СПОСОБ ОЦЕНКИ СОДЕРЖАНИЯ НИТРОСОЕДИНЕНИЙ В ПЛАЦЕНТЕ БЕРЕМЕННОЙ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ Российский патент 2010 года по МПК G01N33/53 

Цель изобретения заключается в установлении процесса накопления в плаценте беременных нитросоединений при обострении во время гестации герпес-вирусной инфекции и показать, что чем выше был титр антител к вирусу герпеса у беременной, тем больше в гомогенате плаценты родильниц содержалось NO₂ ^-.

Вирусные и бактериальные эндотоксины усиливают синтез NOS и соответственно секрецию NO. Выделяемая NO быстро проникает в клетки, где может ингибировать жизненно важные группы ферментов: Н-электроннотранспортирующие, ферменты цикла Кребса и синтеза ДНК. В этих условиях энергопродукция и деление клеток становится невозможным, что ведет к их преждевременной гибели. Оксид азота, накапливаясь в клетке в большом количестве, может вызвать повреждение ДНК. Таким образом, нитросоединения вызывают цитотоксический эффект при эндотоксическом шоке, инфекционных повреждениях. Не менее важным оказывается вопрос, почему простые молекулы как NO₂ ^- обладают широким спектром токсического действия.

Установлено, что NO₂ ^- может превращаться в NO. Свободнорадикальные продукты NO и NO₂ обладают способностью повреждать белки и ненасыщенные жирные кислоты, уменьшать активность большинства ферментных систем, нарушать целостность клеточных и субклеточных структур, разобщать окислительное фосфорилирование, ингибировать транспорт электронов по дыхательной цепи митохондрий, снижать уровень АТФ в крови и тканях (Ажипа Я.И., Реутов В.П., Каюшин Л.П., 1990; Волкова Н.В., 1980; Реутов В.П., 1988; Реутов В.П., Каюшин Л.П., 1994; Реутов В.П., Охотин В.Е., Шуклин А.В. и др., 2007; Северина И.С., 1995; Punjabi C.J., Laskin J., Pendini K. et. al., 1995). Эти же авторы доказывают, что NO₂ в организме становится базой для формирования NO. Поэтому следует ожидать, что при нарастании содержания в ткани NO₂ ^- усиливается выработка NO и появляется опасность усиления токсического действия NO на эти ткани.

В отличие от описанных прототипов приводятся исследования, свидетельствующие, что при герпес-вирусной инфекции, обостряющейся при беременности, резко нарастает содержание нитросоединений (NO₂ ^-) в плаценте.

Заявленный способ имеет следующие приемы.

а) Исследовались плаценты после родов у 20 беременных, перенесших в третьем триместре вспышку герпес-вирусной инфекции, и 20 беременных, не болевших в течение всего периода гестации (контроль). Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.

б) Для оценки содержания NO₂ ^- в плаценте приготовляли гомогенат плаценты, взятой через 10-15 мин после родов. Плацента отмывалась физраствором (ФР). Кусочки плаценты помещались для просушивания на фильтровальную бумагу, взвешивались. Затем их растирали в ступке и к полученному гомогенату добавляли ФР в объеме, равном изначальному весу ткани (на 1 г - 1 мл ФР). Затем его размораживали и центрифугировали при 4000 об/мин при температуре +4°С. Надосадочную жидкость разливали мелкими аликвотами и хранили при -20°С до проведения иммуноферментного анализа (ИФА).

В размороженном супернатанте определяли на ридере «Stat-Fax-2100» (USA) с использованием «Nitric Oxide Assy Kit» (USA) NO₂ ^-. Титр антител к вирусу герпеса (1:1600; 1:6400; 1:12800) определяли на ридере «Stat-Fax-2100» (USA). Титр антител к вирусу герпеса (ВПГ-1) определялся по динамике антител IgG в периферической крови беременных с помощью стандартных наборов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск) иммуноферментным методом (ИФА) на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).

Полученные данные показали, что содержание NO₂ ^- в гомогенате плаценты у беременных, перенесших герпес-вирусную инфекцию, резко нарастает по мере агрессивности инфекции. Содержание NO₂ ^- в гомогенате плаценты при титре 1:1600 к вирусу герпеса увеличивается до 38,8±1,1 мкмоль/л; при титре 1:6400 - до 92,1±1,2 мкмоль/л, а при титре 1:12800 - до 105,7±1,5 мкмоль/л (контроль - 25,6±0,1 мкмоль/л).

Пример №1

Беременная Б. (34 недели) находилась в акушерском стационаре Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН с диагнозом - угроза прерывания беременности.

На тридцатой неделе гестации беременная перенесла вспышку герпес-вирусной инфекции (титр антител - 1:12800). После родов у родильницы была взята плацента, получен гомогенат и иммуноферментным методом определено содержание NO₂ ^-. У данной беременной в плаценте определялось 85,0 мкмоль/л NO₂ ^- (контроль - 25,6±0,1 мкмоль/л).

Можно предполагать, что повышенное содержание в плаценте NO₂ ^- могло привести к состоянию угрозы прерывания беременности, поскольку других осложнений на всем протяжении гестации у нее не отмечалось.

Пример №2

Беременная К. поступила на 36 неделе беременности в акушерское отделение Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН с угрозой прерывания беременности. Родила благополучно, но в пуповинной крови плода определялось:

Р_O2 - 3,5 кПа

Р_CO2 - 2,95 кПа

рН - 7,3

Эти показатели характерны для признаков гипоксии плода.

Беременная на 32 неделе беременности перенесла обострение герпес-вирусной инфекции с титром 1:12800.

В гомогенате плаценты после родов определяли 90 мкмоль/л NO₂ ^-.

Здоровый доношенный новорожденный:

Р_CO2 - 2,95 кПа

рН - 7,4

Р_O2 - 5,3±0,18 кПа

Пример №3

Беременная С. поступила на обследование перед родами в стационар на 36 неделе беременности. Никаких заболеваний во время инфекции не переносила. После родов была взята плацента и приготовлен гомогенат, в котором определяли содержание NO₂ ^-. Количество NO₂ ^- равнялось 18 мкмоль/л.

Литература

1. Ажипа Я.И., Реутов В.П., Каюшин Л.П. Экологические и медико-биологические аспекты проблемы загрязнения окружающей среде нитратами и нитритами//Физиология человека. 1990. 16. (3). 131-135.

2. Волкова Н.В. Влияние нитритов и нитратов натрия на синтез ДНК, митотическую активность и ядерно-цитоплазматические отношения клеток печени крыс и их потомства // Гигиеническое нормирование факторов экологической среды человека: Л.: Тр. Ленингр. санит-гигиент. ин-та. 1980. 130. 38.

3. Реутов В.П. Изучение механизмов восстановления ионов NO в крови и митохондриях клеток тканей млекопитающих: Автореф. дис… канд. биол. наук. Москва. 1988. 20.

4. Реутов В.П., Каюшин Л.П., Сорокина Г.Г. Физиологическая роль цикла окиси азота в организме человека и животных // Физиология человека. 1994. 20 (3). 165-174.

5. Реутов В.П., Охотин В.Е., Шуклин А.В. и др. Оксид азота (NO) и цикл NO в миокарде: молекулярные, биохимические и физиологические аспекты // Успехи физиологических наук. 2007. 38. 4. 39-58.

6. Северина И.С. Растворимая форма гуанилатциклазы в молекулярном механизме физиологических эффектов окиси азота и в регуляции процесса агрегации тромбоцитов // Бюл. экспер. биол. и мед. 1995. (3). 230-235.

7. Punjabi C.J, Laskin J., Pendini K., et. al Production of nitric oxide by rat type II preumocytes increased of inducibic nitric oxide syntase following inhalation of a pulmonary irritant // Amer. J. Respirat, and Crit. Care Med. 1995. 151(1). 116-122.

Изобретение относится к области медицины и касается способа оценки содержания нитросоединений в плаценте у беременных при обострении герпес-вирусной инфекции. Сущность способа заключается в том, что иммуноферментым методом у беременных в крови определяют титр антител к вирусу герпеса. При титре антител вируса герпеса 1:1600 содержание NO₂ ^- увеличивается до 38,8±1,1 мкмоль/л, при титре 1:6400 - до 92,1±1,2 мкмоль/л, а при титре 1:12800 - до 105,7±1,5 мкмоль/л. Способ позволяет оценить содержание нитросоединений в плаценте беременной при обострении герпес-вирусной инфекции.

Способ оценки содержания нитросоединений в плаценте у беременных при обострении герпес-вирусной инфекции, характеризующийся тем, что иммуноферментным методом у беременных в крови определяют титр антител к вирусу герпеса и согласно агрессивности инфекции оценивают уровень содержания NO₂ ^- в плаценте, а именно при титре антител к вирусу герпеса 1:1600 содержание NO₂ ^- увеличивается до 38,8±1,1 мкмоль/л, при титре 1:6400 - до 92,1±1,2 мкмоль/л, а при титре 1:12800 - до 105,7±1,5 мкмоль/л.