СПОСОБ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ МИЕЛОИДНОГО ДИФФЕРОНА Российский патент 2007 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к области медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано для оценки эффективности проводимой терапии, а также биологического воздействия экстремального фактора на организм.

Способы оценки активности миелоидного дифферона известны, например Е.Д.Гольдберг. Справочник по гематологии. Томск: Изд-во Том. ун-та, 1989, с.27-29; Л.В. Козловская. Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования, Москва: Медицина, 1975, с.75; Т.Н.Соболева, Е.Б.Владимирская. Морфологический состав крови и костного мозга у детей // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии, 2004, т.3, №4, с.71-72.

Наиболее близким способом к патентуемому способу можно считать способ оценки активности миелоидного дифферона по книге Е.Д.Гольдберг. Справочник по гематологии. Томск: Изд-во Том. ун-та, 1989, с.27-29. Этот способ заключается в количественной оценке незрелых и зрелых клеток, принадлежащих к миелоидному дифферону кроветворения. При этом учитывают лишь нейтрофильные клетки: миелобласт, промиелоцит, миелоцит, метамиелоцит, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы.

Недостатком прототипа является то, что он не дает полной информации о состоянии миелоидного дифферона.

Изобретение направлено на получение следующего результата: повышение достоверности оценки за счет более полного учета клеток миелоидного дифферона.

Это достигается за счет того, что дополнительно учитывают эозинофилы и базофилы, а также их клетки предшественники, начиная с миелобластов, после чего определяют индекс миелоидного дифферона (ИМД) как соотношение суммы нейтрофильных, базофильных и эозинофильных миелобластов, промиелоцитов, миелоцитов, метамиелоцитов к сумме палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов и базофилов и при НМД менее 0,55 выявляют снижение активности миелоидного дифферона, а при ИМД более 0,60 выявляют увеличение активности миелоидного дифферона.

Сущность изобретения состоит в том, что нами установлена необходимость учета не только нейтрофильных клеток, но и эозинофилов, базофилов и их предшественников с целью получения достоверной информации о состоянии гранулоцитопоэза. Не учет указанных нами дополнительных клеток дает неполную информацию для оценки активности миелоидного дифферона.

На основании проведенной экспериментальной работы и ее математической обработки был введен ранее не используемый критерий - индекс миелоидного дифферона, аналогом для которого послужил известный костномозговой индекс нейтрофилов как соотношение незрелых клеток к зрелым. Сведения о костномозговом индексе нейтрофилов приведены в вышеуказанных источниках.

Значения ИМД менее 0,55 и более 0,60 характеризуют отклонения активности миелоидного дифферона от нормы и установлены нами по результатам проведенной экспериментальной работы на 216 крысах линии Wistar (самцах, возраста 6-8 мес. с массой тела 180-220 г). Изучалось воздействие ионизирующего излучения дозами 0,5 Гр и 3 Гр. Тотальное облучение крыс осуществлялось однократно γ-излучением. В качестве источника γ-квантов был использован ⁶⁰Со. Контрольную группу составили животные, не подвергшиеся облучению. Аутопсия костного мозга из бедренной кости осуществлялась на 1-е и 7-е сутки после облучения. Крысам парентерально вводились препараты:

- Тизоль внутрибрюшинно (водный раствор 50%) - 2,5 г/кг;

- Деринат внутримышечно (водный раствор 1,5%) - 7 мкг/кг;

- Тизоль внутрибрюшинно (водный раствор 50%) - 1,25 г/кг и деринат внутримышечно (водный раствор 1,5%) - 3,5 мкг/кг совместно.

- Физиологический раствор внутрибрюшинно - 1 мл (контрольная подгруппа в каждой группе исследования)

Способ выполняют следующим образом: осуществляют забор костного мозга, изготавливают цитологический препарат образца косного мозга, фиксированный мазок окрашивают азур II-эозином (по Романовскому-Гимзе). Затем производят подсчет клеток миелоидного ростка с помощью иммерсионной системы светового микроскопа (100×15).

Пример №1 (интактный контроль), подсчитано:

Миелобласты - 0,9

Промиелоциты - 1,4

Миелоциты - 8,2

Метамиелоциты - 7,4

Палочкоядерные нейтрофилы - 8,1

Сегментоядерные нейтрофилы - 13,3

Эозинофилы - 6,8

Базофилы - 3,4

Производят расчет ИМД:

ИМД=(0,9+1,4+8,2+7,4)/(8,1+13,3+6,8+3,4)=0,56

Вывод: ИМД более 0,55, но менее 0,60. Таким образом, данный показатель свидетельствует о нормальной активности миелоидного дифферона.

Пример №2 (облучение животного γ-излучением в дозе 0,5 Гр), подсчитано:

Миелобласты - 0,1

Промиелоциты - 0,4

Миелоциты - 9,5

Метамиелоциты - 7,3

Палочкоядерные нейтрофилы - 11,6

Сегментоядерные нейтрофилы - 20,1

Эозинофилы - 5,3

Базофилы - 3,4

Производят расчет ИМД:

ИМД=(0,1+0,4+9,5+7,3)/(11,6+20,1+5,3+3,4)=0,42

Вывод: ИМД менее 0,55. Таким образом, данный показатель свидетельствует о снижении активности миелоидного дифферона.

Пример №3 (животное, не подвергшееся воздействию ионизирующего излучения, получавшее терапию тизолем в течение 7 суток), подсчитано:

Миелобласты - 0,8

Промиелоциты - 1,9

Миелоциты - 11,3

Метамиелоциты - 7,2

Палочкоядерные нейтрофилы - 7,8

Сегментоядерные нейтрофилы - 13,5

Эозинофилы - 4,1

Базофилы - 2,3

Производят расчет ИМД:

ИМД=(0,8+1,9+11,3+7,2)/(7,8+13,5+4,1+2,3)=0,76

Вывод: ИМД более 0,60. Таким образом, данный показатель свидетельствует об увеличении активности миелоидного дифферона.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии. Для оценки активности миелоидного дифферона в эксперименте осуществляют количественную оценку незрелых и зрелых клеток, принадлежащих к миелоидному дифферону кроветворения, при этом дополнительно учитывают эозинофилы и базофилы, а также их клетки предшественники, начиная с миелобластов. Определяют индекс миелоидного дифферона (ИМД) как соотношение суммы нейтрофильных, базофильных и эозинофильных миелобластов, промиелоцитов, миелоцитов, метамиелоцитов к сумме палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов и базофилов. При ИМД менее 0,55 выявляют угнетение активности миелоидного дифферона, а при ИМД более 0,60 выявляют увеличение активности миелоидного дифферона. Использование способа позволяет повысить точность и достоверность оценки активности миелоидного дифферона.

Способ оценки активности миелоидного дифферона в эксперименте, включающий количественную оценку незрелых и зрелых клеток, принадлежащих к миелоидному дифферону кроветворения, отличающийся тем, что дополнительно учитывают эозинофилы и базофилы, а также их клетки предшественники, начиная с миелобластов, после чего определяют индекс миелоидного дифферона (ИМД) как соотношение суммы нейтрофильных, базофильных и эозинофильных миелобластов, промиелоцитов, миелоцитов, метамиелоцитов к сумме палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов и базофилов и при ИМД менее 0,55 выявляют угнетение активности миелоидного дифферона, а при ИМД более 0,60 выявляют увеличение активности миелоидного дифферона.