НОВАЯ СОЛЬ I Российский патент 2011 года по МПК C07D211/58 A61K31/4468 A61P11/06 

Настоящее изобретение относится к соли пиперидинового производного и содержащей ее фармацевтической композиции и ее применению в терапии.

Хемокиновый рецептор 1 (CCR1) высоко экспрессируется в тканях, пораженных различными аутоиммунными, воспалительными, пролиферативными, гиперпролиферативными и иммунологически опосредованными заболеваниями, такими как астма, хроническое обструктивное заболевание легких, рассеянный склероз и ревматоидный артрит. Таким образом, ожидается, что ингибирование явлений, опосредованных CCR-1, солью по изобретению, например путем активации и миграции клеток, будет эффективным при лечении таких состояний.

При приготовлении фармацевтических композиций важно, чтобы активное соединение находилось в форме, в которой оно может быть без труда транспортировано и обработано для того, чтобы получить коммерчески приемлемый производственный процесс. В связи с этим важными факторами являются химическая стабильность и физическая стабильность активного соединения. Активное соединение и содержащие его композиции должны быть такими, чтобы их можно было эффективно хранить в течение значительных периодов времени, без проявления какого-либо значительного изменения физико-химических характеристик (например, химический состав, плотность, гигроскопичность и растворимость) активного соединения.

Кроме того, если активное соединение следует включать в препарат для введения в легкие, например с помощью сухого порошкового ингалятора, такого как устройство Turbuhaler^®, то будет желательно, чтобы активное соединение могло быть легко микронизировано с получением порошка, обладающего хорошей текучестью и содержащего фракцию очень тонкоизмельченных кристаллических частиц (то есть фракцию, в которой частицы активного соединения имеют средневзвешенный аэродинамический диаметр (mass median aerodynamic diameter) меньше 10 мкм (микрометров)). Такая фракция способна проникать глубоко в легкие, что приводит к более быстрой и увеличенной абсорбции активного соединения.

В публикации международной заявки на патент № WO 03/051839 в общем раскрыты некоторые пиперидинильные производные, обладающие активностью в качестве антагонистов CCR1 и, в частности, соединение 4-({(2S)-3-[2-(ацетиламино)-5-гидроксифенокси]-2-гидрокси-2-метилпропил}аммонио)-1-(4-хлорбензил)пиперидин и его фармацевтически приемлемые соли или сольваты. Единственной солью этого соединения, специально раскрытой в заявке, является дитрифторацетатная соль, которая является аморфной по свойствам, что делает ее непригодной для применения в сухих порошкообразных препаратах для введения в легкие.

В настоящее время неожиданно обнаружили возможность приготовления соли соединения 4-({(2S)-3-[2-(ацетиламино)-5-гидроксифенокси]-2-гидрокси-2-метилпропил}аммонио)-1-(4-хлорбензил)пиперидина, обладающей хорошими физико-химическими свойствами, которая может быть приготовлена в сухом порошкообразном препарате для введения в легкие.

Структура 4-({(2S)-3-[2-(ацетиламино)-5-гидроксифенокси]-2-гидрокси-2-метилпропил}аммонио)-1-(4-хлорбензил)пиперидина изображена ниже:

Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением предложена соль бензоат 4-({(2S)-3-[2-(ацетиламино)-5-гидроксифенокси]-2-гидрокси-2-метилпропил}аммонио)-1-(4-хлорбензил)пиперидина (далее именуемая бензоат N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида, "соль бензоат").

В изобретении также предложены сольваты (включая гидраты) соли бензоата. Тем не менее, соль бензоат предпочтительно является безводной и, предпочтительно, находится в несольватированной форме.

В воплощении изобретения соль бензоат или ее сольват обладает кристаллическими свойствами и, предпочтительно, по меньшей мере на 50% является кристаллической, более предпочтительно по меньшей мере на 60% является кристаллической и еще более предпочтительно по меньшей мере на 70% является кристаллической и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 80% является кристаллической. Кристалличность может быть оценена с помощью обычных способов рентгеновской дифрактометрии.

В еще одном воплощении изобретения соль бензоат или ее сольват на от 50%, 60%, 70%, 80% или 90% до 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% является кристаллической.

Не желая быть связанными с какой-либо конкретной теорией, полагают, что соль бензоат является полиморфной, и к настоящему моменту выделены и охарактеризованы две формы.

Один полиморф (далее именуемый Формой А) демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики дифракции рентгеновских лучей на порошке (ДРЛП) (выраженные в градусах 2θ) (предел погрешности согласуется с общим разделом Фармакопеи США по дифракции рентгеновских лучей (USP941) - см. the United States Pharmacopeia Convention. X-Ray Diffraction, General Test <941>. United States Pharmacopeia, 25th ed. Rockville, MD: United States Pharmacopeial Convention; 2002: 2088-2089);

(1) 6,1, 10,7 и 19,3, или

(2) 6,1, 12,2 и 14,1, или

(3) 6,1, 10,7, 12,2, 14,1, 18,1 и 19,3, или

(4) 6,1, 10,7, 12,2, 14,1, 15,7, 18,1 и 19,3, или

(5) 6,1, 10,7, 12,2, 14,1, 15,1 и 19,3, или

(6) 6,1, 10,7, 12,2, 14,1, 15,1, 15,7, 18,1 и 19,3, или

(7) 6,1, 10,7, 12,2, 14,1, 15,1, 15,7, 18,1, 19,3, 21,2 и 24,6.

Форма А может быть получена по существу свободной от других физических форм способом, включающим следующие стадии:

(1) контактирование нагретого раствора N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида, растворенного в подходящем растворителе или смеси растворителей (например, в органическом растворителе, таком как полярный растворитель, примеры которого включают метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол, ацетон и этилацетат), с

(2) нагретым раствором бензойной кислоты, растворенной в подходящем растворителе или смеси растворителей (например органическом растворителе, таком как полярный растворитель, примеры которого включают метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол, ацетон и этилацетат) с получением смеси,

(3) предоставление возможности этой смеси остыть до температуры окружающей среды (например 20°С) с получением осадка Формы А бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида, и

(4) отделение этого осадка от смеси.

Другой полиморф (далее именуемый Формой Б) демонстрирует по меньшей мере следующие характеристические пики дифракции рентгеновских лучей на порошке (ДРЛП) (выраженные в градусах 2θ) (предел погрешности согласуется с общим разделом Фармакопеи США по дифракции рентгеновских лучей (USP941) - см. the United States Pharmacopeia Convention. X-Ray Diffraction, General Test <941>. United States Pharmacopeia, 25th ed. Rockville, MD: United States Pharmacopeial Convention; 2002: 2088-2089):

(1) 6,5, 9,3 и 10,5, или

(2) 6,5, 9,3, 17,6 и 17,8, или

(3) 6,5, 9,3, 10,5, 12,0 и 12,4, или

(4) 6,5, 9,3, 10,5, 12,0, 12,4, 13,0, 13,6, 15,5, 17,6 и 17,8, или

(5) 6,5, 13,0 и 20,2, или

(6) 6,5, 9,3, 10,5, 12,0, 12,4, 13,0, 13,6, 15,5, 17,6, 17,8 и 19,2, или

(7) 6,5, 9,3, 10,5, 12,0, 12,4, 13,0, 13,6, 15,5, 17,6, 17,8, 19,2, 20,2, 22,8 и 26,0, или

(8) 6,5, 9,3, 10,5, 12,0, 12,4, 13,0, 13,6, 15,5, 17,6, 17,8, 19,2, 20,2, 22,8, 24,2, 26,0 и 30,7.

Форма Б может быть получена по существу свободной от других физических форм путем контролируемого нагревания Формы А, как описано в Примерах, или способом суспендирования, включающим растворение, например, 20 мас.% образца Формы А в подходящем растворителе (например, органическом растворителе, таком как полярный растворитель, примеры которого включают метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол и ацетон) с образованием суспензии и гомогенизации этой суспензии при температуре окружающей среды (например, 20°С) в течение по меньшей мере 7 дней, или путем растворения Формы А и бензойной кислоты в подходящем растворителе (например, нагретом изопропаноле) с образованием смеси, предоставления возможности этой смеси остыть до температуры окружающей среды и периодического затравливания этой смеси кристаллами Формы Б.

В тех случаях когда в данном описании ссылаются на то, что Форма А или Форма Б по существу свободна от других физических форм (или по существу чистые), это означает, что предпочтительно по меньшей мере 90% по массе, например 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100 мас.% представленной соли бензоата находится в данной физической форме.

В нижеприведенной таблице 1 представлены дополнительные кристаллографические данные по Формам А и Б соли бензоата, определенные при комнатной температуре.

Таблица 1   Форма А Форма Б Кристаллическая система Моноклинная Орторомбическая Размеры и угол элементарной ячейки     а (Å) 10,82±0,02 10,293±0,002 b (Å) 10,064±0,012 10,733±0,002 с (Å) 14,65±0,03 27,447±0,008 α (°) 90,00 90,00 β (°) 97,86±0,06 90,00 γ (°) 90,00 90,00

Соединения по изобретению полезны в качестве модуляторов активности хемокиновых рецепторов CCR1 или MIP-1α. Дитрифторацетат [N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида имеет IC₅₀ меньше 50 нМ в анализе связывания с CCR1 человека, как описано ниже в разделе Примеры, и может быть введен млекопитающему, включая человека, для лечения аутоиммунных, воспалительных, пролиферативных и гиперпролиферативных заболеваний, а также иммунологически опосредованных заболеваний.

Примеры таких состояний представляют собой:

1. Дыхательные пути: обструктивные заболевания дыхательных путей, включающие: астму, включая бронхиальную, аллергическую, наследственную бронхиальную, приобретенную бронхиальную, вызванную физической нагрузкой, вызванную лекарственными средствами (включающими аспирин и вызванную нестероидным противовоспалительным средством (NSAID)) астму, хроническую или запущенную астму (например, позднюю астму и гиперчувствительность дыхательных путей), а также астму, вызванную пылью, перемежающуюся и постоянную всех степеней тяжести, и другие причины гиперчувствительности дыхательных путей; хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), такое как необратимое ХОЗЛ; бронхит, включая инфекционный и эозинофильный бронхит; эмфизему; бронхоэктаз; муковисцидоз; саркоидоз; экзогенный аллергический альвеолит и родственные заболевания; гиперчувствительный пневмонит; легочный фиброз, включая криптогенный фиброзный альвеолит, идиопатические интерстициальные пневмонии, фиброз, осложняющий противоопухолевую терапию, и хроническую инфекцию, включая туберкулез и аспергиллез, и другие грибковые инфекции; осложнения трансплантации легких; сосудистые и тромбозные расстройства сосудистой сети легких, и легочную гипертензию; противокашлевую активность, включающую лечение хронического кашля, связанного с воспалительными и секреторными состояниями дыхательных путей, а также ятрогенный кашель; острый, аллергический, атрофический ринит и хронический ринит, включающий хронический ринит с образованием казеозных масс, гипертрофический ринит, гнойный ринит, сухой ринит и медикаментозный ринит, а также вазомоторный ринит; пленчатый ринит, включающий крупозный, фибринозный и псевдомембранный ринит, а также скрофулезный ринит; круглогодичный и сезонный (аллергический) ринит, включающий нервно-рефлекторный ринит (сенная лихорадка); назальный полипоз; острую вирусную инфекцию, включая простуду и инфекцию вследствие респираторного-синцитиального вируса, вируса гриппа, коронавируса (включающего тяжелый острый респираторный синдром (SARS)) и аденовируса.

2. Кости и суставы: поражения кожи ревматического или подагрического происхождения, связанные или включающие остеоартрит/остеоартроз, как первичный, так и вторичный по отношению, например, к врожденной дисплазии бедра; шейный и поясничный спондилит, а также поясничную боль и боль в шее; ревматоидный артрит и болезнь Стилла; серонегативные спондилоартропатии, включающие анкилозирующий спондилит, псориатический артрит, реактивный артрит и недифференцируемую спондартропатию; септический артрит и другие связанные с инфекцией артропатии и костные расстройства, такие как туберкулез, включая болезнь Потта и туберкулезный артрит Понсе; острый и хронический вызванный кристаллами синовит, включающий мочевую подагру, болезнь, связанная с отложением пирофосфата кальция, и связанное с отложением кальциевого апатита воспаление сухожилия, бурсальное и синовиальное воспаление; болезнь Бехчета; первичный и вторичный синдром Шегрена; системный склероз и ограниченную склеродерму; системная красная волчанка, смешанное заболевание соединительной ткани, и недифференцируемое заболевание соединительной ткани; воспалительные миопатии, включающие дерматомиозит и полимиозит; ревматическая полимиалгия; ювенильный артрит, включающий идиопатические воспалительные поражения кожи ревматического или подагрического происхождения с распределением на любой сустав и связанные с ними синдромы, а также ревматическую атаку и связанные с ней системные осложнения; васкулиты, включая гигантоклеточный артериит, синдром Такаясу, синдром Черджа-Строса (Churg-Strauss syndrome), нодозный полиартериит, микроскопический полиартериит, а также васкулиты, связанные с вирусной инфекцией, реакциями гиперчувствительности, криоглобулинами и парапротеинами; поясничная боль; семейная средиземноморская лихорадка, синдром Макла-Уэллса, и семейная ирландская лихорадка, болезнь Кикучи; артралгии, вызванные лекарствами, тендиниты, а также миопатии и болезнь Рейтера.

3. Боль и ремоделирование соединительной ткани при костно-мышечных расстройствах вследствие повреждения [например, повреждения при занятиях спортом] или заболевания: поражения кожи ревматического или подагрического происхождения (например, ревматоидный артрит, остеартрит, подагрическая или кристаллическая артропатия), другое заболевание суставов (такое как дегенерация межпозвонковых дисков или дегенерация височно-нижнечелюстного сустава), заболевание, связанное с ремоделированием костей (такое как остеопороз, болезнь Педжета или остеонекроз), полихондрит, склеродермия, смешанное расстройство соединительной ткани, спондилоартропатии или заболевание периодонта (такое как периодонтит).

4. Кожа: псориаз, атопический дерматит, контактный дерматит или другие экзематозные дерматозы, а также реакции гиперчувствительности замедленного типа; фито- и фотодерматит; себорейный дерматит, герпетиформный дерматит, красный плоский лишай, склеротический атрофический лишай, гангренозная пиодермия, кожный саркоид, дискоидная красная волчанка, пемфигус, пемфигоид, врожденный буллезный эпидермолиз, крапивница, ангионевротический отек, васкулиты, эритемы, кожные эозинофилии, гнездная алопеция, облысение по мужскому типу, синдром Свита, синдром Вебера-Кристиана, многоформная эритема; целлюлит инфекционный и неинфекционный; панникулит; кожные лимфомы, немеланомный рак кожи и другие диспластические поражения; расстройства, вызванные лекарствами, включающие стойкие лекарственные эритемы; буллезный пемфигус; увеит и весенний конъюнктивит.

5. Глаза: блефарит; конъюнктивит, включая круглогодичный и весенний аллергический конъюнктивит; ирит; передний и задний увеит; хориоидит; аутоиммунные, дегенеративные или воспалительные расстройства, поражающие сетчатку; офтальмия, включая симпатическую офтальмию; саркоидоз; инфекции, включающие вирусные, грибковые и бактериальные инфекции.

6. Желудочно-кишечный тракт: глоссит, гингивит, периодонтит; воспаление пищевода, включая рефлюкс; эозинофильный гастроэнтерит, мастоцитоз, болезнь Крона, колит, включающий неспецифический язвенный колит, проктит, анальный зуд; глютенчувствительная целиакия, синдром раздраженной толстой кишки, а также пищевые аллергии, которые могут оказывать действие на расстоянии от кишечника (например, мигрень, ринит или экзема).

7. Брюшная полость: гепатит, включая аутоиммунный, алкогольный и вирусный; фиброз и цирроз печени; холицистит; панкреатит как острый, так и хронический.

8. Мочеполовая система: нефрит, включающий интерстициальный и гломерулонефрит; нефротический синдром; цистит, включающий острый и хронический (интерстициальный) цистит и хроническую язву мочевого пузыря; острый и хронический уретрит, простатит, эпидидимит, оофорит и сальпингит; вульвовагинит; болезнь Пейрони; эректильная дисфункция (как мужская, так и женская).

9. Отторжение аллотрансплантата: острое и хроническое, следующее, например, за трансплантацией почки, сердца, печени, легкого, костного мозга, кожи или роговицы или после переливания крови; или болезнь "трансплантат против хозяина".

10. Центральная нервная система (ЦНС): болезнь Альцгеймера и другие дементные расстройства, включающие болезнь Крейтцфельдта-Якоба (CJD) и новую атипичную форму болезни Крейтцфельдта-Якоба (nvCJD); амилоидоз; рассеянный склероз и другие демиелинизирующие синдромы; церебральный атеросклероз и васкулит; временный артериит; тяжелая псевдопаралитическая миастения; острая и хроническая боль (острая, периодическая или постоянная, центрального или периферического происхождения), включающая висцеральную боль, головную боль, мигрень, невралгию тройничного нерва, атипичную лицевую боль, боль в суставах и костях, боль вследствие раковой или опухолевой инвазии, синдромы невропатической боли, включающие диабетические, постгерпетические и связанные с ВИЧ невропатии; нейросаркоидоз; осложнения центральной и периферической нервной системы вследствие злокачественных, инфекционных или аутоиммунных процессов.

11. Другие аутоиммунные и аллергические расстройства, включающие тиреоидит Хашимото, болезнь Грейвса, болезнь Аддисона, сахарный диабет, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, эозинофильный фасцит, гипер-lgE синдром, антифосфолидный синдром.

12. Другие расстройства с воспалительной или иммунологической составляющей; включающие синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), проказу, синдром Сезари и паранеопластические синдромы; системную красную волчанку; лепроматозную лепру; диабет I типа, нефротический синдром.

13. Сердечно-сосудистая система: атеросклероз, нарушающий коронарное и периферическое кровообращение; перикардит; миокардит, воспалительные и аутоиммунные кардиомиопатии, включающие миокардиальный саркоид; ишемические реперфузионные поражения; эндокардит, вальвулит, а также аортит, включающий инфекционный (например, сифилитический); васкулитиды; расстройства проксимальных и периферических вен, включающие флебит и тромбоз, включая тромбоз глубоких вен и осложнения варикозных вен.

14. Онкология: лечение обычных видов рака, включая рак предстательной железы, молочной железы, легкого (например, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), яичников, поджелудочной железы, кишечника и прямой кишки, желудка, кожи и мозга, а также плоскоклеточной саркомы, и злокачественных новообразований, поражающих костный мозг (включая лейкемии) и лимфопролиферативные системы, такие как лимфома Ходжкина и неходжкинская лимфома; включая профилактику и лечение метастазирующей опухоли и опухолевых рецидивов, а также паранеопластических синдромов.

15. Желудочно-кишечный тракт: глютенчувствительная целиакия, проктит, эозинофильный гастроэнтерит, мастоцитоз, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, микроскопический колит, колит неопределенного происхождения, синдром раздраженной толстой кишки, диарея невоспалительной природы, пищевые аллергии, которые могут оказывать действие на расстоянии от кишечника, например мигрень, ринит и экзема.

Таким образом, в настоящем изобретении предложен бензоат N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида или его сольват для применения в терапии.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида или его сольвата в приготовлении лекарственного средства для применения в терапии.

В контексте настоящего описания, если не указано иначе, термин "терапия" также включает "профилактику". Термины "терапевтический" и "терапевтически" следует истолковывать соответственно.

Ожидают, что профилактика является особенно подходящей для лечения людей, которые ранее уже пострадали от эпизода указанного заболевания или состояния, или существует повышенный риск указанного заболевания или состояния. Люди, имеющие риск развития конкретного заболевания или состояния, как правило, включают либо тех, у кого имеется история проявления заболевания или состояния в семье, либо тех, кого с помощью генетического тестирования или скрининга идентифицировали как особенно подверженных к развитию заболевания или состояния.

В изобретении также предложен способ лечения воспалительного заболевания у пациента, страдающего от указанного заболевания или имеющего риск возникновения указанного заболевания, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида или его сольвата.

В изобретении также предложен способ лечения заболевания дыхательных путей, например обратимого обструктивного заболевания дыхательных путей, у пациента, страдающего от указанного заболевания или имеющего риск возникновения указанного заболевания, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида или его сольвата.

Для вышеупомянутых терапевтических применений вводимая доза, безусловно, будет зависеть от способа введения, желаемого лечения и указанного расстройства, но типично находится в диапазоне от 0,001 мг/кг до 30 мг/кг.

Соль бензоат или ее сольват по изобретению могут быть применены сами по себе, но, как правило, их вводят в форме фармацевтической композиции, в которой соль бензоат или ее сольват (активный ингредиент) находится в ассоциации с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем. Традиционные способы выбора и приготовления подходящих фармацевтических композиций описаны, например, в "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M.E.Aulton, Churchill Livingstone, 1988.

В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция может содержать 0,05-99 мас.% (процент по массе), более предпочтительно 0,05-80 мас.%, еще более предпочтительно 0,10-70 мас.% и еще более предпочтительно 0,10-50 мас.% активного ингредиента, причем все проценты по массе приведены относительно массы всей композиции.

В настоящем изобретении также предложена фармацевтическая композиция, содержащая бензоат N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида или его сольват в ассоциации с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.

В изобретении также предложен способ приготовления фармацевтической композиции по изобретению, включающий смешивание бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида или его сольвата с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.

Фармацевтические композиции могут быть введены местно (например, на кожу или в легкое и/или в дыхательные пути) в форме, например, кремов, растворов, суспензий, гептафторалкановых (ГФА) аэрозолей и сухих порошкообразных препаратов, например препаратов в ингаляторе, известном как Turbuhaler^®, или системно, например, путем перорального введения в форме таблеток, капсул, сиропов, порошков или гранул; или с помощью парентерального введения в форме растворов или суспензий; или путем подкожного введения; или путем ректального введения в форме суппозиториев; или трансдермально.

В воплощении изобретения соль бензоат по изобретению вводят путем ингаляции. В еще одном воплощении соль бензоат по изобретению вводят с помощью сухого порошкового ингалятора. Ингалятор может представлять собой одно- или многодозовый ингалятор, а также может представлять собой сухой порошковый ингалятор, приводимый в действие путем дыхания.

При введении путем ингаляции доза соединения (то есть соли бензоата) по изобретению может, как правило, находиться в диапазоне от 0,1 мкг до 10000 мкг, от 0,1 до 5000 мкг, от 0,1 до 1000 мкг, от 0,1 до 500 мкг, от 0,1 до 200 мкг, от 0,1 до 200 мкг, от 0,1 до 100 мкг, от 0,1 до 50 мкг, от 5 мкг до 5000 мкг, от 5 до 1000 мкг, от 5 до 500 мкг, от 5 до 200 мкг, от 5 до 100 мкг, от 5 до 50 мкг, от 10 до 5000 мкг, от 10 до 1000 мкг, от 10 до 500 мкг, от 10 до 200 мкг, от 10 до 100 мкг, от 10 до 50 мкг, от 20 до 5000 мкг, от 20 до 1000 мкг, от 20 до 500 мкг, от 20 до 200 мкг, от 20 до 100 мкг, от 20 до 50 мкг, от 50 до 5000 мкг, от 50 до 1000 мкг, от 50 до 500 мкг, от 50 до 200 мкг, от 50 до 100 мкг, от 100 до 5000 мкг, от 100 до 1000 мкг или от 100 до 500 мкг.

Сухие порошкообразные препараты или ГФА аэрозоли под давлением соединений по изобретению могут быть введены путем пероральной или назальной ингаляции. Для ингаляции соединение желательно тонко измельчают. Тонкоизмельченное соединение предпочтительно обладает средневзвешенным диаметром меньше 10 мкм, и может быть суспендировано в смеси пропеллента с использованием диспергатора, такого как С₈-С₂₀жирная кислота или ее соль (например олеиновая кислота), соль желчных кислот, фосфолипид, алкилсахарид, перфторированное или полиэтоксилированное поверхностно-активное вещество или другой фармацевтически приемлемый диспергатор.

Одна из возможностей заключается в смешивании тонкоизмельченного соединения по изобретению с веществом-носителем, например моно-, ди- или полисахаридом, сахарным спиртом или другим полиолом. Подходящие носители представляют собой сахара, например лактозу, глюкозу, рафинозу, мелезитозу, лактит, мальтит, трегалозу, сахарозу, маннит и крахмал. Альтернативно, тонкоизмельченное соединение может быть покрыто другим веществом. Порошкообразная смесь также может быть внесена в твердые желатиновые капсулы, каждая из которых содержит желаемую дозу активного соединения.

Другая возможность заключается в обработке тонкоизмельченного порошка в сферы, которые разрушаются в процессе процедуры ингаляции. Этим сферонизированным порошком может быть заполнен резервуар для лекарства многодозового ингалятора, например ингалятора, известного как Turbuhaler^®, в котором дозатор отмеряет желаемую дозу, которая затем вдыхается пациентом. С помощью этой системы активный ингредиент вместе веществом-носителем или без него доставляется пациенту.

Для перорального введения соединение по изобретению может быть смешано с адъювантом или носителем, например лактозой, сахарозой, сорбитом, маннитом; крахмалом, например картофельным крахмалом, кукурузным крахмалом или амилопектином; производным целлюлозы; связывающим веществом, например желатином или поливинилпирролидоном; и/или смазывающим веществом, например стеаратом магния, стеаратом кальция, полиэтиленгликолем, воском, парафином и тому подобным, и затем прессовано в таблетки. Если требуются таблетки с покрытием, то ядра, приготовленные как описано выше, могут быть покрыты концентрированным раствором сахара, который может содержать, например, аравийскую камедь, желатин, тальк и диоксид титана. Альтернативно, таблетка может быть покрыта подходящим полимером, растворенным в легко испаряющемся органическом растворителе.

Для приготовления мягких желатиновых капсул соединение по изобретению может быть смешано, например, с растительным маслом или полиэтиленгликолем. Твердые желатиновые капсулы могут содержать гранулы соединения с использованием любого из вышеупомянутых эксципиентов для таблеток. Также жидкими или полутвердыми препаратами соединения по изобретению могут быть заполнены твердые желатиновые капсулы.

Жидкие препараты для перорального применения могут находиться в форме сиропов или суспензий, например растворов, содержащих соединение по изобретению, причем объем доводят сахаром и смесью этанола, воды, глицерина и пропиленгликоля. Возможно, такие жидкие препараты могут содержать красители, корригенты, сахарин и/или карбоксиметилцеллюлозу в качестве загустителя или другие эксципиенты, известные в данной области техники.

Соединения по изобретению также могут быть введены вместе с другими соединениями, применяемыми для лечения вышеописанных состояний.

Таким образом, изобретение также относится к комбинированным способам терапии, где соединение по изобретению или фармацевтическая композиция или препарат, содержащий соединение по изобретению, вводят одновременно или последовательно, или в качестве комбинированного препарата с другим терапевтически агентом или агентами для лечения одного или более чем одного из перечисленных состояний.

Настоящее изобретение далее будет дополнительно раскрыто с помощью следующих иллюстративных примеров.

На Фиг.1 представлена картина дифракции рентгеновских лучей на порошке для бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида (Форма А).

На Фиг.2 представлена картина дифракции рентгеновских лучей на порошке для бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида (Форма Б).

На Фиг.3 показан средневзвешенный аэродинамический диаметр (СВАД) и геометрическое стандартное отклонение (ГСО) для микронизированного бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида (Форма Б) и препарата Pulmicort^® Turbuhaler^®, описанного в примерах. Отметки ошибок соответствуют 95% доверительному интервалу (ДИ).

На Фиг.4 продемонстрирована фракция тонкоизмельченных частиц (ФТЧ) микронизированного бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида (Форма Б) и препарата Pulmicort Turbuhaler^®, описанного в примерах. Отметки ошибок соответствуют 95% доверительному интервалу (ДИ).

Общие способы

Спектры ядерного магнитного резонанса ¹H ЯМР при 298 К регистрировали на приборе Varian Unity Inova 400 МГц (программное обеспечение: VNMR 6,1C и VNMRJ 1,1D; зонд: Nalorac 5 мм DG400-5AT) или Varian Mercury-VX 300 МГц (программное обеспечение: VNMR 6,1C; зонд; Varian 5 мм AutoSW PFG). В качестве внутренних стандартов использовали центральные пики ацетона-d₆ или диметилсульфоксида (ДМСО)-d₆.

Для анализа путем жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (ЖХ/МС) использовали следующий способ:

Аппарат МС: Серия Agilent 1100, оборудованный интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (ХИАД) Аппарат ЖХ: Серия Agilent 1100, оборудованный ультрафиолетовым (УФ) детектором VWD, автоматический пробоотборник ALS, двойной насос и дегазатор Колонка для ЖХ: Chromolith Speed ROD, RP-C18, ⌀ 4,6 × 50 мм Элюент: Растворитель А: вода + 0,1% трифторуксусная кислота (ТФУ); Растворитель Б: ацетонитрил + 0,1% ТФУ Условия ЖХ: поток 2,5 мл/минуту; градиент 5-95% Б; время анализа 3,6 минут; УФ 220 нм МС: режим положительных ионов; напряжение в капилляре 3 кВ

Пример 1

Получение бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида (соль 1:1), Форма А

(а) Смешивали горячие растворы N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида (который может быть получен способами, описанными в WO 03/051839, или способами, аналогичными описанным в WO 01/98273; 462 мг, 1,0 ммоль) в этилацетате (10 мл) и бензойной кислоты (244 мг, 2,0 ммоль) в этилацетате (10 мл). Полученную смесь оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды (20°С) в закрытой пробирке. Формировался белый осадок без мутности. После отстаивания при температуре окружающей среды в течение ночи полученный осадок промывали этилилацетатом (3×10 мл) и сушили в вакууме при 60°С в течение ночи с получением указанной в заголовке соли в виде не совсем белого твердого вещества (506 мг, 86%). Соль содержала следовые количества этилацетата.

¹H ЯМР (399,99 МГц, ацетон-d₆) δ 8.77 (s, 1H), 8.07-8.04 (m, 2H), 7.83 (d, J=8,7 Гц, 1H), 7.55-7.50 (m, 1H), 7.46-7.41 (m, 2H), 7.36-7.31 (m, 4H), 6.52 (d, J=2,6 Гц, 1H), 6.40 (dd, J=8,7, 2,6 Гц, 1H), 3.97 (d, J=9,3 Гц, 1H), 3.89 (d, J=9,3 Гц, 1H), 3.48 (s, 2H), 3.29 (d, J=12,1 Гц, 1H), 2.94 (d, J=12,2 Гц, 1H), 2,91-2.77 (m, 3H), 2.09-2.00 (m, 4H), 1.98 (s, 3Н), 1.72-1.59 (m, 2H), 1.30 (s, 3H)

ХИАД-МС: m/z 462 [МН+]

Стехиометрию, 1:1 основание:кислота, подтвердили с помощью ЯМР.

Дополнительные количества указанной в заголовке соли были получены следующим способом:

(б) Смешивали горячие растворы N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида (4,0 г, 8,65 ммоль) в этилацетате (75 мл) и бензойной кислоты (1,16 г, 9,5 ммоль) в этилацетате (75 мл). Когда полученная смесь охладилась до температуры окружающей среды (20°С), ее затравливали частицами указанной в заголовке соли, полученными в (а) выше, и оставляли на ночь в закрытой колбе. Полученный осадок промывали этилацетатом (3×50 мл) и сушили в условиях вакуума при 60°С в течение ночи с получением указанной в заголовке соли в виде не совсем белого твердого вещества (4,41 г, 87%). Соль содержала следовые количества этилацетата.

Пример 2

Получение бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида (соль 1:1), Форма Б

(а) Соль бензоат, полученную способом Примера 1(б) (Форма А, 10-15 мг), помещали в контейнер для дифференциальной сканирующей калориметрии (с гофрированной крышкой) и нагревали с использованием скорости нагревания 5 К (5°С)/мин до достижения температуры 155°С. Когда соль расплавилась (в используемых условиях была зарегистрирована начальная температура плавления 146,5°С), расплавленный образец охлаждали со скоростью 5 К (5°С)/мин до температуры окружающей среды (20°С). Затем этот контейнер снова нагревали со скоростью нагревания 5 К (5°С)/мин до достижения температуры 151°С, и сканер регистрировал изотерму при 148°С в течение периода 10 минут. После этого контейнер быстро охладили до температуры окружающей среды, что приводило к образованию кристаллов, которые потом с помощью дифракции рентгеновских лучей на порошке (ДРЛП) были охарактеризованы как новая физическая форма бензоата N-{2-[((23)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида (Форма Б). Некоторое количество аморфной соли бензоата могло образовываться в качестве побочного продукта этого способа.

(б) Форму Б соли, описанную выше в (а), также получали путем растворения в пробирке 20 мас.% образца соли бензоата, полученной способом Примера 1(б) (Форма А), в растворителе, таком как метанол (более 20 мг/мл), этанол (более 20 мг/мл), н-пропанол (более 20 мг/мл), изопропанол (8,5 мг/мл) или ацетон (9,6 мг/мл). Цифры в скобках обозначают предполагаемую растворимость соли в этих растворителях. Пробирку затем запаивали и суспензию гомогенизировали при температуре окружающей среды (20°С) с использованием магнита. Перемешивание и температуру поддерживали в течение периода по меньшей мере 7 дней, после чего образец полученного материала высушивали и тестировали с помощью ДРЛП. ДРЛП подтвердила, что произошло полное превращение Формы А в Форму Б.

(в) Форму Б соли, описанную выше в (а), также получали путем растворения соли бензоата, полученной способом по Примеру 1(б) (Форма А) (22,0 г, 37,7 ммоль), и бензойной кислоты (0,46 г, 3,8 ммоль) в горячем 2-пропаноле (190 мл) в колбе с круглым дном с получением красноватого раствора. Колбу подвергали выпариванию с использованием аппарата Rotavapor на водяной бане при 40°С до охлаждения раствора до 40°С, после чего его затравливали несколькими кристаллами Формы Б соли. Водяную баню оставляли медленно охлаждаться до температуры окружающей среды в течение ночи, пока колбу подвергали выпариванию и смесь периодически затравливали несколькими кристаллами Формы Б соли. Образовавшийся розовый осадок выделяли посредством отсасывания, промывали 2-пропанолом (2×50 мл) и сушили в вакууме при 100°С в течение 20 часов с получением указанной в заголовке соли (что подтверждали с помощью ДРЛП) в виде светло-розового твердого вещества (18,5 г, 84%). Соль содержала следовые количества 2-пропанола.

¹H ЯМР (299,95 МГц, ДМСО-d6) δ 8.87 (s, 1H), 7.96-7.91 (m, 2H), 7.59-7.52 (m, 1H), 7.49-7.47 (m, 1H), 7.46-7.42 (m, 2H), 7.36 (d, J=8,6 Гц, 2H), 7.29 (d, J=8,6 Гц, 2H), 6.39 (d, J=2,5 Гц, 1Н), 6.29 (dd, J=8,5, 2,5 Гц, 1Н), 3.78-3.72 (m, 2H), 3.41 (s, 2H), 2.79-2.66 (m, 4H), 1.98 (s, 3Н), 1.97-1.88 (m, 2H), 1.85-1.76 (m, 2H), 1.41-1.25 (m, 2H), 1.19 (s, 3H)

ХИАД-МС: m/z 462 [MH+]

Стехиометрию, 1:1 основание:кислота, подтверждали с помощью ЯМР

Пример 3

Анализ путем дифракции рентгеновских лучей на порошке

Общие способы

Анализ путем дифракции рентгеновских лучей на порошке (ДРЛП) можно проводить с образцами, приготовленными в соответствии со стандартными способами (смотри, например Giacovazzo et al., eds., Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press (1992); Jenkins & Snyder, eds., Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York (1996); Bunn, ed., Chemical Crystallography, Clarendon Press, London (1948); и Klug & Alexander eds., X-ray Diffraction Procedures, John Wiley & Sons, New York (1974)).

Картины дифракции рентгеновских лучей на порошке для Формы А и Формы Б соли, описанных выше в Примерах 1 и 2 (в безводной форме), были получены как описано ниже:

Для анализов использовали порошковый рентгеновский дифрактометр с парафокусировкой (parafocusing) Брэгга-Брентано с использованием монохроматического излучения CuKα (45 кВ и 40 мА). Первичная оптика включала щели Соллера и автоматическую щелерасходимость. Плоские образцы готовили на пластинах с нулевым фоном, вращающихся во время измерений. Вторичная оптика включала щели Соллера, автоматическую антирассеивающую щель, приемную щель и монохроматор. Дифрагированный сигнал обнаруживали с помощью пропорционального детектора, заполненного ксеноном. Картины дифракции регистрировали между 2°≤2θ (тета)≤40° в режиме непрерывного сканирования с величиной шага 0,016° 2θ при скорости 4° 2θ в минуту. Необработанные данные хранили в электронном виде. Оценку проводили на необработанных данных или сглаженных картинах дифракции,

Для описанных выше измерений использовали дифрактометр Panalytical X'pert PRO MPD θ-θ в режиме отражения. Специалист в данной области техники может установить приборные настройки порошкового рентгеновского дифрактометра таким образом, что могут быть собраны данные дифракции, сопоставимые с представленными данными.

Полученные результаты представлены на Фиг.1 и Фиг.2.

Пример 4

Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК)

С использованием стандартных способов, например описанных в Höhne, G, W, H, et al (1996), Differential Scanning Calorimetry, Springer, Berlin, исследовали калориметрический ответ тестируемого образца на повышение температуры с использованием дифференциального сканирующего калориметра с модулированной температурой, Q1000 (ДСКМТ) в режиме "только нагревание" со скоростью нагревания 5°С в минуту. Приблизительно 2-5 мг тестируемого образца помещали в алюминиевые чашки с крышками (не гофрированными) в условиях атмосферы азота.

Хорошо известно, что начало ДСК и пиковые температуры могут меняться вследствие чистоты образца и приборных параметров, особенно скорости сканирования температуры. Специалисты в данной области техники могут использовать стандартную оптимизацию/калибровку для установления приборных параметров дифференциального сканирующего калориметра таким образом, что могут быть собраны данные, сравнимые с данными, представленными здесь.

Обнаружили, что температура плавления для типичного образца безводной Формы А соли составляет 146°С±2°С (начало).

Обнаружили, что температура плавления для типичного образца безводной Формы Б соли составляет 154°С±2°С (начало).

Пример 5

Определение гигроскопичности

Изменения массы тестируемого образца при комнатной температуре (25°С) и относительной влажности 80% (ОВ) исследовали путем регистрации изотерм адсорбции-десорбции с использованием симметричного анализатора испарения-сорбции SGA-100 (VTI Corporation) и применением различных способов, главными особенностями которых являлись: цикл одиночной сорбции/десорбции от 0 до 90% ОВ при шаге ОВ 10% с триггерным значением dm/dt 0,002%, (dm/dt = изменение массы по времени, когда стабильность баланса находится в пределах этой величины, следующий шаг начинается автоматически, тем не менее, если эти условия не достигаются, то существует максимальное определенное по умолчанию время для каждого шага, составляющее 6 часов).

Приблизительно от 2 до 10 мг тестируемого образца помещали в держатель для образца и подвергали воздействию различных относительных влажностей.

Тестируемый образец Поглощение воды (% мас./мас.) при 80% ОВ Безводная Форма А <2 Безводная Форма Б <0,8

Пример 6

Оценка дезагрегационных свойств микронизированной соли

Способ

Предполагали, что это скрининговое исследование даст некоторую оценку в отношении дезагрегационных свойств безводной соли бензоата N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида, формы Б (обозначенной в этом примере как "Форма Б соли"). Результаты сравнивали с результатами для общепризнанного порошкообразного продукта, препарата Pulmicort^® Turbuhaler^®, который тестировали идентичным образом.

Форму Б соли микронизировали для получения размера частиц меньше 5 мкм. Порошок Pulmicort^® Turbuhaler^® высвобождали из Pulmicort^® Turbuhaler^®. Последний препарат состоит из микронизированного порошка будесонида, который сферонизирован в небольшие гранулы. Микронизацию Формы Б соли проводили в струйной мельнице со спиральным потоком. В пределах внутреннего кольцевого пространства струйной мельницы находится спиральный классификатор. Мелкие частицы пройдут через эту зону классификации и выйдут наружу через циклон на дне мельницы. Фракцию, захваченную фильтром мельницы на выходе, отделяли.

Для дезагрегации порошков (для препарата Pulmicort^® Turbuhaler^® и Формы Б соли) порошками заполняли простой ингалятор, содержащий L-образный цилиндрический канал, включающий вертикальный компонент и горизонтальный компонент.

Насадку Turbuhaler^® прочно соединяли с концом горизонтального компонента для того, чтобы способствовать дезагрегации порошка, и тестируемый порошок помещали через вертикальный канал в изгиб канала (то есть в угол канала, имеющего L-форму). Затем путем воздушного импульса (см. ниже) активировали поток воздуха через вертикальный компонент канала, с захватом порошка, находящегося в изгибе, и смесь частиц с воздухом затем перемещалась сквозь горизонтальный компонент цилиндра, и, наконец, проходила через насадку Turbuhaler^®.

После выхода из насадки Turbuhaler^® аэрозоль переносился в аэродинамический аппарат для оценки размеров частиц TSI Aerodynamic Particle Sizer (APS^®) с устройством Impactor Inlet 3306, в котором анализировали аэродинамические свойства аэрозольного облака и фракции тонкоизмельченных частиц. Система APS была собрана таким образом, чтобы дать возможность для вывода доз при возможных потоках воздуха с последующим подсчетом и аэродинамической классификацией (примерно 0,3-20 мкм) частиц от частицы к частице. Кратко, между горловиной USP и 3306 Impacter Inlet помещали трехходовой пневматический клапан и предварительный разделитель NGI. Дополнительно, между клапаном и предварительным разделителем помещали трубку к источнику вакуума через соленоидный клапан, контролируемый таймером (Triggor Box), в виде Т-сочленения. Затем генерировали короткий воздушный импульс сквозь ингалятор, горловину USP и предварительный разделитель с использованием Triggor box. После окончания воздушного импульса пневматический клапан переключали таким образом, чтобы аэрозольное облако в предварительном разделителе перемещалось в APS через 3306 Impacter Inlet для аэродинамической оценки.

Каждую дозу выпускали с воздушным импульсом длительностью 0,4 секунды с максимальным воздушным потоком при 60 л/мин, с последующим забором образца в прибор APS. Время забора образца в программном обеспечении APS устанавливали на 20 секунд. Полученные на APS параметры представляли собой средневзвешенный аэродинамический диаметр (СВАД), геометрическое стандартное отклонение (ГСО) и измерение количества дозы (данные подсчета частиц, переведенные в данные массы с использованием концентрации частиц = 1), названного дозой тонкоизмельченных частиц (ДТЧ).

Первые две дозы (для каждого препарата) высвобождали и измеряли гравиметрически. Среднее значение для этих гравиметрических доз, обозначенных как "отмеренные дозы" или загруженная доза, использовали для нормализации (ДТЧ), что позволяло измерить фракцию тонкоизмельченных частиц (ФТЧ). Таким образом, ФТЧ может быть использована для прямого сравнения двух порошкообразных препаратов (для используемых параметров прибора). Предел для тонкоизмельченных частиц устанавливали на аэродинамический размер частиц 7 мкм. Семь и пять доз затем анализировали с помощью APS соответственно для препарата Pulmicort^® Turbuhaler^® и для Формы Б соли.

Результаты

Результаты представлены в Таблице 2. Фракция тонкоизмельченных частиц представляет собой ДТЧ, разделенную на отмеренную дозу, которая, в свою очередь, представляет собой среднее арифметическое двух измерений для каждого препарата.

Результаты изображены на Фиг.3 (СВАД и ГСО) и на Фиг.4 (ФТЧ). Результаты СВАД и ГСО демонстрируют очень небольшую вариабельность (маленькие доверительные интервалы), и различие между двумя препаратами в отношении этих двух параметров очень мало и может более или менее рассматриваться как эквивалентное.

Для ФТЧ была получена большая вариабельность для Формы Б соли, что может быть отнесено к тому, что порошок не оптимизирован в отношении заполняющих свойств. Тем не менее, неожиданно показано, что ФТЧ в общем выше для Формы Б соли, чем для препарата Pulmicort^® Turbuhaler^®, что также отражается в нормализованной ФТЧ для Формы Б соли.

Таблица 2 Полученные данные. Дозы 1-7 представляют собой данные Pulmicort^® Turbuhaler^®. Доза 8-12 представляет собой данные для Формы Б соли. Нормализованное значение^a ФТЧ для Формы Б соли рассчитывают как среднее значение ФТЧ для Формы Б соли/среднее ФТЧ для препарата Pulmicort^® Turbuhaler^®. Доза ДТЧ/мкг СВАД/мкм ГСО отмеренная доза/мг ФТЧ (ДТЧ/отмеренную дозу 1 108 2,21 1,60 1,45 75 2 134 2,15 1,60 1,45 92 3 116 2,17 1,61 1,45 80 4 123 2,13 1,60 1,45 85 5 139 2,11 1,62 1,45 96 6 138 2,15 1,63 1,45 95 7 163 2,13 1,62 1,45 113 8 167 2,28 1,54 1,22 137 9 133 2,12 1,60 1,22 109 10 279 2,20 1,61 1,22 229 11 157 2,10 1,60 1,22 129 12 175 2,11 1,59 1,22 144 Среднее значение для препарата Pulmicort^®       Turbuhaler^® 132 2,15 1,61 91 Среднее значение 182 2,16 1,59 149 для Формы Б соли             Нормализованная Форма Б соли 164%^a Стандартное отклонение для препарата Pulmicort^® Turbuhaler^®           18,1 0,03 0,01 12,5 Стандартное отклонение для 56,2 0,08 0,03 46,1 Формы Б соли       95% ДИ для препарата Pulmicort^® 13,4 0,03 0,01 9,3 Turbuhaler^® 95% ДИ для Формы 49,3 0,07 0,02 40,4 Б соли

На основании результатов, представленных выше, можно сделать вывод, что препарат Формы Б соли демонстрировал очень похожее среднее значение размера частиц (СВАД) и распределение частиц по размерам (ГСО) с общепризнанным продуктом в виде препарата (препарат Pulmicort^® Turbuhaler^®). Фракция порошка, распределяющаяся на тонкоизмельченные частицы (фракция тонкоизмельченных частиц), которые являются ключевыми для успешной доставки лекарственного средства в дыхательные пути, была схожа для двух различных порошков, хотя лучше для Формы Б соли. Следовательно, на основании данных, полученных в данном исследовании, можно сделать вывод, что препарат соли Б демонстрирует благоприятные дезагрегационные свойства.

Тест на связывание с человеческим CCR1

Мембраны

Для получения клеточных мембран, содержащих CCR1, использовали клетки НЕК293, полученные из Европейской коллекции культивируемых клеток животных (ЕСАСС), стабильно экспрессирующие рекомбинантный человеческий CCR1 (HEK-CCR1). Мембраны хранили при -70°С. Концентрация мембран в каждой партии была доведена до 10% специфического связывания с 33 пМ [¹²⁵I] MIP-1α.

Тест на связывание

100 мкл HEK-CCR1 мембран, разведенные в буфере для анализа рН 7,4 (137 мМ NaCl (Merck, Cat No 1,06404), 5,7 мМ глюкозы (Sigma, Cat No G5400), 2,7 мМ KCl (Sigma, Cat No P-9333), 0,36 мМ NaH₂PO₄×H₂O (Merck, Cat No 1,06346), 10 мМ HEPES (Sigma, Cat No H3375), 0,1% (мас./об.) желатина (Sigma, Cat No G2625)) с добавлением 17500 единиц/л бацитрацина (Sigma, Cat No B1025), вносили в каждую лунку 96-луночного фильтровального планшета (0,45 мкм непрозрачный Millipore cat no MHVB N4550). 12 мкл соединения в буфере для анализа, содержащего 10% ДМСО, добавляли для получения конечных концентраций соединения 1×10^-5,5-1×10^-9,5 M. 12 мкл холодного человеческого рекомбинантного MIP-1α (270-LD-050, R&D Systems, Oxford, UK), 10 нМ конечная концентрация в буфере для анализа, дополненного 10% ДМСО, помещали в определенные лунки (без соединения) в качестве контроля неспецифического связывания (КНС). 12 мкл буфера для анализа с 10% ДМСО добавляли в определенные лунки (без соединения) для определения максимального связывания (В0).

12 мкл [¹²⁵I] MIP-1α, разведенного в буфере для анализа до конечной концентрации в лунках 33 пМ, добавляли во все лунки. Планшеты с крышкой затем инкубировали в течение 1,5 часов при комнатной температуре. После инкубации лунки освобождали путем вакуумной фильтрации (Multiscreen Resist Vacuum Manifold system, Millipore) и однократно промывали 200 мкл буфера для анализа. После промывки во все лунки вносили 50 мкл сцинтилляционной жидкости (OptiPhase "Supermix", Wallac Oy, Turko, Finland). Связывание [¹²⁵I] MIP-1α измеряли с использованием счетчика Wallac Trilux 1450 MicroBeta. Установки границ: Нижнее 5-Верхнее 1020, 1-минутный подсчет/лунку.

Расчет процента замещения и IC₅₀

Для расчета процента замещения применяли следующее уравнение.

Процент замещения = 1-((имп./мин тест-имп./мин КНС)/(имп./мин В0-имп./мин КНС)), где:

имп./мин тест = среднее значение имп./мин в продублированных лунках с мембранами, соединением и [¹²⁵I] MIP-1α имп./мин;

КНС = среднее значение имп./мин в лунках с мембранами, MIP-1α и [^125I] MIP-1α (неспецифическое связывание) имп./мин;

В0 = среднее значение имп./мин в лунках с мембранами, буфером для анализа и [^125I] MIP-1α (максимальное связывание).

Молярная концентрация соединения, приводящая к 50% замещению (IC₅₀), была получена с использованием программы XLfit на основе Excel (версия 2.0.9) для подгонки данных к 4-параметрической логистической функции.

Изобретение относится к соединению, представляющему собой бензоат N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида или к его сольвату. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, к сухому порошковому ингалятору, к применению соединения по любому из пп.1-6, а также к способу модулирования хемокинового рецептора 1 (CCR1). Технический результат - получение нового биологически активного соединения, обладающего модулирующей активностью в отношении хемокинового рецептора 1 (CCR1). 7 н. и 6 з.п.ф-лы, 2 табл., 4 ил.

1. Соединение, представляющее собой бензоат N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-хлорбензил)пиперидин-4-ил]амино}-2-гидрокси-2-метилпропил)окси]-4-гидроксифенил}ацетамида или его сольват.

2. Соединение по п.1, являющееся безводным.

3. Соединение по п.2, демонстрирующее по меньшей мере следующие характеристические пики дифракции рентгеновских лучей на порошке (выраженные в градусах 2θ):
(1) 6,1, 10,7 и 19,3, или
(2) 6,1, 12,2 и 14,1, или
(3) 6,1, 10,7, 12,2, 14,1, 18,1 и 19,3, или
(4) 6,1, 10,7, 12,2, 14,1, 15,7, 18,1 и 19,3, или
(5) 6,1, 10,7, 12,2, 14,1, 15,1 и 19,3, или
(6) 6,1, 10,7, 12,2, 14,1, 15,1, 15,7, 18,1 и 19,3, или
(7) 6,1, 10,7, 12,2, 14,1, 15,1, 15,7, 18,1, 19,3, 21,2 и 24,6.

4. По существу, чистое соединение по п.3, имеющее, по существу, такую же картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, как картина, представленная на Фиг.1.

5. Соединение по п.2, демонстрирующее по меньшей мере следующие характеристические пики дифракции рентгеновских лучей на порошке (выраженные в градусах 2θ):
(1) 6,5, 9,3 и 10,5, или
(2) 6,5, 9,3, 17,6 и 17,8, или
(3) 6,5, 9,3, 10,5, 12,0 и 12,4, или
(4) 6,5, 9,3, 10,5, 12,0, 12,4, 13,0, 13,6, 15,5, 17,6 и 17,8, или
(5) 6,5, 13,0 и 20,2, или
(6) 6,5, 9,3, 10,5, 12,0, 12,4, 13,0, 13,6, 15,5, 17,6, 17,8 и 19,2, или
(7) 6,5, 9,3, 10,5, 12,0, 12,4, 13,0, 13,6, 15,5, 17,6, 17,8, 19,2, 20,2, 22,8 и 26,0, или
(8) 6,5, 9,3, 10,5, 12,0, 12,4, 13,0, 13,6, 15,5, 17,6, 17,8, 19,2, 20,2, 22,8, 24,2, 26,0 и 30,7.

6. По существу, чистое соединение по п.5, имеющее, по существу, такую же картину дифракции рентгеновских лучей на порошке, как картина, представленная на Фиг.2.

7. Фармацевтическая композиция, обладающая модулирующей активностью в отношении хемокинового рецептора 1 (CCR1) и содержащая соединение по любому из пп.1-6 в комбинации с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.

8. Сухой порошковый ингалятор, имеющий резервуар, заполненный соединением по любому из пп.1-6 или фармацевтической композицией по п.7.

9. Соединение по любому из пп.1-6 для терапии, обладающее модулирующей активностью в отношении хемокинового рецептора 1 (CCR1).

10. Применение соединения по любому из пп.1-6 в производстве лекарственного средства для лечения заболеваний или состояний человека, при которых полезна модуляция активности хемокинового рецептора 1 (CCR1).

11. Применение соединения по любому из пп.1-6 в производстве лекарственного средства для применения в лечении хронического обструктивного заболевания легких.

12. Применение соединения по любому из пп.1-6 в производстве лекарственного средства для применения в лечении астмы.

13. Способ модулирования хемокинового рецептора 1 (CCR1), включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-6 или фармацевтической композиции по п.7.