СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИЙ ВЛАГАЛИЩА Российский патент 2010 года по МПК G01N33/48 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматовенерологии, гинекологии и может быть использовано для ранней иммунодиагностики вульвовагинальных инфекций.

В настоящее время клинические тесты, используемые в медицинском клиническом обследовании человека, не идеальны. Всегда остается вероятность того, что результаты диагностического исследования не отражают объективное наличие или отсутствие заболевания. Обычно для любого клинического теста существует несколько (в различной степени точных) альтернатив. Различная доступность, стоимость, безопасность (а также факторы времени и здравого смысла) ограничивают широкое применение тех или иных методов обследования. В медицинской практике существует понятие «золотой стандарт диагностики», подразумевающий наиболее точный диагностический метод, с помощью которого можно установить наличие или отсутствие данного заболевания. Общепринято, что в медицине для характеристики диагностических проб (методов, тестов и т.п.) используют два показателя: чувствительность и специфичность. Чувствительность - это вероятность положительного результата у больного; она характеризует способность пробы выявлять болезнь. Специфичность - это вероятность отрицательного результата у здорового; можно сказать, что она характеризует способность пробы выявлять отсутствие болезни (Стентон Гланц - «Медико-биологическая статистика». Пер. с англ. - М., Практика, 1998, глава 6, с.161-192).

Известен способ изучения местных факторов иммунологической защиты влагалища у женщин с инфекционными вагинитами (аэробным вагинитом, бактериальным вагинозом, трихомониазом) и в норме (без патологии). Уровень секреторного иммуноглобулина класса A (sIgA) во влагалищном отделяемом определяли методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем «sIgA - ИФА - БЕСТ - СТРИП» ЗАО «Вектор-Бест». В связи с возможностью значительных погрешностей при отмеривании необходимого объема отделяемого расчет sIgA производили на 1 грамм общего белка, определяемого по биуретовой реакции.

Авторы в соответствии с особенностями применяемой методики ничего не говорят о цервикальной слизи, которая обычно присутствует и является агрессивной средой, что отрицательно влияет на показатели секреторного иммуноглобулина А вагинального секрета. Также выводят свой диагностический критерий (показатель), отличающийся по своим количественным характеристикам даже при диагностике одной инфекции (то есть нет единства, точности) (О.А.Воронова, Н.М.Герасимова, Н.К.Левчик. - Индукция факторов местной иммунологической защиты при инфекциях влагалища // Российский журнал кожных и венерических болезней, М. «Медицина», 2006 г., №1, с.52-55.

Главным недостатком известного способа является малая чувствительность и специфичность, что выражается в невозможности установления у части больных признаков характерной диагностируемой инфекции.

Невозможность совершенствования по параметрам «чувствительность» и «специфичность» связана с тем, что они находятся в обратной зависимости. Увеличение чувствительности способа путем снижения численности группы и величины диагностического критерия повышает одновременную результативность у больных при инфекции и в контрольной группе. И наоборот, повышение величины диагностического критерия уменьшает число положительных результатов у контрольных лиц, но одновременно уменьшает возможность выявления достоверной реакции у больных инфекционной патологией.

Другой недостаток способа заключается в недостаточной стандартизованности методики определения sIgA и в отсутствии унифицированного количественного критерия специфической реакции (на тот период времени диагностикум не был стандартизован).

Известный способ, в сущности, рассматривается как диагностика только одной аэробной инфекции влагалища (аэробного вагинита).

Наиболее близким техническим решением к заявляемому является способ диагностики аэробного вагинита путем определения наличия клинических признаков: дискомфорта, симптомов воспаления, выделений. При микроскопии влагалищных мазков выявляют лейкоцитарную реакцию, наличие слоев клеток промежуточного эпителия, присутствие единичных форм лактобактерий при наличии крупнобациллярной кокковой флоры. Проводят pH-метрию вагинального отделяемого и аминотест. При значении pH от 4,5 до 5,5 и отрицательном аминотесте диагностируют аэробный вагинит (патент RU №2241990, МПК 7 G01N 33/48, опубл. 10.12.2004 г.) - прототип.

Способ позволяет упростить диагностику и повысить ее точность, однако возможно диагностировать только одну инфекционную патологию - аэробный вагинит, при этом не берется во внимание иммунологический фон гениталий, т.е. не исследуются местные иммунологические факторы реагирования на болезнь (сектреторный иммуноглобулин А вагинального секрета) и тем более не ведется подсчет его количественного содержания.

Изобретение направлено на решение задачи усовершенствования диагностики вульвовагинальных инфекций у женщин репродуктивного периода.

Технический результат заключается в повышении чувствительности, специфичности, качественности, унификации диагностической оценки и определении показателя (количества) sIgA при разной инфекционной патологии во влагалище у женщин.

Технический результат достигается тем, что в способе диагностики инфекций влагалища, включающем установление клинических признаков, определение количества лейкоцитов, эпителия, лактобактерий, проведение pH-метрии вагинального отделяемого и аминотест, дополнительно исследуют секреторный иммуноглобулин А (sIgA). При значении sIgA 200,5±26,3 диагностируют аэробный вагинит; при значении 168±29,9, pH более 5,6-6,0 и положительном аминотесте диагностируют бактериальный вагиноз; при значении 172,1±53,2, pH, не превышающем 6,2, и наличии лейкоцитов в присутствии трихомонад диагностируют трихомониаз; при значении sIgA 375,61±23,1, pH 4,0-4,5 и отрицательном аминотесте диагностируют кандидоз. Значение sIgA, равное 248,4±18,8, соответствует отсутствию инфекций, т.е. здоровью.

Сущность изобретения заключается в том, что способ основан на определении количественной концентрации секреторного иммуноглобулина А (sIgA) в вагинальном секрете женщин (живущих половой жизнью).

Секреторный иммуноглобулин А относится к маркерам так называемого «местного иммунитета». Сборка этого секреторного иммуноглобулина происходит на базальной мембране лимфоидных и эпителиальных клеток влагалища из предшественников секреторного компонента и димера сывороточного IgA. Изменение количества sIgA (как правило, его уменьшение) во влагалищном секрете позволяет оценить состояние секреторного иммунитета в этом отделе репродуктивной системы женщины, как в норме, так и при патологии, а также контролировать динамику лечения.

Экспериментальное установление значений секреторного иммуноглобулина A (sIgA) в пределах 200,5±26,3 позволяет диагностировать аэробный вагинит.

Установление значений sIgA в пределах 168±29,9 в сочетании с pH более 5,6-6,0 и положительном аминотесте позволяет диагностировать бактериальный вагиноз.

Значение sIgA в пределах 172,1±53,2 в сочетании с pH, не превышающим 6,2, и наличием лейкоцитов в присутствии трихомонад позволяет диагностировать трихомониаз.

При значении sIgA 375,61±23,1, pH 4,0-4,5 и отрицательном аминотесте диагностируют кандидоз.

Значение sIgA 248,4±18,8 соответствует здоровью, т.е. отсутствию инфекций.

Учитывая высокую чувствительность метода диагностики (при р=0.05, φ=2.327, чувствительность = 0,99, т.е. составила 99%; при р=0.01, φ=2.327, чувствительность = 0,97, т.е. составила 97%), при данных значениях различия показателей при каждой нозологии были выявлены с большой долей вероятности. Таким образом, данный способ может явиться единым стандартом диагностики инфекций влагалища и быть рекомендован к крупномасштабному внедрению.

Из анализа научно-технической и патентной литературы заявляемой совокупности признаков - сочетания количественной концентрации секреторного иммуноглобулина А (sIgA) в вагинальном секрете женщин (живущих половой жизнью) с pH-метрией и аминотестом позволяет проводить раннюю диагностику заболевания, дальнейший прогноз (развития рецидива, реинфицирования) и динамику лечения, назначение адекватной иммунотропной терапии, нами не выявлено, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Изобретение осуществляется следующим образом. У больной во время осмотра в зеркалах производят забор только вагинального секрета, находящегося в заднем своде влагалища, при этом цервикальная слизь просто удаляется механически (цервикальная слизь не должна присутствовать в отделяемом), который помещается в пробирку из неадгезивного материала. В таком виде клинический материал поступает в лабораторию, где сразу проводится исследование по количественному определению sIgA или его хранение при особых условиях. Срок хранения образцов не более 48 часов, при необходимости образцы можно банковать (хранить) при температуре минус 20°С. Перед постановкой пробы исключить тепловую обработку. При расчете количества sIgA не нужно дополнительно проводить постановку и вычислять белок вагинального секрета.

Метод определения sIgA в вагинальном секрете основан на твердофазном иммуноферментном анализе при использовании стандартизованного набора «sIgA-ИФА-БЕСТ». Результаты анализа регистрируются фотометрически при длине волны 450 нм.

Метод заключается в использовании моноклональных антител, обладающих высокой специфичностью к sIgA, а также высокой чувствительностью метода - 1нг/мл.

Перекрестного связывания с IgM, IgG, IgA, IgE или альбумином не наблюдалось, а также высокой чувствительностью метода - 1нг/мл.

Предлагаемым способом диагностировано 196 проб клинического материала (вагинального секрета), в том числе у 146 женщин с инфекциями во влагалище и у 50 здоровых женщин.

Для проведения качественной диагностики и сопоставления полученных данных все пациентки были обследованы на инфекции, передаваемые половым путем, которые были исключены. Всем проводили микроскопическое исследование вагинального мазка и бактериологическую верификацию условно-патогенных микроорганизмов, трихомонад, грибов рода кандида.

Согласно приведенной таблице при диагностировании величин sIgA в мкг/л, соответствующих табличным, диагностируют ту или иную инфекцию.

Таблица 1 Показатели концентрации sIgA в вагинальном секрете Нозология Количество sIgA (среднее значение) Медиана Вагинит (аэробной этиологии) 200,5±26,3 122,8 Вагиноз (анаэробной этиологии) 168±29,9 97,5 Вагинит (протозойный-трихомонадной этиологии) 172,1±53,2 22,0 Вагинит (кандидозной этиологии) 375,6±23,1 361,3 НОРМА 248,4±18,8 215,0 Р 0,008 Примечания. Значимость рассчитывали по критерию дисперсионный анализ.

Изобретение обеспечивает функциональное назначение метода диагностики - определение количественного содержания sIgA в вагинальном секрете при патологии и норме; унификацию метода, т.е. установление единообразия, приведение к единой форме существующих методик определения sIgA в вагинальном секрете.

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматовенерологии и гинекологии. Предложен способ ранней иммунодиагностики вульвовагинальных инфекций. Диагностику инфекций влагалища проводят путем установления клинических признаков, определения количества лейкоцитов, эпителия, лактобактерий, проведения рН-метрии вагинального отделяемого и аминотеста. Дополнительно исследуют секреторный иммуноглобулин A (sIgA) и при его значении 200,5±26,3 диагностируют аэробный вагинит. При значении sIgA 168±29,9, рН более 5,6-6,0 и положительном аминотесте диагностируют бактериальный вагиноз. При значении sIgA 172,1±53,2, рН, не превышающем 6,2, и наличии лейкоцитов в присутствии трихомонад диагностируют трихомониаз, При значении sIgA 375,61±23,1, рН 4,0-4,5 и отрицательном аминотесте диагностируют кандидоз, значение sIgA 248,4±18,8 соответствует отсутствию инфекций. Изобретение позволяет унификациировать существующие методики определения sIgA в вагинальном секрете. 1 табл.

Способ диагностики инфекций влагалища, включающий установление клинических признаков, определение количества лейкоцитов, эпителия, лактобактерий, проведении рН-метрии вагинального отделяемого и аминотест, отличающийся тем, что дополнительно исследуют секреторный иммуноглобулин A (sIgA) и при его значении 200,5±26,3 диагностируют аэробный вагинит; при значении sIgA 168±29,9, рН более 5,6-6,0 и положительном аминотесте диагностируют бактериальный вагиноз; при значении sIgA 172,1±53,2, рН не превышающем 6,2 и наличии лейкоцитов в присутствии трихомонад диагностируют трихомониаз, при значении sIgA 375,61±23,1, рН 4,0-4,5 и отрицательном аминотесте диагностируют кандидоз, значение sIgA 248,4±18,8 соответствует отсутствию инфекций - здоровью.