СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИНГЕННОГО ПЕРЕВИВНОГО МИЕЛОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА У МЫШЕЙ ЛИНИИ AKR/JY Российский патент 2012 года по МПК G01N33/48 G01N33/49 

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной гематологии, и может быть использовано в научно-исследовательской работе для оценки развития лейкозного процесса у мышей линии AKR/JY способом перевивки им клеток селезенки от мышей с миелобластным лейкозом. В настоящее время для диагностики лейкозов применяют морфоиммуногистохимические критерии [WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. - Ed.Steven H.Swerdlow, Elias Campo, Nancy Lee Harris [et al.]. - International Agency for Research of Cancer, Lyon, 2008. - 439 p.; Клиническая онкогематология: руководство для врачей. Под ред. М.А.Волковой. - 2-е изд., перераб., доп. - М.: Медицина, 2007. - 1120 с. Гематология: руководство для врачей. Под ред. Н.Н.Мамаева, С.И.Рябова. - СПб.: СпецЛит, 2008. - 543 с.].

Основными недостатками используемых методов являются трудоемкость и высокая затратность. Полноценная диагностика опухолевого процесса у мышей линии AKR/JY с сингенным перевивным миелобластным лейкозом возможна при комплексной оценке заболевания с включением биохимических, морфопатофизиологических параметров и органных нарушений у подопытных животных.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности и упрощение способа диагностики сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.

Поставленная задача решается тем, что через 10-12 суток после введения в брюшную полость здоровым мышам линии AKR/JY взвеси лейкозных селезеночных клеток определяют уровень церулоплазмина в плазме крови, массу печени, содержание в ней миелобластов и по этим параметрам диагностируют развитие перевивного миелобластного лейкоза.

Известен способ диагностики перевивного лейкоза La у мышей линии C57B 1/6jG путем определения антиоксидантного комплекса витаминов А, Е и С [Кувшинников В.А. Применение антиоксидантного комплекса витаминов А, Е и С при лейкозе мышей / В.А.Кувшинников, Т.С.Морозкина, А.И.Свирновский [и др.] // Гематология и трансфузиология. - 1989. - №8. - С.23-28], взятый нами за прототип. Этот способ является наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению.

Недостатками известного способа являются низкая информативность, трудоемкость методов и затратность. В частности:

а) отсутствуют данные о массе печени и количестве в ней бластных элементов миелоидного ряда;

б) известный способ требует проведения большого количества тестов и расходных материалов.

Предлагаемый способ по сравнению с известным имеет следующие преимущества:

а) проведенные тесты специфичны для диагностики сингенного перевиваемого миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY;

б) проще известного способа в методическом отношении и более экономичен.

Сравнительный анализ используемых критериев при оценке заявляемого и известного способов диагностики перевивных лейкозов представлен в таблице.

Способы диагностики перевивных лейкозов у мышей Вариант лейкоза Известный способ Лейкоз La Заявленный способ
Сингенный перевивной миелобластный лейкоз Исследуемые тесты Супероксиддисмутаза, глутотионредуктаза, глутотион-SH, токоферол, убихинон, ретинол, аскорбиновая, дигидроаскорбиновая и дикетоглютаровая кислоты, уровень белка, малоновый диальдегид (в селезенке и эритроцитах) Церулоплазмин (в плазме крови), количество миелобластов в печени Масса органов Не определяется Определение массы печени

В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предлагаемого изобретения.

Заявляемое изобретение разработано в лаборатории патоморфологии крови ФГУ «КНИИГиПК ФМБА России» в соответствии с планом НИР.

Опыты проведены на 23 мышах линии AKR/JY обоего пола массой 24,6±2,4 г в возрасте 85±7,4 суток без признаков лейкоза. Перевивку лейкозных клеток от мышей линии AKR/JY с миелобластным лейкозом начинали с введения в наркоз мыши-донора, лапаротомии, удаления селезенки, ее измельчения, фильтрации фрагментов и приготовления 1% -процентной суспензии лейкозных клеток на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 10-12 суток после внутрибрюшинного введения 0,5 мл 1%-ной суспензии лейкозных клеток и развития сингенного перевивного миелобластного лейкоза животных забивали декапитацией, определяли массу печени 2,1±0,4 г, подсчитывали количество бластных элементов миелоидного ряда 30,2±5,2% в мазках-отпечатках печени после их окрашивания азурэозином с использованием метода световой микроскопии. В плазме крови определяли содержание церулоплазмина 216,7±64,5 мг/л по ферментативной реакции с парафенилендиамином по методу Равина [Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медпресс-информ, 2004. - 920 с.] и по этим показателям диагностировали развитие сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY. B контрольной группе у мышей AKR/JY без признаков опухолевой пролиферации уровень церулоплазмина не превышал 152,1 мг/мл.

Заявляемое изобретение обладает новизной, существенными отличиями, дает при использовании положительный эффект, заключающийся в повышении точности и упрощении способа диагностики развития сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.

Пример конкретного выполнения

Мышам линии AKR/JY, возраст 75 суток, вводили внутрибрюшинно 0,5 мл 1% суспензии лейкозных клеток селезенки на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 10 суток животных выводили из опыта декапитацией под наркозом, вскрывали, извлекали и взвешивали печень (масса 1,8 г). В мазках-отпечатках печени подсчитывали содержание миелобластов (27%) и определяли уровень церулоплазмина в плазме крови (258,4 мг/л). На основании этих показателей диагностировали развитие сингенного перевивного миелобластного лейкоза у подопытных животных.

Предлагаемый способ более прост в реализации, менее затратный и дает стабильный положительный результат при диагностике сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY. Данная технология может быть использована в учреждениях медико-биологического профиля для диагностики миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY и проведения мониторинга за течением опухолевого процесса.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной гематологии. Способ диагностики сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY включает определение уровня церулоплазмина в плазме крови и при его значениях более 152,1 мг/л, массе печени выше 1,7 г и содержании в ней миелобластов более 25% диагностируют развитие сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY. Использование заявленного способа позволяет повысить точность и упростить диагностику сингенного первичного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY. 1 пр., 1 табл.

Способ диагностики сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY, включающий определение антиоксидантного комплекса в селезенке и эритроцитах, отличающийся тем, что измеряют уровень церулоплазмина в плазме крови и при его значениях более 152,1 мг/л, массе печени выше 1,7 г и содержании в ней миелобластов более 25% диагностируют развитие сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.