СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ И УГЛЕВОДОВ ЭЛЕКТРОДИАЛИЗОМ Российский патент 2011 года по МПК B01D61/44 

Изобретение относится к способу очистки и производства аминокислот, в частности к получению аминокислот из растворов, содержащих в качестве примеси углеводы, и может быть использовано в пищевой и фармацевтической промышленности.

Одним из наиболее распространенных методов синтеза аминокислот является микробиологический, в ходе которого штаммы-продуценты синтезируют аминокислоту, потребляя при этом органические вещества. Максимальный биосинтез L-лизина наблюдается при использовании питательных сред на основе сахарозы [И.М.Грачева, Н.Н.Гаврилова, Л.А.Иванова Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и жиров. - М.: Пищевая промышленность, 1980. 448 с.]. После завершения процесса биосинтеза в составе культуральной жидкости наряду с целевой аминокислотой содержатся и остаточные углеводы с концентрацией 3-5 г/л. В ходе дальнейшего выделения, разделения и концентрирования возможно взаимодейтвие аминокислот с углеводами при повышении температуры технологических растворов с образованием окрашенных веществ - меланоидинов и снижение концентрации целевого продукта [Взаимодействие фруктозы и глютаминовой кислоты в лимоннокислых средах. / В.Ф.Селеменев, И.П.Шамрицкая, К.Лепс, Г.Ю.Орос. // Изв. ВУЗов. Пищевая технология. 1979, №2. С.40-44]. Для предотвращения потерь аминокислот в процессе их производства актуальной задачей является разделение аминокислот и углеводов.

Известен способ очистки лизина от минеральных катионов (Na⁺, K⁺, Са²⁺) с помощью катионита КУ-2-8 в NH₄ ⁺-форме [Исследование работы крупногабаритного ионообменного фильтра в процессе выделения кристаллического лизина из культуральной жидкости. / А.Ф.Шолин и др. // Теория и практика сорбционных процессов. 1981. №14. С.107-110]. Очистка L-лизина от сопутствующих компонентов культуральной жидкости, элюатов и маточников осуществляется с помощью макропоритсого анионита АВ-17-2П в хлоридной или гидроксильной форме [Способ очистки L-лизина от сопутствующих компонентов культуральной жидкости, элюатов и маточников. / В.Ф.Селеменев и др. Патент РФ №2140902. Приоритет 16.07.97].

Однако при ионообменных способах очистки аминокислот образуются большие объемы сточных вод, велики затраты на регенерацию ионообменников растворами кислот и щелочей. Мембранные методы позволяют сократить объемы сточных вод и затраты реагентов. Способ очистки водных растворов синтетических аминокислот, содержащих органические и неорганические примеси, описан в [Пат. 1466676 Франция, МКИ С07С. Precede de purification des acides amines. / Sumitoro Chemical Co." заявл. 14.01.66, опубл. 12.12.66.]. pH при очистке поддерживали около изоэлектрической точки. Приведен пример получения препарата с содержанием основного вещества 97% из 2% раствора глицина.

Известна электродиализная установка с биполярной мембраной, примененная для разделения растворов, содержащих аминокислоты (аспарагиновую кислоту, фенилаланин) и хлорид натрия [20. Pat. 4330 USA, 1C С07С 227-40, B01D 061-40. Electrodialytic treatment of aqueous solutions containing amino acids or other amphoteric compounds for salt separation. / Chlanda, P.Frederich (USA); Alliend - Signal, Inc. - №393165; Appl. 14.08.89; Pat. 2.08.90].

В работе [Electrodialysis of acetate fermentation broths. / U.N.Chukwu, M.Cheryan. // Appl. Biochem. Biotechnol. - 1999. - V.77-79. - P.485-499] проведено электродиализное отделение уксусной кислоты от остатков непрореагировавшей глюкозы в ацетатном ферментационном бульоне.

Наиболее близким по совокупности признаков является описанный электродиализный способ получения L-лизина из лизинсодержащих растворов, включающий обработку рацемата разделяющим агентом с получением солей D- и L-лизина, удаление D-формы и разложение гидротартрата лизина методом электродиализа в электродиализаторе с чередующимися катионообменными и биполярными мембранами в интенсивном токовом режиме (12-18 мА/см) с выделением чистого L-лизина (Пат. РФ №2223946, МПК С07С 227/34; 229/26.; опубл. 20.02.2004).

К недостаткам вышеизложенного способа относятся:

- предложенный способ позволяет производить выделение лизина из растворов его солей с разделяющим оптически активным агентом без использования концентрированных растворов кислот, но не предполагает разделения аминокислот и неэлектролитов, которое требуется при микробиологическом синтезе;

- использование интенсивных токовых режимов приводит к существенным энергозатратам.

Технический результат - получение чистого раствора аминокислоты от неэлектролитов (углеводов) методом электродиализа с чередующимися биполярными и монополярными (катионообменными или анионообменными) мембранами.

Технический результат достигается тем, что способ разделения аминокислот и углеводов электродиализом включает внесение исходного раствора, содержащего аминокислоту и углевод, в дилюатные секции электродиализатора с расположенными между электродами чередующимися катионообменными и биполярными мембранами или анионообменными и биполярными мембранами, при pH исходного раствора, равном p1 соответствующей аминокислоты, при этом в камерах концентрирования циркулирует дистиллированная вода, а в электродные камеры подают раствор сульфата натрия с концентрацией 0.025 моль/дм³, причем образовавшиеся в дилюатных камерах катионы или анионы аминокислот переносятся через катионообменные или анионообменные мембраны в камеры концентрирования, а углевод остается в растворе, вытекающем из дилюатной секции.

Разделение проводится в электродиализаторе с платиновым анодом и никелевым катодом, состоящим из семи камер, разделенных чередующимися ионообменными мембранами, при плотности электрического тока 0,1-7,0 мА/см².

В качестве исходного раствора в процессе разделения может быть взят раствор, содержащий нейтральную (например, глицин), основную (например, лизин) или кислую (например, глютаминовая кислота) аминокислоту и углевод.

На фиг.1 представлена схема электродиализного аппарата с чередующимися катионообменными и биполярными мембранами (1-7 номера секций, К - катионообменные мембраны, АК - биполярные мембраны, АА - аминокислота).

На фиг.2 представлена схема электродиализного аппарата с чередующимися анионообменными и биполярными мембранами (1-7 номера секций, А - катионообменные мембраны, АК - биполярные мембраны, АА - аминокислота).

Таблица 1. Характеристики процесса разделения глицина и сахарозы электродиализом с чередующимися катионообменными и биполярными мембранами (МК-40/МБ-3), а также анионообменными и биполярными мембранами (МА-41/МБ-3).

Таблица 2. Характеристики процесса разделения глицина и глюкозы электродиализом с чередующимися катионообменными и биполярными (МК-40/МБ-3) мембранами, а также анионообменными и биполярными мембранами (МА-41/МБ-3).

Таблица 3. Характеристики процесса разделения лизина и сахарозы электродиализом с катионообменными (МК-40) и биполярными (МБ-3 или Fumaser FBM) мембранами.

Таблица 4. Характеристики процесса разделения глютаминовой кислоты и сахарозы электродиализом с анионообменными (МА-41) и биполярными (МБ-3) мембранами.

Использовали биполярные мембраны МБ-3 (производство ОАО «Щекиноазот», РФ) или Fumaser FBM (производство FuMa-Tech GmbH? Германия), а также сульфокатионообменные мембраны МК-40 и сильноосновные анионообменные мембраны МА-41 (производство ОАО «Щекиноазот», РФ).

Гетерогенные катионообменные мембраны МК-40 изготовлены на основе катионита КУ-2, функциональными группами в котором являются сульфогруппы. Гетерогенные анионообменные мембраны МА-41 получаются на основе анионита АВ-17, который содержит четвертичные группы аммониевого основания. Биполярные мембраны МБ-3 изготавливаются прессованием в один лист катионообменной мембраны МК-41 и анионообменной мембраны МА-41. Мембрана МК-41 изготовлена на основе катионита КФ-1, который содержит в качестве функциональных групп остатки фосфорной кислоты. Мембрана FBM имеет многослойную структуру: катионообменный слой (сульфокислотные группы в сшитом полиэфиркетоне), анионообменный слой (четверичные ионы аммония, внедренные в матрицу полисульфона) и тонкий промежуточный слой, содержащий третичные амино-группы.

Рабочая площадь каждой из мембран составляла 20 см². Через камеры обессоливания (дилюатные) 2, 4, 6 пропускали исходный раствор, через камеры концентрирования 3 и 5, куда осуществлялся перенос аминокислоты, дистиллированную воду. Линейная скорость протока в камерах обессоливания составляла 0.11-0.22 см/с. В электродные камеры 1,7 подавался вспомогательный электролит - сульфат натрия с концентрацией 0.025 моль/дм³.

Эффективность процесса разделения оценивали по величине коэффициента разделения, который рассчитывали по формуле:

где C_p1 - концентрация 1-го компонента в пермеате (растворе камеры концентрирования), С_р2 - концентрация 2-го компонента в пермеате, C₀₁ - концентрация 1-го компонента в исходном растворе, С₀₂ - концентрация 2-го компонента в исходном растворе.

При подаче напряжения на электроды биполярные мембраны генерируют ионы Н⁺ и ОН^- без использования дополнительных реагентов, за счет разложения воды. Таким образом, происходит подкисление и подщелачивание растворов в камерах электродиализатора, в результате чего биполярные ионы аминокислоты превращаются в катионы (фиг.1) или анионы (фиг.2). Катионы аминокислоты мигрируют через катионообменные мембраны к катоду, а анионы аминокислоты через анионообменные мембраны к аноду. Таким образом, согласно фиг.1 и фиг.2, нечетные камеры являются камерами концентрирования аминокислоты, а четные - дилюатными камерами.

Исходный раствор, содержащий аминокислоту и углевод, подавали в камеры обессоливания 2, 4, 6, ограниченные с катодной стороны катионообменными, а с анодной стороны биполярными мембранами (фиг.1) или же с анодной стороны анионообменными, а с катодной стороны биполярными мембранами (фиг.2). Величина pH исходного раствора была равной р1 аминокислоты, таким образом, аминокислота присутствовала в исходном растворе преимущественно в виде биполярных ионов, которые не способны мигрировать в электрическом поле. За счет использования биполярных мембран происходило безреагентное подкисление (подщелачивание) раствора и образование катионов (анионов) аминокислоты, которые переносились через катионообменные (анионообменные) мембраны в камеры концентрирования. Через камеры концентрирования 3 и 5, куда осуществлялся перенос аминокислоты, пропускали дистиллированную воду. Таким образом, из камер обессоливания (2, 4, 6) вытекал раствор, обедненный аминокислотой, и содержащий углевод - дилюат. Продукт - раствор, содержащий аминокислоту без примесей углевода, вытекал из камер концентрирования (3, 5).

В электродные камеры 1, 7 подавали вспомогательный электролит - сульфат натрия с концентрацией 0.025 моль/дм³. Это позволяет избежать нежелательных процессов электрохимического превращения аминокислот в электродных секциях. Процесс проводили в гальваностатическом режиме, при плотности тока 0.1-3.0 мА/см².

Пример 1

В качестве аминокислоты был выбран глицин. Глицин является представителем нейтральных аминокислот и, в зависимости от pH среды, способен существовать в виде катионов, биполярных ионов и анионов, а значит, может переноситься как через катионообменную, так и через анионообменную мембрану.

Эксперименты проводились в электродиализаторах, представленных на фиг.1 и фиг.2. Исходный раствор содержал глицин в концентрации 0.1 моль/л и сахарозу в концентрации 0.01 моль/л. Линейная скорость протока в секциях составляла 0.1 см/с.

При электродиализе с чередующимися катионообменными и биполярными мембранами глицин в виде катионов переносился через катионообменную мембрану в камеру концентрирования, сахароза преимущественно оставалась в секции обессоливания. При электродиализе с чередующимися анионообменными и биполярными мембранами глицин в виде анионов переносился через анионообменную мембрану в камеру концентрирования, сахароза преимущественно оставалась в секции обессоливания.

Таблица 1 демонстрирует влияние плотности тока на коэффициент разделения глицина и сахарозы при электродиализе с чередующимися катионообменными и биполярными, а также чередующимися анионообменными и биполярными мембранами. Результаты опытов, представленные в таблице 1, свидетельствуют о том, что с увеличением используемой плотности тока коэффициент разделения сначала резко возрастает, затем его рост замедляется. Поэтому оптимальной является плотность тока 2.0 мА/см², при этом коэффициент разделения достигает величины 40.0 для электродиализатора, изображенного на фиг.1, и 46.4 для электродиализатора, изображенного на фиг.2. Из таблицы 1 видно, что эффективнее разделение глицина и сахарозы протекает при использовании электродиализатора с чередующимися анионообменными и биполярными мембранами.

Пример 2. В качестве кислой аминокислоты был выбран глицин, в качестве углевода - глюкоза. Глицин является представителем нейтральных аминокислот и, в зависимости от pH среды, способен существовать в виде катионов, биполярных ионов и анионов, а значит, может переноситься как через катионообменную, так и через анионообменную мембрану.

Эксперименты проводились в электродиализаторах, представленных на фиг.1 и фиг.2. Исходный раствор содержал глицин в концентрации 0.1 моль/л и глюкозу в концентрации 0.01 моль/л. Линейная скорость протока в секциях составляла 0.1 см/с.

При электродиализе с чередующимися катионообменными и биполярными мембранами глицин в виде катионов переносился через катионообменную мембрану в камеру концентрирования, глюкоза преимущественно оставалась в секции обессоливания. При электродиализе с чередующимися анионообменными и биполярными мембранами глицин в виде анионов переносился через анионообменную мембрану в камеру концентрирования, глюкоза преимущественно оставалась в секции обессоливания.

Таблица 2 демонстрирует влияние плотности тока на коэффициент разделения глицина и глюкозы при электродиализе с чередующимися катионообменными и биполярными, а также чередующимися анионообменными и биполярными мембранами. Результаты опытов, представленные в таблице 1, свидетельствуют о том, что с увеличением используемой плотности тока коэффициент разделения сначала резко возрастает, затем его рост замедляется. Поэтому оптимальной является плотность тока 2.0 мА/см², при этом коэффициент разделения достигает величины 8.0 для электродиализатора, изображенного на фиг.1, и 8.9 для электродиализатора, изображенного на фиг.2. Из таблицы 1 видно, что эффективнее разделение глицина и глюкозы протекает при использовании электродиализатора с чередующимися анионообменными и биполярными мембранами. Однако в обоих случаях коэффициент разделения для системы глицин - глюкоза меньше, чем для смеси глицин - сахароза, что объясняется большей величиной диффузионного потока глюкозы через ионообменные мембраны, по сравнению с сахарозой.

Пример 3. В качестве кислой аминокислоты была выбрана глютаминовая кислота, в качестве углевода - сахароза. Глютаминовая кислота в щелочных и нейтральных растворах существует в виде одно- и двухзарядных анионов, и может переноситься через анионообменную мембрану. Поэтому разделение глютаминовой кислоты и сахарозы проводили в электродиализаторе, представленном на фиг.2.

Исходный раствор содержал глютаминовую кислоту в концентрации 0.025 моль/л и сахарозу в концентрации 0.01 моль/л. Линейная скорость протока в секциях составляла 0.1 см/с.

Таблица 3 демонстрирует влияние плотности тока на коэффициент разделения глютаминовой кислоты и сахарозы при электродиализе с чередующимися анионообменными и биполярными мембранами. С увеличением используемой плотности тока коэффициент разделения возрастает и при плотности тока 4.0 мА/см² фактор разделения достигает величины 80.8.

Пример 4. В качестве основной аминокислоты был выбран лизин, в качестве углевода - сахароза. Лизин в кислых и нейтральных растворах существует в виде одно- и двухзарядных катионов, а значит, может переноситься через катионообменную мембрану. Поэтому разделение лизина и сахарозы проводили в электродиализаторе, представленном на фиг.1.

Исходный раствор содержал лизин в концентрации 0.025 моль/л и сахарозу в концентрации 0.01 моль/л. Линейная скорость протока в секциях составляла 0.1 см/с.

Таблица 4 демонстрирует влияние плотности тока на коэффициент разделения лизина и сахарозы при электродиализе с чередующимися катионообменными и биполярными мембранами двух типов: МБ-3 и Fumasep FBM. С увеличением используемой плотности тока коэффициент разделения возрастает и при плотности тока 7.0 мА/см² он достигает величины 203.3 для системы с биполярными мембранами МБ-3 и 235.0 при использовании биполярных мембран Fumasep FBM.

Таблица 1 Плотность тока, мА/см² Sc (MA-41/МБ-3) Sc (MK-40/МБ-3) 0.25 16.4 6.4 0.50 20.0 7.7 0.75 27.3 10.9 1.00 34.5 30.0 1.50 40.0 35.9 2.00 41.8 40.0 3.00 46.4 41.8

Таблица 2 Плотность тока, мА/см² S_c (MA-41/МБ-3) S_c (MK-40/МБ-3) 0.50 4.2 1.9 0.75 6.1 2.9 1.00 7.2 6.1 1.50 8.5 7.2 2.00 8.9 8.0 3.00 9.5 8.5

Таблица 3 Плотность тока, мА/см² S_c 0.50 15.2 1.50 31.2 2.00 43.2 2.50 48.8 3.00 62.4 3.50 63.2 4.00 80.8    

Таблица 4 Плотность тока, мА/см² S_c (MK-40/MB-3) S_c (MK-40/Fumasep FBM) 1.00 16.0 97.5 2.00 24.0 177.6 3.00 77.4 173.5 4.00 152.0 162.9 5.00 112.0 152.0 6.00 144.0 181.7 7.00 203.3 235.0

Изобретение относится к способу очистки и производства аминокислот, в частности к получению нейтральных (глицин), кислых (глютаминовая кислота) и основных (лизин) аминокислот, и может быть использовано в пищевой и фармацевтической промышленности. Способ разделения аминокислот и сахаров электродиализом включает внесение исходного раствора, содержащего аминокислоту и сахарозу, в дилюатные секции электродиализатора с расположенными между электродами чередующимися катионообменными и биполярными мембранами, или анионообменными и биполярными мембранами, при рН исходного раствора, равном р1 соответствующей основной аминокислоты, при этом в камерах концентрирования циркулирует дистиллированная вода, а в электродные камеры подают раствор сульфата натрия с концентрацией 0.025 моль/дм³, причем образовавшиеся в дилюатных камерах катионы (или анионы) аминокислот переносятся через катионообменные (анионообменные) мембраны в камеры концентрирования, а сахароза остается в растворе, вытекающем из секции обессоливания (дилюате). Способ обеспечивает получение аминокислоты, очищенной от неэлектролитов (углеводов). 4 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

1. Способ разделения аминокислот и углеводов электродиализом, включающий внесение исходного раствора, содержащего аминокислоту и углевод, в дилюатные секции электродиализатора с расположенными между электродами чередующимися катионообменными и биполярными мембранами или анионообменными и биполярными мембранами, при рН исходного раствора равном р1 соответствующей аминокислоты, при этом в камерах концентрирования циркулирует дистиллированная вода, а в электродные камеры подают раствор сульфата натрия с концентрацией 0,025 моль/дм³, причем образовавшиеся в дилюатных камерах катионы или анионы аминокислот переносятся через катионообменные или анионообменные мембраны в камеры концентрирования, а углеводы остаются в растворе, вытекающем из дилюатной секции.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве аминокислоты используется нейтральная аминокислота глицин, а в качестве примеси - сахароза, при этом используется любой из указанных электродиализаторов.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве аминокислоты используется нейтральная аминокислота глицин, а в качестве примеси - глюкоза, при этом используется любой из указанных электродиализаторов.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве аминокислоты используется основная аминокислота лизин, а в качестве примеси - сахароза, при этом используется электродиализатор с чередующимися катионообменными и биполярными мембранами.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве аминокислоты используется кислая аминокислота - глютаминовая кислота, а в качестве примеси - сахароза, при этом используется электродиализатор с чередующимися анионообменными и биполярными мембранами.