УСТОЙЧИВЫЕ К ГРИБКАМ РАСТЕНИЯ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ Российский патент 2009 года по МПК C07K14/415 C12N15/82 A01H5/00 C12N15/29 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

В растении путем его генетической трансформации повышают активность белка Rpi-blb2. Повышение активности белка Rpi-blb2 в тканях растения придает ему устойчивость к патогенам типа Oomycetes. 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 31 ил., 8 табл.

1. Способ создания или повышения устойчивости растения к растительным патогенам типа Oomycetes, включающий повышение активности белка Rpi-blb2 в растении или ткани, органе или клетке растения или его части.

2. Способ по п.1, где указанный Rpi-blb2 белок кодируется полинуклеотидом, содержащим молекулу нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из:
a) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей, по меньшей мере, зрелую форму полипептида, изображенного в виде SEQ ID NO:2 или 4;
b) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей кодирующую последовательность, представленную в виде SEQ ID NO:1, или 3, или 5, или 6, кодирующей, по меньшей мере, зрелую форму полипептида;
c) молекул нуклеиновых кислот, последовательность нуклеотидов которых является вырожденной в результате генетического кодирования последовательности нуклеотидов (а) или (b);
d) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, полученный из полипептида, кодируемого полинуклеотидом от (а) до (с), путем замещения, делеции и/или добавления одной или нескольких аминокислот из аминокислотной последовательности полипептида, кодируемого полинуклеотидом от (а) до (с);
e) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, последовательность которого на 70% и более идентична аминокислотной последовательности полипептида, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты (а) или (b);
f) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей биологически активный фрагмент полипептида, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пунктов от (а) до (е);
g) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей полинуклеотид, имеющий последовательность молекулы нуклеиновой кислоты, амплифицированной из библиотеки нуклеиновых кислот с использованием праймеров, указанных в табл.Зb;
h) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент, начинающийся с аминокислот 1, 30, 50, 100, 200, 300, 500 или 1000 и оканчивающийся аминокислотами 1276, 1000, 500, 300, 200, 50, 30 или 1 полипептида, кодируемого любой из молекул от (а) до (g);
i) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей, по меньшей мере, 20 нуклеотидов из полинуклеотида любой из молекул (а) или (d);
j) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, распознаваемый моноклональным антителом, которое было выращено против полипептида, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пунктов от (а) до (h);
k) молекулы нуклеиновой кислоты, получаемой путем скрининга подходящей библиотеки при жестких условиях с зондом, имеющим последовательность молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пунктов от (а) до (j) или ее фрагмент из, по меньшей мере, 20; и
l) молекулы нуклеиновой кислоты, комплементарная цепь которой гибридизирует при жестких условиях любую молекулу нуклеиновой кислоты из (а) или (k);
m) или комплементарной цепи любой из молекул от (а) до (l);
и причем полинуклеотид не состоит из последовательности молекулы нуклеиновой кислоты Mi1.1 или Mi1.2 и/или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок Mi1.1 или Mi1.2.

3. Способ по п.1, где дополнительно к белку Rpi-blb2 повышают активность другого белка устойчивости.

4. Способ по п.1, где активность является повышенной вследствие de novo-экспрессии.

5. Способ по п.3, где эндогенная активность Rpi-blb2 и/или другого белка устойчивости является повышенной.

6. Способ по п.1, включающий одну или более из следующих стадий:
a) стабилизирование белка устойчивости;
b) стабилизирование мРНК, кодирующей белок устойчивости;
c) повышение специфической активности белка устойчивости;
d) экспрессирование или повышение экспрессии гомологичного или искусственного транскрипционного фактора для экспрессии белка устойчивости;
e) стимулирование активности белка устойчивости через экзогенные индуцирующие факторы;
f) экспрессирование гена, кодирующего трансгенный белок
устойчивости; и/или g) увеличение числа копий гена, кодирующего белок устойчивости.

7. Способ по любому из пп.1-6, результатом которого является снижение индекса споруляции, по меньшей мере, на 30% после заражения Р. infestans по сравнению с диким типом.

8. Способ по любому из пп.1-6, где растительный патоген представлен из отряда Pythiales или Peronosperales.

9. Полинуклеотид, кодирующий Rpi-blb2 белок, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из:
a) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей, по меньшей мере, зрелую форму полипептида, изображенного в виде SEQ ID NO:2 или 4;
b) молекул нуклеиновых кислот, содержащих кодирующую последовательность, представленную в виде SEQ ID NO:1, или 3, или 5, или 6, кодирующих, по меньшей мере, зрелую форму полипептида;
c) молекулы нуклеиновой кислоты, последовательность нуклеотидов которой является вырожденной в результате генетического кодирования последовательности нуклеотидов (а) или (b);
d) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, полученный из полипептида, кодируемого полинуклеотидом от (а) до (с), путем замещения, делеции и/или добавления одной или нескольких аминокислот из аминокислотной последовательности полипептида, кодируемого полинуклеотидом от (а) до (с);
e) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, последовательность которого на 70% и более идентична аминокислотной последовательности полипептида, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты (а) или (b);
f) молекул нуклеиновых кислот, содержащих биологически активный фрагмент полипептида, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пунктов от (а) до (е);
g) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей полинуклеотид, имеющий последовательность молекулы нуклеиновой кислоты, амплифицированной из библиотеки нуклеиновых кислот с использованием праймеров, указанных в табл.3b;
h) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент, начинающийся с аминокислот 1, 30, 50, 100, 200, 300, 500 или 1000 и оканчивающийся аминокислотами 1276, 1000, 500, 300, 200, 50, 30 или 1 полипептида, кодируемого любой из молекул от (а) до (g);
i) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей, по меньшей мере, 20 нуклеотидов из полинуклеотида любой из молекул (а) или (d);
j) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, распознаваемый моноклональным антителом, которое было выращено против полипептида, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пунктов от (а) до (h);
k) молекулы нуклеиновой кислоты, получаемой путем скрининга подходящей библиотеки при жестких условиях с зондом, имеющим последовательность молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пунктов от (а) до (j) или ее фрагмент из, по меньшей мере, 20; и
l) молекулы нуклеиновой кислоты, комплементарная цепь которой гибридизирует при жестких условиях любую молекулу нуклеиновой кислоты из (а) или (k);
или комплементарную цепь любой из молекул от (а) до (1);
и причем полинуклеотид не состоит из последовательности молекулы нуклеиновой кислоты Mi1.1 или Mi1.2 и/или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок Mi1.1 или Mi1.2.

10. Полинуклеотид по п.9, где маркер представляет собой Е40М58, СТ119 или СТ216.

11. Полинуклеотид по п.9 или 10, который является ДНК или РНК.

12. Способ получения трансгенного растения, растительной клетки, или растительной ткани, или их части, включающий введение полинуклеотида по любому из пп.9-11 или указанного полинуклеотида и полинуклеотида, кодирующего другой белок устойчивости, в геном указанного растения, растительной ткани, или растительной клетки или их части.

13. Применение полинуклеотида по любому из пп.9-11 для получения растения или растительной ткани, органа растения или растительной клетки или их части, устойчивых к растительному патогену типа оомицетов.