ДОМЕНЫ И ЭПИТОПЫ МЕНИНГОКОККОВОГО БЕЛКА NMB1870 Российский патент 2009 года по МПК C07K14/00 C12N15/31 A61K38/16 A61K39/95 A61P31/04 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Изобретение касается белка NMB1870, который представляет собой известный поверхностный белок Neisseria meningitidis, экспрессируемый всеми серогруппами нейссерий. Белок подразделяется на три отдельных семейства. Сыворотка, индуцированная против антигена определенного семейства, оказывает бактерицидное действие в пределах этого семейства, но неактивна в отношении штаммов, экспрессирующих антигены одного из других двух семейств, т.е. существует перекрестная защита внутри семейства, но не между семействами. Установлено, что NMB1870 может быть подразделен на домены и что антигенные домены могут быть выделены из NMB1870 всех трех семейств и экспрессированы в виде единой полипептидной цепи, что осуществляется способом, раскрытым в изобретении. Также обнаружено, что NMB1870 экспрессирует некоторые эпитопы в поверхностных петлях, расположенных между альфа-спиралями, и что замещение эпитопами петли одного семейства петлей другого семейства позволяет получить химерный NMB1870 с антигенностью, характерной для белков нескольких семейств, В изобретении раскрыты химерные белки NMB1870 (варианты), содержащие части NMB1870 различных семейств. Полученные по изобретению белки могут быть использованы в качестве лекарственного средства, в составе иммуногенных композиций для иммунизации против заболеваний, вызванных Neisseria meningitidis, без учета семейной специфичности защиты. 7 н. и 15 з.п. ф-лы, 46 ил.

1. Способ получения химерной аминокислотной последовательности NMB1870, предусматривающий следующие стадии: (а) выравнивание первой аминокислотной последовательности NMB1870 со второй аминокислотной последовательностью NMB1870, где первая и вторая последовательности различны и принадлежат к различным семействам NMB1870, с получением пары выровненных последовательностей; (b) выбор части первой аминокислотной последовательности, начиная с аминокислоты a₁ указанной первой аминокислотной последовательности и кончая аминокислотой b₁ указанной первой аминокислотной последовательности, где эта часть представляет собой последовательность поверхностной петли; (с) выбор части второй аминокислотной последовательности, начиная с аминокислоты а₂ указанной второй аминокислотной последовательности и кончая аминокислотой b₂ указанной второй аминокислотной последовательности, где эта часть представляет собой последовательность поверхностной петли, и где остатки a₁ и а₂ и b₁ и b₂ выровнены в паре выровненных последовательностей;
и (d) замена указанной части первой аминокислотной последовательности указанной частью второй аминокислотной последовательности с получением таким образом химерной аминокислотной последовательности NMB1870.

2. Способ по п.1, в котором первая последовательность представляет собой последовательность NMB1870 семейства I.

3. Способ по п.2, в котором первая последовательность представляет собой SEQ ID NO:1.

4. Способ по п.3, где поверхностные петли в SEQ ID NO:1 представляют собой: (1) аминокислоты 134-141; (2) аминокислоты 162-168; (3) аминокислоты 181-182; (4) аминокислоту 197; (5) аминокислоты 219-223; (6) аминокислоты 234-236; (7) аминокислоты 261-267.

5. Способ по любому из предшествующих пунктов, где вторая последовательность представляет собой SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:3.

6. Способ по любому из предшествующих пунктов, где выбранные части характеризуются длиной, составляющей, по меньшей мере, 3 аминокислоты.

7. Способ по любому из предшествующих пунктов, где часть содержит поверхностную петлю (1).

8. Способ по любому из предшествующих пунктов, где часть содержит поверхностную петлю (2).

9. Способ по любому из предшествующих пунктов, где часть содержит поверхностную петлю (3).

10. Способ по любому из предшествующих пунктов, где часть содержит поверхностную петлю (4).

11. Способ по любому из предшествующих пунктов, где часть содержит поверхностную петлю (5).

12. Способ по любому из предшествующих пунктов, где часть содержит поверхностную петлю (6).

13. Способ по любому из предшествующих пунктов, где часть содержит поверхностную петлю (7).

14. Полипептид для иммунизации против заболеваний, вызванных патогенными бактериями рода Neisseria, содержащий аминокислотную последовательность:
-B₁-L₁-B₂-L₂-B₃-L₃-B₄-L₄-B₅-L₅-B₆-L₆-B₇-L₇-B₈-,
где
(a) каждый из указанных B₁, В₂, В₃, В₄, В₅, В₆, В₇ и В₈ означают: (i) фрагмент SEQ ID NO:1; (ii) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с указанным фрагментом (i) и/или содержащую фрагмент из по меньшей мере 6 смежных аминокислот из указанного фрагмента (i);
(b) каждый из L₁, L₂, L₃, L₄, L₅, L₆ и L₇ означает: (iii) фрагмент SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 и/или SEQ ID NO:3, при условии, что по меньшей мере один из указанных L₁, L₂,
L₃, L₄, L₅, L₆ и L₇ не означает фрагмент SEQ ID NO:1, и где B₁-B₈ определены следующим образом:
Аминокислотные координаты в SEQ ID NO: 1 B₁ B₂ В₃ В₄ B₅ В₆ В₇ B₈ 1-133 142-161 169-180 183-196 198-218 224-233 237-260 268-274

и где L₁-L₇ определены следующим образом:
Аминокислотные координаты в SEQ ID NO:1, 2 или 3 SEQ L₁ L₂ L₃ L₄ L₅ L₆ L₇ 1 134-141 162-168 181-182 197 219-223 234-236 261-267 2 134-141 162-167 180-181 196 218-222 233-235 260-266 3 142-149 170-175 188-189 204 226-230 241-243 268-274

15. Полипептид для иммунизации против заболеваний, вызванных патогенными бактериями рода Neisseria, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся общей идентичностью последовательности с SEQ ID NO:1, составляющей, по меньшей мере, 80%, причем идентичность последовательности указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO:1 составляет более 80% в каркасных областях SEQ ID NO:1; а идентичность последовательности указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO:1 составляет менее 80% в петлевых областях SEQ ID NO:1.

16. Полипептид для иммунизации против заболеваний, вызванных патогенными бактериями рода Neisseria, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся общей идентичностью последовательности с SEQ ID NO:2, составляющей, по меньшей мере, 80%, причем идентичность последовательности указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO:2 составляет более 80% в каркасных областях SEQ ID NO:2; а идентичность последовательности указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO:2 составляет менее 80% в петлевых областях SЕQ ID NO:2.

17. Полипептид для иммунизации против заболеваний, вызванных патогенными бактериями рода Neisseria, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся общей идентичностью последовательности с SEQ ID NO:3, составляющей, по меньшей мере, 80%, причем идентичность последовательности указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO:3 составляет более 80% в каркасных областях SEQ ID NO:3; а идентичность последовательности указанной аминокислотной последовательности с SEQ ID NO:3 составляет менее 80% в петлевых областях SEQ ID NO:3.

18. Иммуногенная композиция для иммунизации против заболеваний, вызванных патогенными бактериями рода Neisseria, содержащая полипептид по любому из пп.14-17.

19. Композиция по п.18, дополнительно содержащая адъювант на основе соли алюминия.

20. Композиция по п.18 или 19, дополнительно содержащая менингококковый белок PorА.

21. Композиция по п.18 или 19, дополнительно содержащая препарат везикул внешней мембраны N. meningitidis.

22. Полипептид по любому из пп.14-17 для применения в качестве лекарственного средства для лечения заболевания, вызванного N. meningitidis.