации. Особо предпочтительным является применение способа, описанного в WO 01/32905, где продукт, содержащий биологически активные пептиды, получен с помощью ферментации с последующими концентрацией и нанофильтрацией. Этот предпочтительный способ осуществления предоставляет прекрасные возможности для применения исходного сырья различных типов и модификаций композиции конечного продукта согласно требованиям, как подробно описано в WO 01/32905, настоящим введенным в данный текст ссылкой.

В случае, когда биологически активные пептиды для применения в соответствии с настоящим изобретением получаются путем ферментации, исходное сырье может представлять собой любой продукт, содержащий последовательности требуемых биологически активных пептидов как часть его собственных пептидной или белковой последовательности. Белок молока, особенно казеин, предпочтителен для применения как таковой либо в форме различных препаратов. Пригодные типы исходного сырья также включают различные молочные продукты, содержащие казеин, такие как обезжиренное молоко или молоко с различным содержанием жира как таковые, либо в форме соответствующего сухого молока и молочнокислых продуктов, таких как кислое молоко, пахта, йогурт, простокваша, несозревший сыр и т.д.

Ферментация может проводиться с помощью любых молочнокислых бактерий, которые способны продуцировать требуемые пептиды из исходного сырья. Подходящие молочнокислые бактерии могут быть обнаружены среди видов, принадлежащих к родам, например, Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc, Streptococcus и Bifidobacterium. Наиболее выраженными среди молочнокислых бактерий протеолитическими свойствами обладает Lactobacillus helveticus, и, следовательно, рассматривается как наиболее подходящая для данной цели. Предпочтительным штаммом Lactobacillus helveticus является L.helveticus LBK-16H, DSM 13137, который подробно описан в патентной публикации WO 01/32836. Особенно предпочтительным является Lactobacillus helveticus LB 1936, DSM 17754, который подробно описан в патентной публикации FI20065054.

Молочнокислые бактерии могут применяться в виде чистых культур либо смешанных культур, отдельно или совместно с обычно применяемыми и коммерчески доступными заквасками. Молочнокислые бактерии также могут быть использованы совместно с другими микроорганизмами.

Условия ферментации подбирают таким образом, чтобы удовлетворить требованиям применяемого штамма для образования достаточного количества биологически активных пептидов для получения желаемого эффекта. Выбор подходящих условий, таких как температура, pH и аэрация, является частью практических знаний специалиста в данной области. Обычно ферментация проводится при температуре приблизительно от 30 до 45°C. Ферментацию проводят до тех пор, пока не образуется требуемое количество биологически активных пептидов. Обычно процесс занимает приблизительно от 20 до 30 часов. Во время ферментации образуется смесь различных пептидов. В случае достаточно продолжительной ферментации в основном получаются относительно короткие ди- и трипептиды, такие как Val-Pro-Pro (VPP) и Ile-Pro-Pro (IPP). Предпочтительно время инкубации примерно от 22 до 24 часов.

Полученная клеточная суспензия может применяться как таковая, либо пептиды могут быть отделены и очищены с применением стандартных методик. Предпочтительным видом обработки является концентрирование, например, испарением или частичным или полным высушиванием клеточной суспензии путем распределения суспензии по поверхности пластины, высушивания и, наконец, перемалывания в хорошо сохраняющийся сухой порошок.

Дополнительная переработка клеточной суспензии путем нанофильтрации является превосходным способом, облегчающим производство пептидов (активных в отношении эндотелиальных функций, таких как жесткость артерий) совместно с необходимым составом минералов в одном и том же продукте. Путем выбора типа мембраны для нанофильтрации и условий процесса возможно влиять на состав полученного продукта.

Нанофильтрацию проводят вплоть до достижения требуемого интервала содержания сухого вещества, который может составлять примерно от 20 до 40%, или до приблизительного отношения объемных концентраций от 5 до 20. Посредством нанофильтрации содержание пептидов в продукте повышается. Композиция конечных продуктов естественным образом зависит от используемых условий ферментации, необязательной обработки путем нанофильтрации и других возможных предварительных и дополнительных обработок.

Неожиданно, было показано, что в соответствии с настоящим изобретением, трипептиды IPP и VPP и продукты, их содержащие, снижают артериальную жесткость и, таким образом, полезны при артериальных дисфункциях. В течение периода воздействия в десять недель амбулаторный индекс жесткости артерий (AASI), измеряющий артериальную жесткость, значительно улучшился у группы, получавшей продукт, содержащий трипептиды IPP и VPP, по сравнению с контрольной группой; даже в первом неоптимизированном тесте индекс снизился примерно на 9% по сравнению с контрольной группой. Средний AASI на конец периода лечения составил 0,31±0,15 в группе Lactobacillus helveticus и 0,34±0,17 в контрольной группе.

Продукты, описанные выше, могут как таковые применяться для достижения желаемого эффекта. Продукты также могут быть высушены и использованы в форме порошка или лиофилизованного препарата. Продукты предпочтительно также применяются при получении функциональных продуктов питания или других продуктов. Применение в качестве лекарственных или фармацевтических продуктов также возможно.

Понятие «продукты питания» имеет широкое значение в настоящем изобретении, охватывая все потребляемые продукты, которые могут находиться в твердой, желеобразной или жидкой форме, и охватывая как готовую продукцию, так и продукты, к которым в качестве добавки или части продукта во время потребления добавлены биологически активные пептиды или продукты, их содержащие. Продукты питания могут, например, представлять собой продукцию молочной промышленности либо индустрии напитков. Типичные продукты включают молочные продукты, такие как йогурт, простокваша, творог, кислое молоко, кислое цельное молоко, пахта, другие кисломолочные продукты, несозревшие сыры и зрелые сыры, начинки для закусок и т.д. Другая важная группа включает напитки, такие как напиток из молочной сыворотки, фруктовые напитки и газированные напитки.

В соответствии с изобретением, биологически активные пептиды или продукты, их содержащие, применяются в достаточном для достижения желаемого эффекта количестве. В случае применения продукта, полученного двухстадийным способом, описанным выше, количество для применения в основном зависит от степени концентрации сыворотки и составляет, к примеру, от 0,1 до 30%, предпочтительно приблизительно от 5 до 15%, при подсчете относительно веса конечного продукта.

Биологически активные пептиды или продукты, их содержащие, могут быть добавлены в пищевой продукт во время его изготовления либо к готовому пищевому продукту. Рассматриваемые пищевые продукты, таким образом, включают желаемые пептиды либо продукт, их содержащий, в дополнение к другим компонентам, содержащимся в соответствующих пищевых продуктах, и полностью соответствует по вкусу и характеристикам с этими обычными продуктами.

Изобретение будет подробно описано посредством последующих примеров. Эти примеры приведены только для иллюстрации изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие каким-либо образом объем защиты. Изложенные примеры демонстрируют благоприятное, полезное и лечебное действие IPP и VPP как таковых либо в комбинации, на артериальную жесткость путем усиления эндотелиальной функции, также как и предпочтительные конечные продукты для приема биологически активных пептидов.

ПРИМЕР 1

Влияние биологически активного продукта на артериальную

жесткость

Артериальная жесткость может быть измерена с помощью ультразвукового оборудования или аппланационной тонометрии, либо с применением амбулаторного индекса жесткости артерий (AASI). AASI определяется как 1 минус тангенс угла наклона к оси икс диастолического или систолического давления в течении 24-часового амбулаторного мониторинга, и является надежным показателем артериальной жесткости (Li Y, Wang JG, Dolan E, Gao PJ, Guo HF, Nawrot T. Ambulatory arterial stiffness index derived from 24-hour ambulatory blood pressure monitoring. Hypertension 2006; 47(3):359-64).

В рандомизированном исследовании, где контрольная группа параллельно принимала плацебо, 94 пациента с повышенным давлением, не получавшие никаких лекарственных препаратов, принимали либо молоко, ферментированное с помощью штамма Lactobacillus helveticus LBK-16H в соответствии с Примером 2, либо контрольный продукт в течение десяти недель после четырехнедельного подготовительного периода. Двадцатичетырехчасовое амбулаторное измерение кровяного давления проводили в начале и в конце экспериментального периода. Средние значения базовой линии систолического и диастолического кровяного давления составляли 132,6±9,9/83,0±8,0 мм рт.ст. в группе, принимавшей Lactobacillus helveticus, и 130,3±9,6/80,2±7,0 мм рт.ст. в контрольной группе.

На конец десятинедельного экспериментального периода систолическое и диастолическое кровяное давление в большей степени снизилось в группе, принимавшей продукт Lactobacillus helveticus, по сравнению с контрольной группой. Эффект лечения на SBP (систолическое кровяное давление) составил -4,1 (95% Cl: -6,6 до -1,8, p<0,001). Эффект лечения на DBP (диастолическое кровяное давление) составил -1,8 (95% Cl: -3,7 до -0,0, p=0,048).

Индекс AASI определяли, используя значения амбулаторного кровяного давления и их анализа методом, предложенным Li et al., ibid. Индекс AASI линейно возрастает с возрастом как у мужчин, так и у женщин. Низкие значения индекса AASI более благоприятны, чем высокие значения, и, следовательно, если значение снижается, то улучшается индекс артериальной жесткости. Средние значения базовой линии AASI составили 0,36±0,15 в группе Lactobacillus helveticus и 0,36±0,17 в контрольной группе. На конец экспериментального периода средние значения AASI составили 0,31±0,14 в группе Lactobacillus helveticus и 0,34±0,15 в контрольной группе.

В течение десяти недель экспериментального периода индекс AASI улучшился статистически значимо в тестируемых группах (p=0,043), но не статистически значимо в контрольной группе (p=0,47) (Таблица 1).

Таблица 1 Изменения индекса AASI после 10-недельного экспериментального периода     Значимость
(2-сторонняя) Разность средних Тестируемая группа Изменения индекса AASI 0,043 -0,0427 Контрольная группа Изменения индекса AASI 0,474 -0,0195

ПРИМЕР 2

Получение продуктов, пригодных в настоящем изобретении

Штамм Lactobacillus helveticus LBK 16-H, DSM 13137, выращивали в среде MRS при 37°C в течение 24 часов и высевали в восстановленное молоко (10%) для образования закваски. Через два цикла роста закваску (15%) вносили в среду ферментера, приготовленную из 9-10% сухого обезжиренного молока и стерилизованную при 110°С в течение 10 минут. Ферментацию проводили при 37°C от 22 до 24 часов при непрерывном сильном перемешивании. Продукт (a) может быть использован как таковой, в сухой и/или перемолотой форме, либо требуемые пептиды могут быть отделены от продукта с применением известных методик.

Процедура была повторена с применением Lactobacillus helveticus LB 1936, DSM 17754, и цельного молока или пахты, соответственно, вместо сухого обезжиренного молока, с целью производства соответствующих продуктов b и c.

ПРИМЕР 3

Получение конечного продукта, пригодного в настоящем изобретении

Пептидный концентрат

Кислое молоко, содержащее пептиды, активные при коррекции эндотелиальной дисфункции, получали путем добавления примерно 1% пептидного концентрата к коммерчески доступному кислому молоку. Композиция продукта показана в Таблице 2, в которой для сравнения также приведена композиция коммерчески доступного кисломолочного продукта, кислого молока AB, произведенного Valio Ltd.

Для получения пептидного концентрата Evolus® ферментацию проводили, как описано в Примере 2. Полученную клеточную суспензию разделяли с помощью центрифуги для осветления. Таким образом, предварительно обработанная сыворотка подвергалась нанофильтрации через мембрану Nanomax-50 при 40°C и давлении в 30 бар. Сыворотку фильтровали до тех пор, пока соотношение объемных концентраций не достигало 9.

Таблица 2 Композиция продукта Evolus и коммерческого молочно-кислого
продукта (кислое молоко AB, Valio Ltd) Информация о питательности
продукта/100 г (порция 200 г) Evolus Кислое молоко AB Калорийность 260 кДж/
61 ккал 220 кДж/
53 ккал Белки 3,0 г 3,2 г Углеводы 12 г 4,4 г Из которых лактозы не более 1,0 г*   Клетчатка 0 г 0 г Жиры 0,1 г 2,5 г Кальций 150 мг** 120 мг Калий 233 мг 170 мг Магний 13 мг 11 мг Натрий 24 мг 39 мг Трипептиды Ile-pro-pro 1,1 мг 0 Val-pro-pro 1,3 мг 0 * Свыше 80% лактозы ферментативно разрушено
** 25% от рекомендуемого суточного потребления

ПРИМЕР 4

Получение конечного продукта, пригодного в настоящем изобретении

Кисломолочный напиток Evolus Tehojuoma

Для получения суточной дозы кисломолочного напитка Evolus® Tehojuoma ферментацию проводили, как описано в Примере 2. Далее, к кисломолочному продукту добавляли 1% пептидного концентрата Evolus®, приготовленного как описано в Примере 3. Продукт, содержащий необходимую суточную дозу активного ингредиента как таковой, предназначен для употребления.

Информация о питательности продукта приведена в Таблице 3. Другими ингредиентами, которые содержат кисломолочный напиток, являются пастеризованное обезжиренное молоко, концентрат молочного белка, загустители, кальций морских водорослей, регулятор кислотности, закваска, ароматизатор, витамины (фолиевая кислота, B6, B12) и краситель.

Таблица 3 Композиция молочнокислого напитка Evolus® Tehojuoma Информация о питательности продукта/100 г (порция 100 мл) Evolus Калорийность 260 кДж/
61 ккал Белки 3,5 г Углеводы 11 г Из которых лактозы не более 1,0 г* Клетчатка 0 г Жиры 0,1 г Кальций 200 мг** Калий 410 мг Магний 15,5 мг Натрий 38 мг Фолиевая кислота 66 мкг*** Витамин В6 0,66 мкг*** Витамин В12 0,33 мкг*** * Свыше 80% лактозы ферментативно разрушено
** 25% от рекомендуемого суточного потребления
*** 33% от рекомендуемого суточного потребления

ПРИМЕР 5

Получение конечного продукта, пригодного в настоящем изобретении

Мягкий сыр

Мягкий сыр, такой как свежий сыр, плавленый сыр и домашний сыр (прессованный творог) получали согласно общепринятым технологиям производства. К примеру, плавленый сыр Evolus® получали смешиванием творога, сливок или масла и других ингредиентов, подвергали тепловой обработке и упаковывали. Пептидный концентрат Evolus®, приготовленный, как описано в Примере 3, добавляли в обогащенную творогом смесь. Продукт, содержащий необходимую суточную норму активного ингредиента, как таковой предназначен для употребления.

Трипептиды Ile-Pro-Pro (IPP) и/или Val-Pro-Pro (VPP) применяют для получения продукта, снижающего артериальную жесткость, и для получения продукта, улучшающего эластичность кровеносных сосудов. Получают их из казеина или казеинсодержащего исходного сырья путем ферментации его со штаммом Lactobacillus helveticus DSM 13137 или Lactobacillus helveticus DSM 17754 и выделением с помощью концентрирования и нанофильтрации. Продукт включает композицию закваски, содержащей выделенные из казеина пептиды Ile-Pro-Pro и/или Val-Pro-Pro, и живые молочнокислые бактерии. Для снижения артериальной жесткости индивидууму вводят продукт, включающий Ile-Pro-Pro и/или Val-Pro-Pro. Для улучшения эластичности артериальных сосудов индивидууму вводят продукт, включающий Ile-Pro-Pro и/или Val-Pro-Pro, с применением указанных биологически активных пептидов. Изобретение способствует предупреждению и нормализации эндотелиальной дисфункции, повышает эластичность кровеносных сосудов и снижает артериальную жесткость сосудов. 4 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 табл., 5 пр.

1. Применение Ile-Pro-Pro и/или Val-Pro-Pro для получения продукта снижающего артериальную жесткость.

2. Применение Ile-Pro-Pro и/или Val-Pro-Pro для получения продукта улучшающего эластичность кровеносных сосудов.

3. Применение по п.1 или 2, отличающееся тем, что Ile-Pro-Pro и/или Val-Pro-Pro представлены в форме пищевого продукта.

4. Применение по п.3, отличающееся тем, что пищевой продукт имеет высокое содержание выделенных из казеина низкомолекулярных пептидов, и который получен ферментацией казеинсодержащего исходного сырья с молочнокислыми бактериями.

5. Применение по п.4, отличающееся тем, что пищевой продукт имеет высокое содержание выделенных из казеина низкомолекулярных пептидов, и который получен ферментацией казеинсодержащего исходного сырья со штаммом Lactobacillus helveticus LBK-16H, DSM 13137, или со штаммом Lactobacillus helveticus LB 1936, DSM 17754, необязательно с частичным или полным удалением казеина и/или других белков молока и/или лактозы и нанофильтрацией полученного содержащего белок ферментированного продукта.

6. Применение по п.4, отличающееся тем, что продукт включает композицию закваски, содержащей выделенные из казеина низкомолекулярные пептиды Ile-Pro-Pro и/или Val-Pro-Pro, и живые молочнокислые бактерии.

7. Применение по п.3, отличающееся тем, что пищевой продукт является продуктом молочной промышленности, индустрии напитков, индустрии переработанных продуктов, индустрии готовых мясных блюд, хлебопекарной промышленности или кондитерской промышленности.

8. Применение по п.7, отличающееся тем, что продукт является ферментированным молочным продуктом.

9. Применение по п.7, отличающееся тем, что продуктом является напиток, предпочтительно напиток из молочной сыворотки, фруктовый напиток или пиво.

10. Применение по п.1 или 2, отличающееся тем, что продукт является продуктом фармацевтической промышленности.

11. Способ снижения артериальной жесткости, включающий введение индивидууму продукта, включающего Ile-Pro-Pro и/или Val-Pro-Pro, определенного в п.1.

12. Способ улучшения эластичности артериальных сосудов, включающий введение индивидууму продукта, включающего Ile-Pro-Pro и/или Val-Pro-Pro, определенного в п.2.