ФОСФОЛИПИДНАЯ ЛЕКАРСТВЕННАЯ КОМПОЗИЦИЯ С НАНОРАЗМЕРОМ ЧАСТИЦ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА И КОМАТОЗНЫХ СОСТОЯНИЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2012 года по МПК A61K31/683 A61P3/06 

Изобретение относится к медицине и фармакологии и касается стабильной при хранении наносистемы с размером частиц 15-25 нм, получаемой на основе растительных фосфолипидов и предназначенной для активации выведения холестерина из тканей (стенки сосудов) и биомембран и/или репарации биомембран клеток, патологически измененных вследствие заболевания, и способа ее получения.

В настоящее время большинство новых лекарственных препаратов создается на основе направленной коррекции нарушений определенных биохимических процессов, свойственных тому или иному заболеванию, путем использования соединений, для которых предварительно была выявлена специфическая биологическая активность, например, способность воздействовать на ряд белков, чаще всего ферментов, вовлеченных в патогенез заболевания. В отличие от этого, фосфолипидам, предлагаемым в настоящем изобретении в качестве основы лекарственного препарата, свойственна не узкоспецифичная, а хорошо известная универсальная биологическая активность, так как они являются естественными природными компонентами биомембран всех живых клеток, а также липопротеинов крови.

Растительные (соевые) фосфолипиды, как компоненты предлагаемой наносистемы, отличаясь от фосфолипидов клеток животных по жирнокислотному составу, способны тем не менее встраиваться в клеточные мембраны и липопротеины, особенно липопротеины высокой плотности (ЛВП), нормализуя их нарушенные функции. А так как нарушения функций этих структур сопряжены с рядом патологических состояний, то коррекция нарушений путем встраивания фосфолипидов может оказывать терапевтическое действие, способствуя лечению соответствующих заболеваний. На этом основано предлагаемое использование разработанной фосфолипидной наносистемы для лечения, в частности, двух патологических состояний - атеросклероза сосудов с его основным риск-фактором - нарушением липидного обмена (т.е. дислипопротеинемией), а также поражения клеток мозга при коматозных и прекоматозных состояниях (энцефалопатиях).

В настоящее время известно, что атеросклеротическое поражение аорты возникает не только из-за переизбытка в плазме крови холестерина, но из-за ряда других факторов, включая нарушение баланса между его поступлением и удалением из клеточных мембран и стенок сосудов, осуществляемым различными классами липопротеинов плазмы. Одним из видов таких нарушений, дислипопротеинемий, является относительная недостаточность уровня липопротеинов высокой плотности (ЛВП) - класса липопротеинов, удаляющих и транспортирующих в печень избыточный холестерин из клеток и тканей (процесс, называемый «обратным транспортом холестерина», ОТХ). Для лечения дислипопротеинемий в настоящее время наиболее активно используются статины - ингибиторы биосинтеза холестерина. В то же время такая терапия, снижая тканевое поступление холестерина, не затрагивает процесса его выведения, так как не влияет на ЛВП. Среди современных препаратов небольшое повышение ЛВП (до 18%) косвенно могут вызывать препараты группы фибратов, хотя они использовались больше для снижения уровня общего холестерина и сейчас практически вытесняются статинами, что связано и с рядом их побочных действий. Повышение уровня ЛВП достигается и при использовании производных никотиновой кислоты, однако из-за снижения захвата этих липопротеинов печенью оно не приводит к активации ОТХ, а значит, вряд ли может иметь лечебное действие на перегруженные холестерином ткани сосудов и мембраны клеток.

В то же время эффективным средством, способствующим повышению эффективности обратного транспорта холестерина, могут быть полиненасыщенные фосфолипиды, особенно в форме наночастиц. Такое действие фосфолипидов основано на двух механизмах. Во-первых, они встраиваются в ЛВП, повышая холестерин-акцепторную активность последних, и, во-вторых, образуют комплексы со свободным апопротеином А1, которые также могут служить акцепторами холестерина. Следует ожидать, что как процессы встраивания в ЛВП, так и образования фосфолипид-белковых комплексов будут более активны при снижении размеров фосфолипидных частиц за счет увеличения эффективной площади поверхности, а значит и контакта с компонентами плазмы. На этом принципе основано терапевтическое действие используемого уже несколько десятилетий препарата Липостабил. Существенным недостатком инъекционной формы этого препарата является использование солей желчных кислот с целью снижения размера частиц липидной эмульсии, но повышающих токсичность лекарственного препарата. Вследствие этого Липостабил с 2005 года отсутствует на фармрынке России, т.к. он не прошел перерегистрацию в Минздравсоцразвития именно из-за токсичности, обусловленной наличием в его составе солей желчных кислот [1, 2]. Однако многолетняя практика применения полиненасыщенного фосфатидилхолина для нормализации липидных нарушений показывает ценность использования этого биологически активного соединения для клинических целей и является основанием для поиска новых лекарственных композиций на его основе.

Другим лечебным свойством фосфолипидов, усиленным благодаря наноформе, является их способность встраиваться в поврежденные мембраны, репарируя их и тем самым способствуя восстановлению поврежденных клеток. Острым, жизнеугрожающим клеточным повреждением является повреждение клеток мозга (астроцитов), возникающее при коматозных и прекоматозных состояниях. В данном случае была бы целесообразна репарация мембран мозговых клеток, в комплексе с детоксикацией, устраняющей причину возникновения самого коматозного состояния, в частности при гепатической коме и острых токсических отравлениях. Поскольку при коматозных состояниях возможно нарушение гематоэнцефалического барьера, можно полагать, что он может стать в какой-то степени проницаемым для наночастиц, в частности наночастиц растительных фосфолипидов, способных, как отмечалось выше, репарировать мембрану. Кроме того, циркуляция высоких доз фосфолипидов должна способствовать детоксикации, активируя выведение токсикантов клетками печени и одновременно адсорбируя некоторое количество токсикантов, особенно гидрофобной природы. Этот процесс может быть существенно интенсифицирован за счет наноразмеров циркулирующих частиц, с одной стороны, увеличивающих их общую «рабочую поверхность», а с другой, пролонгирующих время циркуляции фосфолипидов в кровяном русле.

Одним из распространенных типов коматозных состояний является гепатическая кома, возникающая как результат гепатической энцефалопатии - повреждения астроцитов мозга за счет влияния накапливающихся в крови токсикантов, и, в первую очередь, ионов аммония, которые не детоксицируются печенью. Образующийся в астроцитах из ионов аммония глутамин вызывает набухание клеток и их последующую дисфункцию. Поэтому лечение гепатических коматозных состояний проводят путем сочетанного воздействия на активацию выведения аммония (например, производными орнитина и препаратами цинка), на коррекцию гемостаза и общую детоксикацию путем инфузии разбавленных солевых растворов и растворов глюкозы, а также путем одновременного воздействия на печень как первичное звено гепатической энцефалопатии, с целью восстановления ее детоксицирующей функции.

Наряду с методами, направленными на прекращение воздействия энцефалопатического фактора, необходима также репарация уже произошедших клеточных нарушений, в дополнение к общей активации кровотока. С этой целью применяется цитиколин (citicoline) - цитидин-5-дифосфохолина, являющийся метаболическим предшественником мембранных фосфолипидов, а также источником холина, необходимого для функционирования клеток мозга. Этот лекарственный препарат, предназначенный для лечения мозгового кровообращения и травм головы, использовали при лечении коматозных состояний, при этом наблюдали его положительное действие. Таким образом, подтверждается целесообразность поступления в организм фосфолипидов, которые способны репарировать мембраны поврежденных клеток мозга.

Приведенное выше перечисление уникальных свойств фосфолипидов, как чрезвычайно ценных естественных природных корректоров, создает предпосылки для их активного использования в качестве самостоятельных лечебных агентов.

Действительно, различные аспекты и возможности медицинского применения фосфолипидов были показаны еще 2-3 десятилетия назад, и лечение гепатической комы и пре-комы входит в перечень показаний к применению фосфолипидного препарата «Эссенциале» (http://www.24hoursppc.biz/ products/essentiale_forte30/). Однако в инъекционной форме этого препарата для солюбилизации водонерастворимых фосфолипидов использованы в качестве детергента соли дезоксихолевой кислоты (bttp://www.bionity.com/lexikon/e /Deoxycholic_acid/), проявляющие цитотоксическое действие [3], что ограничивает его применение.

Таким образом, фактически использованию мощного лекарственного репарирующего потенциала фосфолипидов до сих пор мешало отсутствие технологии бездетергентного получения их активных лекарственных форм, и только в настоящее время, разработанная в НИИ биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича РАМН, технология получения наночастиц фосфолипидов открывает возможности их реального медицинского применения.

Наиболее близкой к предложенной композиции является пероральная лекарственная форма фосфолипидного препарата для профилактики и лечения заболеваний печени, нарушения липидного обмена и восстановления функции печени после интоксикации в форме наночастиц с диаметром 30-50 нм, содержащая растительные фосфолипиды с содержанием фосфатидилхолина 75-98%, глицирризиновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и углевод при суммарном содержании фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли 2-80 мас.% и массовом соотношении фосфолипидов и глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли не более 4:1, при этом в качестве углевода форма содержит мальтозу и/или изомальтозу (RU 2373924 С1, опубликовано 27.11.2009). Запатентованная лекарственная форма стала известна под торговым названием Фосфоглив.

Наиболее близким к предложенному способу является способ получения пероральной лекарственной формы фосфолипидного препарата, характеризующийся тем, что эмульсию растительных фосфолипидов в водном растворе глицирризиновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли смешивают с водным раствором углевода, в качестве которого используют лактозу, мальтозу и/или изомальтозу, при рН 6,5-7,5 и полученную эмульсионно-дисперсионную систему подвергают 5-22 циклам гомогенизации при давлении 800-1200 бар с последующей сублимационной сушкой (см. там же).

Использование в известном препарате соли глицирризиновой кислоты ограничивает его применение у больных с портальной гипертензией. Кроме того, минералокортикоподобное действие может способствовать задержке жидкости в организме, появлению отеков и повышению артериального давления.

Предлагаемый в настоящем изобретении новый лекарственный препарат (под условным названием Фосфовит) имеет существенные отличия в качественном и количественном составе лекарственных субстанций, лежащих в его основе, и способе его получения. Препарат включает помимо фосфатидилхолина (ФХ) также и другой фосфолипидный компонент - 1,2-диацил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин или фосфатидилэтаноламин (ФЭА) в количестве от 0,2 до 7,0%. Включение этого фосфолипида обусловлено его биологической значимостью в структуре биомембран и липопротеинов. После ФХ это второй по количественному содержанию фосфолипид в мембранах животных клеток. ФЭА локализуется, в основном, во внутренннем слое биомембран и, благодаря конусоподобной конфигурации молекулы, вместе с холин-содержащими фосфолипидами (главным образом фосфатидилхолином (ФХ) обеспечивает оптимальное соотношение фосфолипидов для поддержания пространственной геометрии биомембраны, а именно, определенной степени ее сферичности, а значит и геометрической формы клетки в целом. А это, естественно, является условием поддержания ее нормального функционирования.

Поэтому, если фосфатидилхолин может служить "мембранным клеем" для репарации поврежденной мембраны, встраиваясь в нее снаружи, то присутствие вместе с ним фосфатидилэтаноламина как бы повышает качество этого «клея», приближая его свойства к свойствам репарируемого объекта, т.е. мембраны.

На первом этапе ФЭА, также как и фосфатидилхолин будет встраиваться в мембрану клетки снаружи, а затем постепенно, с участием ферментов скрамблаз (флипаз) будет переходить во внутренний слой, способствуя таким образом более полной репарации поврежденного фрагмента мембраны. Кроме того, ФЭА необходим для функционирования митохондрий, для биосинтеза фосфатидилсерина, участвующего в регуляции и контроле клеточных процессов. ФЭА является также компонентом ЛВП, поэтому он вместе с ФХ будет встраиваться и в ЛВП, способствуя поддержанию их структуры.

Таким образом, введение ФЭА в лекарственный препарат на основе фосфолипидных наночастиц должно обеспечить усиление репарирующей функции последнего при включении вводимых фосфолипидов как в поврежденные мембраны, так и в ЛВП плазмы крови.

Добавление ФЭА оказывает также влияние и на свойства наночастиц в процессе технологии их получения. Оказывая влияние на структуру образующегося слоя фосфолипидных молекул, он способствует, с одной стороны, более легкому образованию частиц, повышая при этом их стабильность, с другой, изменяет текучесть (жидкостность) фосфолипидной мембраны. При этом процесс получения лекарственного препарата становится более технологичным: облегчается стадия стерилизующей фильтрации водного раствора. Кроме того, встраивание ФЭА в образующиеся наночастицы, повышая степень жидкостности их фосфолипидной поверхности, облегчает взаимодействие частиц с клетками после введения в организм.

Таким образом, ФЭА - функционально важный фосфолипид всех биомембран и липопротеинов, добавляется не только для повышения специфических терапевтических воздействий фосфолипидных наночастиц, но оптимизации технологии их получения.

Благодаря добавлению ФЭА, улучшаются технологические свойства получаемого препарата, возможность сохранения его свойств при регидратации, достигается усиление уже имеющего действия фосфолипидных наночастиц за счет оптимизации их свойств как при технологическом получении и хранении, так и при действии на предполагаемые терапевтические мишени - дефектные мембраны клеток или липопротеины крови.

Задачей настоящего изобретения является разработка высокоэффективной фосфолипидной лекарственной композиции со средним диаметром наночастиц не более 25 нм, обладающей низкой токсичностью, способной выдерживать длительное хранение, для лечения нарушений липидного обмена и гепатических энцефалопатий, вызывающих коматозные и прекоматозные состояния, и способа ее получения.

Сложность производства нанопрепаратов на основе растительных фосфолипидов заключается в получении большого объема высушиваемого раствора, а также повышенных требований к размеру частиц, апирогенности и стерильности для внутривенных лекарственных форм.

Изменение технологической схемы производства фосфолипидных нанолекарств, описанной в патентах RU 2373924 С1 и RU 2391966 С1, в частности, использование погружной высокоскоростной роторно-статорной механической мешалки на этапе первичной гомогенизации смеси, применение только микрофлуодайзера для гомогенизации под высоким давлением и изменение схемы фильтрации раствора на фильтрацию в тангенциальном потоке позволяют интенсифицировать процессы, повысить качество процесса высушивания, получить лиофилизированный препарат с однородными по размеру частицами, полностью восстанавливающий свойства при регидратации.

Технический результат достигается тем, что фосфолипидная лекарственная композиция для лечения нарушения липидного обмена и гепатических энцефалопатий, вызывающих коматозные и прекоматозных состояния, в форме фосфолипидных наночастиц размером 15-25 нм, включает фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин и мальтозу при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Фосфатидилхолина 15,8-50,0 Фосфатидилэтаноламина 0,2-7,0 Мальтозы 49,8-80,0

Технический результат достигается также способом получения указанной фосфолипидной лекарственной композиции, заключающимся в том, что фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин и мальтозу суспензируют в воде с помощью роторно-статорного гомогенизатора и полученную суспензию подвергают нескольким циклам микрофлуидизации при давлении 1700-1900±10% бар при температуре 45-55°C с последующими фильтрацией в тангенциальном потоке и лиофилизацией.

Количество циклов микрофлуидизации составляет, как правило, 3-4 рН раствора, находится в пределах 6,0-7,5.

Предлагаемое в настоящем изобретении приготовление фосфолипидов в форме наносистемы дает широкие возможности лекарственного использования этих природных биологически активных соединений широкого спектра действия. На этом основано предлагаемое использование разработанной фосфолипидной наносистемы для лечения, в частности, двух патологических состояний - атеросклероза сосудов с его основным риск-фактором (дислипопротеинемией, включая недостаточность ОТХ), а также поражения клеток мозга при коматозных и прекоматозных состояниях, вызванных гепатической энцефалопатией.

Предлагаемый способ позволяет осуществлять в асептических условиях получение новых лекарственных форм как для перорального, так и для инъекционного применения, при следующих заболеваниях и состояниях:

1) дислипидемия и атеросклероз, при недостаточности обратного транспорта холестерина;

2) коматозное и прекоматозное состояние, возникающее на фоне гепатической энцефалопатии.

Используемый фосфатидилхолин является основным компонентом высокоочищенного растительного соевого фосфолипида, содержание фосфатидилхолина, в котором не менее 75-98 мас.%. 1,2-Диацил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (ФЭА) с содержанием 93-98% получают обработкой соевого фосфатидилхолина фосфолипазой D.

Содержание в композиции ФХ - от 15,8 до 50,0%; ФЭА - от 0,2 до 7,0%. Другие фосфолипидные компоненты могут содержаться в количествах, не превышающих допустимые (лизофосфатидилхолина до 4 мас.%, следовые количества других фосфолипидов).

В качестве вспомогательных фармакологически приемлемых веществ композиция содержит мальтозу, выполняющую роль криопротектора при сублимационной (лиофильной) сушке. Именно добавление мальтозы дает возможность получения лиофилизата, способного после растворения в физиологическом растворе или воде полностью восстанавливать свою структуру, в частности размер частиц.

Технологические этапы получения фосфолипидной композиции.

В работе использовались следующие материалы:

1. Липоид С 100, соевый фосфолипид фирмы Липоид ГМбХ, Германия (содержание ФХ 75-98 мас.%).

2. Липоид S РЕ фирмы Липоид ГМбХ, Германия (содержание ФЭА 93-98%).

3. Мальтозы моногидрат фирмы MERCK, Германия.

4. Вода для инъекций (по ФС №42-4587-95).

Пример 1.

1. Диспергирование фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина и мальтозы в воде.

Навески соевого фосфолипида и фосфатидилэтаноламина добавляют к водному раствору мальтозы, гомогенизируют методом роторно-статорной гомогенизации в течение 5-10 мин при температуре 40-55°С и скоростях вращения ротора - 20000-30000 об/мин до получения однородной первичной дисперсии.

2. Микрофлюидизация концентрированной дисперсии. Гомогенизацию проводят с помощью микрофлюидайзера Microfluidizer Processor, MHO EN-30K (США). Первичную дисперсию, полученную на предыдущей стадии, пропускают через микрофлюидайзер под давлением 1700-1900 бар ±10%. Температуру дисперсии поддерживают в пределах 40-55°С. Процесс микрофлюидизации проводят в течение 3-4 циклов до достижения величины светопропускания рабочего раствора > 60% (контролируют по светопропусканию при 660 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см).

3. Фильтрация полученной наноэмульсии. Полученный раствор фильтруют с помощью системы тангенциальной фильтрации последовательно через фильтр 5 мкм, а затем через стерильный фильтр 0,22 мкм (стерилизующая фильтрация), либо только через стерильный фильтр 0,22 мкм.

4. Розлив стерильной наноэмульсии. Полученный раствор разливают во флаконы в стерильных условиях и предукупоривают резиновыми пробками.

5. Лиофилизация. Флаконы с препаратом помещают на полки лиофильной сушилки. Продукт замораживают до -40°С, затем полки нагревают до +10°С. При вакууме 150 миллиТор продукт сублимируют в течение 30 часов. Затем температуру полок повышают до +50°С и досушивают препарат при вакууме 50 миллиТор в течение 8-10 часов. Высушенный препарат укупоривают под вакуумом. После разгрузки лиофильной сушилки флаконы закатывают алюминиевыми колпачками, этикетируют и отбирают пробы для контроля качества аналитическими и микробиологическими методами.

Определение размера частиц фосфолипидной композиции.

1. К 3 мл очищенной воды добавляют 20 мкл препарата (отбор пробы производят либо после гомогенизации/микрофлуидизации, либо после растворения содержимого флакона лиофильно высушенного препарата в 10 мл воды).

2. Полученный раствор дегазируют, фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм в стеклянную измерительную кювету.

3. Анализ размера частиц осуществляют методом фотонно-корреляционной спектроскопии на субмикронном анализаторе размера частиц Beckman N5. Около 95% частиц, полученных вышеописанным способом, имеют размеры от 15 до 25 нм.

В таблице 1 приведены рецептуры предлагаемой фосфолипидной композиции.

Таблица 1. № рецептуры Состав композиции, % масс Используемый метод Размер частиц, нм Фосфатидилхолин Фосфатидилэтаноламин Мальтоза 1 20 7 73 микрофлуидизация 12 2 19,8 0,2 80 микрофлуидизация 17 3 25 6 69 микрофлуидизация 15 4 30 4 66 микрофлуидизация 18 5 35 2 63 микрофлуидизация 16 6 40 1,5 58,5 микрофлуидизация 24

Пример 2.

Модель прекоматозного состояния на основе гепатической энцефалопатии, на почве цирроза печени получали путем индуцирования цирроза длительным введением черыреххлористого углерода (CCl₄) подопытным животным - крысам.

CCl₄ вводили внутрибрюшинно по 0,1 мл/100 г два раза в неделю в течение 45 дней. В последние дни эксперимента животные проявляли внешние признаки прекоматозного состояния - длительный сон и атаксию (стадии I и II по принятой классификации). Предлагаемую композицию (рецептура №2, таблица 1) вводили 10 животным инфузионно, ежедневно, в течение 3-х суток (доза 200 мг/кг по фосфолипиду). Оценивали эффективность лечения по активности ферментов - щелочной фосфатазе (ЩФ), аспартатаминотрансферазе (АсТ), аланинаминотрансферазе (АлТ), а также по концентрации в плазме аммония, как показателю гепатической энцефалопатии.

В таблице 2 приведены результаты эксперимента.

Таблица 2. Показатели Без лечения Введение Фосфовита Интактные животные Щелочная фосфатаза, ед/л 1290±60 612±24 120±30 АсТ, ед/л 610±70 221±34 91±15 АлТ, ед/л 240±30 136±19 52±14 Концентрация аммония (мкг аммонийного азота/100 мл 127±8 89±6 44±6

Как видно из таблицы 2, введение предложенного нанофосфолипидного препарата вызвало снижение активности ферментов, наряду со снижением концентрации аммония. Кроме того, у животных наблюдалось снижение проявлений внешних поведенческих признаков тяжести энцефалопатии, выражающееся в ослаблении атаксии и переходе из 11-ой к 1-ой (менее тяжелой) стадии.

Пример 3.

Модель индуцированной гиперлипидемии и атеросклероза у крыс получали с использованием насыщенного жирами рациона, содержащего холестерин, согласно Руководству [4].

Фосфовит вводили животным внутрижелудочно через зонд в дозе 100 мг/кг по фосфолипиду в течение месяца (рецептура №3, таблица 1). После окончания эксперимента оценивали состояние системы липопротеинов по концентрации общего холестерина и холестерина ЛВП, а также триглицеридов и общих фосфолипидов сыворотки. Оценивали также состояние печени по уровню билирубина, а также массу тела животного. В таблице 3 приведены результаты эксперимента.

Таблица 3. Содержание в сыворотке крови Интактные животные Атеросклероз Контроль Нанофосфолип 1 2 3 4 Общий холестерин, ммоль/л 1,6±0,1 3,1±0,3 2,5±0,2 Холестерин ЛВП, ммоль/л 0,9±0,1 1,0±0,1 1,3±0,1 Холестерин β- + пре-β-липопротеинов (ЛНП+ЛОНП) 0,7±0,1 2,0±0,2 1,2±0,2 Триглицериды, ммоль/л 2,8±0,1 5,0±0,4 3,1±0,2 Фосфолипиды, ммоль/л 1,9±0,2 2,0±0,2 2,7±0,2 Коэффициент атерогенности, холестерин (ЛНП+ЛОНП)/холестерин ЛВП, ед. 0,78±1,0 2,0±0,2 0,92±0,2 Отношение холестерин/фосфолипиды 0,84±0,1 1,55±0,2 0,92±0,1 Билирубин общий, ммоль/л 3,2±0,4 5,1±0,3 3,5±0,4 Масса тела, г 220±11 308±13 255±11 Сокращения: ЛВП, ЛНП и ЛОНП - липопротеины высокой, низкой и очень низкой плотности соответственно.

Как видно из таблицы 3, в контрольной группе (не получавшей лечение) заметно возросли по сравнению со здоровыми животными «атерогенные» показатели холестерин (общий и атерогеных липопротеинов, ЛНП+ЛОНП), триглицериды, и, естественно, и относительные, рассчитываемые на их основе показатели (коэффициент атерогенности) и соотношение холестерин/фосфолипиды. Введение Фосфовита привело к их снижению, наряду с повышением концентрации «антиатерогенных» параметров - холестерина ЛВП и фосфолипидов плазмы. Нормализовался также и уровень билирубина, указывающий на улучшение функционирования печени. У животных в отличие от контрольной группы не было признаков ожирения (масса тела в среднем была ниже), что указывает и на одновременную активизацию липидного обмена, включая липолиз жиров, вводимых в рационе (подсолнечное масло в смеси со свиным жиром).

После окончания эксперимента животных забивали декапитацией и аорту подвергали гистологическому исследованию. В аортах животных, не получавших лечения, были выявлены жировые полоски и пятна, определялись атеросклеротические бляшки с ксантомными клетками. В противоположность этому, в группах, получавших Фосфовит, аорта не отличалась от аорты интактных животных.

Механизм антиатерогенного действия препарата Фосфовит направлен на нормализацию соотношения концентраций атерогеных (ЛНП и ЛОНП) и антиатерогенных (ЛВП) липопротеинов, в первую очередь, путем повышения уровня холестерина ЛВП. Препарат показан преимущественно лицам с нарушением липидного обмена по типу гипоальфалипопротеинеми. Вторичным эффектом Фосфовита будет снижение повышенного уровня общего холестерина и холестерина ЛНП у пациентов с первичной гиперхолестеринемией, когда применение диетотерапии и других нефармакологических мероприятий не приносит адекватного эффекта. Результатом сочетания этих воздействий будет торможение прогрессирования атеросклеротического поражения у лиц с высокими факторами его риска, включая комбинированную гиперхолестеринемию и гипертриглицеридемию (сопровождающуюся обычно гипоальфалипопротеинемией, т.е. низким уровнем ЛВП).

Таким образом, новый препарат из наночастиц растительного фосфатидилхолина, Фосфовит, проявляет терапевтическую эффективность как лекарственное средство при купировании гепатических энцефалопатий, сопряженных с коматозными и пре-коматозными состояниями, а также для лечения дислипидемий, сопряженных с недостаточным выведением тканевого холестерина (т.е. для активации его т.н. «обратного транспорта» - из тканей и клеток в печень).

Преимуществом разработанной ультратонкой фосфолипидной наноэмульсии по отношению к традиционным лекарственным формам является также отсутствие токсичности и аллергических реакций и полная биодеградируемость, т.к. в ее основе лежат фосфолипидные компоненты - фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламин, -аналогичные естественному строительному материалу живых клеток [3, 5].

Лекарственные препараты на основе фосфолипидных наночастиц размером не более 25 нм не токсичны, обладают биологическими свойствами, основанными на способности эффективно воздействовать на обратный транспорт холестерина, репарировать поврежденные мембраны клеток, и могут быть использованы в комплексной терапии для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, а также пре- и коматозных состояний.

ЛИТЕРАТУРА

1. Мельчинская Е.Н., Громнатский Н.И., Кириченко Л.Л., Тер. Архив, 2000; 72(8):57-8).

2. Young VL. Aesthet Surg J. 2003, 23(5):413-7.

3. Araki Y, Andoh A, Bamba H, Yoshikawa K, Doi H, Komai Y, Higuchi A, Fujiyama Y. The cytotoxicity of hydrophobic bile acids is ameliorated by more hydrophilic bile acids in intestinal cell lines IEC-6 and Caco-2. Oncol Rep.2003; 10(6):1931-6.

4. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» под общей редакцией чл.-корр. РАМН, профессора Хабриева Р.У., Москва, 2005, с.452.

5. О.М.Ипатова. Фосфоглив: механизм действия и применение в клинике. Москва, 2005, 84-114).

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается композиции и технологии получения готовых лекарственных форм на основе фосфолипидных наночастиц размером до 25 нм. Препарат предназначен для перорального приема при терапии нарушений липидного обмена в качестве гипохолестеринемического средства. Для инъекционного применения в терапии токсических и прекоматозных состояний предусматривается инфузионная форма. Фосфолипидная лекарственная композиция для лечения нарушения липидного обмена и гепатических коматозного и прекоматозного состояния в форме фосфолипидных наночастиц размером 15-25 нм включает фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин и мальтозу. Способ получения указанной фосфолипидной лекарственной композиции заключается в том, что фосфолипид, фосфатидилэтаноламин и мальтозу суспензируют в воде и полученную суспензию подвергают нескольким циклам микрофлуидизации при давлении 1700-1900±10% бар, температуре 40-55°С c последующей лиофилизацией. Указанные препараты представляют собой лиофильно высушенные порошки, выдерживающие длительное хранение. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 3 пр., 3 табл.

1. Фосфолипидная лекарственная композиция для лечения нарушения липидного обмена и гепатических коматозного и прекоматозного состояния в форме наночастиц размером 15-25 нм, включающая фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин и мальтозу при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Фосфатидилхолин 15,8-50,0 Фосфатидилэтаноламин 0,2-7,0 Мальтоза 49,8-80,0

2. Способ получения фосфолипидной лекарственной композиции по п.1, характеризующийся тем, что фосфолипид, фосфатидилэтаноламин и мальтозу суспензируют в воде, и полученную суспензию подвергают нескольким циклам микрофлуидизации при давлении 1700-1900±10% бар при температуре 40-55°С с последующими фильтрацией и лиофилизацией.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что используют воду с рН 6,0-7,5.

4. Способ по п.2, отличающийся тем, что проводят фильтрацию в тангенциальном потоке.