ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ БИС-(ДИАЛКИЛАМИДЫ) ФОСФОРИЛЗАМЕЩЕННЫХ 1,4-ДИКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2012 года по МПК C07F9/53 A61K31/66 A61P25/28 

Настоящее изобретение относится к области органической химии и может быть использовано в медицине как новые физиологически активные вещества, в частности, обладающие нейропротекторной активностью.

Синтез новых соединений в ряду замещенных диамидов 1,4-дикарбоновых кислот является актуальной задачей, т.к. многие из них обладают различными видами биологической активности и могут найти применение в медицинской практике [В.О. Козьминых. Синтез и биологическая активность замещенных амидов и гидразидов 1,4-дикарбоновых кислот (обзор). Хим.-фарм. журнал. 2006. Т. 40. № 1. С. 9-17]. Наиболее подробно исследованы амиды и диамиды непредельных 1,4-дикарбоновых кислот, а также янтарной кислоты и ее гомологов.

Известно получение диалкиламидов α,ω-дикарбоновых кислот из соответствующих моноамидов, СО и аминов [M.C. Cesa, R.A. Dubbert, J.D. Burrington. 1,6 Hexanediamides from 3-pentenamides. EP 186 950]. Таким же способом получены наиболее близкие к заявляемым соединениям алкилзамещенные диамиды янтарной кислоты [J. Kadelka, H.-H. Schwarz, Process for the preparation of substituted succinic acid amides. US Pat. № 4 588 833].

Незамещенные диамиды янтарной кислоты получены также из соответствующего диэфира янтарной кислоты и аминов в спирте в присутствии алкоголятов щелочных металлов [V.P. Kucesky. Method of making amides of dimethylamine and piperazine. US Pat № 3 288 794].

Влияние гетероатомных заместителей в метиленовых фрагментах молекулы на биологическую активность практически не изучалось, т.к. методы синтеза таких соединений разработаны недостаточно.

Известен способ получения лишь одного соединения из заявляемой группы бис-(диалкиламидов) фосфорилзамещенных 1,4-дикарбоновых кислот, а именно 1,4-бис-(дибутиламида) 2-(дифенилфосфинил)-янтарной кислоты. [А.Н. Туранов, В.К. Карандашев, А.Н. Яркевич, З.В. Сафронова, А.В. Харитонов, Н.И. Родыгина, А.М. Федосеев. Экстракция U(VI), Th(IV), Pu(IV), Am(III) и редкоземельных элементов из азотнокислых растворов оксидами дифенил(диалкилкарбамоилметил)фосфинов с заместителями в метиленовом мостике. Радиохимия. 2004. Т.46. Вып. 5. С. 427-432]. Было обнаружено, что полученное соединение проявляет экстракционные свойства.

Способ получения вышеупомянутого соединения, принятый нами за прототип, включает следующие операции: прибавление по каплям раствора гексабутилтриамидофосфита (Bu₂N)₃Р к суспензии 2-дифенилфосфинил-янтарной кислоты в толуоле и последующее нагревание реакционной смеси в течение 2 ч при кипении толуола, т.е. при 110°С. При этом в результате образуется смесь соединений, требующая разделения методом колоночной хроматографии, что в итоге позволяет получить целевое соединение с выходом около 40%.

Задачей настоящего изобретения является с одной стороны, расширение арсенала средств, обладающих физиологической активностью. С другой стороны, не менее важной задачей является разработка метода их синтеза, обеспечивающего получение таких соединений с высокими выходами.

Поставленная задача достигается за счет обнаружения группы бис-(диалкиламидов) фосфорилзамещенных 1,4-дикарбоновых кислот, представленных общей формулой (I),

в которой каждый заместитель R может быть прямой или разветвленный низший алкил, незамещенный или замещенный фенил, где заместителями фенильной группы выбраны из соединений: галогены в количестве от 1 до 5 атомов; низшие алкильные группы в количестве от 1 до 5 групп; низшие алкоксигруппы в количестве от 1 до 5 групп; диалкиламиногруппы в количестве от 1 до 5 групп; Y представляет прямую связь или метиленовую группу; заместитель R' может быть прямой или разветвленный низший алкил; обладающих нейропротекторными свойствами.

Авторами изобретения неожиданно было найдено, что заявляемые соединения общей формулы (I), содержащие широкий набор устойчивых фосфиноксидных фрагментов, благодаря обнаружению у них новых свойств, которые не вытекают из химической структуры этих соединений, могут найти применение в медицине в качестве нейропротекторных соединений.

Наиболее предпочтительными соединениями формулы (I) являются:

N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-(дифенилфосфинил)-янтарной кислоты;

N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[(2-метилфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты;

N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты;

N^l,N^l,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-диметиламинофенил)-фосфинил]-янтарной кислоты;

N^l,N^l,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-хлорфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты;

N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-метоксифенил)-фосфинил]-янтарной кислоты;

N^l,N^l,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-(ди-н-бутилфосфинил)-янтарной кислоты;

N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-метоксифенил)-фосфинилметил]-янтарной кислоты;

N^l,N^l,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинилметил]-янтарной кислоты;

N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетраэтилдиамид 2-(дифенилфосфинилметил)-янтарной кислоты.

Еще одним аспектом изобретения является способ получения бис-диалкиламидов фосфорилзамещенных 1,4-дикарбоновых кислот общей формулы (I), позволяющий получать целевые соединения с выходом до 75-95%.

Отличие предлагаемого способа заключается в следующем. Заявитель обнаружил, что при проведении реакции в диапазоне температур 20-80°С в органических растворителях, выбранных из группы ароматических углеводородов или предельных углеводородов, образуются с высокими выходами лишь целевые продукты, а не смеси соединений, т.к. в этом диапазоне температур реакция не осложняется побочными процессами декарбоксилирования, однако протекает с достаточно высокой скоростью.

Этот метод является универсальным и может быть применен для синтеза всего ряда заявляемых соединений (схема 1):

Методы синтеза исходных фосфорилзамещенных 1,4-дикарбоновых кислот общей формулы (II) разработаны заявителем, и в настоящее время они являются доступными соединениями [А.Н.Яркевич, З.В.Сафронова, А.Н.Пушин, С.О.Бачурин, Н.С.Зефиров. Способ получения фосфорилированных 1,4-дикарбоновых кислот. Патент РФ 2405789 по заявке 2008129151. А.Н. Яркевич, З.В. Сафронова, А.Н. Пушин, С.О. Бачурин, Н.С. Зефиров. Способ получения солей фосфорилированных 1,4-дикарбоновых кислот. Патент РФ по заявке 2008129150. Решение о выдаче патента от 25.11.2010].

Гексаалкилтриамидофосфиты (R'₂N)₃P также являются известными соединениями, которые получают в промышленных масштабах из доступного сырья.

Общая методика синтеза бис-(диалкиламидов) фосфорилзамещенных 1,4-дикарбоновых кислот, представленных формулой (I), состоит в следующем.

Расчетное или взятое с избытком количество гексаалкилтриамидофосфита (R'₂N)₃P (III) прибавляют к раствору/суспензии фосфорилзамещенной 1,4-дикарбоновой кислоты в безводном растворителе и перемешивают реакционную массу при температуре 20-80°С до завершения реакции. Органический раствор промывают водой, высушивают Na₂SO₄ и растворитель удаляют в вакууме. Полученный маслообразный продукт перед проведением биологических испытаний дополнительно очищают хроматографированием на колонке силикагеля L 100/160 ммк, элюент - хлороформ или смесь бензол-ацетон 3:1, после чего вещества в большинстве случаев закристаллизовываются. Синтезированные соединения представляют собой устойчивые маслообразные или кристаллические вещества, хорошо растворимые в большинстве органических растворителей.

Приведенные ниже примеры иллюстрируют способ синтеза, заявляемый в настоящем изобретении и характеристики конкретных соединений, полученных заявляемым способом, но не ограничивают применение данного изобретения.

Пример 1. Получение N ¹ ,N ¹ ,N ⁴ ,N ⁴ -тетрабутилдиамида 2-(дифенилфосфинил)-янтарной кислоты [C ₆ H ₅ ] ₂ P(O)CH(CH ₂ CONBu ₂ )CONBu ₂ ( соединение1).

Раствор 1.08 г (0.0026 моль) гексабутилтриамидофосфита (Bu₂N)₃P в 2 мл безводного бензола прибавили по каплям к суспензии 0.96 г (0.0030 моль) 2-дифенилфосфинил-янтарной кислоты в 15 мл безводного бензола и нагревали смесь 1 ч при слабом кипении растворителя. Реакционную смесь промыли водой (3х7мл), высушили Na₂SO₄ и растворитель удалили в вакууме. Получили 1.45 г соединения (1) в виде масла, выход 90%. Продукт очистили хроматографированием на колонке силикагеля L 100/160 ммк. Хлороформом элюировали 1.30 г (80%) N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамида-2-(дифенилфосфинил)-янтарной кислоты в виде масла. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д.): 0.84 м (12Н, 4CH₃); 1.20 м (8H, 4CCH₂CCN); 1.36 м (8H, 4CCCH₂CN); 2.60 м, 1H и 3.00 м, 1Н (СН₂СР); 3.16 м (8Н, 2CH₂NCH₂); 4.32 м (1Н, СНР); 7.50 м, 6Н, 7.86 м, 2Н и 8.06 м, 2Н (2C₆H₅). Спектр ЯМР ³¹P (CDCl₃, δ, м.д.): 31.97.

Пример 2. N ¹ ,N ¹ ,N ⁴ ,N ⁴ -тетрабутилдиамид 2-[(2-метилфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты [2-CH ₃ C ₆ H ₄ ] ₂ P(O)CH(CH ₂ CONBu ₂ )CONBu ₂ (соединение 2)

Синтезировали аналогично соединению (1) из 0.83 г (0.002 моль) (Bu₂N)₃P и 1.04 г (0.003 моль) 2-[(2-метилфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты. Получили 1.55 г соединения (2), выход 91%, масло. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д.): 0.94 м (12Н, 4CH₃); 1.28 м (8H, 4CCH₂CCN); 1.44 м (8H, 4CCCH₂CN); 2.48 с, 3Н и 2.56 с 3Н (2СН₃-Ar); 3.04 м (4Н, CH₂NCH₂) и 3.40 м (4Н, CH₂NCH₂); 3.18 м, 1Н и 3.62 м, 1Н (СН₂СР); 4.72 м (1Н, СНР); 7.12 м, 1Н, 7.10-7.90 м (8Н, 2С₆Н₄). Спектр ЯМР ³¹P (CDCl₃, δ, м.д.): 38.96.

Пример 3. N ¹ ,N ¹ ,N ⁴ ,N ⁴ -тетрабутилдиамид 2-[бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты [2,5-(CH ₃ ) ₂ C ₆ H ₄ ] ₂ P(O)CH(CH ₂ CONBu ₂ )CONBu ₂ (соединение 3)

Синтезировали аналогично соединению (1) из 0.83 г (0.002 моль) (Bu₂N)₃P и 0.86 г (0.0023 моль) 2-[бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты. Получили 1.30 г соединения (3), выход 95%, масло. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д.): 0.82 м (12Н, 4CH₃); 1.20 м (8H, 4CCH₂CCN); 1.36 м (8H, 4CCCH₂CN); 2.22 с, 3H, 2.30 с, 6Н и 2.38 с, 3Н (4СН₃-Ar); 2.50 м, 1Н и 3.50 м, 1Н (СН₂СР); 2.96 м (4Н, CH₂NCH₂) и 3.32 м (4Н, CH₂NCH₂); 4.65 м (1Н, СНР); 7.10-7.60 м (6Н, 2С₆Н₃). Спектр ЯМР ³¹P (CDCl₃, δ, м.д.): 38.05.

Пример 4. N ¹ ,N ¹ ,N ⁴ ,N ⁴ -тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-диметиламинофенил)-фосфинил]-янтарной кислоты (4-Me ₂ NC ₆ H ₄ ) ₂ P(O)CH(CH ₂ CONBu ₂ )CONBu ₂ (соединение 4)

Синтезировали аналогично соединению (1) из 0.83 г (0.002 моль) (Bu₂N)₃P и 0.97 г (0.0024 моль) 2-[бис-(4-диметиламинофенил)-фосфинил]-янтарной кислоты. Получили 1.25 г соединения (4), выход 83%, т. пл. 92°С. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д.): 0.87 м (12Н, 4CH₃); 1.25 м (8H, 4CCH₂CC); 1.50 м (8H, 4CCCH₂C); 2.60 м, 1Н и 2.90 м, 1Н (СН₂СР); 3.00 с, (12Н, 2CH₃NCH₃); 3.20 м (8Н, 2CH₂NCH₂); 4.24 м (1Н, СНР); 6.70 м, 4Н и 7.72 м, 4Н (2С₆Н₄). Спектр ЯМР ³¹P (CDCl₃, δ, м.д.): 33.44.

Пример 5. N ¹ ,N ¹ ,N ⁴ ,N ⁴ -тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-хлорфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты (4-ClC ₆ H ₄ ) ₂ P(O)CH(CH ₂ CONBu ₂ )CONBu ₂ (соединение 5)

Синтезировали аналогично соединению (1) из 0.83 г (0.002 моль) (Bu₂N)₃P и 0.97 г (0.0025 моль) 2-[бис-(4-хлорфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты. Получили 1.40 г соединения (5), выход 92%, т. пл. 60°С. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д.): 0.86 м (12Н, 4CH₃); 1.20 м (8H, 4CCH₂CCN); 1.40 м (8H, 4CCCH₂CN); 2.65 м, 1Н и 2.95 м, 1Н (СН₂СР); 3.08 м (4Н, CH₂NCH₂); 3.26 м (4Н, CH₂NCH₂); 4.30 м (1Н, СНР); 7.45 м, 4Н, 7.78 м, 2Н и 8.10 м, 2Н (2С₆Н₄). Спектр ЯМР ³¹P (CDCl₃, δ, м.д.): 30.73.

Пример 6. N ¹ ,N ¹ ,N ⁴ ,N ⁴ -тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-метоксифенил)-фосфинил]-янтарной кислоты [4-CH ₃ OC ₆ H ₄ ] ₂ P(O)CH(CH ₂ CONBu ₂ )CONBu ₂ (соединение 6)

Синтезировали аналогично соединению (1) из 0.83 г (0.002 моль) (Bu₂N)₃P и 0.95 г (0.0025 моль) 2-[бис-(4-метоксифенил)-фосфинил]-янтарной кислоты. Получили 1.21 г соединения (6), выход 81%, масло. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д.): 0.83 м (12Н, 4CH₃); 1.18 м (8H, 2CCH₂CH₂C); 1.32 м (8H, 2CCH₂CH₂C); 2.58 м, 1Н и 3.12 м, 1Н (2H, СН₂Р); 3.18 м (8Н, 2CH₂NCH₂); 3.85 м (6Н, 2CH₃O); 4.26 м (1Н, СНР); 6.95 м, 4Н, 7.75 м, 2Н и 7.96 м, 2Н (2C₆H₄). Спектр ЯМР ³¹P (CDCl₃, δ, м.д.): 31.96.

Пример 7. N ¹ ,N ¹ ,N ⁴ ,N ⁴ -тетрабутилдиамид 2-(ди-н-бутилфосфинил)-янтарной кислоты (n-C ₄ H ₉ ) ₂ P(O)CH(CH ₂ CONBu ₂ )CONBu ₂ (соединение 7)

Синтезировали аналогично соединению (1) из 0.43 г (0.0012 моль) (Bu₂N)₃P и 0.33 г (0.0012 моль) 2-(ди-н-бутил-фосфинил)-янтарной кислоты. Получили 0.59 г соединения (8), выход 98%, т. пл. 46°С. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д.): 0.80 м (18Н, 6CH₃); 1.20-1.80 м (28H, 6CCH₂CH₂CN+ CH₂PCH₂); 2.50 м, 1Н и 4.00 м, 1Н (СН₂СР); 3.10-3.60 м (9Н, 2CH₂NCH₂ +СНР); Спектр ЯМР ³¹P (CDCl₃, δ, м.д.): 50.60.

Пример 8. N ¹ ,N ¹ ,N ⁴ ,N ⁴ -тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-метоксифенил)-фосфинилметил]-янтарной кислоты [4-CH ₃ OC ₆ H ₄ ] ₂ P(O)CH ₂ CH(CH ₂ CONBu ₂ )CONBu ₂ (соединение 8)

Синтезировали аналогично соединению (1) из 0.83 г (0.002 моль) (Bu₂N)₃P и 1.18 г (0.003 моль) 2-[бис-(4-метоксифенил)-фосфинилметил]-янтарной кислоты. Получили 1.70 г соединения (9), выход 92%, т. пл. 65°С. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д.): 0.85 м (12Н, 4CH₃); 1.00-1.58 м (16H, 4CCH₂CH₂C); 2.24-2.90 м (4H, СН₂Р+СН₂СО); 3.20 м (8Н, 2CH₂NCH₂); 3.56 м (1Н, СНСР); 3.80 с (6Н, 2СН₃О); 6.90 м, 4Н и 7.68 м, 4Н (2C₆H₄). Спектр ЯМР ³¹P (CDCl₃, δ, м.д.): 31.38.

Пример 9. N ¹ ,N ¹ ,N ⁴ ,N ⁴ -тетрабутилдиамид 2-[бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинилметил]-янтарной кислоты [2,5-(CH ₃ ) ₂ C ₆ H ₄ ] ₂ P(O)CH ₂ CH(CH ₂ CONBu ₂ )CONBu ₂ (соединение 9).

Синтезировали аналогично соединению (1) из 0.83 г (0.002 моль) (Bu₂N)₃P и 0.78 г (0.002 моль) 2-[бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинилметил]-янтарной кислоты. Получили 1.04 г соединения (10), выход 85%, масло. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д.): 0.85 м (12Н, 4CH₃); 1.28 м (8H, 4CCH₂CCN); 1.42 м (8H, 4CCCH₂CN); 2.20 с, 2.22 с, 2.34 с и 2.36 с, 12Н (4СН₃-Ar); 2.60-3.00 м (4Н, CH₂CCH₂); 3.18 м (4Н, CH₂NCH₂); 3.58 м (1Н, СНСР); 7.08 м 2H, 7.22 м, 2Н и 7.68 м, 2Н (6Н, 2С₆Н₃). Спектр ЯМР ³¹P (CDCl₃, δ, м.д.): 32.28.

Пример 10. N ¹ ,N ¹ ,N ⁴ ,N ⁴ -тетраэтилдиамид 2-(дифенилфосфинилметил)-янтарной кислоты [C ₆ H ₅ ] ₂ P(O)CH ₂ CH(CH ₂ CONEt ₂ )CONEt ₂ (соединение 10)

Синтезировали аналогично соединению (1) из 0.49 г (0.002 моль) (Et₂N)₃P и 0.65 г (0.002 моль) 2-(дифенилфосфинилметил)-янтарной кислоты. Получили 0.81 г N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетраэтилдиамида 2-(дифенилфосфинилметил)-янтарной кислоты (11), выход 91%, т. пл. 116°С. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д.): 0.90-1.10 м (12Н, 4CH₃); 2.40-2.70 м и 2.85 м (4H, СН₂Р+СН₂СО); 3.06-3.42 м (8Н, 2CH₂NCH₂); 3.60 м (1Н, СНСР); 7.52 м, 6Н и 7.80 м, 4Н (2C₆H₄). Спектр ЯМР ³¹P (CDCl₃, δ, м.д.): 31.08.

Исследование физиологической активности заявляемых соединений на примере проявления ими нейропротекторной активности.

Нейропротекторное действие синтезированных веществ исследовано на Р₂-фракции синаптосом коры мозга крыс, как удобной модели in vitro для оценки способности различных соединений влиять на захват ионов кальция в нервные окончания. В настоящем изобретении заявителем использован метод определения захвата ⁴⁵Са²⁺ в синаптосомы коры мозга крыс при стимуляции глутаминовой кислотой.

Синаптосомы получали по стандартной методике Хайоша из коры мозга новорожденных крысят (9-10 дней) линии Вистар [Hajos F. // Brain Res., 1975, Vol. 93, N 3, P. 485-489]. Мозг гомогенизировали (стекло-тефлон) в 10 объемах охлажденной 0,32 М сахарозы (900 об/мин). Гомогенат центрифугировали 10 мин при 1500 g. Полученный супернатант центрифугировали 20 мин при 10000 g. Для аккумуляции радиоактивной метки Р₂-фракцию синаптосом суспендировали в инкубационном буфере А: NaCl 132 мМ, KCl 5мМ, HEPES 5 мМ, глюкоза 10 мМ, pH 7,4 (концентрация белка 1,5-2 мг/мл). Концентрация Са²⁺ в конечном объеме составляла 1.25 мМ (1.4 мкКu/мл). Для стимуляции захвата ⁴⁵Са²⁺ в синаптосомы использовали 200 мкМ глутамат. Через 5 мин инкубации с глутаматом при 37°С захват ⁴⁵Са²⁺ останавливали фильтрованием через фильтры GF/B (Whatman, Англия), промывая три раза холодным буферным раствором Б: KCl 145 мМ, трис 10 мМ, трилон Б 5.4 мМ, pH 7.4 [Петрова Л.Н., Бачурин С.О. // Бюл. эксп. биол. и мед., 2006г., т.142, № 7, с. 51-54]. Пробы анализировали с помощью жидкостного сцинтилляционного бета-анализатора (Россия). Все опыты ставились в 3 параллельных пробах в 2-3 независимых экспериментах. Количество захваченного в синаптосомы ⁴⁵Са²⁺ определяли по разнице в содержании метки при стимуляции захвата глутаматом и без стимуляции агонистом и выражали в % от контроля (контроль принимали за 100%).

Специфический захват ⁴⁵Са²⁺ определяли по следующей формуле:

К_(43/21) = [(Са₄ - Са₃)/(Са₂ - Са₁)]·100%, где

Са₁ - захват ⁴⁵Са²⁺ в контроле (без глутамата и тестируемого соединения),

Са₂ - захват ⁴⁵Са²⁺ в присутствии глутамата,

Са₃ - захват ⁴⁵Са²⁺ в присутствии тестируемого соединения (без глутамата),

Са₄ - захват ⁴⁵Са²⁺ в присутствии глутамата и тестируемого соединения.

Статистическую обработку результатов проводили по критерию Стьюдента.

Титрование веществ проводили при концентрации 100 мкМ. Соединения 1-9 которые оказывали ингибирующее действие на захват ⁴⁵Са²⁺ в синаптосомы коры мозга крыс, исследовали подробно при четырех различных концентрациях для определения параметра IC₅₀ (концентрация вещества, при которой происходит 50%-ное ингибирование захвата кальция).

В Таблице 1 представлены данные по исследованию захвата ⁴⁵Са²⁺ в синаптосомы коры мозга крыс при стимуляции глутаматом в присутствии заявляемых бис-(диалкиламидов) фосфорилированных 1,4-дикарбоновых кислот (соединения 1-10) и ближайших структурных аналогов заявляемых соединений - фосфорилированных 1,4-дикарбоновых кислот и их эфиров (соединения 11-15), а также одноосновных функциональных аналогов - фосфорилированных амидов одноосновной уксусной кислоты (ацетамиды 16-18).

Как видно из приведенной таблицы, представители заявляемых соединений (соединения 1-10) в изученных концентрациях полностью или в значительной степени ингибируют захват кальция в синаптосомы мозга крыс при стимуляции глутаматом, что подтверждает их исключительные нейропротекторные свойства.

Определенные для соединений 1-10 значения IC₅₀ также подтверждают высокую нейропротекторную активность заявляемых соединений.

Проведенные по стандартной методике определения значений LD₅₀>100 мг/кг для соединений 1-10 позволяют отнести их к малотоксичным соединениям.

В отличие от заявляемых соединений (1-10), исследования их аналогов, демонстрируют лишь незначительное изменение уровня захвата кальция по сравнению с контролем (соединения 11-18).

Таким образом, проведенные исследования подтверждают, что авторами изобретения были обнаружены у заявляемой группы соединений новые неожиданные свойства, которые не вытекают из химической структуры этих соединений и ранее известных свойств.

Таблица 1.

Исследование захвата ⁴⁵Са²⁺ в синаптосомы коры мозга крыс при стимуляции глутаматом в присутствии бис-(диалкиламидов) фосфорилированных 1,4-дикарбоновых кислот (соединения 1-10) и их аналогов (соединения 11-18) .

№ Название соединения Структура Захват ⁴⁵Са²⁺
(в % от контроля) IC₅₀, мкМ 1. N¹,N¹,N⁴,N⁴-Тетрабутилдиамид 2-(дифенилфосфинил)-янтарной кислоты 0 14.1 2. N¹,N¹,N⁴,N⁴-Тетрабутилдиамид 2-[бис-(2-метилфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты 6.6 ± 3.3 9.3 3. N¹,N¹,N⁴,N⁴-Тетрабутилдиамид 2-[бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты 7.7 ± 6.4 18.6 4. N¹,N¹,N⁴,N⁴-Тетраэтилдиамид 2-[бис-(4-диметиламинофенил)-фосфинил]-янтарной кислоты 0 7.9 5. N¹,N¹,N⁴,N⁴-Тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-хлорфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты 11.7 ± 7.0 4.8 6. N¹,N¹,N⁴,N⁴-Тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-метоксифенил)-фосфинил]-янтарной кислоты 7.2 ± 1.3 17.0

7. N¹,N¹,N⁴,N⁴-Тетрабутилдиамид 2-(ди-н-бутил-фосфинил)-янтарной кислоты 0 44.7 8. N¹,N¹,N⁴,N⁴-Тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-метоксифенил)-фосфинилметил]-янтарной кислоты 0 15.5 9. N¹,N¹,N⁴,N⁴-Тетрабутилдиамид 2-[бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинилметил]-янтарной кислоты 4.9 ± 4.9 5.1 10. N¹,N¹,N⁴,N⁴-Тетраэтилдиамид 2-(дифенилфосфинилметил)-янтарной кислоты 63.8 ± 12.0   11. 2-[Бис-(4-диметиламино-фенил)-фосфинил]-янтарная кислота 117,1 ± 3,9   12. 2-[Бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинил]-янтарная кислота 97,9 ± 11,4   13. 2-(Диэтилфосфинил)-янтарная кислота 120,1 ± 17,3   14. 2-[Бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинилметил]-янтарная кислота 91 ± 3,1  

15. Этиловый эфир
2-(дифенилфосфинил)-янтарной кислоты 104 ± 0,5   16. N,N-Дибутиламид
2-(дифенилфосфинил)уксусной кислоты 96,2 ± 2,9   17. N,N-Диэтиламид
2-(дифенилфосфинил)уксусной кислоты 95.4 ± 2.1   18. N,N-Диэтиламид
2-(дифенилфосфинил)-3-(диэтиламино)пропионовой кислоты 97.4 ± 0.2  

Изобретение относится к новым нейропротекторам, представляющим собой бис-диалкиламиды фосфорилзамещенных 1,4-дикарбоновых кислот формулы [I] и способу их получения из соответствующих кислот формулы [II].

где R - прямой или разветвленный низший алкил, незамещенный или замещенный фенил, где заместителями фенильной группы могут быть галогены в количестве от 1 до 5 атомов, низшие алкильные группы в количестве от 1 до 5 групп, низшие алкоксигруппы в количестве от 1 до 5 групп, диалкиламиногруппы в количестве от 1 до 5 групп; Y - прямая связь или метилен, R' - прямой или разветвленный низший алкил. Способ синтеза соединений формулы [I] отличается проведением реакции кислот формулы [II] с гексаалкилтриамидофосфитами общей формулы (R'₂N)₃P, где R' имеют вышеуказанные значения, в среде ароматических или предельных углеводородов в диапазоне температур 20-80°С. Предложены новые нейропротекторы и новый упрощенный способ их получения с хорошими выходами. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Нейропротекторные соединения, представляющие собой бис-диалкиламиды фосфорилированных 1,4-дикарбоновых кислот общей формулы (I)

в которой каждым заместителем R может быть прямой или разветвленный низший алкил, незамещенный или замещенный фенил, где заместителями фенильной группы могут быть галогены в количестве от 1 до 5 атомов, низшие алкильные группы в количестве от 1 до 5 групп, низшие алкоксигруппы в количестве от 1 до 5 групп, диалкиламиногруппы в количестве от 1 до 5 групп, Y представляет прямую связь или метиленовую группу, заместителем R' может быть прямой или разветвленный низший алкил.

2. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-(дифенилфосфинил)-янтарной кислоты.

3. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[(2-метилфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты.

4. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты.

5. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-диметиламинофенил)-фосфинил]-янтарной кислоты.

6. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-хлорфенил)-фосфинил]-янтарной кислоты.

7. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-метоксифенил)-фосфинил]-янтарной кислоты.

8. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-(ди-н-бутилфосфинил)-янтарной кислоты.

9. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(4-метоксифенил)-фосфинилметил]-янтарной кислоты.

10. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетрабутилдиамид 2-[бис-(2,5-диметилфенил)-фосфинилметил]-янтарной кислоты.

11. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой N¹,N¹,N⁴,N⁴-тетраэтилдиамид 2-(дифенилфосфинилметил)-янтарной кислоты.

12. Способ синтеза соединений по п.1 общей формулы (I), заключающийся в реакции фосфорилированных 1,4-дикарбоновых кислот общей формулы (II)

в которой R и Y имеют значения, представленные в п.1, с гексаалкилтриамидофосфитами общей формулы (R'₂N)₃Р, в которой R' имеют значения, представленные в п.1, при нагревании в органическом растворителе, выбранном из ряда ароматических углеводородов или предельных углеводородов, отличающийся тем, что реакцию проводят в диапазоне температур 20-80°С.