СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ДИВЕРТИКУЛЕЗА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2012 года по МПК G09B23/28 A61K39/395 A61K31/13 A61P1/00 

Изобретение относится к области медицины, а конкретно к способам лечения дивертикулеза кишечника.

Известен способ хирургического лечения дивертикулеза тонкой и толстой кишки (1 - Molacek J, Treska V. Multiple diverticulosis of the small and large intestine. Rozhl Chir. 2007 Jan; 86(1):35-6). Данный способ принят за аналог.

Известен способ лечения дивертикула Меккеля путем трансумбиликальной дивертикулэктомии (2 - Prasad T.R., Chui C.H., Jacobsen A.S. Laparoscopic-assisted resection of Meckel′s diverticulum in children. JSLS. 2006 Jul-Sep; 10(3):310-6.). Данный способ принят за прототип.

Способ-прототип является достаточно травматичным.

Целью изобретения является снижение травматичности лечения дивертикулеза. Технический результат достигается тем, что создают локальное разрежение стенки толстой кишки и через 1-1,5 ч внутривенно вводят инфликсимаб в дозе 15-20 мг/кг, после чего через 30-60 мин вводят серотонин в дозе 0,1-0,15 мг/кг.

Способ реализуется следующим образом.

В условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (40-60 мг/кг) крысам проводили срединную лапаротомию. Дивертикулы создавали путем вакуумной деформации стенки слепой и сигмовидной кишки на площади 1-1,5 см² на равных расстояниях друг от друга путем создания последовательно 5-6 разрежений стенки кишки величиной 60-80 мм рт.ст., длительностью 40-60 с.

По уровню электромоторной активности (ЭМА) определяли гипо- и гиперкинетическое состояние слепой и сигмовидной кишки при моделировании дивертикулов с помощью биполярных непогружных электродов. Фоновая ЭМА сигмовидной кишки характеризовалась среднечастотными (4,5±0,7 в мин) и среднеамплитудными (0,14±0,06 мВ) медленными волнами. То есть, фоновая моторная активность сигмовидной кишки была достаточно интенсивна. Фоновая ЭМА слепой кишки характеризовалась медленноволновой активностью с частотой 12,9±1,3 в мин и амплитудой 0,1±0,03 мВ.

Реализация способа моделирования дивертикулов сопровождалась снижением частоты медленных волн ЭМА сигмовидной кишки до 3,4±0,3 в мин, при амплитуде 0,16±0,03 мВ. То есть, развитие дивертикулов приводит к достоверному снижению медленноволновой активности сигмовидной кишки. Моделирование дивертикулов сопровождалось снижением частоты медленных волн ЭМА слепой кишки до 11,2±1,0 в мин, при неизменной амплитуде (0,1±0,03 мВ). То есть, заявляемый способ моделирования дивертикулов приводит к снижению медленноволновой активности слепой кишки.

Далее крыс разделили на две группы по 8 животных в каждой. Животным 1-й группы в условиях нембуталового наркоза на 10-е сутки модели проводили биопсию толстой кишки с последующим морфологическим исследованием.

Биоптаты фиксировали в 10% нейтральном формалине, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заключали в парафин по стандартной методике. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином и на соединительную ткань - по Ван Гизону. Анализ изменений стенки толстой кишки проводили при увеличении микроскопа х250-500.

Подтверждением эффективности моделирования является морфологическое исследование стенки слепой кишки, которое было проведено на 10-й день развития дивертикулов.

При макроскопическом исследовании толстой кишки установлены явления гипотонии, деформации стенки кишки. В некоторых дивертикулах обнаружены неровность контуров и фиксация стенок. В подслизистом слое отмечаются явления отека, сосуды венозного типа могут быть расширены, кровенаполнены.

В слизистой оболочке толстой кишки в области дивертикула выявлена различная степень выраженности активации клеток: в поверхностном эпителии встречаются межэпителиальные лимфоциты, в подэпителиальном слое встречаются единичные макрофаги и отдельные плазматические клетки.

Количество бокаловидных клеток также резко увеличено. В бокаловидных клетках отмечаются разные стадии секреторного процесса.

То есть, в собственной пластинке слизистой оболочки слепой кишки обнаружена выраженная пролиферация иммуноактивных клеток, в частности, лимфоцитов и в меньшей степени макрофагов и плазматических клеток, которые располагаются равномерно.

В верхних отделах слизистой оболочки в области крипт обнаружены скопления мелких эпителиоцитов расположенных в несколько рядов. В мышечном слое отмечается дистрофия отдельных гладкомышечных клеток. В межмышечном нервном сплетении отмечается вакуольная дистрофия нейронов, что может свидетельствовать о нарушении трофической функции нервной системы. В этих условиях изменяется регулирующая функция эфферентных нейронов, расположенных в межмышечном нервном сплетении, на моторную деятельность кишки.

При окраске по Ван Гизону наблюдается избыточное развитие соединительной ткани в подслизистом слое. Грубые коллагеновые волокна проникают между пучками гладкомышечных клеток.

Следует отметить повышенную пролиферативную активность стволовых клеток крипт, что приводит к формированию скоплений малодифференцированных эпителиальных клеток. Возрастание пула этих эпителиоцитов может быть обусловлено снижением функции клеток иммунной системы, которое наблюдаются при процессах альтерации.

Выраженный дистрофический процесс нейронов ганглиев снижает сократительную функцию гладкомышечных клеток стенки кишки. Локальное нарушение кровотока с избыточным развитием соединительной ткани дополнительно нарушает сократительную функцию гладкомышечных клеток стенки кишки, что способствует развитию застойных явлений в области дивертикула.

Снижение электромоторной активности толстой кишки является интегральным показателем нейродистрофического процесса, избыточного коллагенообразования и пролиферации эпителия толстой кишки с образованием многоклеточных скоплений малодифференцированных эпителиоцитов.

Второй группе крыс создают локальное разрежение стенки кишки и через 1-1,5 ч внутривенно вводят инфликсимаб в дозе 15-20 мг/кг, после чего через 30-60 мин вводят серотонин в дозе 0,1-0,15 мг/кг.

Подтверждением эффективности лечения дивертикулеза являются результаты морфологического исследования стенки слепой кишки, которое было также проведено на 10-й день развития дивертикулеза в условиях введения инфликсимаба и серотонина.

При последующем макроскопическом исследовании толстая кишка гипотонична, но не деформирована. В подслизистом слое явления отека и усиленного кровенаполнения минимальны.

В слизистой оболочке толстой кишки в области дивертикула встречаются единичные межэпителиальные лимфоциты, макрофаги и плазматические клетки. Количество бокаловидных клеток невелико. То есть, в собственной пластинке слизистой оболочки слепой кишки не обнаружена пролиферация иммуноактивных клеток.

В верхних отделах слизистой оболочки в области крипт обнаружены скопления мелких эпителиоцитов, расположенных в несколько рядов. Дистрофия гладкомышечных клеток не выражена. В межмышечном нервном сплетении нейроны ганглиев сохранны.

При окраске по Ван Гизону наблюдается умеренное развитие соединительной ткани в подслизистом слое.

Способ подтверждается следующими примерами.

Пример 1.

В условиях нембуталового наркоза 40 мг/кг крысе 1-й группы проводили срединную лапаротомию. Модель дивертикулов создавали путем вакуумной деформации стенки слепой и сигмовидной кишки на площади 1 см² на равных расстоянии друг от друга путем создания последовательно 5 разрежений стенки кишки величиной 60 мм рт.ст., длительностью 40 с.

По уровню электромоторной активности (ЭМА) определяли гипо- и гиперкинетическое состояние слепой и сигмовидной кишки при моделировании дивертикулов с помощью биполярных непогружных электродов площадью контактной поверхности 2 мм². Регистрацию проводили с использованием многоканального полиграфа.

Фоновая ЭМА сигмовидной кишки характеризовалась среднечастотными (3,5 в мин) и среднеамплитудными (0,07 мВ) медленными волнами. То есть, фоновая моторная активность сигмовидной кишки была достаточно интенсивна. Фоновая ЭМА слепой кишки характеризовалась медленноволновой активностью с частотой 10,5 в мин и амплитудой 0,08 мВ.

Развитие дивертикулов сопровождалось снижением частоты медленных волн ЭМА сигмовидной кишки до 2,8 в мин, при амплитуде 0,10 мВ. Моделирование дивертикулов сопровождалось снижением частоты медленных волн ЭМА слепой кишки до 8,4 в мин, при амплитуде 0,05 мВ.

Подтверждение образования дивертикулов осуществляли путем проведения морфологического исследования толстой кишки на 10-е сутки модели. Биоптаты фиксировали в 10% нейтральном формалине, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заключали в парафин по стандартной методике. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином и на соединительную ткань - по Ван Гизону. Анализ изменений стенки толстой кишки проводили при увеличении микроскопа х250-500.

Далее проводилось морфологическое исследование стенки слепой кишки с моделью дивертикулеза на 10-й день модели.

При макроскопическом исследовании стенка толстой кишки деформирована, гипотонична. В подслизистом слое отмечаются явления отека, вены расширены, кровенаполнены. В некоторых дивертикулах обнаружены признаки перенесенного воспаления.

В слизистой оболочке толстой кишки в области дивертикула встречаются межэпителиальные лимфоциты, в подэпителиальном слое встречаются макрофаги и плазматические клетки. Имеется обильная лимфоидно-клеточная инфильтрация слизистого слоя. В бокаловидных клетках отмечаются разные стадии секреторного процесса. Количество бокаловидных клеток значительно.

В верхних отделах слизистой оболочки в области крипт обнаружены скопления мелких эпителиоцитов, расположенных в несколько рядов. В мышечном слое отмечается дистрофия отдельных гладкомышечных клеток и вакуольная дистрофия нейронов.

При окраске по Ван Гизону наблюдается избыточное развитие соединительной ткани в подслизистом слое. Грубые коллагеновые волокна проникают между пучками гладкомышечных клеток.

Пример 2.

Крысе 2-й группы (модель дивертикулеза и лечение) в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (60 мг/кг) проводили срединную лапаротомию. Дивертикулы создавали путем вакуумной деформации стенки слепой и сигмовидной кишки на площади 1,5 см² на равных расстоянии друг от друга путем создания последовательно 6 разрежений стенки кишки величиной 80 мм рт.ст., длительностью 60 с.

Через 1 ч после выполненных разрежений стенки кишки крысе внутривенно вводили инфликсимаб в дозе 15 мг/кг с последующим через 30 мин введением серотонина в дозе 0,1 мг/кг.

Подтверждением эффективности лечения дивертикулеза являются результаты морфологического исследования стенки слепой кишки, которое было также проведено на 10-й день развития дивертикулеза в условиях введения инфликсимаба и серотонина.

При макроскопическом исследовании тонус толстой кишки снижен. В подслизистом слое явления отека и кровенаполнения минимальны.

В слизистой оболочке толстой кишки в области дивертикула встречаются единичные межэпителиальные макрофаги, лимфоциты, плазматические и бокаловидные клетки. То есть, в собственной пластинке слизистой оболочки слепой кишки не обнаружена пролиферация иммуноактивных клеток.

В верхних отделах слизистой оболочки в области крипт обнаружены скопления мелких эпителиоцитов. Дистрофия гладкомышечных клеток не выражена. В межмышечном нервном сплетении нейроны ганглиев сохранны.

При окраске по Ван Гизону наблюдается умеренное развитие соединительной ткани в подслизистом слое.

Пример 3.

Крысе 2-й группы (модель дивертикулеза и лечение) в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (50 мг/кг) проводили срединную лапаротомию. Дивертикулы создавали путем вакуумной деформации стенки слепой и сигмовидной кишки на площади 1 см² на равных расстоянии друг от друга путем создания последовательно 5 разрежений стенки кишки величиной 60 мм рт.ст., длительностью 40 с.

Через 1,5 ч после выполненных разрежений стенки кишки внутривенно вводили инфликсимаб в дозе 20 мг/кг с последующим через 60 мин введением серотонина в дозе 0,15 мг/кг.

Подтверждением эффективности лечения дивертикулеза являются результаты морфологического исследования стенки слепой кишки, которое было проведено на 10-й день развития дивертикулеза в условиях введения инфликсимаба и серотонина.

При макроскопическом исследовании тонус толстой кишки снижен. В подслизистом слое явления отека и кровенаполнения минимальны.

В слизистой оболочке толстой кишки в области дивертикула встречаются единичные межэпителиальные макрофаги, лимфоциты, плазматические клетки; бокаловидные клетки - в обычном количестве. То есть, в собственной пластинке слизистой оболочки слепой кишки не обнаружена пролиферация иммунореактивных клеток.

В верхних отделах слизистой оболочки в области крипт обнаружены скопления мелких эпителиоцитов. Дистрофия гладкомышечных клеток не выражена. В межмышечном нервном сплетении нейроны ганглиев сохранны.

При окраске по Ван Гизону наблюдается умеренное развитие соединительной ткани в подслизистом слое.

По заявляемому способу проведено моделирование дивертикулеза на 16 крысах, 8 из которых были успешно пролечены. Последующие наблюдения показали, что 8 крыс с дивертикулезом, пролеченных согласно предложенному способу, сохраняли жизнеспособность в течение последующего года, тогда как из группы крыс с моделью дивертикулеза 3 животных погибло через полгода наблюдений.

Испытания подтвердили достижение цели изобретения - снижение травматичности лечения.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается разработки способов лечения дивертикулеза кишечника. Моделируют патологию путем создания локального разрежения стенки толстой кишки. Затем через 1-1,5 часа внутривенно вводят инфликсимаб в дозе 15-20 мг/кг, после чего через 30-60 минут вводят серотонин в дозе 0,1-0,15 мг/кг. Способ обеспечивает эффективное лечение дивертикулеза в услових создания указанной модели при снижении травматичности лечения заболевания. 3 пр.

Способ лечения дивертикулеза в эксперименте путем вмешательства, отличающийся тем, что создают локальное разрежение стенки толстой кишки и через 1-1,5 ч внутривенно вводят инфликсимаб в дозе 15-20 мг/кг, после чего через 30-60 мин вводят серотонин в дозе 0,1-0,15 мг/кг.