СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИНГЕННОГО ПЕРЕВИВНОГО ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА У МЫШЕЙ ЛИНИИ AKR/JY Российский патент 2011 года по МПК G01N33/48 G01N33/49 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной гематологии, и может быть использовано в научно-исследовательской работе для изучения особенностей развития лейкозного процесса у мышей линии AKR/JY в ответ на повреждающие и лечебные факторы воздействия. В настоящее время для диагностики клональных опухолевых заболеваний кроветворной ткани, в частности лейкозов, применяют морфогистохимические критерии (Клиническая онкогематология: руководство для врачей / Под ред. М.А.Волковой. - 2-е изд., перераб., доп. - М.: Медицина, 2007. - 1120 с.; Гематологическое руководство для врачей / Под ред. Н.Н.Мамаева, С.И.Рябова. - СПб.: Спец. лит., 2008. - 543 с.).

Основными недостатками являются трудоемкость и высокая затратность используемых методов. Положительные результаты диагностики заболевания у мышей линии AKR/JY с сингенным перевивным лимфобластным лейкозом возможны при комплексной оценке опухолевого процесса с включением биохимических, морфопатофизиологических параметров и органных нарушений у подопытных животных.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности и упрощение способа диагностики сингенного перевиваемого лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.

Поставленная задача решается тем, что через 5-7 дней после введения в брюшную полость здоровым мышам линии AKR/JY взвеси лейкозных селезеночных клеток определяют уровень церулоплазмина в плазме крови, массу тимуса, содержание в нем лимфобластов и по этим параметрам диагностируют развитие лейкозного процесса.

Известен способ диагностики перевивного лейкоза La у мышей линии C57B1/6jG путем определения антиоксидантного комплекса витаминов А, Е. С (В.А.Кувшинников и др. Применение антиоксидантного комплекса витаминов А, Е и С при лейкозе мышей / Гематология и трансфузиология - 1989. - т.34, №8. - С.23-28), взятый нами за прототип. Этот способ является наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению.

Недостатками известного способа являются низкая информативность, трудоемкость методов и затратность, в частности:

а) отсутствуют данные о массе тимуса и количесиве бластных элементов лимфоидного ряда в органе;

б) известный способ требует проведения большого количества тестов и расходных материалов.

Предлагаемый способ по сравнению с известным имеет следующие преимущества:

а) проведенные тесты более специфичны для диагностики сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY;

б) проще известного способа в методическом отношении и более экономичен.

Сравнительный анализ заявляемого и известного способов дагностики лейкозов представлены в таблице.

Таблица Результаты сравнительного анализа заявляемого и известного способов диагностики лейкозов Вариант лейкоза Известный способ
Лейкоз La Заявленный способ
Сингенный перевивной лейкоз Исследуемые тесты Супероксиддисмутаза, глутотионредуктаза, глутотион-SH, токоферол, убихинон, ретинол, аскорбиновая, дигидроаскорбиновая и дикетоглютаровая кислоты, уровень белка, малоновый диальдегид (в печени, селезенке и эритроцитах). Церулоплазмин (в плазме крови), количество лимфобластов в тимусе Масса органов Не определяется Определение массы тимуса

В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предлагаемого изобретения.

Заявляемое изобретение разработано в лаборатории экспериментально-клинических исследований ФГУ «КНИИГиПК ФМБА России» в соответствии с планом НИР.

Опыты проведены на 24 мышах линии AKR/JY обоего пола, массой 25,5±0,57 г, в возрасте 118±2,1 суток без признаков лейкоза. Перевивку лейкозных клеток от мышей линии AKR/JY с лимфобластным лейкозом начинали с введения в наркоз мыши-донора, лапаротомии, удаления селезенки, ее измельчения, фильтрации фрагментов и приготовления 1%-процентной суспензии лейкозных клеток на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 5-7 дней после внутрибрюшинного введения 0,5 мл 1%-ной суспензии лейкозных клеток и развитии сингенного перевивного лимфобластного лейкоза животных забивали декапитацией, определяли массу тимуса 0,28±0,084 г, подсчитывали количество бластных элементов 28,2±8,4% в мазках-отпечатках тимуса после их окрашивания азур-эозином с использованием метода световой микроскопии. В плазме крови определяли содержание церулоплазмина 234,8±32 мг/л по ферментативной реакции с парафенилендиамином по методу Равина (B.C.Камышников. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. М., 2004. - С.476-477) и по этим показателям диагностировали развитие сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.

Заявляемое изобретение обладает новизной, существенными отличиями, дает при использовании положительный эффект, заключающийся в повышении точности и упрощении способа диагностики развития сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.

Пример конкретного использования

Мышам линии AKR/JY, возраст 120 суток, вводили внутрибрюшинно 0,5 мл 1% суспензии лейкозных клеток селезенки на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 5 дней животное забивали декапитацией под наркозом, вскрывали, извлекали и взвешивали тимус (масса 0,25 г). В мазках-отпечатках тимуса подсчитывали содержание лимфобластов (23%) и определяли уровень церулоплазмина в плазме крови (205 мг/л). На основании этих показателей диагностировали развитие сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у подопытных животных.

Предлагаемый способ более прост в реализации, менее затратный и дает стабильный положительный результат при диагностике сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY. Предлагаемая технология может быть использована в учреждениях медицинского и биологического профиля для изучения особенностей развития сингенного перевивного лимфобластного лейкозного процесса у мышей линии AKR/JY в ответ на разнообразные повреждающие и лечебные факторы воздействия.

Изобретение относится к области экспериментальной гематологии. Способ включает определение уровня церулоплазмина в плазме крови. При его значениях от 202,8 до 266,8 мг/л, массе тимуса выше 0,2 г и содержании в нем лимфобластов более 19% диагностируют развитие перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY. Способ позволяет быстро и точно диагностировать сингенный перевивной лимфобластный лейкоз у мышей линии AKR/JY. 1 табл.

Способ диагностики сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY, включающий определение антиоксидантного комплекса в печени, селезенке и эритроцитах, отличающийся тем, что измеряют уровень церулоплазмина в плазме крови и при его значениях от 202,8 до 266,8 мг/л, массе тимуса выше 0,2 г и содержании в нем лимфобластов более 19% диагностируют развитие сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.