СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ СИСТЕМНОГО ФИБРОЗА Российский патент 2009 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине и может быть применено при моделирования системного фиброза.

Известен способ моделирования атеросклероза с сопутствующей жировой дистрофией печени, принятый за аналог (1 - Н.Н.Аничков, С.С.Холатов. Неврогенный атеросклероз и липидоз аорты. - В кн.: С.В.Андреев (ред). Моделирование заболеваний. М., Медицина, 1972. - 336 с.).

Известен способ моделирования жировой дистрофии печени путем введения четыреххлористого углерода - прототип (2 - БМЭ под ред. Б.В.Петровского. М., Медицина, 1977, т.5, стр.332).

Однако в известном способе-прототипе невозможно воспроизвести системный фиброз.

Целью изобретения является повышение точности воспроизведения системного фиброза.

Технический результат достигается тем, что экспериментальным животным 4-6-кратно с перерывами в 1 неделю вводят четыреххлористый углерод в вазелиновом масле в соотношении 1:1 в объеме 0,3-0,4 мл подкожно с предварительным за 15-20 мин 4-6-кратным введением купренила в дозе 0,1-0,2 мг/кг.

Способ реализуется следующим образом.

Экспериментальным животным (крысам линии Вистар) весом 220-250 г 4-6-кратно с перерывами в 1 неделю вводят четыреххлористый углерод в вазелиновом масле в соотношении 1:1 в объеме 0,3-0,4 мл подкожно с предварительным за 15-20 мин 4-6-кратным введением купренила в дозе 0,1-0,2 мг/кг.

Через 3 месяца от начала введения животные худеют, шерстка приобретает тусклый вид, редеет, подвижность и пищевая активность снижены. В условиях нембуталового наркоза производят лапаротомию и торакотомию. Отбирают биоптаты сердца, легкого, печени, нижней трети пищевода, поджелудочной железы, почек.

Печень. При обзорной окраске гематоксилином и эозином и по Ван-Гизону (на коллаген) балочная структура печени не сохранена. Обнаруживаются соединительно-тканные тяжи, протянувшиеся от триад к центральной вене, перемоделирующие печеночную дольку. Часть гепатоцитов находится в состоянии дистрофии. В отдельных клетках содержатся вакуоли. Цитоплазма оптически прозрачна; ядра гепатоцитов либо уплотнены и уменьшены в размере, либо увеличены. Имеются двуядерные гепатоциты.

Центральные вены печени умеренно расширены и содержат форменные элементы крови. Вокруг вен наблюдается скопление стромальных клеток и умеренно расширенные синусоиды. Структурные элементы триад не изменены. Ядерная область эндотелиальных клеток вен и артерий триад выбухает в просвет сосуда, что свидетельствует об активации эндотелиоцитов. В области умеренно расширенных центральных вен находятся дилатированные синусоиды с купферовскими клетками. Купферовские клетки встречаются в умеренном количестве. Обнаруживаются участки полнокровия печени с наличием эритроцитов в синусоидах. Отмечается гиперплазия эпителия каналикул.

Пищевод. При окраске гематоксилином и эозином ороговевающий эпителий пищевода без особенностей. В подслизистом слое отмечается массивное развитие грубоволокнистой соединительной ткани. Сосуды подслизистого слоя обычного строения. Вены дилатированы, кровенаполнены.

Мышечная ткань обычного строения. В наружном продольном мышечном слое содержится грубоволокнистая соединительная ткань. Коллагеновые волокна замещают гладкомышечную ткань наружного мышечного слоя.

Адвентициальный слой узкий, сохранный. В адвентициальном слое представлен нервный ствол с плотной упаковкой нервных волокон. Соединительно-тканные клетки расположены по периферии нервного ствола. По ходу нервного ствола встречаются отдельные утолщенные участки, в которых располагаются структуры, аналогичные нервным волокнам, и многочисленные клетки нейронального типа с базофильной цитоплазмой и крупным пузырьковидным асимметрично расположенным ядром. Расположенные в периневрии сосуды близко прилежат к нервному стволу. В периневрии находятся фибробласты. Вблизи периневрия содержатся сосуды венозного типа с эритроцитами.

Пищевод при специальной окраске на коллагеновые волокна. Эпителий интенсивно окрашен. Коллагенизация подслизистого слоя выражена интенсивно. Большое количество соединительно-тканных волокон проникает в мышечный слой до циркулярного слоя с небольшим проникновением в него.

Из подслизистого слоя волокна грубой волокнистой соединительной ткани проникают между мышечными пучками в эпителиальный слой. Отдельные гладкомышечные клетки и их группы окружены тонким ободком соединительной ткани.

Из адвентициального слоя волокна соединительной ткани проникают в наружный мышечный слой, отделяя пучки гладкомышечных клеток и отдельные гладкомышечные клетки. В перивенулярном пространстве адвентициальной оболочки находятся мощные пучки соединительной ткани. Артерии с утолщенной стенкой. В периартериальной ткани отмечаются грубые пучки соединительно-тканных волокон. В периадвентициальном пространстве, где располагается рыхлая соединительная ткань, вокруг сосудов нет выраженного развития соединительной ткани.

Сердце. При окраске гематоксилином и эозином мышечные клетки преимущественно нормального строения, в отдельных кардиомиоцитах в околоядерной области выявляется зернистая дистрофия. Поперечная исчерченность кардиомиоцитов сохранена. Сосуды капиллярного типа, несколько расширенные, содержат эритроциты.

При окраске по Ван-Гизону в отдельных участках миокарда преимущественно по ходу капилляров и прекапилляров расположены прослойки соединительной ткани. Обнаруживаются участки окрашенной перисарколеммальной ткани за счет содержащихся коллагеновых волокон. В мелких сосудах в дупликатурах базальной мембраны находятся адвентициальные клетки. Адвентициальные клетки (перициты) по ходу сосудов дифференцируются в фибробласты с последующим образованием коллагеновых волокон.

В периваскулярной ткани вокруг крупных артерий и вен наблюдается разрастание соединительной ткани. В периартериальных областях разрастание соединительной ткани более выражено, чем в перивенулярных. Вокруг мелких сосудов коллагеновых волокон немного, вены расширены, кровенаполнены. Вокруг артерий находится много коллагеновых волокон, проникающих в мышечные пучки.

Легкое. При окраске гематоксилином и эозином отмечается расширение альвеол; в областях нерасширенных альвеол отмечается утолщение межальвеолярных перегородок за счет развития соединительной ткани и инфильтрации лимфоидными клетками. В периброхиальном и в периартериальном пространствах также отмечается инфильтрация лимфоидными клетками и развитие грубоволкнистой соединительной ткани.

При окраске по Ван-Гизону выявляется умеренное развитие соединительной ткани в периброхиальном пространстве: в крупных бронхах отмечается мощное развитие соединительной ткани в слизистой, мышечной и интенсивно окрашивающемся адвентициальном слое; стенка небольших терминальных бронхов окрашивается на коллаген незначительно. В инфильтрат перибронхиального пространства проникают интенсивно окрашенные коллагеновые волокна. В стенке бронха под базальной мембраной находятся тяжи соединительно-тканных волокон, от которых в эпителий проникают короткие пучки. Мышечный слой стенки бронха окрашен незначительно. В периартериальном пространстве наблюдается выраженное развитие коллагеновых волокон.

Почка. При окраске гематоксилином и эозином в мозговом слое почки канальцы расширены в разной степени. Нисходящий и восходящий отделы петли Генле также расширены. Эпителий канальцев уплощен из-за их растяжения; эпителиоцитов нормального строения немного. Мелкие сосуды содержат эритроциты. Эндотелий выбухает в просвет артерии вследствие сокращения ее стенки. Уплощенный эндотелий этих сосудов встречается редко.

При специальной окраске на коллагеновые волокна выявляются сохранные клубочки с отслоенной от клубочков капсулой. Капсула тонкая, коллагенизированная. Вокруг канальцев обнаружены коллагеновые волокна. Вокруг вен находится коллагенсодержащая ткань. Периваскулярная область крупных артерий содержит большое количество коллагеновых волокон. Наибольшее развитие соединительной ткани наблюдается в периваскулярной области.

Поджелудочная железа. При окрашивании гематоксилином и эозином паренхима поджелудочной железы коллагенизирована, в перипанкреатической соединительной ткани отмечаются группы лимфоцитов с плотноокрашенными ядрами. Тучные клетки содержат эозинофильные гранулы. В жировой ткани представлены фибробласты в различных функциональных состояниях. Капилляры не расширены. Встречаются полиморфно-клеточные инфильтраты с фибробластами.

В лимфатическом узле области перипанкреатического пространства отмечаются лимфоциты с плотной цитоплазмой и крупным ядром, расположенным центрально или эксцентрично. Встречаются дендритные клетки обычного строения, с несколькими отростками. Ядро дендритной клетки содержит среднедисперсный хроматин, расположенный по периферии клетки. К дендритным клеткам примыкают так называемые темные клетки.

В ткани железы обнаруживаются лимфатические сосуды, вокруг которых расположены волокна соединительной ткани, обрамляющие контур этих образований. Внутри системы протоков обнаруживаются лимфоциты.

Способ подтверждается следующими примерами.

Пример 1.

Крысе линии Вистар весом 220 г 4-кратно с перерывами в 1 неделю вводят четыреххлористый углерод в вазелиновом масле в соотношении 1:1 в объеме 0,3 мл подкожно с предварительным, за 15 мин, 4-кратным введением купренила в дозе 0,1 мг/кг.

Через 3 месяца от начала введения крыса худеет, шерстка приобретает тусклый вид, редеет, подвижность и пищевая активность снижены. В условиях нембуталового наркоза (40 мг/кг) производят лапаротомию и торакотомию. Отбирают биоптаты сердца, легкого, печени, нижней трети пищевода, поджелудочной железы, почек.

Печень. При обзорной окраске гематоксилином и эозином балочная структура печени не сохранена. Обнаруживаются соединительно-тканные тяжи, протянувшиеся от триад к центральной вене, перемоделирующие печеночную дольку. Часть гепатоцитов находится в состоянии дистрофии. Цитоплазма оптически прозрачна; ядра гепатоцитов уплотнены и уменьшены в размере. Имеются двуядерные гепатоциты.

Центральные вены печени умеренно расширены. Вокруг вен наблюдается скопление стромальных клеток и умеренно расширенные синусоиды. Структурные элементы триад не изменены. Ядерная область эндотелиальных клеток вен и артерий триад выбухает в просвет сосуда. В области умеренно расширенных центральных вен находятся дилатированные синусоиды с купферовскими клетками. Купферовские клетки встречаются в умеренном количестве. Обнаруживаются участки полнокровия печени с наличием эритроцитов в синусоидах. Отмечается гиперплазия эпителия каналикул.

При окрашивании по Ван-Гизону наблюдается окаймление сосудов центральных вен коллагенсодержащими структурами. В отдельных областях соединительно-тканные волокна окаймляют группы гепатоцитов и отдельные гепатоциты. Грубые коллагеновые волокна располагаются вокруг сосудисто-нервных пучков. Из периваскулярного пространства узкие тяжи соединительно-тканных волокон проникают в паренхиму печени. Вблизи отдельных резко расширенных синусоидов располагаются пучки коллагеновых волокон, которые прослеживаются и в пространстве Диссе.

Пищевод. При окраске гематоксилином и эозином ороговевающий эпителий пищевода без особенностей. В подслизистом слое отмечается массивное развитие грубоволокнистой соединительной ткани. Сосуды подслизистого слоя обычного строения. Вены дилатированы, кровенаполнены.

Мышечная ткань обычного строения. В наружном продольном мышечном слое содержится грубоволокнистая соединительная ткань. Коллагеновые волокна замещают гладкомышечную ткань наружного мышечного слоя.

Адвентициальный слой узкий, сохранный. В адвентициальном слое представлен нервный ствол с плотной упаковкой нервных волокон. Соединительно-тканные клетки расположены по периферии нервного ствола. По ходу нервного ствола встречаются отдельные утолщенные участки, в которых располагаются структуры, аналогичные нервным волокнам, и многочисленные клетки нейронального типа с базофильной цитоплазмой и крупным пузырьковидным асимметрично расположенным ядром. Расположенные в периневрии сосуды близко прилежат к нервному стволу. В периневрии находятся фибробласты. Вблизи периневрия содержатся сосуды венозного типа с эритроцитами.

Пищевод при специальной окраске на коллагеновые волокна. Эпителий интенсивно окрашен. Коллагенизация подслизистого слоя выражена интенсивно. Большое количество соединительно-тканных волокон проникает в мышечный слой до циркулярного слоя с небольшим проникновением в него.

Из подслизистого слоя волокна грубой волокнистой соединительной ткани проникают между мышечными пучками в эпителиальный слой. Отдельные гладкомышечные клетки и их группы окружены тонким ободком соединительной ткани.

Из адвентициального слоя волокна соединительной ткани проникают в наружный мышечный слой, отделяя пучки гладкомышечных клеток и отдельные гладкомышечные клетки. В перивенулярном пространстве адвентициальной оболочки находятся мощные пучки соединительной ткани. Артерии с утолщенной стенкой. В периартериальной ткани отмечаются грубые пучки соединительно-тканных волокон. В периадвентициальном пространстве, где располагается рыхлая соединительная ткань, вокруг сосудов нет выраженного развития соединительной ткани.

Сердце. При окраске гематоксилином и эозином мышечные клетки преимущественно нормального строения, в отдельных кардиомиоцитах в околоядерной области выявляется зернистая дистрофия. Поперечная исчерченность кардиомиоцитов сохранена. Сосуды капиллярного типа, несколько расширенные, содержат эритроциты.

При окраске по Ван-Гизону в отдельных участках миокарда преимущественно по ходу капилляров и прекапилляров расположены прослойки соединительной ткани. Обнаруживаются участки окрашенной перисарколеммальной ткани за счет содержащихся коллагеновых волокон. В мелких сосудах в дупликатурах базальной мембраны находятся адвентициальные клетки. Адвентициальные клетки (перициты) по ходу сосудов дифференцируются в фибробласты с последующим образованием коллагеновых волокон.

В периваскулярной ткани вокруг крупных артерий и вен наблюдается разрастание соединительной ткани. В периартериальных областях разрастание соединительной ткани более выражено, чем в перивенулярных. Вокруг мелких сосудов коллагеновых волокон немного, вены расширены, кровенаполнены. Вокруг артерий находится много коллагеновых волокон, проникающих в мышечные пучки.

Легкое. При окраске гематоксилином и эозином отмечается расширение альвеол; в областях нерасширенных альвеол отмечается утолщение межальвеолярных перегородок за счет развития соединительной ткани и инфильтрации лимфоидными клетками. В периброхиальном и в периартериальном пространствах также отмечается инфильтрация лимфоидными клетками и развитие грубоволкнистой соединительной ткани.

При окраске по Ван-Гизону выявляется умеренное развитие соединительной ткани в периброхиальном пространстве: в крупных бронхах отмечается мощное развитие соединительной ткани в слизистой, мышечной и интенсивно окрашивающемся адвентициальном слое. В инфильтрат перибронхиального пространства проникают интенсивно окрашенные коллагеновые волокна. В стенке бронха под базальной мембраной находятся тяжи соединительно-тканных волокон, от которых в эпителий проникают короткие пучки. Мышечный слой стенки бронха окрашен незначительно. В периартериальном пространстве наблюдается выраженное развитие коллагеновых волокон.

Почка. При окраске гематоксилином и эозином в мозговом слое почки канальцы расширены в разной степени. Нисходящий и восходящий отделы петли Генле также расширены. Эпителий канальцев уплощен из-за их растяжения; эпителиоцитов нормального строения немного. Мелкие сосуды содержат эритроциты. Эндотелий выбухает в просвет артерии вследствие сокращения ее стенки.

При специальной окраске на коллагеновые волокна выявляются сохранные клубочки с отслоенной от клубочков капсулой. Капсула тонкая, коллагенизированная. Вокруг канальцев обнаружены коллагеновые волокна. Вокруг вен находится коллагенсодержащая ткань. Периваскулярная область крупных артерий содержит большое количество коллагеновых волокон. Наибольшее развитие соединительной ткани наблюдается в периваскулярной области.

Поджелудочная железа. При окрашивании гематоксилином и эозином паренхима поджелудочной железы коллагенизирована, в перипанкреатической соединительной ткани отмечаются группы лимфоцитов с плотноокрашенными ядрами. Тучные клетки содержат эозинофильные гранулы. В жировой ткани представлены фибробласты в различных функциональных состояниях. Капилляры не расширены. Встречаются полиморфно-клеточные инфильтраты с фибробластами.

В лимфатическом узле области перипанкреатического пространства отмечаются лимфоциты с плотной цитоплазмой и крупным ядром, расположенным центрально или эксцентрично. Встречаются дендритные клетки обычного строения, с несколькими отростками. Ядро дендритной клетки содержит среднедисперсный хроматин, расположенный по периферии клетки. К дендритным клеткам примыкают так называемые темные клетки.

В ткани железы обнаруживаются лимфатические сосуды, вокруг которых расположены волокна соединительной ткани, обрамляющие контур этих образований. Внутри системы протоков обнаруживаются лимфоциты.

Пример 2.

Белой крысе линии Вистар весом 250 г 6-кратно с перерывами в 1 неделю вводят четыреххлористый углерод в вазелиновом масле в соотношении 1:1 в объеме 0,4 мл подкожно с предварительным, за 20 мин, 6-кратным введением купренила в дозе 0,02 мг/кг.

Через 3 месяца от начала введения крыса теряет 10% веса, шерстка тусклая, редкая, крыса неподвижно сидит в клетке, слобо реагирует на пищевой раздражитель. В условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (40 мг/кг) производят лапаротомию и торакотомию. Отбирают биоптаты сердца, легкого, печени, нижней трети пищевода, поджелудочной железы, почек.

Печень. При обзорной окраске гематоксилином и эозином балочная структура печени не сохранена. Обнаруживаются соединительно-тканные тяжи, протянувшиеся от триад к центральной вене, перемоделирующие печеночную дольку. Часть гепатоцитов находится в состоянии дистрофии. В отдельных клетках содержатся вакуоли. Цитоплазма оптически прозрачна; ядра гепатоцитов увеличены. Имеются двуядерные гепатоциты.

Центральные вены печени расширены и содержат эритроциты. Вокруг вен наблюдается скопление стромальных клеток и соединительно-тканных волокон. Структурные элементы триад не изменены. Ядерная область эндотелиальных клеток вен и артерий триад выбухает в просвет сосуда. В области умеренно расширенных центральных вен находятся дилатированные синусоиды с купферовскими клетками. Обнаруживаются участки полнокровия печени с наличием эритроцитов в синусоидах.

При окрашивании по Ван-Гизону наблюдается окаймление сосудов центральных вен коллагенсодержащими структурами. В отдельных областях соединительно-тканные волокна окаймляют группы гепатоцитов и отдельные гепатоциты. Грубые коллагеновые волокна располагаются вокруг сосудисто-нервных пучков. Из периваскулярного пространства узкие тяжи соединительно-тканных волокон проникают в паренхиму печени. Вблизи отдельных резко расширенных синусоидов располагаются пучки коллагеновых волокон, которые прослеживаются и в пространстве Диссе.

Пищевод. При окраске гематоксилином и эозином ороговевающий эпителий пищевода без особенностей. В подслизистом слое отмечается массивное развитие грубоволокнистой соединительной ткани. Сосуды подслизистого слоя обычного строения. Вены дилатированы, кровенаполнены.

В наружном продольном мышечном слое содержится грубоволокнистая соединительная ткань. Коллагеновые волокна замещают гладкомышечную ткань наружного мышечного слоя.

Адвентициальный слой узкий, сохранный. В адвентициальном слое представлен нервный ствол с плотной упаковкой нервных волокон. Соединительно-тканные клетки расположены по периферии нервного ствола. По ходу нервного ствола встречаются утолщенные участки соединительной ткани.

Пищевод при специальной окраске на коллагеновые волокна. Эпителий интенсивно окрашен. Коллагенизация подслизистого слоя выражена интенсивно. Большое количество соединительно-тканных волокон проникает в мышечный слой до циркулярного слоя с небольшим проникновением в него. Из подслизистого слоя волокна грубой волокнистой соединительной ткани проникают между мышечными пучками в эпителиальный слой. Отдельные гладкомышечные клетки и их группы окружены тонким ободком соединительной ткани.

Из адвентициального слоя волокна соединительной ткани проникают в наружный мышечный слой, отделяя пучки гладкомышечных клеток и отдельные гладкомышечные клетки. В перивенулярном пространстве адвентициальной оболочки находятся мощные пучки соединительной ткани. Артерии с утолщенной стенкой. В периартериальной ткани отмечаются грубые пучки соединительно-тканных волокон. В периадвентициальном пространстве, где располагается рыхлая соединительная ткань, вокруг сосудов нет выраженного развития соединительной ткани.

Сердце. При окраске гематоксилином и эозином мышечные клетки преимущественно нормального строения, в отдельных кардиомиоцитах в околоядерной области выявляется зернистая дистрофия. Поперечная исчерченность кардиомиоцитов сохранена. Сосуды капиллярного типа, несколько расширенные, содержат эритроциты.

При окраске по Ван-Гизону в отдельных участках миокарда преимущественно по ходу капилляров и прекапилляров расположены прослойки соединительной ткани. Обнаруживаются участки окрашенной перисарколеммальной ткани за счет содержащихся коллагеновых волокон. В мелких сосудах в дупликатурах базальной мембраны находятся адвентициальные клетки. Адвентициальные клетки (перициты) по ходу сосудов дифференцируются в фибробласты с последующим образованием коллагеновых волокон.

В периваскулярной ткани вокруг крупных артерий и вен наблюдается разрастание соединительной ткани. В периартериальных областях разрастание соединительной ткани более выражено, чем в перивенулярных. Вокруг мелких сосудов коллагеновых волокон немного, вены расширены, кровенаполнены. Вокруг артерий находится много коллагеновых волокон, проникающих в мышечные пучки.

Легкое. При окраске гематоксилином и эозином отмечается расширение альвеол; в областях нерасширенных альвеол отмечается утолщение межальвеолярных перегородок за счет развития соединительной ткани и инфильтрации лимфоидными клетками. В периброхиальном и в периартериальном пространствах также отмечается инфильтрация лимфоидными клетками и развитие грубоволкнистой соединительной ткани.

При окраске по Ван-Гизону выявляется умеренное развитие соединительной ткани в периброхиальном пространстве: в крупных бронхах отмечается мощное развитие соединительной ткани в слизистой, мышечной и интенсивно окрашивающемся адвентициальном слое; стенка небольших терминальных бронхов окрашивается на коллаген незначительно. В стенке бронха под базальной мембраной находятся тяжи соединительно-тканных волокон, от которых в эпителий проникают короткие пучки. Мышечный слой стенки бронха окрашен незначительно. В периартериальном пространстве наблюдается выраженное развитие коллагеновых волокон.

Почка. При окраске гематоксилином и эозином в мозговом слое почки канальцы расширены в разной степени. Нисходящий и восходящий отделы петли Генле также расширены. Эпителий канальцев уплощен вследствие их растяжения; эпителиоцитов нормального строения немного. Мелкие сосуды содержат эритроциты. При специальной окраске на коллагеновые волокна выявляются сохранные клубочки с отслоенной от клубочков капсулой. Капсула тонкая, коллагенизированная. Вокруг канальцев обнаружены коллагеновые волокна. Вокруг вен находится коллагенсодержащая ткань. Периваскулярная область крупных артерий содержит большое количество коллагеновых волокон. Наибольшее развитие соединительной ткани наблюдается в периваскулярной области.

Поджелудочная железа. При окрашивании гематоксилином и эозином паренхима поджелудочной железы коллагенизирована, в перипанкреатической соединительной ткани отмечаются группы лимфоцитов с плотноокрашенными ядрами. Тучные клетки содержат эозинофильные гранулы. В жировой ткани представлены фибробласты в различных функциональных состояниях. Капилляры не расширены. Встречаются полиморфно-клеточные инфильтраты с фибробластами.

В ткани железы обнаруживаются лимфатические сосуды, вокруг которых расположены волокна соединительной ткани, обрамляющие контур этих образований. Внутри системы протоков обнаруживаются лимфоциты.

Нервный ствол. При окраске гематоксилином и эозином нервный тяж с клетками перинервия и извитыми нервными волокнами. В периневрии находятся коллагеновые волокна и расширенный кровеносный сосуд с эритроцитами.

Нервный ствол при окраске по Ван-Гизону окружен соединительно-тканным футляром. Выделяются пучки нервных волокон, окруженных тонкими волокнами соединительной ткани вследствие возможной активации фибробластов. Вена окружена ободком избыточно развитой соединительной ткани.

Пример 3

Крысе линии Вистар весом 240 г 5-кратно с перерывами в 1 неделю вводят четыреххлористый углерод в вазелиновом масле в соотношении 1:1 в объеме 0,35 мл подкожно с предварительным, за 18 мин, 5-кратным введением купренила в дозе 0,15 мг/кг.

Через 3 месяца от начала введения крыса вялая, адинамичная, шерстка редкая с участками алопеции, локомоторная ативность снижена. В условиях нембуталового наркоза производят лапаротомию и торакотомию. Отбирают биоптаты сердца, легкого, печени, нижней трети пищевода, поджелудочной железы, почек.

Печень. При обзорной окраске гематоксилином и эозином балочная структура печени не сохранена. Обнаруживаются соединительно-тканные тяжи, протянувшиеся от триад к центральной вене. В отдельных клетках содержатся вакуоли. Цитоплазма оптически прозрачна; ядра гепатоцитов уплотнены и уменьшены.

Центральные вены печени умеренно расширены и содержат форменные элементы крови. Вокруг вен наблюдается скопление стромальных клеток и умеренно расширенные синусоиды. Структурные элементы триад не изменены. Ядерная область эндотелиальных клеток вен и артерий триад выбухает в просвет сосуда, что свидетельствует об активации эндотелиоцитов. В области умеренно расширенных центральных вен находятся дилатированные синусоиды с купферовскими клетками. Купферовские клетки встречаются в умеренном количестве. Обнаруживаются участки полнокровия печени с наличием эритроцитов в синусоидах.

При окрашивании по Ван-Гизону наблюдается окаймление сосудов центральных вен коллагенсодержащими структурами. В отдельных областях соединительно-тканные волокна окаймляют группы гепатоцитов и отдельные гепатоциты. Грубые коллагеновые волокна располагаются вокруг сосудисто-нервных пучков. Из периваскулярного пространства узкие тяжи соединительно-тканных волокон проникают в паренхиму печени. Вблизи отдельных резко расширенных синусоидов располагаются пучки коллагеновых волокон.

Пищевод. При окраске гематоксилином и эозином в подслизистом слое отмечается массивное развитие грубоволокнистой соединительной ткани. Сосуды подслизистого слоя обычного строения. Вены дилатированы, кровенаполнены.

Мышечная ткань обычного строения. В наружном продольном мышечном слое содержится грубоволокнистая соединительная ткань. Коллагеновые волокна замещают гладкомышечную ткань наружного мышечного слоя.

Адвентициальный слой узкий, сохранный. В адвентициальном слое представлен нервный ствол с плотной упаковкой нервных волокон. Соединительно-тканные клетки расположены по периферии нервного ствола.

Пищевод при специальной окраске на коллагеновые волокна. Эпителий интенсивно окрашен. Коллагенизация под слизистого слоя выражена интенсивно. Большое количество соединительно-тканных волокон проникает в мышечный слой до циркулярного слоя с небольшим проникновением в него.

Из подслизистого слоя волокна грубой волокнистой соединительной ткани проникают между мышечными пучками в эпителиальный слой. Отдельные гладкомышечные клетки и их группы окружены тонким ободком соединительной ткани.

Из адвентициального слоя волокна соединительной ткани проникают в наружный мышечный слой, раздвигая пучки гладкомышечных клеток и отдельные гладкомышечные клетки. В перивенулярном пространстве адвентициальной оболочки находятся мощные пучки соединительной ткани. Артерии с утолщенной стенкой. В периартериальной ткани отмечаются грубые пучки соединительно-тканных волокон. В периадвентициальном пространстве, где располагается рыхлая соединительная ткань, вокруг сосудов нет выраженного развития соединительной ткани.

Сердце. При окраске гематоксилином и эозином мышечные клетки преимущественно нормального строения, в отдельных кардиомиоцитах в околоядерной области выявляется зернистая дистрофия. Поперечная исчерченность кардиомиоцитов сохранена. Сосуды капиллярного типа, несколько расширенные, содержат эритроциты.

При окраске по Ван-Гизону в отдельных участках миокарда преимущественно по ходу капилляров и прекапилляров расположены прослойки соединительной ткани. Обнаруживаются участки окрашенной перисарколеммальной ткани за счет содержащихся коллагеновых волокон. В мелких сосудах в дупликатурах базальной мембраны находятся адвентициальные клетки. Адвентициальные клетки (перициты) по ходу сосудов дифференцируются в фибробласты с последующим образованием коллагеновых волокон.

В периваскулярной ткани вокруг крупных артерий и вен наблюдается разрастание соединительной ткани. В периартериальных областях разрастание соединительной ткани более выражено, чем в перивенулярных. Вокруг мелких сосудов коллагеновых волокон немного, вены расширены, кровенаполнены. Вокруг артерий находится много коллагеновых волокон, проникающих в мышечные пучки.

Легкое. При окраске гематоксилином и эозином отмечается расширение альвеол; в областях нерасширенных альвеол отмечается утолщение межальвеолярных перегородок за счет развития соединительной ткани и инфильтрации лимфоидными клетками. В периброхиальном и в периартериальном пространствах также отмечается инфильтрация лимфоидными клетками и развитие грубоволкнистой соединительной ткани.

При окраске по Ван-Гизону выявляется умеренное развитие соединительной ткани в периброхиальном пространстве: в крупных бронхах отмечается мощное развитие соединительной ткани в слизистой, мышечной и интенсивно окрашивающемся адвентициальном слое; стенка небольших терминальных бронхов окрашивается на коллаген незначительно. В инфильтрат перибронхиального пространства проникают интенсивно окрашенные коллагеновые волокна. В стенке бронха под базальной мембраной находятся тяжи соединительно-тканных волокон, от которых в эпителий проникают короткие пучки. Мышечный слой стенки бронха окрашен незначительно. В периартериальном пространстве наблюдается выраженное развитие коллагеновых волокон.

Почка. При окраске гематоксилином и эозином в мозговом слое почки канальцы расширены в разной степени. Нисходящий и восходящий отделы петли Генле также расширены. Эпителий канальцев уплощен из-за их растяжения; эпителиоцитов нормального строения немного. Мелкие сосуды содержат эритроциты. Эндотелий выбухает в просвет артерии вследствие сокращения ее стенки. Уплощенный эндотелий этих сосудов встречается редко.

При специальной окраске на коллагеновые волокна выявляются сохранные клубочки с отслоенной от клубочков капсулой. Капсула тонкая, коллагенизированная. Вокруг канальцев обнаружены коллагеновые волокна. Вокруг вен находится коллагенсодержащая ткань. Периваскулярная область крупных артерий содержит большое количество коллагеновых волокон. Наибольшее развитие соединительной ткани наблюдается в периваскулярной области.

Поджелудочная железа. При окрашивании гематоксилином и эозином паренхима поджелудочной железы коллагенизирована, в перипанкреатической соединительной ткани отмечаются группы лимфоцитов с плотноокрашенными ядрами. Тучные клетки содержат эозинофильные гранулы. В жировой ткани представлены фибробласты в различных функциональных состояниях. Капилляры не расширены. Встречаются полиморфно-клеточные инфильтраты с фибробластами.

В лимфатическом узле области перипанкреатического пространства отмечаются лимфоциты с плотной цитоплазмой и крупным ядром, расположенным центрально или эксцентрично. Встречаются дендритные клетки обычного строения, с несколькими отростками. Ядро дендритной клетки содержит среднедисперсный хроматин, расположенный по периферии клетки. К дендритным клеткам примыкают так называемые темные клетки.

В ткани железы обнаруживаются лимфатические сосуды, вокруг которых расположены волокна соединительной ткани, обрамляющие контур этих образований. Внутри системы протоков обнаруживаются лимфоциты.

Проведено моделирование системного фиброза у 15 крыс. Морфологическое исследование подтвердило достижение цели изобретения - повышение точности моделирования системного фиброза.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования системного фиброза. Для этого экспериментальному животному (крысе линии Вистар) 4-6-кратно с перерывами в 1 неделю вводят смесь четыреххлористого углерода в вазелиновом масле в соотношении 1:1 в объеме 0,3-0,4 мл подкожно. Предварительно за 15-20 мин до каждого введения смеси вводят купренил в дозе 0,1-0,2 мг/кг. Способ обеспечивает повышение точности воспроизведения системного фиброза.

Способ моделирования системного фиброза, включающий введение фармакологических агентов, отличающийся тем, что 4-6-кратно с перерывами в 1 неделю вводят четыреххлористый углерод в вазелиновом масле в соотношении 1:1 в объеме 0,3-0,4 мл подкожно с предварительным, за 15-20 мин, 4-6-кратным введением купренила в дозе 0,1-0,2 мг/кг.