СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СКРЫТОГО ВНУТРИСОСУДИСТОГО ФИБРИНООБРАЗОВАНИЯ Российский патент 2011 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения риска тромбообразования и определения необходимости антикоагулянтной профилактики и терапии у пациентов с повышенным риском тромбообразования.

Тромбозы различной локализации, в том числе тромбоз глубоких вен (ТГВ) нижних конечностей и тромбоэмболия легочной артерии (ТЭЛА) как проявления венозного тромбоэмболизма, являются наиболее частыми заболеваниями, которые в значительном проценте случаев приводят к инвалидизирующим осложнениям и фатальным исходам. В немалой степени это объясняется тем, что диагностика тромботических заболеваний только на основании клинических проявлений не всегда бывает точной. В настоящее время существует целый ряд объективных методов для диагностики тромбозов, однако инвазивная природа некоторых из них, высокая частота отрицательных результатов и ограниченная доступность для ежедневной клинической практики привели к разработке новых методов диагностики, основанных на результатах оценки состояния системы гемостаза. Основанием для применения лабораторных критериев диагностики тромбоэмболических осложнений явился известный факт появления в крови больных с тромбозами специфических маркеров активации системы гемостаза.

Процесс фибринообразования является предшествующим процессу образования тромба. Как известно, образование тромба начинается с момента, когда под действием тромбина фибриноген превращается в фибрин, который образует основной каркас сгустка крови и тромба. Процесс превращения фибриногена в фибрин проходит в три стадии, последовательно сменяющих друг друга. В результате образуется нерастворимый фибрин-полимер, в котором молекулы фибрин-мономера ковалентно связаны между собой с образованием D-димерных комплексов (Зубаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования. Казань: "ФЭН", 2000. С - 364).

Фибрин-полимер, или сгусток фибрина, является основой для образования тромба, в состав которого, помимо фибрина, входят форменные элементы крови и плазменные белки. Процесс внутрисосудистого фибринообразования в физиологических условиях протекает скрыто и до момента образования тромба не доступен диагностике.

Диагностика скрытого внутрисосудистого фибринообразования на ранних этапах процесса тромбообразования с последующим назначением терапии позволяет снизить число венозных тромбозов и тромбоэмболических осложнений.

Известен способ диагностики внутрисосудистого тромбообразования путем ультразвукового ангиосканирования с цветовым дуплексным картированием, в том числе и глубоких вен нижних конечностей, который позволяет выявить тромбозы, наблюдать в динамике процесс формирования, нарастания, организации и лизиса тромба (Флебология. Руководство для врачей. / Савельев B.C., Гологорский В.А., Кириенко А.И., и др.: Под редакцией В.С.Савельева. - М.: Медицина, 2001. С. - 226).

Известный способ позволяет обнаружить эхопозитивные тромботические массы в просвете сосуда, однако не позволяет выявить скрытого фибринообразования.

Наиболее близким по достигаемому техническому результату является способ диагностики внутрисосудистого тромбообразования (тромбоза глубоких вен нижних конечностей или ТЭЛА) путем определения уровня D-димера в плазме крови, и высокое содержание D-димера (более 250 нг/мл) указывает на наличие внутрисосудистого тромба, а его нормальное значение исключает наличие венозных тромбозов (Баркаган З.С., Момот А.П., Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. Издание 2-ое дополненное. - М.: «Ньюдиамед», 2001. С. - 43).

Однако однократное определение уровня D-димера не позволяет выявить скрытого внутрисосудистого фибринообразования.

Авторы предлагают способ диагностики скрытого внутрисосудистого фибринообразования путем определения уровня D-димера до и через сутки после проведения последовательно перемежающейся пневматической компрессии (ПППК) нижних конечностей.

Техническим результатом заявляемого способа является повышение информативности лабораторных критериев внутрисосудистого тромбообразования и диагностика скрыто протекающего внутрисосудистого фибринообразования, что позволяет определить высокий риск развития тромбозов на ранних этапах тромбообразования у пациентов с имеющимися в анамнезе тромбозами любой локализации и дифференцировать подходы к назначению терапии у таких пациентов.

Технический результат достигается тем, что определение уровня D-димера проводят дважды: до и через 24 часа после проведения 30- минутного сеанса последовательно перемежающейся пневматической компрессии нижних конечностей, и повышение уровня D-димера в плазме крови во второй пробе свидетельствует о наличии скрытого внутрисосудистого фибринообразования, а отсутствие повышения уровня D-димера или его снижение свидетельствует об отсутствии скрытого внутрисосудистого фибринообразования.

Способ осуществляют следующим образом.

1 этап: Определяют уровень D-димера в плазме крови турбодиметрическим тестом.

Кровь берут утром натощак из локтевой вены иглой без шприца (самотеком) и немедленно смешивают с 3,8% раствором цитрата натрия. Стабилизированную кровь до центрифугирования (в том числе и в процессе транспортировки) хранят при комнатной температуре (+18…+25°) не более 1 ч. Исследование крови со сгустками или гемолизом не допускается. Стабилизированную кровь центрифугируют на центрифуге, например «Eppendorf 5810R», Германия, при 1000 об/мин (140-160 g) в течение 5-7 мин. Богатую тромбоцитами плазму с помощью пипетки переносят в другую пробирку, в которой ее дополнительно центрифугируют при 3000-4000 об/мин (1200-1400 g) в течение 15 минут, в результате получают бедную тромбоцитами плазму (БТП).

Материал для исследования - бедная тромбоцитами плазма.

БТП исследуют не позже чем через 1 ч после получения крови, замораживание ее не рекомендуется.

Реактивы. Реагенты для турбодиметрического определения перектерстносвязанных продуктов распада фибрина (D-димера) фирмы Dade Behring.

Референс-значения уровня D-димера до 250 нг/мл.

2 этап: Проводят сеанс ПППК на нижние конечности компрессионной системой, например SCD фирмы «TYCO Healthcore Group AG», США, продолжительностью 30 минут.

3 этап: Через 24 часа от момента окончания сеанса ПППК нижних конечностей проводят повторное определение уровня D-димера в плазме крови турбодиметрическим тестом.

Оценка полученных результатов

Через 24 часа после ПППК отсутствие увеличения уровня D-димера или его снижение в образце крови свидетельствует об отсутствии внутрисосудистого фибринообразования. Повышение уровня D-димера в образце крови через 24 часа после ПППК свидетельствует о наличии внутрисосудистого фибринообразования.

Клинические примеры

1. Пациентка Л., 58 лет. Диагноз: Гематогенная тромбофилия, генетически обусловленная форма: гетерозигота по PAI-I. Подострый правосторонний бедренно-подколенный флеботромбоз, подострая ТЭЛА. Состояние после имплантации кавафильтра.

Получает лечение: дезагреганты, непрямые антикоагулянты.

Проведено обследование: Дуплексное сканирование вен нижних конечностей: общие подвздошные вены справа и слева проходимы, наружные подвздошные вены (НПВ) слева и справа проходимы, кава-фильтр в просвете НПВ, положение типичное.

Гемостазиограмма: MHO 2,2; D-димер 495 нг/мл.

Проведен 30-минутный сеанс ПППК нижних конечностей.

Гемостазиограмма через 24 часа: D-димер 513 нг/мл.

Данное увеличение уровня D-димера, на фоне изначально повышенного, свидетельствует о наличии скрытого внутрисосудистого фибринообразования, с высоким риском развития тромбоза.

2. Пациентка Ж., 43 года. Диагноз: Гематогенная тромбофилия, генетически обусловленная форма: гетерозигота по PAI-I. Подострый правосторонний бедренно-подколенный флеботромбоз, подострая ТЭЛА. Состояние после имплантации кавафильтра.

Получает лечение: дезагреганты, непрямые антикоагулянты.

Проведено обследование: Дуплексное сканирование вен нижних конечностей: состояние после имплантации кава-фильтра, глубокие вены бедренно-подколенно-берцового сегмента справа проходимы, реканализация тромбоза.

Гемостазиограмма: MHO 2,2; D-димер менее 50 нг/мл.

Проведен 30-минутный сеанс ПППК нижних конечностей.

Гемостазиограмма через 24 часа: D-димер менее 50 нг/мл.

Отсутствие динамики изменения уровня D-димера, на фоне изначально нормального уровня, свидетельствует об отсутствии скрытого внутрисосудистого фибринообразования, с низким риском развития тромбоза.

3. Пациент Ф., 48 лет. Диагноз: Гематогенная тромбофилия, комбинированная форма: мутация гена MTHFR, гипергомоцистеинэмия; гетерозигота по PAI-I. Подострый правосторонний бедренно-подколенный флеботромбоз, подострая ТЭЛА.

Получает лечение: непрямые антикоагулянты.

Проведено обследование: Дуплексное сканирование вен нижних конечностей: глубокие вены бедренно-подколенно-берцового сегмента справа проходимы, реканализация тромбоза.

Гемостазиограмма: MHO 1,9; D-димер 100 нг/мл.

Проведен 30-минутный сеанс ПППК нижних конечностей.

Гемостазиограмма через 24 часа: D-димер 900 нг/мл.

Динамика увеличения уровня D-димера, на фоне изначально нормального уровня, свидетельствует о наличии скрытого внутрисосудистого фибринообразования, с высоким риском развития тромбоза.

Заявленный способ диагностики скрытого внутрисосудистого фибринообразования позволяет определить высокий риск развития тромбозов на ранних этапах тромбообразования у пациентов с имеющимися в анамнезе тромбозами любой локализации и дифференцировать подходы к назначению терапии у таких пациентов. В результате проведения сеанса ПППК нижних конечностей происходит активация системы фибринолиза за счет выделения эндотелием сосудов тканевого активатора плазминогена и индукции трансформации плазминогена в плазмин, который в свою очередь лизирует фибрин до конечных продуктов, одним из которых является D-димер.

Заявляемый способ может быть использован в лечебно-профилактических учреждениях любого профиля, включая поликлиники, способ прост в исполнении и интерпретации показателей.

Изобретение относится к медицине и касается способа диагностики скрытого внутрисосудистого фибринообразования. Сущность способа заключается в том, что у пациента определяют уровнь D-димера до и через сутки после проведения последовательно перемежающейся пневматической компрессии (ПППК) нижних конечностей. При выявлении повышения уровня D-димера во второй пробе диагностируют наличие скрытого внутрисосудистого фибринообразования.

Использование способа позволяет определить высокий риск развития тромбозов на ранних этапах тромбообразования у пациентов с имеющимися в анамнезе тромбозами любой локализации и дифференцировать подходы к назначению терапии у таких пациентов.

Способ диагностики скрытого внутрисосудистого фибринообразования, заключающийся в определении уровня D-димера в плазме крови, отличающийся тем, что определение уровня D-димера проводят дважды: до и через 24 ч после проведения 30-минутного сеанса последовательно перемежающейся пневматической компрессии нижних конечностей и повышение уровня D-димера в плазме крови во второй пробе свидетельствует о наличии скрытого внутрисосудистого фибринообразования, а отсутствие повышения уровня D-димера или его снижение свидетельствует об отсутствии скрытого внутрисосудистого фибринообразования.