МНОЖЕСТВЕННАЯ ВАКЦИНАЦИЯ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ МЕНИНГОКОККИ СЕРОГРУППЫ С Российский патент 2012 года по МПК A61K39/09 A61K39/116 A61P31/04 

Все документы, цитируемые в настоящем документе, включены в качестве ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к области иммунизации пациентов против множества патогенов.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Вакцины, содержащие антигены более одного патогенного организма в составе одной дозы, известны как "мультивалентные" или "комбинированные" вакцины. К настоящему моменту к применению человеком в ЕС и США одобрены различные комбинированные вакцины, включая тривалентные вакцины для защиты от дифтерии, столбняка и коклюша (вакцины "DTP") и тривалентные вакцины для защиты от кори, паротита и краснухи (вакцины "MMR").

Преимуществом комбинированных вакцин для пациентов является меньшее количество инъекций, что ведет к терапевтическому преимуществу, заключающемуся в увеличении соблюдения схемы приема (например, смотрите главу 29 ссылки 1), особенно при вакцинации детей. Однако в то же время для них существуют трудности в производстве вследствие факторов, включающих физическую и биохимическую несовместимость между антигенами и другими компонентами; иммунологическую интерференцию и устойчивость. Различные комбинированные вакцины представлены в ссылках 2-10.

В 2005 году в исследовании, получившем широкую известность [11], было показано, что иммуногенность конъюгатной вакцины капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы С ('MenC') уменьшалась при введении с 9-валентным конъюгатным сахаридом S. pneumoniae в качестве комбинированной вакцины. Кроме того, сниженный ответ наблюдали к совместно вводимым конъюгату H. influenzae типа b ('Нib') и дифтерийному анатоксину. Авторы пришли к выводу, что комбинированная вакцина 'Pnc9-MenC' "не может быть подходящей заменой отдельных вакцин MenC или вакцин пневмококкового гликоконъюгата". Кроме того, было сделано предположение, что несовместимость может быть не связана с комбинированной природой антигенов и что "возможно, что подобный эффект может быть при введении вакцин по отдельности".

Таким образом, существует необходимость в иммунизации, которая может защищать от MenC и пневмококка, без значительной потери иммуногенности этих двух компонентов. Кроме того, существует необходимость в иммунизации, которая может защитить от MenC, пневмококка, дифтерии и Hib без значительной потери иммуногенности этих четырех компонентов. В общем смысле существует необходимость интеграции иммунизации MenC с уже существующими схемами иммунизации.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Поскольку в исследовании, описанном в ссылке 11, обнаружили снижение иммуногенности MenC, это снижение не рассматривается в настоящем изобретении. По сравнению с исследованием, описанным в ссылке 11, изобретение отличается по нескольким ключевым аспектам, которые могут быть применены индивидуально или в комбинации для достижения успеха в отличие от предыдущего неудачного способа. Поскольку в исследовании, описанном в ссылке 11, использовали антиген, представляющий целую клетку B. pertussis, и обнаружили снижение иммуногенности MenC, то в первом аспекте изобретения конъюгат MenC антигена вводили с бесклеточным(ыми) антигеном(ами) B. pertussis и не отмечали снижения иммуногенности. Данная ситуация отличается от предыдущего эксперимента с конъюгатами Hib, которые, как правило, совместимы с цельноклеточным коклюшем, но зачастую не несовместимы с бесклеточным коклюшем. Это также противоречит предыдущему эксперименту с конъюгатами пневмококка, где гуморальный иммунный ответ уменьшался при совместном введении с бесклеточным(и) антигеном(ами) B. pertussis, но не уменьшался при использовании клеточного антигена [2]. Применение бесклеточных антигенов имеет преимущество по сравнению с применением клеток, в плане безопасности и реакционноспособности.

Кроме того, поскольку в эксперименте ссылки 11 вакцину MenC/Pnc9 вводили одновременно с пероральным введением полиомиелитной вакцины ('OPV') и было обнаружено снижение иммуногенности MenC, то во втором аспекте изобретения конъюгат антигена MenC вводили вместе с вакциной против полиомиелита в инъекционной форме, такой как инактивированная полиовирусная вакцина ('IPV'), и не отмечали снижения иммуногенности. Применение IPV вместо OPV устраняет риск полиопаралича, связанного с вакциной.

Кроме того, поскольку в экспериментах ссылки 11 была использована композиция вакцины, в которой конъюгаты пневмококка и MenC доставляли как предварительно смешанную комбинацию, и обнаружили снижение иммуногенности MenC, то в третьем аспекте изобретения конъюгат антигена MenC доставляли отдельно от пневмококкового конюгата, в виде частей набора, и не отмечали снижения иммуногенности. Конъюгаты MenC и пневмококка можно вводить пациенту по отдельности (например, в различные места) или можно смешивать в момент использования для комбинированного введения. Производство и распространение набора менее удобно, чем готового раствора комбинированной вакцины, но такой тип набора в настоящее время используют (например, в продукте INFANRIX HEXA^TM), и неудобства можно компенсировать повышением иммуногенности и стабильности антигенов.

Кроме того, поскольку в экспериментах ссылки 11 использовали композицию вакцины, в которой конъюгаты пневмококка и MenC доставляли как лиофилизированную комбинацию, и обнаружили снижение иммуногенности MenC, то в четвертом аспекте изобретения конъюгат пневмококкового антигена вводят в жидкой форме, не отмечая снижения иммуногенности. Конъюгат MenC может находиться в лиофилизированной форме, а также может быть в жидкой форме. Введение конъюгата пневмококка в жидкой форме позволяет избежать необходимость его разбавления в момент использования, а также позволяет использовать его для разбавления любых других иммуногенных компонентов, которые находятся в лиофилизированной форме.

Также, поскольку в экспериментах ссылки 11 использовали композицию вакцины, в которой конъюгаты пневмококка и MenC доставляли в комбинации с адъювантом фосфатом алюминия, и обнаружили снижение иммуногенности MenC, то в пятом аспекте изобретения конъюгат менингококкового антигена вводят без адъюванта фосфата алюминия, не отмечая снижения иммуногенности. Адъювант фосфата алюминия может быть заменен на адъювант гидроксида алюминия или возможно вообще не включать адъюванты алюминия. Также можно использовать дополнительные альтернативные замены солей алюминия.

Наконец, в шестом аспекте изобретения конъюгаты пневмококка и MenC вводили с любым из двух или с обоими: бесклеточным антигеном коклюша и инактивированным полиовирусным антигеном, и для двух конъюгатов применяли тот же белок-носитель. Применение общего белка-носителя снижает общее количество различных антигенов, которые одновременно презентируются иммунной системе, а также это удобнее для производства. При введении более одного пневмококкового конъюгата каждый пневмококковый конъюгат может иметь один и тот же белок-носитель или можно использовать различные белки-носители, но по меньшей мере один из пневмококковых конъюгатов должен иметь тот же белок-носитель, что и конъюгат MenC.

Эти шесть аспектов изобретения описаны ниже более подробно.

В ссылке 3, опубликованной в декабре 2004 года, описан эксперимент, в котором INFANRIX HEXA^TM (GSK) вводили вместе с MENINGITEC^TM (Wyeth) в разные бедра детям грудного возраста. INFANRIX HEXA^TM поставлялся в виде жидкой композиции D-T-Ра-HBsAg-IPV с дополнительным лиофилизированным компонентом Hib, а компонент Hib ресуспендировали с 5-валентной жидкой композицией в момент использования с получением 6-валентной комбинированной вакцины. MENINGITEC^TM поставлялся в виде жидкой композиции, содержащей адъювант фосфата алюминия. Напротив, в пятом аспекте настоящего изобретения антиген менингококкового конъюгата находится без адъюванта фосфата алюминия. Также в отличие от ссылки 3 в седьмом аспекте изобретения антиген менингококкового конъюгата доставляли в лиофилизированной форме. Лиофилизированная форма будет переведена в жидкую форму перед инъекцией, и при разведении можно использовать (a) водную композицию, содержащую D-T-Ра, для получения комбинированной вакцины или (b) отдельный водный носитель для совместного введения с композицией, содержащей D-T-Ра.

В ссылке 4 описан эксперимент, в котором вакцину конъюгата менингококка C вводили вместе с 5-валентной вакциной D-T-Ра-IPV-Hib. В ссылке 5 описан эксперимент, в котором вакцину конъюгата пневмококка C вводили вместе с 5-валентной вакциной D-T-Ра-IPV-Hib. Ни одна из указанных 5-валентных вакцин не содержала компонента HBsAg. В ссылке 6 описаны эксперименты, в которых (a) HBsAg вводили грудным детям вместе с вакциной конъюгата пневмококка, и (b) отдельные вакцины D-T-Ра и Hib вводили детям ясельного возраста вместе с вакциной конъюгата пневмококка. В ссылке 7 описан эксперимент, в котором вакцину конъюгата менингококка C вводили вместе с 4-валентной вакциной D-T-Ра-Hib. В восьмом аспекте изобретения конъюгаты пневмококка и менингококка серогруппы C вводили с поверхностным антигеном гепатита В. В девятом аспекте изобретения конъюгаты пневмококка и менингококка серогруппы C вводили с инактивированным полиовирусным антигеном.

Эти девять аспектов изобретения описаны ниже более подробно. Девять аспектов можно применять по отдельности или в комбинации.

В ссылке 8 описан эксперимент, в котором 6-валентную вакцину D-T-Ра-HBV-IPV-Hib вводили вместе с 7-валентной вакциной конъюгата пневмококка, но не применяли конъюгаты менингококка. В ссылках 9 и 10 описаны различные возможные комбинированные вакцины, которые могут включать конъюгаты менингококка, отсутствуют подробные детали, например, нет описания профиля O-ацетилирования представленных сахаридов менингококка серогруппы C.

Применение бесклеточного(ых) антигена(ов) коклюша

В первом аспекте изобретения конъюгат MenC антигена ('MCC') вводили вместе с бесклеточным(и) антигеном(ами) B. pertussis, обычно известным как 'Pa'. Антигены MCC и Ра могут быть введены пациенту по отдельности или могут быть введены как комбинированная вакцина.

Таким образом, изобретение относится к набору, содержащему первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; и (b) второй иммуногенный компонент содержит бесклеточный антиген B. pertussis.

Кроме бесклеточных антигенов B. pertussis, второй иммуногенный компонент предпочтительно содержит один или несколько из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; HBsAg; инактивированного полиовирусного антигена; и, необязательно, конъюгированного антигена Hib.

Набор также может включать компонент, включающий конъюгированный антиген сахарида пневмококка.

Изобретение также относится к иммуногенной композиции, содержащей: (a) конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; и (b) бесклеточный антиген B. pertussis. В дополнение к антигену MCC и бесклеточному антигену B. pertussis композиция может содержать один или несколько из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; HBsAg; инактивированного полиовирусного антигена; и, необязательно, конъюгированного антигена Hib. Она также может включать конъюгированный антиген сахарида пневмококка.

Применение инъекционной полиовакцины

Во втором аспекте изобретения конъюгат антигена MenC ('MCC') вводили вместе с инъекционным полиовирусным антигеном, таким как инактивированная полиовакцина ('IPV'), также известная как вакцина Salk. Антигены MCC и IPV могут быть введены пациенту по отдельности или могут быть введены в виде комбинированной вакцины.

Таким образом, изобретение относится к набору, содержащему первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; и (b) второй иммуногенный компонент содержит инактивированный полиовирусный антиген.

В дополнение к IPV, второй иммуногенный компонент предпочтительно содержит один или несколько из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; HBsAg; бесклеточного антигена коклюша; и, необязательно, конъюгированного антигена Hib.

Набор также может включать компонент, включающий конъюгированный антиген сахарида пневмококка.

Изобретение также относится к иммуногенной композиции, содержащей: (a) конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; и (b) инактивированный полиовирусный антиген. Кроме антигена MCC и бесклеточного антигена B. pertussis, композиция может содержать один или несколько из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; HBsAg; бесклеточного антигена коклюша; и, необязательно, конъюгированного антигена Hib. Также она может включать конъюгированный антиген сахарида пневмококка.

Введение MenC в качестве отдельного компонента набора

В третьем аспекте изобретения конъюгат антигена MenC ('MCC') вводили отдельно от конъюгатов пневмококка ('PnC'), в виде частей набора.

Таким образом, изобретение относится к набору, содержащему первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; и (b) второй иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae.

Первый компонент может дополнительно включать один или несколько из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; антигена коклюша и HBsAg. Он также может включать инактивированный полиовирусный антиген. Он также может включать конъюгированный антиген Hib. Однако в случае если один из шести дополнительных антигенов включен в первый компонент, то он не может быть включен во второй компонент.

Второй компонент может дополнительно включать один или несколько из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; антигена коклюша и HBsAg. Он также может включать инактивированный полиовирусный антиген. Он также может включать конъюгированный антиген Hib. Однако в случае если один из шести дополнительных антигенов включен во второй компонент, то он не может быть включен в первый компонент.

В случае если ни первый, ни второй компонент не содержит дифтерийный анатоксин, то дифтерийный анатоксин может быть включен в качестве дополнительного компонента набора. Подобным образом в случае, если ни первый, ни второй компонент не содержит столбнячный анатоксин, столбнячный анатоксин может быть включен в качестве дополнительного компонента набора. Подобным образом в случае, если ни первый, ни второй компонент не содержит антиген коклюша, антиген коклюша может быть включен в качестве дополнительного компонента набора. Подобным образом в случае, если ни первый, ни второй компонент не содержит HBsAg, HBsAg может быть включен в качестве дополнительного компонента набора. Подобным образом в случае, если ни первый, ни второй компонент не содержит Hib, Hib может быть включен в качестве дополнительного компонента набора. Подобным образом в случае, если ни первый, ни второй компонент не содержит IPV, IPV может быть включен в качестве дополнительного компонента набора.

Дифтерийный, столбнячный антигены и антиген коклюша обычно включают вместе в один компонент набора.

Жидкие конъюгаты пневмококка

В четвертом аспекте изобретения антиген конъюгата пневмококка находится в жидкой форме. Совместно вводимый конъюгат MenC может поставляться: (i) отдельно, в лиофилизированной форме; (ii) отдельно, также в жидкой форме; или (iii) в смеси с конъюгатом пневмококка в жидкой форме.

Таким образом, изобретение относится к набору, содержащему первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содержит водную композицию конъюгированного капсульного сахарида S. pneumoniae; и (b) второй иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C. MCC во втором компоненте может быть в водной форме или в лиофилизированной форме.

Первый и/или второй компонент может также включать один или несколько из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; антигена(ов) коклюша; HBsAg; и инактивированного полиовирусного антигена. Предпочтительно все пять дополнительных антигенов включены в первый или во второй компонент. Как альтернатива пять антигенов могут находиться в виде третьего иммуногенного компонента набора. Набор может включать конъюгированный антиген Hib в первом или во втором (или в третьем) компоненте.

Изобретение также относится к иммуногенной композиции, содержащей конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae и конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, где композиция присутствует в водной форме. Иммуногенная композиция также предпочтительно включает один или несколько из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; бесклеточного антигена(ов) коклюша; HBsAg; инактивированного полиовирусного антигена; и, необязательно, конъюгированного антигена Hib.

Адъюванты фосфата алюминия с MenC

В пятом аспекте изобретения антиген конъюгата менингококка доставляют без адъюванта фосфата алюминия. Адъювант фосфата алюминия может быть заменен на адъювант гидроксида алюминия, или адъюванты алюминия возможно вообще не включать. Совместно вводимый конъюгат пневмококка может быть доставлен с адъювантом фосфата алюминия.

Таким образом, изобретение относится к набору, содержащему первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содетжит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, но не содержит адъювант фосфата алюминия; и (b) второй иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae.

В предпочтительных схемах первый иммуногенный компонент не содержит адъювант фосфата алюминия, но может включать адъювант гидроксида алюминия. В качестве альтернативы, он может не включать солей алюминия, но в этом случае он может включать адъюванты не на основе алюминия или не включать адъюванты совсем.

В альтернативной схеме если фосфат алюминия допустим в первом компоненте, то первый компонент может включать смесь гидроксида алюминия и фосфатных адъювантов. Таким образом, изобретение также относится к иммуногенной композиции, содержащей конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C и конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae, где композиция содержит адъювант гидроксида алюминия и адъювант фосфата алюминия.

В дополнительной альтернативной схеме фосфат алюминия допустим в первом компоненте и компонент менингококкового конъюгата абсорбируют адъювантом фосфата алюминия. Таким образом, изобретение также относится к иммуногенной композиции, содержащей конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C и конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae, где конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C абсорбируют адъювантом фосфата алюминия. Изобретение также относится к набору, содержащему первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, который абсорбируют адъювантом фосфата алюминия; и (b) второй иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae. Конъюгат пневмококка также можно абсорбировать адъювантом фосфата алюминия.

Наборы могут дополнительно включать один или более из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; антиген коклюша и HBsAg. Также можно включать инактивированный полиовирусный антиген. Также можно включать конъюгированный антиген Hib.

Белки-носители для MenC и PnC

В шестом аспекте изобретения конъюгаты пневмококка и MenC вводили с любым из двух или с обоими: бесклеточным антигеном коклюша и инактивированным полиовирусным антигеном, и для двух конъюгатов применяли тот же белок-носитель. Несмотря на риск супрессии, вызываемой носителем, было обнаружено, что конъюгаты пневмококка и MenC не взаимодействуют друг с другом, что противоречит предположениям авторов ссылки 11.

Таким образом, изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей: (a) капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, конъюгированный с первым белком-носителем; (b) капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, конъюгированный со вторым белком-носителем; и (с) бесклеточный антиген B. pertussis и/или инактивированный полиовирусный антиген, характеризующийся тем, что первый белок-носитель и второй белок-носитель одинаковы. Композиция также может содержать один или несколько из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; HBsAg; и/или конъюгированного Hib сахарида.

Применение "одного и того же" белка-носителя не означает, что существует единственная белковая молекула-носитель, к которой прикрепляют как сахарид менингококка, так и сахарид пневмококка (ссылка 12). Предпочтительнее, когда два конъюгата отделены друг от друга, но носитель, применяемый для первого конъюгата, тот же носитель, что применяют для второго конъюгата, например, сахариды пневмококка конъюгируют с CRM197, и сахариды менингококка также конъюгируют с CRM197, но CRM197, с которым конъюгирует как сахарид пневмококка, так и сахарид и менингококка не существует. Таким образом, конъюгаты получают отдельно и впоследствии объединяют.

Изобретение также относится к наборам, содержащим PnC, MCC и один или оба из Ра или IPV:

- набор, содержащий по меньшей мере первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) один из компонентов содержит капсульный сахарид S. pneumoniae, конъюгированный с первым белком-носителем, (b) один из компонентов содержит капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, конъюгированный со вторым белком-носителем, (с) один из компонентов содержит бесклеточный антиген коклюша, характеризующийся тем, что первый белок-носитель и второй белок-носитель одинаковы;

- набор, содержащий по меньшей мере первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) один из компонентов содержит капсульный сахарид S. pneumoniae, конъюгированный с первым белком-носителем, (b) один из компонентов содержит капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, конъюгированный со вторым белком-носителем, (с) один из компонентов содержит инактивированный полиовирусный антиген, характеризующийся тем, что первый белок-носитель и второй белок-носитель одинаковы.

Все антигены (a), (b) и (c) присутствуют в наборе, но не являются целой частью соответствующего компонента набора. Возможны следующие комбинации антигенов, в соответствии с тремя отдельными компонентами для антигенов (a), (b) и (c):

Компонент 1 (а) (а) и (b) (а) и (с) (а) Компонент 2 (b) и (с) (с) (b) (b) Компонент 3 - - - (с)

При наличии каждого из PnC, MCC, Ра и IPV изобретение относится к набору, содержащему по меньшей мере первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) один из компонентов содержит капсульный сахарид S. pneumoniae, конъюгированный с первым белком-носителем; (b) один из компонентов содержит капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, конъюгированный со вторым белком-носителем; (с) один из компонентов содержит бесклеточный антиген коклюша; и (d) один из компонентов содержит инактивированный полиовирусный антиген, характеризующийся тем, что первый белок-носитель и второй белок-носитель одинаковы.

Все антигены (a), (b), (c) присутствуют в наборе, но не являются целой частью соответствующего компонента набора. Изобретение охватывает следующие комбинации антигенов, в соответствии с четырьмя отдельными компонентами для антигенов (a), (b), (c) и (d):

Компонент 1 (а) (а) (а) (а) (а) (а) и (b) (а) и (b) Компонент 2 (b), (с) и (d) (b) (b) и (с) (b) и (d) (b) (с) и (d) (с) Компонент 3 - (с) и (d) (d) (с) (с) - (d) Компонент 4 - - - - (d) - -  

Компонент 1 (а) и (с) (а) и (с) (а), (b) и (с) (а), (b) и (d) (а), (с) и (d) (а) и (d) (а) и (d) Компонент 2 (b) (b) и (d) (d) (с) (b) (b) (b) и (с) Компонент 3 (d) - - - - (с) - Компонент 4 - - - - - - -

Как правило, антигены (c) и (d) будут частью одного и того же компонента.

Эти наборы также могут включать один или более из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; HBsAg; и/или конъюгированного сахарида Hib.

Если композиция или набор включает сахариды более одного серотипа S. pneumoniae и/или более одной серогруппы N. meningitidis, то этот аспект изобретения требует, чтобы по меньшей мере один и тот же белок-носитель применяли для одного из конъюгатов S. pneumoniae и по меньшей мере для одного из конъюгатов N. meningitidis. В некоторых вариантах осуществления один и тот же белок-носитель будут применять для всех конъюгатов S. pneumoniae и по меньшей мере одного из конъюгатов N. meningitidis. В других вариантах осуществления один и тот же белок-носитель будут применять для одного конъюгата S. pneumoniae и для всех конъюгатов N. meningitidis. В других вариантах осуществления один и тот же белок-носитель будут применять для всех конъюгатов S. pneumoniae и для всех конъюгатов N. meningitidis. Выбор носителя описан ниже более подробно.

Если композиция или набор включают конъюгированный сахарид Hib, то белок-носитель для сахарида Hib может быть тем же, что и для конъюгатов пневмококка и менингококка, или для конъюгата Hib могут использовать другой носитель.

Если композиция или набор включает столбнячный анатоксин, то белок-носитель для конъюгатов пневмококка и менингококка предпочтительно не является столбнячным анатоксином. В некоторых вариантах осуществления ни один из конъюгатов пневмококка и менингококка не имеет столбнячный анатоксичный носитель.

Если композиция или набор включает дифтерийный анатоксин, то белок-носитель для конъюгатов пневмококка и менингококка предпочтительно не является дифтерийным анатоксином. В некоторых вариантах осуществления ни один из конъюгатов пневмококка и менингококка не имеет дифтерийный анатоксичный носитель.

Если композиция или набор включает как дифтерийный анатоксин, так и столбнячный анатоксин, то белок-носитель для конъюгатов пневмококка и менингококка предпочтительно не является ни дифтерийным анатоксином, ни столбнячным анатоксином.

Лиофилизация MenC

В седьмом аспекте изобретения антиген конъюгата менингококка серогруппы С находится в лиофилизированной форме в наборе, который также включал водную композицию, содержащую D-T-Ра.

Таким образом, изобретение относится к набору, содержащему первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содержит водную композицию дифтерийного анатоксина, столбнячного анатоксина и бесклеточного антигена B. pertussis; и (b) второй иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C в лиофилизированной форме.

Лиофилизированный конъюгат MenC восстанавливают в виде водной формы перед инъекцией. На стадии восстановления можно применять: (a) водную композицию, содержащую D-T-Ра, для получения комбинированной вакцины, содержащей конъюгат MenC; или (b) отдельный водный носитель для получения второй инъекции для совместного введения с композицией, содержащей D-T-Ра, при этом набор может включать водный носитель, в виде дополнительного компонента.

Композиция, содержащая D-T-Ра, также может включать любой из двух или оба: поверхностный антиген вируса гепатита В и инактивированный полиовирусный антиген.

В состав набора также можно включать конъюгированный антиген Hib. Он может быть включен в лиофилизированной форме (например, в том же контейнере, что и лиофилизированный компонент MenC) или в составе композиции, содержащей D-T-Ра.

Введение MenC, PnC и HBsAg

В восьмом аспекте изобретения конъюгаты менингококка серогруппы С и пневмококка вводили с поверхностным антигеном вируса гепатита В.

Таким образом, изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей: (а) конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae; (b) конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; и (с) поверхностный антиген вируса гепатита В. Композиция также может включать один или более из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; антигена B. pertussis; инактивированного полиовирусного антигена; и/или конъюгированного сахарида Hib.

Изобретение также относится к набору, содержащему первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) один из компонентов содержит конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae; (b) один из компонентов содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы С; (с) один из компонентов содержит поверхностный антиген вируса гепатита В.

Антигены (a), (b), (c), все присутствуют в наборе, но они не являются целой частью соответствующего компонента набора. Осуществимы следующие комбинации антигенов в соответствии с тремя отдельными компонентами для антигенов (a), (b), (c) и (d):

Компонент 1 (а) (а) и (b) (а) и (с) (а) Компонент 2 (b) и (с) (с) (b) (b) Компонент 3 - - - (с)

Набор также может включать один или более из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; антигена B. pertussis; инактивированного полиовирусного антигена; и/или конъюгированного сахарида Hib. Эти дополнительные антигены могут быть включены в тот же компонент набора, что и (a), (b), (c), или могут быть в отдельном компоненте(ах). Однако в основном отдельный компонент набора может включать все из: HBsAg; дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; антигена B. pertussis и инактивированного полиовирусного антигена.

Введение MenC, PnC и IPV

В девятом аспекте изобретения конъюгаты менингококка серогруппы С и пневмококка вводили с инактивированным полиовирусным антигеном.

Таким образом, изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей: (а) конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae; (b) конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; и (с) инактивированный полиовирусный антиген. Композиция также может включать один или более из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; антигена B. pertussis; HBsAg и/или конъюгированного сахарида Hib.

Изобретение также относится к набору, содержащему первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) один из компонентов содержит конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae; (b) один из компонентов содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы С; (с) один из компонентов содержит инактивированный полиовирусный антиген.

Все антигены (a), (b), (c) присутствуют в наборе, но они не являются всей частью соответствующего компонента набора. Осуществимы следующие комбинации антигенов в соответствии с тремя отдельными компонентами антигенов (a), (b), (c) и (d):

Компонент 1 (а) (а) и (b) (а) и (с) (а) Компонент 2 (b) и (с) (с) (b) (b) Компонент 3 - - - (с)

Набор также может включать один или более из: дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; антигена B. pertussis; HBsAg и/или конъюгированного сахарида Hib. Указанные дополнительные антигены могут быть включены в тот же компонент набора, что и (a), (b), (c), или могут быть в отдельном компоненте(ах). Однако в основном отдельный компонент набора может включать все из: инактивированного полиовирусного антигена; дифтерийного анатоксина; столбнячного анатоксина; антигена B. pertussis и HBsAg.

Комбинации первого, второго, третьего, четвертого, пятого, шестого, седьмого, восьмого и девятого аспектов

Девять аспектов изобретения могут быть применены по отдельности или в комбинации 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 аспектов. Например, изобретение также относится к следующим наборам:

- набор, содержащий первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; и (b) второй иммуногенный компонент содержит бесклеточный антиген B. pertussis и инактивированный полиовирусный антиген;

- набор, содержащий первый иммуногенный компонент, второй иммуногенный компонент и третий иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; (b) второй иммуногенный компонент содержит бесклеточный антиген B. pertussis и/или инактивированный полиовирусный антиген; и (с) третий иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae;

- набор, содержащий первый иммуногенный компонент, второй иммуногенный компонент и необязательно третий иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, но не содержит адъювант фосфата алюминия; (b) второй иммуногенный компонент содержит бесклеточный антиген B. pertussis и/или инактивированный полиовирусный антиген; и (с) третий необязательный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae;

- набор, содержащий первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; (b) второй иммуногенный компонент содержит дифтерийный анатоксин; столбнячный анатоксин; бесклеточный антиген B. pertussis, поверхностный антиген вируса гепатита В и инактивированный полиовирусный антиген, отличающийся тем, что первый иммуногенный компонент лиофилизирован и/или не содержит адъювант фосфата алюминия;

- набор, содержащий по меньшей мере первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, где: (a) один из компонентов содержит сахарид капсульный S. pneumoniae, конъюгированный с первым белком-носителем; (b) один из компонентов содержит капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, конъюгированный со вторым белком-носителем, (с) один из компонентов содержит бесклеточный антиген коклюша, отличающийся тем, что первый белок-носитель и второй белок-носитель одинаковы и что компонент, содержащий N. meningitidis серогруппы C, лиофилизирован и/или не содержит адъювант фосфата алюминия и т.д.

Изобретение также относится к следующим иммунногеным композициям:

- иммунногеная композиция, содержащая конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; бесклеточный антиген B. pertussis и инактивированный полиовирусный антиген;

- иммунногеная композиция, содержащая: (а) конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C; бесклеточный антиген B. pertussis и/или инактивированный полиовирусный антиген и (с) конъюгированный капсульный сахарид S. pneumoniae;

- иммунногеная композиция, содержащая: (а) капсульный сахарид S. pneumoniae, конъюгированный с первым белком-носителем; (b) капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C, конъюгированный со вторым белком-носителем; (с) бесклеточный антиген коклюша, инактивированный полиовирусный антиген и поверхностный антиген вируса гепатита В, где первый белок-носитель и второй белок-носитель одинаковы и т.д.

Антигены для применения в изобретении

Композиции и наборы изобретения включают конъюгированный капсульный антиген сахарида N. meningitidis серогруппы C. Как правило, они также включают по меньшей мере один конъюгированный антиген сахарида S. pneumoniae. Они также могут включать дополнительные антигены других патогенов, в частности бактерий и/или вирусов. Предпочтительные дополнительные антигены выбраны из:

- дифтерийного анатоксина ('D'),

- столбнячного анатоксина ('T'),

- антигена коклюша (T'), который обычно является бесклеточным ('aP'),

- поверхностного антигена вируса гепатита B (HBV) ('HBsAg'),

- антигена вируса гепатита А (HAV),

- конъюгированного капсульного сахарида Haemophilus influenzae типа b ('Hib'),

- инактивированной полиовирусной вакцины (IPV),

- конъюгированного капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы A ('MenA'),

- конъюгированного капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы W135 ('MenW135'),

- конъюгированного капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы Y ('MenY'),

Из этих дополнительных антигенов можно использовать больше одного. В частности, предпочтительны следующие комбинации антигенов.

- Бивалентные вакцины: MenC-PnC.

- Тетравалентные вакцины: D-T-Ра-MenC.

- Пентавалентные вакцины: D-T-Ра-Hib-MenC; D-T-Ра-IPV-MenC; D-T-Ра-HBsAg-MenC; D-T-Ра-MenC-PnC.

- Гексавалентные вакцины: D-T-Ра-HBsAg-IPV-MenC; D-T-Ра-HBsAg-MenC-PnC.

- Гептавалентные вакцины: D-T-Ра-HBsAg-IPV-Hib-MenC; D-T-Ра-HBsAg-Hib-MenC-MenA.

- Октавалентные вакцины: D-T-Ра-HBsAg-IPV-Hib-MenC-MenA; D-T-Ра-HBsAg-IPV-Hib-MenG-PnC.

Указанные композиции могут состоять из перечисленных антигенов или дополнительно могут включать антигены от других патогенов. Таким образом, их можно использовать по отдельности или в комбинации с другими вакцинами.

Конъюгированные сахариды N. meningitidis

Конъюгированные антигены менингококка содержат капсульные сахаридные антигены Neisseria meningitides, конъюгированные с белками-носителями. Конъюгированные моновалентные вакцины против серогруппы С одобрены для применения у человека и включают MENJUGATE^TM [13], MENINGITEC^TM и NEISVAC-C^TM. Известны смеси конъюгатов серогрупп A+C [14, 15], и опубликованы и одобрены как продукт MENACTRA^TM в 2005 году смеси конъюгатов серогрупп A+C+W135+Y [16-19].

В изобретении применяют по меньшей мере сахарид менингококка серогруппы С, но также можно включать сахариды одной или нескольких серогрупп A, W135 и/или Y, например A+C, C+W135, C+Y, A+C+W135, A+C+Y, C+W135+Y, A+C+W135+Y. Если применяют более одной группы, то предпочтительно применение обеих серогрупп A и C.

Капсульный сахарид менингококка серогруппы С является (α2→9)-связанный гомополимер сиаловой кислоты (N-ацетилнейраминовая кислота) в основном с группами O-ацетил (OAc-) в C-7 или C-8 положениях. Соединение представляет собой: →9)- Neu p NAc 7/8 OAc-(α2→

Некоторые штаммы MenC (~12% инвазивных изолятов) продуцируют полисахариды, которые не содержат указанную группу OAc. Наличие или отсутствие групп OAc приводит к появлению уникальных эпитопов, и специфичность связывания антитела с сахаридом может влиять на его бактериальную активность против О-ацетилированных (OAc-) и де-О-ацетилированых (OAc+) штаммов [20-22]. Разрешенные конъюгатные вакцины MenC содержат как сахариды OAc- (NEISVAC-C^TM), так и OAc+ (MENJUGATE^TM и MENINGITEC^TM). Сахариды серогруппы С, применяемые в изобретении, могут быть получены как из штаммов OAc+, так и из штаммов OAc-. Предпочтительными штаммами для производства конъгатов серогруппы С являются штаммы OAc+, предпочтительно серотипа 16, предпочтительно сероподтипа P1.7a,1. Таким образом, предпочтительными штаммами являются штаммы C:16:P1.7a,1 OAc+. Также можно использовать штаммы OAc+ сероподтипа P1.1, такие как штамм C11.

Капсульный сахарид менингококка серогруппы А является гомополимером (α1→6)-связанного N-ацетил-D-маннозамин-1-фосфата, с частичным O-ацетилированием в C3 и C4 положениях. Ацетилирование в C-3 положении может составлять 70-95%. Условия, применяемые для очистки сахарида, могут давать де-O-ацетилирование (например, при основных условиях), но предпочтительным является, если OAc остается в C-3 положении. Таким образом, предпочтительно, если по меньшей мере 50% (например, по меньшей мере 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или более) маннозаминовых остатков О-ацетилированы в C-3 положении.

Сахарид серогруппы W135 является полимером дисахаридных единиц сиаловой кислоты и галактозы. Так же как и для сахарида серогруппы С, O-ацетилирование может варьировать, но сиаловая кислота находится в 7 и 9 положениях [23]. Структура описывается как: →4)-D-Neup5Ac(7/9OAc)-α-(2→6)-D-Gal-α-(1→

Сахарид серогруппы Y сходен с сахаридом серогруппы W135, за исключением того, что повторяющаяся дисахаридная единица содержит вместо галактозы глюкозу. Так же как и для сахарида серогруппы W135, O-ацетилирование сиаловой кислоты может варьировать в 7 и 9 положениях [23]. Строение серогруппы Y описывается как: →4)-D-Neup5Ac(7/9OAc)-α-(2→6)-D-Glc-α-(1→

В продуктах MENJUGATE^TM и MENINGITEC^TM применяют белок-носитель CRM197, и этот носитель можно применять в изобретении. В продукте NEISVAC-C^TM применяют столбнячный анатоксиновый белок-носитель, и этот носитель можно применять в изобретении так же, как и дифтерийный анатоксин. Другой белок-носитель, применяемый для конъюгатов менингококка, является D белком Haemophilus influenzae, который не используют ни в одной из существующих одобренных конъюгатных вакцин.

Часть сахарида конъюгата может содержать полноразмерные сахариды, как получено от менингококка, и/или он может содержать фрагменты полноразмерных сахаридов. Сахариды, применяемые по изобретению, предпочтительно короче, чем нативные капсульные сахариды бактерии. Таким образом, предпочтительно деполимеризовать сахариды так, чтобы деполимеризацию производили после очистки сахаридов, но перед конъюгацией. Деполимеризация уменьшает длину цепи сахаридов. Один из способов деполимеризации содержит применение перекиси водорода [16]. Перекись водорода добавляют к сахариду (например, до конечной концентрации H₂O₂, равной 1%) и затем смесь инкубируют (например, при приблизительно 55°C) до достижения необходимого уменьшения длины цепи. Другой способ деполимеризации содержит кислотный гидролиз [17]. В данной области известны другие способы деполимеризации. Сахариды, которые можно использовать для получения конъюгатов по изобретению, могут быть получены любым из указанных способов деполимеризации. Деполимеризация может быть использована в качестве обеспечения оптимальной длины цепи для иммуногенности и/или для уменьшения длины цепи для физической контролируемости сахаридов. Предпочтительные сахариды имеют следующие варианты средней степени полимеризации (Dp): A=10-20; C=12-22; W135=15-25; Y=15-25. В единицах молекулярной массы, вместо Dp, предпочтительными вариантами для всех серогрупп являются: <100 кДа; 5 кДа - 75 кДа; 7 кДа - 50 кДа; 8 кДа - 35 кДа; 12 кДа - 25 кДа; 15 кДа - 22 кДа.

Можно использовать конъюгаты менингококка с отношением сахарид/белок (масса/масса) от 1:10 (т.е. избыток белка) до 10:1 (т.е. избыток сахарида), например отношения от 1:5 до 5:1, от 1:2,5 до 2,5:1 или от 1:1,25 до 1,25:1. Можно использовать соотношение 1:1, в частности, для серогруппы С.

В основном композиция содержит от 1 мкг до 20 мкг (измеренная как сахарид) на дозу каждой присутствующей серогруппы.

Введение конъюгата предпочтительно приводит к повышению титра сывороточного бактерицидного анализа (SBA) по меньшей мере в 4 раза для соответствующей серогруппы, и предпочтительно по меньшей мере в 8 раз. Титры SBA можно измерять с использованием комплемента крольчат или комплемента человека [24].

Конъюгаты менингококка можно абсорбировать или не абсорбировать с адъювантами солей алюминия.

Конъюгаты менингококка могут быть лиофилизированы перед применением по изобретению. Если композиция лиофилизирована, она может включать стабилизатор, такой как маннит. Она также может включать хлорид натрия.

Конъюгированные сахариды пневмококка

Конъюгированные антигены пневмококка содержат антигены капсульных сахаридов Streptococcus pneumoniae, конъюгированные с белком-носителем [например, ссылки 25-27]. Предпочтительно включать сахариды более одного серотипа S. pneumoniae: широко применяются смеси полисахаридов 23 различных серотипов, такие как конъюгатные вакцины с полисахаридами от 5 до 11 различных серотипов [28]. Например, PREVNAR^TM [29] содержит антигены семи серотипов (4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F и 23F) с сахаридами, где каждый отдельно конъюгирован CRM197 путем восстановительного аминирования с 2 мкг каждого сахарида на 0,5-мл дозу (4 мкг серотипа 6B).

Композиции по изобретению предпочтительно включают антигены сахаридов по меньшей мере серотипов 6B, 14, 19F и 23F. Дополнительные серотипы предпочтительно выбирают из: 1, 3, 4, 5, 7F, 9V и 18C. В частности, применяют 7-валентный (как в PREVNAR^TM), 9-валентный (например, 7 серотипов PREVNAR, плюс 1 и 5), 10-валентный (например, 7 серотипов PREVNAR, плюс 1, 5 и 7F) и 11-валентный (например, 7 серотипов PREVNAR, плюс 1, 3, 5 и 7F) охват серотипов пневмококка.

Часть сахарида конъюгата может включать полноразмерные сахариды, например полученные из пневмококка, и/или он может включать фрагменты полноразмерных сахаридов. Сахариды, которые можно использовать по изобретению, предпочтительно короче нативных капсульных сахаридов бактерий, как описано выше для менингококковых конъюгатов.

Можно использовать конъюгаты пневмококка с отношением сахарид/белок (масса/масса) от 1:10 (т.е. избыток белка) до 10:1 (т.е. избыток сахарида), например отношения от 1:5 до 5:1, от 1:2,5 до 2,5:1 или от 1:1,25 до 1,25:1.

В продукте PREVNAR^TM применяют белок-носитель CRM197, и этот носитель также можно применять в изобретении. Альтернативные носители для использования с сахаридами пневмококка включают, но ими не ограничиваются, столбнячный анатоксиновый белок-носитель, дифтерийный анатоксиновый белок-носитель, и/или белок D H. influenzae. Эффективным может быть использование множества носителей для смеси серотипов пневмококка [30], например включать и носитель белка D H. influenzae, и, например, столбнячный анатоксиновый носитель и/или дифтерийный анатоксиновый носитель. Например, один или несколько (предпочтительно все) из серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 и 23F могут быть конъюгированы с носителем-белком D H. influenzae, серотип 18C может быть конъюгирован со столбнячным анатоксиновым носителем, серотип 19F может быть конъюгирован с дифтерийным анатоксиновым носителем.

Как правило, композиция содержит от 1 мкг до 20 мкг (измеренная как сахарид) на дозу каждой присутствующей серогруппы.

Антигены коклюша

Bordetella pertussis вызывает коклюш. Антигены коклюша присутствуют в вакцинах как в клеточной форме (целая клетка, в форме инактивированных клеток B. pertussis), так и в бесклеточной. Получение клеточных антигенов коклюша хорошо известно [например, смотрите главу 21 ссылки 1], например, они могут быть получены путем высокотемпературной инактивации фазы I культуры B. pertussis. Однако в изобретении предпочтительно использовать бесклеточные антигены.

При применении бесклеточных антигенов предпочтительным является применение одного, двух или (предпочтительно) трех из следующих антигенов: (1) обезвреженный коклюшный токсин (коклюшный анатоксин или 'PT'); (2) филаментный гемагглютинин ('FHA'); (3) пертактин (также известный как '69 килодальтонный наружный белок мембраны'). Эти три антигена предпочтительно получают посредством выделения из культуры B. pertussis, выращенной в модифицированной жидкой среде Stainer-Scholte. PT и FHA могут быть выделены ферментативным брожением (например, абсорбцией на гидроксиапатитовом геле), а пертактин может быть выделен из клеток путем термообработки и флокуляции (например, с использованием хлорида бария). Антигены могут быть очищены последовательными стадиями хроматографии и/или осаждения. PT и FHA могут быть очищены посредством, например, гидрофобной хроматографии, аффинной хроматографии и эксклюзионной хроматографии. Пертактин может быть очищен посредством, например, ионообменной хроматографии, гидрофобной хроматографии и эксклюзионной хроматографии. FHA и пертактин могут быть обработаны формальдегидом перед применением по изобретению. PT предпочтительно обезвреживать обработкой формальдегидом и/или глутаральдегидом. В качестве альтернативы химической детоксификационной процедуре PT может быть мутантным, у которого ферментативная активность снижена посредством мутагенеза [31], но детоксификация химической обработкой является предпочтительной.

Бесклеточные антигены коклюша предпочтительно абсорбируют на одном или нескольких адъювантах солей алюминия. Альтернативно, они могут быть добавлены в неабсорбированном состоянии. При добавлении пертактина он должен быть уже предпочтительно абсорбирован на адъюванте гидроксида алюминия. PT и FHA могут быть абсорбированы на адъюванте гидроксида алюминия или фосфата алюминия. Абсорбция всех PT, FHA и пертактина на гидроксиде алюминия наиболее предпочтительна.

Композиции, как правило, включают: 1-50 мкг/доза PT; 1-50 мкг/доза FHA и 1-50 мкг пертактина. Предпочтительными являются количества примерно 25 мкг/доза PT, примерно 25 мкг/доза FHA и примерно 8 мкг/доза пертактина. Так же как PT, FHA и пертактин, в бесклеточную вакцину коклюша возможно включение фимбрий (например, агглютиногенов 2 и 3).

Инактивированная полиовирусная вакцина

Полиовирус вызывает полиомиелит. Вместо использования пероральной полиовирусной вакцины в предпочтительных вариантах осуществления изобретения применяют IPV, как раскрыто более подробно в главе 24 ссылки 1.

Полиовирусы могут быть выращены в клеточной культуре, но предпочтительно применение культуры клеточной линии Vero, полученной из почек зеленой мартышки. Клетки Vero могут быть соответствующим образом культивированы на микроносителях. После культивирования вирионы могут быть очищены с использованием технологий, таких как ультрафильтрация, диафильтрация и хроматография. Перед введением пациентам полиовирусы должны быть инактивированы, и этого можно достичь обработкой формальдегидом.

Полиомиелит может быть вызван одним из трех типов полиовируса. Данные три типа похожи и вызывают идентичные симптомы, но весьма различаются по антигенности, и инфекция, вызванная одним типом, не защищает от инфекций, вызванных другими типами. Поэтому в изобретении предпочтительно использовать три полиовирусных антигена: полиовирус типа 1 (например, штамм Mahoney), полиовирус типа 2 (например, штамм MEF-1) и полиовирус типа 3 (например, штамм Saukett). Предпочтительно культивировать, очищать и инактивировать вирусы по отдельности и затем комбинировать для получения большой партии тривалентной смеси для применения в изобретении.

Количества IPV в основном выражают в единицах 'DU' ("единица D антигена" [32]). Предпочтительно применение от 1 до 100 DU на вирусный тип на дозу, например приблизительно 80 DU полиовируса 1 типа, приблизительно 16 DU полиовируса 2 типа, приблизительно 64 DU полиовируса 3 типа.

Предпочтительно не абсорбировать полиовирусные антигены на адъювантах солей алюминия до обычного приготовления композиций по изобретению, но они могут быть абсорбированы на адъювант(ы) алюминия в композиции вакцины в течение хранения.

Дифтерийный анатоксин

Corynebacterium diphtheriae вызывает дифтерию. Дифтерийный токсин можно обезвредить (например, с помощью формалина или формальдегида) для устранения токсичности, в то же время оставляя способность индуцировать специфические антитоксиновые антитела после инъекции. Указанные дифтерийные анатоксины применяют для дифтерийных вакцин, как раскрыто более подробно в главе 13 ссылки 1. Предпочтительны дифтерийные анатоксины, которые получены обработкой формальдегидом. Дифтерийный анатоксин может быть получен культивированием C. diphtheriae в питательной среде (например, среда Fenton или среда Linggoud-Fenton), которая может быть дополнена экстрактом крупного рогатого скота, после чего следует обработка формальдегидом, ультрафильтрация и осаждение. Анатоксиновый материал затем может быть подвергнут процессу, содержащему стерильную фильтрацию и/или диализ.

Количества дифтерийного анатоксина могут быть выражены в международных единицах (IU). Например, NIBSC поддерживает 'Diphtheria Toxoid Adsorbed Third International Standard 1999' [33, 34], который содержит 160 IU на ампулу. Как альтернатива системе IU единица 'Lf' ("флоккулирующие единицы" или "наименьшая флоккулирующая доза") определяется как количество анатоксина, которое при связывании с одной международной единицей антитоксина образовывает оптимально флоккулирующую смесь [35]. Например, NIBSC поддерживает 'Diphtheria Toxoid, Plain' [36], который содержит 300 LF на ампулу, и также поддерживает 'The 1st International Reference Reagent For Diphtheria Toxoid For Flocculation Test' [37], который содержит 900 LF на ампулу.

В основном композиции включают от 20 до 80 Lf дифтерийного анатоксина, в основном приблизительно 50 Lf.

По системе измерений IU композиции в основном включают по меньшей мере 30 IU/доза.

Дифтерийный анатоксин предпочтительно абсорбируют на адъювантах гидроксида алюминия.

Столбнячный анатоксин

Clostridium tetani вызывает столбняк. Столбнячный анатоксин может быть обработан для получения защитного анатоксина. Анатоксины применяют в столбнячных вакцинах, и они описаны более подробно в главе 27 ссылки 1. Предпочтительны столбнячные анатоксины, которые получены посредством обработки формальдегидом. Столбнячный анатоксин может быть получен культивированием C. tetani в питательной среде (например, среда Latham, полученная из бычьего казеина), за которым следует обработка формальдегидом, ультрафильтрация и преципитация. Материал затем может быть подвергнут процессу, включающему стерильную фильтрацию и/или диализ.

Количества столбнячного анатоксина могут быть выражены в международных единицах (IU). Например, NIBSC поддерживает 'Tetanus Toxoid Adsorbed Third International Standard 2000' [38, 39], который содержит 469 IU на ампулу. Как альтернатива системе IU единица 'Lf' ("флоккулирующие единицы" или "наименьшая флоккулирующая доза") определяется как количество анатоксина, которое при связывании с одной международной единицей антитоксина образовывает оптимально флоккулирующую смесь [35]. Например, NIBSC поддерживает 'The 1st International Reference Reagent for Tetanus Toxoid For Flocculation Test' [40], который содержит 1000 LF на ампулу.

В основном композиции включают от 5 до 50 Lf столбнячного анатоксина, в основном приблизительно 20 Lf.

По системе измерений IU композиции в основном включают по меньшей мере 40 IU/доза.

Столбнячный анатоксин можно абсорбировать на адъювантах гидроксида алюминия, но это не обязательно (например, можно применять абсорбцию от 0 до 10% общего столбнячного анатоксина).

Антигены вируса гепатита А

Вирус гепатита А (HAV) является одним из известных агентов, которые вызывают вирусные гепатиты. Вакцины HAV описаны в главе 15 ссылки 1. Предпочтительный компонент HAV основан на инактивированном вирусе, и инактивация может быть достигнута обработкой формалином. Вирус можно культивировать на диплоидных фибробластах легких эмбриона человека, таких как клетки MRC-5. Предпочтительным штаммом HAV является HM175, хотя также можно использовать CR326F. Клетки могут быть выращены в условиях, которые позволяют культивировать вирусы. Клетки лизируют, и полученная суспензия может быть очищена посредством ультрафильтрации и гель-проникающей хроматографии.

Количество HAV антигена, выраженное в EU (Elisa Units), равняется по меньшей мере, в основном приблизительно 500 EU/мл.

Поверхностный антиген гепатита В

Вирус гепатита В (HВV) является одним из известных агентов, которые вызывают вирусные гепатиты. Вирион HBV состоит из внутреннего ядра, окруженного наружной белковой оболочкой или капсидом, и вирусное ядро содержит геном вирусной ДНК. Основным компонентом капсида является белок, известный как HBV поверхностный антиген или, более обыкновенно, 'HBsAg', который является в основном 226-аминокислотным полипептидом с молекулярной массой ~24 кДа. Все существующие вакцины гепатита В содержат HBsAg, и если указанный антиген вводят нормальному вакцинируемому пациенту, то он стимулирует выработку анти-HBsAg антител, которые защищают от инфекции HBV.

HBsAg для производства вакцин получают двумя способами. Первый способ предполагает очистку антигена в форме микрочастиц из плазмы пациентов хронического гепатита В, т.к. большие количества HBsAg синтезируются в печени и высвобождаются в кровяное русло в период инфекции HBV. Второй способ предполагает экспрессию белка посредством способов рекомбинации ДНК. HBsAg для применения по изобретению предпочтительно получать путем рекомбинантной экспрессии в дрожжевых клетках. Подходящие дрожжевые клетки, например, включают вирусные носители Saccharomyces (такие как S. cerevisiae) или Hanensula (такие как H. polymorpha).

HBsAg предпочтительно является негликозилированным. В противоположность нативному HBsAg (т.е. как в очищенном продукте из плазмы) HBsAg, экспрессируемые в дрожжах, как правило, не гликозированы, что является наиболее предпочтительно для применения по настоящему изобретению, т.к. она высоко иммуногенна и может быть получена без риска контаминации кровяным продуктом.

HBsAg, как правило, существует в форме практически сферических частиц (средний диаметр приблизительно 20 нм), включая липидный матрикс, содержащий фосфолипиды. Частицы HBsAg, экспрессируемые дрожжами, могут включать фосфатидилинозитол, который не обнаружен у диких вирионов HBV. Также частицы могут включать нетоксичные количества LPS для стимулирования иммунной системы [41]. Предпочтительным является HbsAg в форме частиц, включающих липидный матрикс, содержащий фосфолипиды, фосфатидилинозитол и полисорбат 20.

Все известные подтипы HBV содержат общий детерминант 'a'. При комбинации с другими детерминантами и субдетерминантами идентифицировано девять подтипов: ayw1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr, adw2, adw4, adrq- и adrq+. Кроме данных подтипов, обнаружены другие варианты, такие как мутанты HBV, которые были выявлены у иммунизированных индивидуумов ("ускользнувшие мутанты"). Наиболее предпочтительным подтипом HBV для применения по изобретению является подтип adw2. Предпочтительный HBsAg имеет следующую аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 1):

Указанная последовательность отличается от ближайшего эквивалента в базе данных по аминокислоте 117, имея в составе кислоту Asn вместо Ser. В изобретении можно применять SEQ ID NO 1 или последовательность, отличающуюся от SEQ ID NO 1 вплоть до 10 (т.е. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) единичных аминокислотных замен.

В дополнение к 'S' последовательности поверхностный антиген может включать, полностью или частично, последовательность pre-S, такую как последовательность pre-S1 и/или pre-S2, полностью или частично.

HBsAg предпочтительно экспрессируют: (1) под контролем прямого промотора гена глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы; и/или (2) с терминатором транскрипции ARG3, находящегося в обратном направлении.

Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа является гликолитическим белком, и установлено, что ее промотор, в частности, можно использовать для контроля экспрессии HBsAg у S. cerevisiae [42]. Предпочтительный промотор GAPDH имеет следующую 1060-нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 2):

Эта последовательность отличается от последовательности ссылки 42 следующим образом: (1) A/C замена в 42 нуклеотиде; (2) T/A замена в 194 нуклеотиде; (3) C/A мутация в 301 нуклеотиде; (4) инсерция A в 471 нуклеотиде; (5) C/T замена в положении 569; (6) T/C замена в положении 597; (7) инсерция T в 604 нуклеотиде (пять T вместо четырех T); и (8) замена 3'-GCTT последовательности единичным A.

В изобретении можно использовать указанную 1060-мерную промоторную последовательность или последовательность, отличающуюся от 1060-мерной последовательности максимум 20 (т.е. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20) точковыми мутациями, где каждая точковая мутация является делецией, заменой или инсерцией одного нуклеотида.

1060-мерная последовательность предпочтительно находится непосредственно за стартовым кодоном ATG, кодирует N-конец HBsAg (SEQ ID NO: 3):

Ген ARG3 в дрожжах кодирует белок орнитинкарбамоилтрансферазы [43], и его последовательность терминации транскрипции используют в некоторых дрожжевых рекомбинантных экспрессионных системах [44, 45, 46]. Она эффективна для контроля экспрессии HBsAg в дрожжах, в частности, в сочетании с промотором GAPDH.

Ген, кодирующий HBsAg, в основном встроен в плазмиду. Предпочтительная плазмида включает промотор GAPDH, за которым следует последовательность, кодирующая HBsAg, за которой расположен терминатор ARG3. Предпочтительные плазмиды могут также включать один, два или все три из перечисленных: (1) маркер выделения LEU2; (2) 2 мк плазмидная последовательность; и/или (3) участок начала репликации, активный у Escherichia coli [46]. Таким образом, предпочтительные плазмиды могут функционировать как челночные векторы между дрожжами и E. coli.

Плазмида, размером от 14500 до 15000 п.н., является предпочтительной, например от 14600 до 14700 п.н.

Если применяют маркер выделения LEU2, то клеткой-хозяином должна быть LEU2^-ve (т.е. лейцин ауксотроф). Клетка-хозяин может быть leu2-3 leu2-112 мутантом. Дополнительными признаками предпочитаемых дрожжевых клеток-хозяев являются his3 и/или can1-11. Наиболее предпочтительной дрожжевой клеткой-хозяином является leu2-3 leu2-112 his3 can1-11, такая как штамм DC5.

Предпочтительный способ очистки HBsAg, после клеточной деструкции, включает: ультрафильтрацию; эксклюзионную хроматографию; анионнообменную хроматографию; ультрацентрифугирование; высаливание и стерильную фильтрацию. Лизаты могут быть осаждены после клеточной деструкции (например, с применением полиэтиленгликоля), оставляя HBsAg в растворе, готовом для ультрафильтрации.

После очистки HBsAg может быть подвергнут диализу (например, с цистеином), который можно использовать для удаления любых ртутных консервантов, таких как тимеросал, который мог быть применен при получении HBsAg [47].

Количества HBsAg, как правило, выражают в микрограммах, и стандартное количество HBsAg на дозу вакцины составляет от 5 до 5 мкг, например 10 мкг/доза.

Хотя HBsAg можно абсорбировать адъювантом гидроксида алюминия в готовой вакцине (как в хорошо известном продукте ENGERIX-B^TM) или можно оставлять неабсорбированным, как правило, абсорбируют адъювантом фосфата алюминия [48].

Конъюгированные антигены Haemophilus influenzae типа b

Haemophilus influenzae типа b ('Hib') вызывает бактериальный менингит. Вакцины Hib обычно основаны на антигене капсульного сахарида (например, глава 14 ссылки 1), приготовление которого хорошо описано (например, ссылки от 49 до 58).

Сахарид Hib может быть конъюгирован с белком-носителем для увеличения его иммуногенности, особенно у детей. Характерными белками-носителями являются столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин, производное дифтерийного анатоксина CRM197, белок D H. influenzae и комплекс наружного белка мембраны менингококка серогруппы В. Белок-носитель конъюгата Hib предпочтительно отличается от белка(ов)-носителей в конъюгате(ах) менингококка, но в некоторых вариантах осуществления можно использовать тот же носитель.

Предпочтительным носителем является столбнячный анатоксин, как, главным образом, применяется в продукте, обозначаемом как 'PRP-T'. PRP-T можно получать ионизированием капсульного полисахарида Hib с применением цианогена бромида, конъюгации ионизированного сахарида с линкером адипиновой кислотой (таким как (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимидом), в основном гидрохлоридной солью) и затем проведения реакции структурной единицы линкер-сахарид с белком-носителем дифтерийного анатоксина.

Часть сахарида может включать полноразмерные полирибозилрибитолфасфаты (PRP), как получено из бактерии Hib, и/или фрагменты полноразмерных PRP.

Можно использовать конъюгаты Hib с соотношением сахарид/белок (масса/масса) от 1:5 (т.е. избыток белка) до 5:1 (т.е. избыток сахарида), например соотношения от 1:2 до 5:1 и соотношения от 1:1,25 до 1:2,5. Однако в предпочтительных вакцинах массовое соотношение сахарида к белку-носителю составляет от 1:2 до 1:4, предпочтительно от 1:2,5 до 1:3,5. В вакцинах, где столбнячный анатоксин присутствует и как антиген, и как белок-носитель, массовое соотношение сахарида к белку-носителю в конъюгате может быть от 1:0,3 до 1:2 [59].

Количества конъюгатов Hib, как правило, выражают в единицах массы сахарида (т.е. доза общего конъюгата (носитель + сахарид) выше, чем установленная доза) во избежание вариаций вследствие выбора носителя. Стандартное количество сахарида Hib на дозу составляет от 1 до 30 мкг, предпочтительно приблизительно 10 мкг.

В результате предпочтительно введение конъюгата Hib в концентрации анти-PRP антител ≥0,15 мкг/мл и более предпочтительно ≥1 мкг/мл, и они являются стандартными порогами чувствительности.

Конъюгаты Hib могут быть лиофилизированы перед их применением по изобретению. Также перед лиофилизацией могут быть добавлены дополнительные компоненты, например стабилизаторы. Предпочтительными стабилизаторами для включения являются лактоза, сахароза и маннит, а также их смеси, например смеси лактоза/сахароза, смеси сахароза/маннит и т.д. Готовая вакцина, таким образом, может содержать лактозу и/или сахарозу. Применение смеси сахароза/маннит может ускорять процесс высушивания.

Конъюгаты Hib можно абсорбировать и можно не абсорбировать адъювантами солей алюминия. Предпочтительно не абсорбировать их адъювантами гидроксида алюминия.

Характеристики композиций изобретения

Кроме описанных выше антигенных компонентов, композиции по изобретению, как правило, включают неантигенные компоненты. Неантигенный компонент может включать носители, адъюванты, эксципиенты, буферы и т.д., как описано ниже более подробно. Эти неантигенные компоненты могут иметь различные источники. Например, они могут присутствовать в одном из антигенов или адъювантных материалах, которые применяют в процессе производства, или могут быть добавлены отдельно от указанных компонентов.

Предпочтительные композиции по изобретению включают один или несколько фармацевтических носителей и/или эксципиентов.

Предпочтительно для контроля тоничности включать физиологические соли, такие как натриевые соли. Предпочтителен хлорид натрия (NaCl), который может быть от 1 до 20 мг/мл.

Композиции, как правило, имеют осмотическую концентрацию от 200 мОсм/кг до 400 мОсм/кг, предпочтительно 240-360 мОсм/кг и более предпочтительно находятся в пределах 290-320 мОсм/кг. Ранее было показано, что осмотическая концентрация оказывает влияние на болевые ощущения, вызванные вакцинацией [60], но, тем не менее, поддержание осмотической концентрации в этих пределах не предпочтительно.

Композиции по изобретению могут включать один или несколько буферов. Характерные буферы включают: фосфатный буфер; буфер Tris; боратный буфер; сукцинатный буфер; гистидиновый буфер или цитратный буфер. Буферы, как правило, находятся в диапазоне от 5 до 20 мМ.

Значение pH композиции по изобретению, как правило, находится между 5,0 и 7,5 и более характерно между 5,0 и 6,0 для оптимальной стабильности или между 6,0 и 7,0.

Композиции по изобретению предпочтительно являются стерильными.

Композиции по изобретению предпочтительно являются непирогенными, например, содержат <1 ЕЭ (единица эндотоксина, стандартная мера измерения) на дозу и предпочтительно <0,1 ЕЭ на дозу.

Композиции по изобретению предпочтительно являются безглютеновыми.

Если антигены абсорбированы, то композиция может быть мутной суспензией. Подобная замутненность означает, что микробная контаминация заметна не полностью, и поэтому вакцина предпочтительно содержит консервант. Это особенно важно, если вакцина расфасована в упаковки лекарственных средств для многократного приема. Предпочтительными консервантами для включения являются 2-феноксиэтанол и тимеросал. Однако рекомендуется не использовать, где возможно, ртутные консерванты (например, тимеросал). Предпочтительно, чтобы композиции по изобретению содержали приблизительно менее 25 нг/мл ртути.

Концентрацию каких-либо солей алюминия по изобретению выражают в единицах Al³⁺, предпочтительно менее 5 мг/мл, например ≤4 мг/мл, ≤3 мг/мл, ≤2 мг/мл, ≤1 мг/мл и т.д.

Композиции по изобретению предпочтительно вводят пациентам в дозах по 0,5 мл. Понятно, что рекомендации для 0,5-мл доз включают нормальное отклонение, например 0,5 мл±0,05 мл.

Изобретение может предусматривать основное вещество материала, которое пригодно для упаковки в отдельные дозы, которые затем могут быть выданы для введения пациентам. Концентрации, указанные выше, являются в основном концентрациями в готовой упакованной дозе, и, таким образом, концентрации в нерасфасованной вакцине могут быть выше (например, для уменьшения конечных концентраций разведением).

Остаточный материал отдельных антигенных компонентов также может присутствовать в следовых количествах в готовой вакцине, полученной посредством способа по изобретению. Например, если для получения анатоксинов дифтерии, столбняка и коклюша использовали формальдегид, то готовый продукт вакцины может сохранять следовые количества формальдегида (например, менее 10 мкг/мл, предпочтительно <5 мкг/мл). При получении полиовируса могут быть использованы субстрат или стабилизаторы (например, Medium 199), и они могут оставаться в готовой вакцине. Подобным образом, свободные аминокислоты (например, аланин, аргинин, аспартат, цистеин и/или цистин, глутамат, глутамин, глицин, гистидин, пролин и/или гидроксипролин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, серин, треонин, триптофан, тирозин и/или валин), витамины (например, холин, аскорбат и т.д.), бифосфат натрия, первичный кислый фосфат калия, кальций, глюкоза, аденин сульфат, феноловый красный, ацетат натрия, хлорид калия и т.д., могут оставаться в готовой вакцине в концентрации ≤100 мкг/мл, предпочтительно <10 мкг/мл, каждый. Другие компоненты при получении антигенов, такие как неомицин (например, неомицин сульфат, особенно компонента IPV), полимиксин B (например, полимиксин B сульфат, особенно компонента IPV) и т.д., также могут присутствовать, например, в количествах менее нанограмма на дозу.

Возможные дополнительные компоненты готовой вакцины, которые образовываются при получении антигена, являются результатом очистки неполного количества антигенов. Таким образом, могут присутствовать малые количества белков B. pertussis, C. diphtheriae, C. tetani и/или S. cerevisiae и/или геномной ДНК.

Если применяют компонент IPV, его, как правило, культивируют в клетках Vero. Предпочтительно готовая вакцина содержит менее 50 пг/мл ДНК клеток Vero, например менее 50 пг/мл ДНК клеток Vero с длиной ≥50 пар оснований.

Адъюванты

Предпочтительные иммуногенные композиции по изобретению включают адъювант, и адъювант предпочтительно включает одну или несколько солей алюминия, и особенно адъювант фосфата алюминия и/или адъювант гидроксида алюминия. Антигенные компоненты, используемые для получения композиции по изобретению, предпочтительно включают адъюванты алюминия до использования, т.е. они предварительно смешаны или предварительно абсорбированы адъювантом(ами).

Адъюванты алюминия, применяемые в настоящее время, в основном относятся к адъювантам как "гидроксида алюминия", так и "фосфата алюминия". Однако данные названия даны для удобства, так как ни один из них не имеет точного описания конкретного химического соединения, которое присутствует (например, смотрите главу 9 ссылки 61). В изобретении можно использовать любую из солей "гидроксид" или "фосфат", в основном применяют в качестве адъювантов.

Адъюванты, известные как "гидроксид алюминия", являются в основном солями гидроокиси алюминия, которые обычно, по меньшей мере частично, кристаллизованы. Гидроокись алюминия, которая может быть описана формулой AlO(OH), можно отличать от других соединений алюминия, таких как гидроксид алюминия Al(OH)₃, посредством инфракрасной спектроскопии (IR), в частности, наличием области поглощения в области 1070 см^-1 и значительным плечом хроматографического пика в 3090-3100 см^-1 (глава 9 ссылки 61).

Адъюванты, известные как "фосфат алюминия", являются в основном гидроксифосфатами алюминия, также часто содержащими малые количества сульфата. Они могут быть получены преципитацией, и условия реакции и концентрации при преципитации могут влиять на степень замены в соли фосфатной группы на гидроксильную. Гидроксифосфаты, как правило, имеют молярную концентрацию PO₄/Al от 0,3 до 0,99. Гидроксифосфаты можно отличать от определенного AlPO₄ наличием гидроксильных групп. Например, диапазон IR спектра в области 3164 см^-1 (например, при нагревании до 200°C) свидетельствует о наличии структурных гидроксильных групп (глава 9 ссылки 61).

Молярная концентрация PO₄/Al³⁺ адъюванта фосфата алюминия, как правило, составляет от 0,3 до 1,2, предпочтительно от 0,8 до 1,2 и более предпочтительно 0,95±0,1. Фосфат алюминия, как правило, некристаллический, в частности соли гидроксифосфата. Типичным адъювантом является некристаллический гидроксифосфат алюминия с молярной концентрацией PO₄/Al от 0,84 до 0,92, с включением 0,6 мг Al³⁺/мл. Фосфат алюминия, как правило, корпускулярный. Стандартный диаметр твердых частиц после любой антигенной абсорбции находится в диапазоне 0,5-20 мкм (например, приблизительно 5-10 мкм).

PZC фосфата алюминия находится в обратной зависимости от степени замещения фосфатной группы на гидроксильную, и указанная степень замещения может варьировать в зависимости от условий реакции и концентрации реактивов, используемых при получении соли посредством преципитации. PZC также меняется посредством изменения концентрации свободных ионов фосфата в растворе (больше фосфата = больше кислого PZC) или добавления буфера, такого как гистидиновый буфер (делает PZC более щелочным). Фосфаты алюминия, применяемые в изобретении, как правило, имеют PZC от 4,0 до 7,0, более предпочтительно от 5,0 до 6,5, например приблизительно 5,7.

Раствор фосфата алюминия, применяемый для приготовления композиции по изобретению, может содержать буфер (например, фосфатный или гистидиновый, или Tris буфер), но это не всегда обязательно. Раствор фосфата алюминия предпочтительно стерилен и свободен от пирогенов. Раствор фосфата алюминия может включать свободные водные ионы фосфата, например присутствуют в концентрации от 1,0 до 20 мМ, предпочтительно от 5 до 15 мМ и более предпочтительно приблизительно 10 мМ. Раствор фосфата алюминия также может включать хлорид натрия. Концентрация хлорида натрия находится предпочтительно в диапазоне от 0,1 до 100 мг/мл (например, 0,5-50 мг/мл, 1-20 мг/мл, 2-10 мг/мл) и более предпочтительно приблизительно 3±1 мг/мл. Наличие NaCl обеспечивает правильное определение pH перед антигенной абсорбцией.

Способы лечения и введение вакцины

Изобретение предполагает совместное введение антигенов от различных патогенов. Такие антигены могут быть введены совместно в форме комбинированной вакцины (т.е. отдельная водная композиция, содержащая несколько антигенов, таких, что их одновременное введение вызывает иммунизацию субъекта против нескольких патогенов). Альтернативно, они могут быть введены пациенту по отдельности (например, в различные места), но, главное, в одно и то же время, например в течение одной консультации врача или других медицинских работников. Таким образом, различные антигены могут быть для одновременного, раздельного или последовательного использования или могут быть смешаны перед применением. Введение различных конъюгатных вакцин одновременно, но в различные места, может позволить избежать потенциальные супрессорные эффекты, наблюдаемые, когда конъюгаты совместно используют белок-носитель.

Композиции по изобретению пригодны для введения человеку, и изобретение относится к способу увеличения иммунного ответа пациента, содержащему стадию введения композиции по изобретению пациенту.

Изобретение также относится к композиции по изобретению для применения в медицине.

Изобретение также относится к применению (a) конъюгированного капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C и (b) бесклеточного антигена B. pertussis в производстве лекарственного препарата для иммунизации пациента.

Изобретение также относится к применению (a) конъюгированного капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C и (b) инактивированного полиовирусного антигена в производстве лекарственного препарата для иммунизации пациента.

Изобретение также относится к применению (a) конъюгированного капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C, (b) конъюгированного капсульного сахарида S. pneumoniae, (c) поверхностного антигена вируса гепатита B в производстве лекарственного препарата для иммунизации пациента.

Изобретение также относится к применению (a) конъюгированного капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C, (b) конъюгированного капсульного сахарида S. pneumoniae, (c) инактивированного полиовирусного антигена в производстве лекарственного препарата для иммунизации пациента.

Изобретение также относится к применению (a) конъюгированного капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C, (b) конъюгированного капсульного сахарида S. pneumoniae, (c) инактивированного полиовирусного антигена и (d) бесклеточного антигена B. pertussis в производстве лекарственного препарата для иммунизации пациента.

Изобретение также относится к применению (a) капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C, конъюгированного с первым белком-носителем, (b) капсульного сахарида S. pneumoniae, конъюгированного со вторым белком-носителем в производстве лекарственного препарата для иммунизации пациента, отличающегося тем, что первый белок-носитель и второй белок-носитель одинаковы.

Иммуногенные композиции по изобретению предпочтительно являются вакцинами, применяющимися для уменьшения или профилактики заболеваний, таких как: бактериальный менингит, включая менингококковый менингит, пневмококковый менингит и менингит Hib; вирусный гепатит, включая инфекции HBV и HAV; дифтерия; столбняк или тризм; судорожный кашель или коклюш; и/или полиомиелит.

Пациентами для получения композиций по изобретению предпочтительно являются пациенты младше 2 лет, предпочтительно в возрасте от 0 до 12 месяцев. Одна определенная группа состоит из пациентов, ранее не получавших конъюгатную менингококковую вакцину, в возрасте от 1 до 3 месяцев. Другая группа состоит из пациентов, ранее получавших иммунизацию дифтерийным анатоксином, в возрасте от 3 до 5 месяцев.

Для полной эффективности стандартная схема первичной иммунизации для детей может включать введение более одной дозы. Например, прием может быть в 0, 2 и 4 месяца (период 0 соответствует первой дозе); 0, 1 и 2 месяца; 0 и 2 месяца; 0, 2 и 8 месяцев и т.д. Первую дозу (0 период) можно вводить приблизительно в 2-месячном возрасте или иногда (например, при схеме приема 0-2-8 месяц) приблизительно в 3-месячном возрасте.

Композиции также можно использовать в качестве повторной иммунизации, например, для детей на втором году жизни.

Композиции по изобретению можно вводить посредством внутримышечной инъекции, например в руку, ногу или ягодицы. Если применяют раздельное введение, то, в частности, при введении двух композиций по отдельности стандартным является парентеральное введение композиций в противоположные конечности, например введение как в правую, так и в левую руку.

Если композиции по изобретению включают адъюванты, основанные на алюминии, в течение хранения возможно выпадение компонентов в осадок. Таким образом, композицию следует встряхнуть перед введением пациенту. Перемешанная композиция, как правило, является мутной белой суспензией.

Способ упаковки композиций по изобретению

Композиции по изобретению можно помещать в контейнеры для применения. Подходящие контейнеры включают ампулы и одноразовые шприцы (предпочтительно стерильные шприцы).

Если композиции по изобретению упакованы в ампулы, они предпочтительно сделаны из стеклянного или пластикового материала. Предпочтительно ампулу стерилизуют перед добавлением в нее композиции. Для того чтобы избежать проблем с пациентами, чувствительными к латексу, ампулы предпочтительно запечатывать пробкой, не содержащей латекс. Ампула может включать разовую дозу вакцины, или она может включать более одной дозы ('многоразовая' ампула), например 10 доз. Если применяют многоразовую ампулу, каждую дозу следует извлекать стерильной иглой и шприцем при строгих асептических условиях, принимая меры для предотвращения контаминации содержимого ампулы. Предпочтительные ампулы изготовлены из бесцветного стекла.

Ампула может иметь крышку (например, наконечник Люэра), обработанную таким образом, что предварительно наполненный шприц может быть вставлен в крышку, содержимое шприца можно выдавить в ампулу (например, восстановить лиофилизированный материал до исходной концентрации в настоящем документе), и содержимое ампулы можно возвратить назад в шприц. После удаления шприца из ампулы, затем можно присоединить иглу, и композицию можно вводить пациенту. Крышка предпочтительно находится внутри клапана или покрытия, так что клапан или покрытие нужно удалить перед тем, как к крышке можно получить доступ.

Если композиция помещена в шприц, шприц обычно не содержит иглу, которая присоединена к нему, хотя отдельная игла может быть укомплектована со шприцем для комплектации и использования. Предпочтительно применять безопасные иглы. 1-дюймовые 23-мерные, 1-дюймовые 25-мерные и 5/8-дюймовые 25-мерные иглы являются стандартными. Шприцы могут быть снабжены отрывными этикетками, на которых может быть напечатан номер партии и срок хранения содержимого для обеспечения документации. Предпочтительно плунжер шприца содержит пробку для предохранения плунжера от случайного удаления при засасывании. Шприцы могут иметь латексные каучуковые крышки и/или плунжеры. Одноразовые шприцы содержат однократную дозу вакцины. Шприц, как правило, имеет кончик колпачка для герметического закрытия кончика перед присоединением иглы, и кончик колпачка предпочтительно изготовлен из бутилкаучука. Если шприц и игла упакованы отдельно, то игла предпочтительно снабжена бутилкаучуковым колпачком. Предпочтителен серый бутилкаучук. Предпочтительными шприцами являются те, которые маркированы торговой маркой "Tip-Lok"^TM.

Если применяют стеклянный контейнер (например, шприц или ампулу), то предпочтительно применять контейнер, изготовленный из боросиликатного стекла вместо натриево-кальциево-силикатного стекла.

Изобретение относится к различным наборам. Наборы могут включать отдельные иммуногенные композиции, и данные композиции могут быть как смешаны друг с другом для получения комбинированной вакцины для немедленного приема в момент использования, так и они могут быть введены по отдельности (например, в различные места), но, главное, в одно время. Таким образом, композиции в наборе могут быть для совместного, раздельного или последовательного применения, или их можно смешать. Если композиции смешивают, то предпочтительно, чтобы по меньшей мере один из них находился изначально в водной форме и один изначально в лиофилизированной форме так, чтобы лиофилизированную композицию активировать водной композицией в момент использования. Если присутствует лиофилизированный компонент, он в основном содержит один или несколько конъюгированных сахаридных антигенов.

Стандартные композиции для отдельного включения в наборы по изобретению содержат: композицию, содержащую MenC конъюгированный антиген; композицию, содержащую пневмококковый конъюгированный антиген; композицию, содержащую бесклеточный антиген(ы) B. pertussis и/или инактивированный полиовирусный антиген; и композицию, содержащую конъюгат Hib.

Композиция, содержащая бесклеточный антиген(ы) B. pertussis, в основном также содержит дифтерийный анатоксин и столбнячный анатоксин. Она также может включать один или несколько из HBsAg и/или IPV. Таким образом, одна композиция набора может быть пентавалентной композицией D-T-Ра-HBsAg-IPV, или готовым раствором компонента D-T-Ра-HBsAg-IPV-Hib.

Каждую композицию набора можно хранить по отдельности, например каждую в отдельной ампуле или шприце. Возможно также поставлять одну композицию в шприце и остальные в ампулах. Если компоненты смешивают для немедленного приема в момент использования, альтернативной заменой отдельных контейнеров является применение многокамерного контейнера. Многокамерный шприц позволяет держать отдельные композиции раздельно в течение хранения, но смешивать при активации плунжера шприца.

Композиции по изобретению могут быть в форме цельного раствора, если они не укомлектованы в форме набора.

Схемы иммунизации

Как упомянуто выше, стандартная схема первичной иммунизации для детей содержит введение более одной дозы. Например, прием может быть в 0, 2 и 4 месяца (период 0 соответствует первой дозе); 0, 1 и 2 месяца; 0 и 2 месяца; 0, 2 и 8 месяцев и т.д. Первую дозу (0 период) вводят, как правило, приблизительно в 2-месячном возрасте. Показано, что 2-дозовая схема приема (например, с разницей в два месяца) не уступает более дорогой 3-дозовой схеме (например, с разницей в месяц). Стандартные, неменингококковые вакцины можно доставлять между 2 дозами 2-дозовой схемы приема.

Таким образом, изобретение относится к способу лечения пациента, который ранее получал (i) однократную дозу капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C и (ii) более одной дозы одного или нескольких из бесклеточного антигена B. pertussis, поверхностного антигена вируса гепатита B и/или инактивированного полиовируса, содержащего введение пациенту дополнительной дозы капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C. Необязательно можно вводить дополнительную дозу MenC совместно с другими антигенами, как описано выше.

Изобретение также относится к способу увеличения иммунного ответа пациента, содержащему стадии: (i) совместное введение пациенту капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C и одного или нескольких из бесклеточного антигена B. pertussis, поверхностного антигена вируса гепатита B и/или инактивированного полиовируса; затем (ii) введение пациенту одного или нескольких из бесклеточного антигена B. pertussis, поверхностного антигена вируса гепатита B и/или инактивированного полиовируса без совместного введения капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C; и (iii) совместное введение пациенту капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C и одного или нескольких из бесклеточного антигена B. pertussis, поверхностного антигена вируса гепатита B и/или инактивированного полиовируса. Стадии (i), (ii) и (iii) предпочтительно выполняют в последовательности с интервалами по меньшей мере в один месяц. Они могут быть выполнены приблизительно в 2-месячном возрасте, приблизительно в 3-месячном возрасте и приблизительно в 4-месячном возрасте. Способ можно удобно осуществить посредством введения: (i) первой вакцины и второй вакцины; (ii) второй вакцины, но не первой вакцины; и (iii) первой вакцины и второй вакцины.

В альтернативной схеме приема стадии (ii) и (iii) могут быть переставлены, т.е. пациент получает вакцину серогруппы C в первый и во второй визиты, но не получает в третий.

Изобретение также относится к применению конъюгированного капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C в производстве лекарственного препарата для иммунизации пациента, где пациент ранее получал (i) n доз капсульного сахарида N. meningitidis серогруппы C и (ii) более n доз одного или нескольких из бесклеточного антигена B. pertussis, поверхностного антигена вируса гепатита B и/или инактивированного полиовируса. n предпочтительно равняется 1.

Общие сведения

Термин "содержащий" охватывает "содержащий", а также "состоящий из", например, композиция, "содержащая" X, может состоять исключительно из X или может включать что-нибудь дополнительное, например X+Y.

Слово "в основном" не исключает "полностью", например, композиция, которая является "в основном свободной" от Y, может быть полностью свободной от Y. Где необходимо, слово "в основном" может быть опущено из определения по изобретению.

Термин "приблизительно" в отношении числового значения x означает, например, x±10%.

За исключением специально оговоренных случаев, способ, содержащий стадию смешивания двух или более компонентов, не требует какого-либо определенного порядка смешивания. Таким образом, компоненты могут быть смешаны в любом порядке. Если имеется три компонента, то два компонента могут быть объединены друг с другом, и затем их комбинация может быть объединена с третьим компонентом и т.д.

Если антиген характеризуют как "абсорбированный" с адъювантом, предпочтительно, чтобы абсорбировали по меньшей мере 50% (по массе) антигена, например, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% или более. Предпочтительно, чтобы и дифтерийный анатоксин, и столбнячный анатоксин абсорбировали полностью, т.е. ничего не обнаруживали в супернатанте. Также предпочтительна полная абсорбция HBsAg.

Количества конъюгатов, как правило, даны в единицах массы сахаридов (т.е. доза конъюгата (носитель + сахарид) в целом выше, чем заданная доза) во избежание вариаций вследствие выбора носителя.

Для конъюгатов используют стандартные белки-носители, являющиеся бактериальными токсинами, такими как дифтерийный анатоксин [например, смотрите главу 13 ссылки 1; ссылки 62-65] (или его мутант CRM197 [66-69]) и столбнячный анатоксин, как правило, в форме анатоксина (например, полученный обработкой инактивирующим химическим соединением, таким как формалин или формальдегид). Другие подходящие белки-носители включают в качестве неограничивающих примеров наружный мембранный белок N. meningitidis [70], синтетические пептиды [71, 72], белки теплового шока [73, 74], белки коклюша [75, 76], цитокины [77], лимфокины [77], гормоны [77], факторы роста [77], искусственные белки, содержащие несколько эпитопов CD4⁺T-клеток человека, от антигенов, полученных от различных патогенов [78], таких как N19 [79], белок D от H. influenzae [80-82], пневмолизин [83], поверхностный белок пневмококка PspA [84], железосодержащие белки [85], анатоксин A или B из C. difficile [86] и т.д.

Если животный (и, в частности, бычий) материал применяют в клеточной культуре, он должен быть получен из источников, которые свободны от трансмиссивных губчатых энцефалопатий (TSE) и, в частности, свободны от губчатой энцефалопатии коров (BSE).

СПОСОБЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Понятно, что изобретение описывают только в качестве примера и что могут быть выполнены модификации, в то же время остающиеся в объеме и сущности изобретения.

Три дозы в 2, 4 и 6 месяцев

Исследование предназначено для оценки безвредности и иммуногенности вакцины MENJUGATE^TM (конъюгированный капсульный сахарид менингококка серогруппы C) при введении вместе с вакциной PREVNAR^TM (конъюгированный 7-валентный капсульный сахарид пневмококка) и/или продуктом INFANRIX-HEXA^TM (D-T-Ра-HBsAg-IPV-Hib).

992 младенцев в возрасте 2 месяцев в регистрации распределяли в одну из трех групп, получающих: (1) PREVNAR^TM плюс INFANRIX-HEXA^TM; (2) MENJUGATE^TM плюс INFANRIX-HEXA^TM; или (3) MENJUGATE^TM плюс PREVNAR^TM плюс INFANRIX-HEXA^TM. Вакцины вводили одновременно, но в разные места инъекции. Исследование проводили с вакцинами, вводимыми в возрасте 2, 4 и 6 месяцев. Локальная эритема, уплотнение и отек были незначительно меньше в группе 3 по сравнению с группой 2 (в основном приблизительно на 5% реакций меньше); болезненность была одинакова в обеих группах. Системные реакции были похожи во всех группах, но были в основном самыми низкими во 2 группе, хотя диарея была самой низкой в 3 группе. Однако во всех случаях вакцины были высоко толерантны и безопасны.

Для оценки иммуногенности бактерицидный титр (BCA) против MenC измеряли в двух образцах крови от каждого субъекта: первый был взят во время первой дозы вакцины; второй был взят на 4-6 недель после третьей дозы. В тесте BCA применяли человеческий комплемент.

Иммунологические результаты исследования были недостоверны, потому что ранее Buttery et al. [11] показали, что конъюгаты менингококка серогруппы C были иммунологически несовместимы с мультивалентными конъюгатами пневмококка. Тем не менее, в противоположность, в исследовании по настоящему изобретению показано, что у 100% субъектов в группах (2) и (3) достигнут иммунный бактерицидный титр (т.е. увеличение титров BCA ≥1:8 в двух образцах крови) против N. meningitidis серогруппы C. Кроме того, GMT между обеими группами были приблизительно идентичными, показывая, что ни один из различных компонентов non-MenC вакцины не препятствует иммуногенности конъюгата MenC.

Результаты BCA были следующими:

Группа вакцин 2 3 Разница/отношение % с ≥1:8 увеличением в BCA GMT 100%
(98-100%) 100%
(99-100%) 0%
(-1%-2%) BCA GMT во втором образце 572
(473-690) 565
(465-686) 0,99
(0,75-1,3)

Иммуногенность компонентов INFANRIX HEXA^TM была не снижена. Титры антител против D, T, P, Hib и HBsAg во втором образце крови измеряли посредством ELISA. Титры антител против полиовируса измеряли посредством стандартного нейтрализационного теста. Результаты были следующими:

Антиген Критерий Группа 3 Группа 2 Разница Дифтерия ≥0,1 МЕ/мл 100% 100% 0% Столбняк ≥0,1 МЕ/мл 100% 100% 0% Коклюш ≥4-кратное увеличение 87% 89% -2% Hib ≥0,15 мкг/мл 96% 99% -3% HBsAg ≥10 МЕ/мл 99% 99% 0% Полиовирус типа 1 ≥1:8 99% 100% 0% Полиовирус типа 2 ≥1:8 100% 100% 0% Полиовирус типа 3 ≥1:8 99% 100% 0%

Антиген Критерий Группа 1 Группа 2 Разница Дифтерия ≥0,1 МЕ/мл 100% 100% 0% Столбняк ≥0,1 МЕ/мл 100% 100% 0% Коклюш ≥4-кратное увеличение 92% 89% -3% Hib ≥0,15 мкг/мл 98% 99% 0% HBsAg ≥10 МЕ/мл 98% 99% 2% Полиовирус типа 1 ≥1:8 99% 100% 1% Полиовирус типа 2 ≥1:8 100% 100% 0% Полиовирус типа 3 ≥1:8 99% 100% 1%

Иммуногенность компонентов PREVNAR^TM была незначительно снижена. Проценты пациентов с титрами ELISA ≥0,15 мкг/мл во втором образце крови были следующими:

Серотип Группа 3 Группа 1 Разница 4 95% 96% 0% 6В 91% 92% -1% 14 94% 96% -2% 9V 95% 97% -2% 18С 96% 94% -3% 19F 94% 97% -3% 23F 91% 95% -3%

Таким образом, иммунный ответ против сахарида MenC в группах (2) и (3) был не ниже по сравнению с группой (1). Иммунный ответ против гексавалентных антигенов был похож в трех группах. Таким образом, иммунный ответ против сахарида пневмококка в группе (3) был не ниже по сравнению с группой (1). Данные результаты согласуются с ссылкой 3.

Сравнение 2-дозных и 3-дозных схем приема

INFANRIX-HEXA^TM можно вводить в соответствии с 3-дозной первичной схемой приема в 2-, 3- и 4-месячном возрасте. Т.к. конъюгатные вакцины могут быть ингибированы совместным введением антигенов бесклеточного коклюша, в исследовании предполагали оценить безвредность и иммуногенность вакцины MENJUGATE^TM при введении вместе с продуктом INFANRIX-HEXA^TM по 3-дозной схеме приема. Конъюгат менингококка вводили совместно со всеми тремя гексавалентными дозами (т.е. в 2-, 3- и 4-месячном возрасте) или вводили только с первой и третьей дозами (т.е. в 2 и 4 месяца). Иммунную память на конъюгат менингококка оценивали введением неконъюгированной смеси сахаридов серогрупп A и С в возрасте 12 месяцев одновременно с дополнительной дозой INFANRIX-HEXA^TM со взятием крови через 7 или 28 суток.

241 младенец в возрасте 7-11 недель в регистрации распределяли в одну из четырех групп вакцинации, получающих: (1) MENJUGATE^TM плюс INFANRIX-HEXA^TM в соответствии с 3-дозной схемой приема, за которыми следовали неконъюгированный А/С и INFANRIX-HEXA^TM в 12 месяцев со взятием крови через 1 неделю; (2) та же группа (1), но со взятием крови через 28 суток после неконъюгированного А/С; (3) MENJUGATE^TM плюс INFANRIX-HEXA^TM в соответствии с 2-дозной схемой приема также с введением INFANRIX-HEXA^TM в возрасте 3 месяцев, за которыми следовали неконъюгированный А/С и INFANRIX-HEXA^TM в 12 месяцев со взятием крови через 1 неделю; (4) та же группа (3), но со взятием крови через 28 суток после неконъюгированного А/С. Если одновременно было введено более одной дозы, дозы вводили одновременно, но в разные места инъекции.

Для локальной реактогенности между группами лечения и вакцинами не было обнаружено клинически значимой разницы. После вакцинации MenPS A/C и четвертой инъекции гексавалентной вакцины в 12 месяцев более высокая доля субъектов в каждой группе показала локальные реакции по сравнению с первой, второй и третьей инъекцией как гексавалентной вакцины, так и Menjugate^TM. Наибольшее число локальных реакций имели место в течение двух дней инъекции и были оценены как легкие и средние. Субъектов с тяжелой локальной реакцией к менингококковому конъюгату не было.

Частота системных реакций при суммировании всех инъекций была похожей между всеми четырьмя группами лечения. При визите 2, который позволил сравнить системные реакции после совместного ведения Menjugate^TM и гексавалентной вакцины (группы 1 и 2) с реакциями после гексавалентной вакцины в чистом виде (группы 3 и 4), клинически значимой разницы обнаружено не было. Наибольшие системные реакции имели место между 6 часами и 2 сутками после инъекции. Ни один из субъектов не показал ректальную температуру ≥40,5°C.

Через месяц после первичной иммунизации с Menjugate^TM проценты вакцинируемых пациентов, демонстрирующих иммунные титры SBA (титры ≥8), были 98% и 100% для 2-дозной и 3-дозной схем иммунизации соответственно. Иммунные титры SBA оставались на 89% (2-дозная группа) против 95% (3-дозная группа) в течение 8 месяцев после вакцинации. Обе иммунизационные схемы вызывали более чем 100-кратное увеличение геометрических значений титра SBA, измеренного через 1 месяц после 2 или 3 иммунизации.

С однократной стимулирующей дозой MenPS A/C субъекты, также получавшие иммунизационную схему приема Menjugate^TM, показали 15-кратное или большее увеличение SBA GMT по сравнению с периодом до стимуляции. Это можно сравнить с 1,09-кратным увеличением, обнаруженным в предыдущем исследовании, где однократную дозу MenPS A/C вводили неиммунизированным 12-месячным младенцам в исторической контрольной группе. SBA, определяемые через 28 дней после стимуляции MenPS A/C GMT (группы 2 и 4), имели тенденцию увеличиваться по сравнению с SBA, определяемыми на 7 день (группы 1 и 3).

Таким образом, реактогенность и другие защитные параметры были схожи среди всех четырех вакцинируемых групп.

Базовые линии GMC антител против поверхностного антигена вируса гепатита B были ниже у субъектов в группах с 2-дозной и 3-дозной схемами приема (8,61 МЕ/л и 5,93 МЕ/л). Через месяц после первичной иммунизации они увеличились в 52 и 96 раз соответственно, и у 99% субъектов в обеих группах обнаружены защитные концентрации антител ≥10 МЕ/л.

Таким образом, две инъекции конъюгата менингококка, вводимые в 2- и 4-месячном возрасте, обеспечивали иммунологическую память для иммунной системы у здоровых младенцев. У 98% субъектов в 2-дозных группах и 100% субъектов в 3-дозных группах титр hBCA достиг ≥1:8. Иммунный ответ, индуцированный 2-дозной схемой приема, можно считать не ниже иммунного ответа, индуцированного 3-дозной схемой приема. 99% всех субъектов обнаружили титры ≥10 МЕ/л в ответ на компонент гепатита В при гексавалентной вакцинации, таким образом, демонстрируя отсутствие интерференции и с 2-дозной, и с 3-дозной менингококковыми схемами приема.

В заключение, 2-дозная менингококковая схема с интервалом приема в два месяца у младенцев с возрастом младше 1 года была иммуногенной и индуцировала иммунологическую память при совместном введении с гексавалентной вакциной. 2-дозная иммунизационная схема приема MenC не уступает 3-дозной схеме приема. Свидетельств уменьшения иммуногенности при совместном введении антигенов D, T, Pa, IPV, HBV или Hib не выявлено.

Указанным пациентам на втором году жизни может быть дана повторная доза менингококкового конъюгата.

7-валентная D-T-Pa-HBV-IPV-Hib-MenC иммунизация младенцев

В подтверждение результатов, представленных выше, ссылка 87 демонстрирует исследование одновременного использования конъюгатной вакцины менингококка C (NEISVAC-C^TM со столбнячным анатоксиновым носителем) с комбинациями, основанными на DTaP, в соответствии с двумя схемами вакцинации, одна из которых содержит вакцинацию гепатитом B при рождении. Здоровые младенцы были случайным образом распределены по получению (i) D-T-Pa-HBV-IPV/Hib (INFANRIX HEXA^TM) в 2, 4 и 6 месяцев или (ii) HBV при рождении, за которым следовали INFANRIX HEXA^TM в 2 и 6 месяцев, но D-T-Pa-IPV/Hib в 4 месяца. В обеих группах две дозы конъюгата MenC-TT были совместно введены в 2 и 4 месяца, по сравнению с 3 дозами конъюгата MenC-CRM197 (MENINGITEC^TM), совместно вводимыми с INFANRIX HEXA^TM в 2, 4 и 6 месяцев.

Все реципиенты NEISVAC-C^TM имели серопротективные концентрации анти-PRP антител через 1 месяц после третьей дозы вакцины, и все имели титры SBA-MenC ≥1:8 после второй дозы NEISVAC-C^TM. Полученные ответы не уступали ответам, наблюдаемым после 3 доз D-Ta-P-HBV-IPV/Hib и MENINGITEC^TM. GMC анти-PRP антител были достоверно выше у вакцин NEISVAC-C^TM, чем у вакцин MENINGITEC^TM. Иммунный ответ ко всем другим совместно вводимым антигенам не пострадал, имея отношение серопротекция/серопозитивность ≥98,1% у вакцин NEISVAC-C^TM.

Все схемы приема были хорошо толерантны без различий в реактогенности между исследуемыми группами.

Таким образом, сделаны выводы, что совместное введение D-T-Pa-HBV-IPV/Hib или D-T-Pa-IPV/Hib с двумя дозами конъюгата MenC со столбнячным анатоксиновым носителем является безопасным, хорошо толерантным и иммуногенным и не приводит к снижению ответа на другие совместно вводимые антигены.

ССЫЛКИ (содержимое которых включено в настоящее описание в качестве ссылки)

[1] Vaccines, (eds. Plotkin & Orenstein). 4th edition, 2004, ISBN: 0-7216-9688-0.

[2] Dagan et al. (2004) InfectImmun 72:5383-91.

[3] Tejedor et al. (2004) Pediatr Infect Dis J 23:1109-15.

[4] Halperin et al. (2002) Clin Invest Med 25:243-51.

[5] Schmitt et al. (2003) Vaccine 21:3653-62.

[6] Shmefield et al. (1999) Pediatr Infect Dis J. 18:757-63.

[7] Slacks al. (2001) J Infect Dis. 184:1617-20.

[8] Tichmann-Schumann et al. (2005) Pediatr Infect Dis 24:70-77.

[9] WO02/00249.

[10] WO02/080965.

[11] Buttery et al. (2005) JAMA 293:1751-8.

[12] WO99/42130.

[13] Jones (2001) Curr Opin Investig Drugs 2:47-49.

[14] Costantino et al. (1992) Vaccine 10:691-8.

[15] Lieberman et al. (1996) JAMA 275:1499-503.

[16] WO02/058737.

[17] WO03/007985.

[18] Rennels et al. (2002) Pediatr Infect Dis J 21:978-979.

[19] Campbell et al. (2002) J Infect Dis 186:1848-1851.

[20] Arakere & Frasch {1991) Infect. Immun. 59:4349-4356.

[21] Michon et al. (2000) Dev. Biol. 103:151-160.

[22] Rubinstein & Stein (1998) J. Immunol. 141:4357-4362.

[23] WO2005/033148.

[24] W.H.O. Tech Rep. Ser. 594:51, 1976.

[25] Watson (2000) Pediatr Infect Dis J 19:331-332.

[26] Rubin (2000) Pediatr Clin North Am 47:269-285, v.

[27] Jedrzejas (2001) Microbiol Mol Biol Rev 65:187-207.

[28] Zielen et al. (2000) Infect. Immun. 68:1435-1440.

[29] Darkes & Plosker (2002) Paediatr Drugs 4:609-630.

[30] WO98/51339.

[31] Rappuoli et al. (1991) TIBTECH 9:232-238.

[32] Module 6 of WHO's The immunological basis for immunization series (Robertson).

[33] Sesardic et al. (2001) Biologicals 29:107-22.

[34] NIBSC code: 98/560.

[35] Module 1 of WHO's The immunological basis for immunization series (Galazka).

[36] NIBSC code: 69/017.

[37] NIBSC code: DIFT.

[38] Sesardic et al. (2002) Biologicals 30:49-68.

[39] NIBSC code: 98/552.

[40] NIBSC code: TEFT.

[41] Vanlandschoot et al. (2005) J Gen Virol 86:323-31.

[42] European patent 0460716; US patent 5349059.

[43] Crabeel et al. (1983) Proc Natl Acad Sci USA 78:5026-30.

[44] Cabezon et al. (1984) Proc Natl Acad Sci USA 81:6594-8.

[45] van der Straten et al. (1986) DNA 5:129-36.

[46] Harford et al. (1987) Postgraduate Medical Journal 63 (suppl 2):65-70.

[47] WO03/066094.

[48] WO93/24148.

[49] Ramsay et al. (2001) Lancet 357(9251):195-196.

[50] Lindberg (1999) Vaccine 17 Suppl 2:S28-36.

[51] Buttery & Moxon (2000) J R Coll Physicians Lond 34:163-168.

[52] Ahmad & Chapnick (1999) Infect Dis Clin North Am 13:113-133, vii.

[53] Goldblatt (1998) J. Med. Microbiol. 47:563-567.

[54] Европейский патент 0477508.

[55] Патент США 5306492.

[56] WO98/42721.

[57] Conjugate Vaccines (eds. Cruse et al.) ISBN 3805549326, particularly vol. 10:48-114.

[58] Hermanson (1996) Bioconjugate Techniques ISBN: 0123423368 или 012342335X.

[59] WO96/40242.

[60] Nony et al. (2001) Vaccine 27:3645-51.

[61] Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell & Newman) Plenum Press 1995 (ISBN 0-306-44867-X).

[62] Патент США 4709017.

[63] WO93/25210.

[64] Патент США 5917017.

[65] WO00/48638.

[66] Del Guidice et al. (1998) Molecular Aspects of Medicine 19:1-70.

[67] Anonymous (Jan 2002) Research Disclosure, 453077.

[68] Anderson (1983) Infect Immun 39(l):233-238.

[69] Anderson et al. (1985) J Clin Invest 76(l):52-59.

[70] EP-A-0372501.

[71] EP-A-0378881.

[72] EP-A-0427347.

[73] WO93/17712.

[74] WO94/03208.

[75] WO98/58668.

[76] EP-A-0471177.

[77] WO91/01146.

[78] Falugi et al. (2001) Eur J Immunol 31:3816-3824.

[79] Baraldo et al. (2004) Infect Immun 72(8):4884-7.

[80] EP-A-0594610.

[81] Ruan et al. (1990) J Immunol 145:3379-3384.

[82] WO00/56360.

[83] Kuo et al. (1995) Infect Immun 63:2706-13.

[84] WO02/091998.

[85] WO01/72337.

[86] WO00/61761.

[87] Tejedor et al. (2006) Pediatr Infect Dis J 25:713-20.

Группа изобретений относится к области медицины и касается множественной вакцинации, включающей менингококки серогруппы С. Сущность группы изобретений включает набор для иммунизации, содержащий первый иммуногенный компонент, представляющий коньюгированный капсульный сахарид штамма ОАс+ Neisseria meningitides серогруппы С и коньюгированный антиген Hib в лиофилизированной форме, и второй иммуногенный компонент, содержащий водный состав дифтерийного анатоксина, столбнячного анатоксина и бесклеточного антигена В. pertussis. Изобретение также включает применение коньюгированного с белком-носителем столбнячного анатоксина капсульного сахарида штамма ОАс+ Neisseria meningitides серогруппы С в лиофилизированной форме и водного бесклеточного антигена В.pertussis для получения лекарственного средства для иммунизации. Преимущество группы изобретений заключается в разработке наборов вакцины, которые могут защитить от MenC в составе комбинированных вакцин без потери иммуногенности. 2 н. и 29 з.п. ф-лы.

1. Набор дли иммунизации, содержащий первый иммуногенный компонент и второй иммуногенный компонент, в котором:
(a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид штамма ОАс+ Neisseria meningitidis серогруппы С и конъюгированный антиген Hib, в лиофилизированной форме; и
(b) второй иммуногенный компонент содержит водный состав дифтерийного анатоксина, столбнячного анатоксина и бесклеточного антигена В.pertussis.

2. Набор по п.1, где штамм ОАс+ является серотипом 16.

3. Набор по п.1, где штамм ОАс+ является сероподтипом Р1.7а,1 или сероподтипом Р1.1.

4. Набор по п.1, где штамм ОАс+ является штаммом- ОАс+С:16:Р1.7а,1.

5. Набор по п.3, где штаммом ОАс+ является С11.

6. Набор по любому из пп.1-5, где капсульный сахарид штамма ОАс+Neisseria meningitidis серогруппы С конъюгирован с белком-носителем CRM197, белком-носителем столбнячного анатоксина, белком-носителем дифтерийного анатоксина или белком-носителем D H.influenzae.

7. Набор по любому из пп.1-5, где капсульный сахарид штамма ОАс+Neisseria meningitidis серогруппы С является полноразмерным сахаридом.

8. Набор по п.6, где капсульный сахарид штамма ОАс+ Neisseria meningitidis серогруппы С является полноразмерным сахаридом.

9. Набор по п.7, где капсульный сахарид имеет молекулярную массу <100 кДА.

10. Набор по п.8, где капсульный сахарид имеет молекулярную массу <100 кДа.

11. Набор по п.9, где капсульный сахарид имеет молекулярную массу между 5 кДа и 75 кДа.

12. Набор по п.10, где капсульный сахарид имеет молекулярную массу между 5 кДа и 75 кДа.

13. Набор по любому из пп.1-5, где конъюгированный капсульный сахарид штамма ОАс+Neisseria meningitidis серогруппы С имеет отношение сахарид: белок (масс/масс.) между 1:10 и 10:1.

14. Набор по п.6, где конъюгированный капсульный сахарид штамма ОАс+ Neisseria meningitidis серогруппы С имеет отношение сахарид: белок (масс./масс.) между 1:10 и 10:1.

15. Набор по любому из пп.1-5, где конъюгированный капсульный сахарид штамма ОАс+ Neisseria meningitidis серогруппы С адсорбирован на соль алюминия.

16. Набор по п.6, где конъюгированный капсульный сахарид штамма ОАс+ Neisseria meningitidis серогруппы С адсорбирован на соль алюминия.

17. Набор по любому из пп.1-5, где конъюгированный капсульный сахарид штамма ОАс+ Neisseria meningitidis серогруппы С не адсорбирован на соль алюминия.

18. Набор по п.6, где конъюгированный капсульный сахарид штамма ОАс+ Neisseria meningitidis серогруппы С не адсорбирован на соль алюминия.

19. Набор по любому из пп.1-5, где антиген бесклеточной вакцины против В.pertussis содержит один, два или три следующих антигенов:
(1) дезактивированный коклюшный токсин (′РТ′);
(2) филаментный гемагглютинин ('FНА¹); и
(3) пертактин.

20. Набор по п.6, где антиген бесклеточной вакцины против В.pertussis содержит один, два или три следующий антигена: (1) дезактивированный коклюшный токсин (′РТ′); (2) филаментный гемагглютинин (′FНА′); и (3) пертактин.

21. Набор по п.19, где РТ, FHA и пертактин адсорбированы на гидроксиде алюминия.

22. Набор по п.20, где РТ, FHA и пертаксин адсорбированы на адъюванте гидроксиде алюминия.

23. Набор по любому из пп.1-5, где дифтерийный анатоксин адсорбирован на адъюванте гидроксиде алюминия.

24. Набор по п.6, где дифтерийный анатоксин адсорбирован на адъюванте гидроксиде алюминия.

25. Набор по любому из пп.1-5, где столбнячный анатоксин адсобрирован на адъюванте гидроксиде алюминия.

26. Набор по п.6, где столбнячный анатоксин адсобрирован на адъюванте гидроксиде алюминия.

27. Набор по любому из пп.1-5, где второй компонент представляет собой пентавалентную композицию D-T-Pa-HbsAg-IPV.

28. Набор по п.6, где второй компонент представляет собой пентавалентную композицию D-T-Pa-HbsAg-IPV.

29. Набор по любому из пп.1-5, где:
(a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид Nelsseria meningitidis серогруппы С;
(b) второй иммуногенный компонент содержит дифтерийный анатоксин, столбнячный анатоксин, антиген бесклеточной вакцины против В.pertussis, поверхностный антиген вируса гепатита В и инактивированный антиген полиовируса, где первый иммуногенный компонент является лиофилизованным и не содержит адъюванта фосфата алюминия.

30. Набор по п.6, где:
(a) первый иммуногенный компонент содержит конъюгированный капсульный сахарид Neisseria meningitidis серогруппы С;
(b) второй иммуногенный компонент содержит дифтерийный анатоксин, столбнячный анатоксин, антиген бесклеточной вакцины против В.pertussis, поверхностный антиген вируса гепатита В и инактивированный антиген полиовируса, где первый иммуногенный компонент является лиофилизованным и не содержит адъюванта фосфата алюминия.

31. Применение (а) конъюгированного с белком-носителем столбнячного анатоксина капсульного сахарида штамма ОАс+ N.meningitidis серогруппы С, в лиофизилизованной форме и (b) водного бесклеточного антигена В.pertussis, для получения лекарственного средства для иммунизации пациентов.