СПОСОБ ТОРМОЖЕНИЯ ГРУБОГО РУБЦЕВАНИЯ КОНЪЮНКТИВЫ Российский патент 2012 года по МПК A61F9/00 A61N5/67 A61K31/195 A61K35/44 A61P27/02 

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для торможения грубого рубцевания конъюнктивы.

Использование фотодинамической терапии (ФДТ) в офтальмологии включает внутриглазные опухоли, субретинальную неоваскулярную мембрану, абляцию цилиарного тела (Rivelles M.J., 2000), и результатом проводимой терапии является окклюзия новообразованных сосудов с сохранением окружающих тканей (Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. - 2002. - Vol.240. - P.749-757).

Андреев Ю.В. (1993) предложил использовать ФДТ с целью деструкции новообразованных сосудов роговицы в эксперименте.

Аналогом предлагаемого изобретения является способ того же назначения, представляющий собой ФДТ с использованием радахлорина®, состоящего из трех циклических тетрапирролов хлориновой природы (с гидрированным кольцом D), основной из которых (80-90%) - хлорин е6, применяемый для проведения пластики конъюнктивальных фильтрационных подушек после антиглаукоматозных операций (Прокофьева М.И. // Дисс. канд. мед. наук. Лазерная коррекция функции фильтрационных подушечек после фистулизирующих антиглаукоматозных операций. - Москва. - 2004 г.). Способ включает субконъюнктивальное введение 0,3 мл радахлорина в область кистозной фильтрационной подушки (КФП), представляющую собой зону пролиферации и неоваскуляризации. Далее наносят коагуляты аргоновым лазером с длиной волны 488,5-511 нм в произвольном порядке по всей поверхности подушечки от периферии к центру. Мощность излучения составляет 0,5 Вт, экспозиция 0,2 сек, диаметр фокального пятна 50-100 мкм, количество коагулятов 40-60. При этом происходит запустевание новообразованных сосудов и их разрушение.

Недостатками способа являются развитие некробиотических изменений в глубоких слоях конъюнктивы с последующим усилением пролиферации фибробластов в зоне воздействия, в поверхностных слоях собственно конъюнктивы развивается вазопролиферативная активность, появляются локальные деструктивные очаги, формируются участки уплотнения. Также существует необходимость использования отдельного препарата для выявления и уточнения границ пролиферации при проведении флуоресцентной диагностики.

Наиболее близким решением к предлагаемому способу является проведение фотодинамической терапии, включающей введение в субтеноново пространство 0,5-1,0 мл раствора аласенса, полученного путем растворения 2 мг препарата в 10,0 мл физраствора, и пероральное введение 4 мг/кг (8 мг) аласенса в разведении физраствором до 2,0 мл. Последующее контактное облучение зоны пролиферирующих клеток лазером с длиной волны 632,8 нм, мощностью 50-60 мВт и диаметром пучка на конце световода - 2-4 мм. Экспозиция действия - 10-14 минут (см. Изучение воздействия Аласенса на соединительную ткань и новообразованные сосуды свежего рубца конъюнктивы / Балашова Л.М., Попов А.В., Кузьмин С.Г., Шевчик С.А., Спивак И.А. // Клиническая геронтология. - 2006. - Т.12, №9. - С.73).

Однако использование предлагаемых параметров ФДТ приводит к недостаточному внутрисосудистому тромбозу, а увеличение мощности и длительности излучения - к чрезмерному эффекту, что может даже стимулировать процессы чрезмерной пролиферации фибробластов в зоне воздействия, вазопролиферативную активность и формировать участки уплотнения. Необходимость перорального введения препарата параллельно с местным делает методику неудобной, особенно учитывая, что аласенс обладает выраженным неприятным соленым вкусом, от которого непросто избавиться, поскольку соединение при изменении рН становится неустойчивым.

Большое внимание современными исследователями уделяется поиску новых методик, позволяющих добиться угнетения ангиогенеза сосудов конъюнктивы в зонах пролиферирующих клеток и препятствовать грубому рубцеванию конъюнктивы, некробиотическим и деструктивным изменениям ткани.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа, который бы препятствовал грубому рубцеванию конъюнктивы, вызывал угнетение ангиогенеза сосудов конъюнктивы в зонах пролиферирующих клеток и не вызывал некробиотических и деструктивных изменений тканей, обладал бы минимальным токсическим действием и одновременно служил достоверным маркером зон пролиферирующих клеток.

Способ торможения грубого рубцевания конъюнктивы включает проведение фотодинамической терапии, при которой сначала вводят субконъюнктивально не менее 2 мг аласенса, а затем через 1,5-2 часа воздействуют лазерным излучением с длиной волны 632,8 нм.

Способ отличается тем, что воздействие лазерным излучением плотностью мощности 47,7-55,7 мВт/см² проводят в течение 10-14 минут, а через 12-24 часа после вмешательства в конъюнктивальный мешок пораженного глаза вводят препарат висклерон по 1 капле 3 раза в день, в течение не менее 10 дней.

Техническим результатом предлагаемого способа является угнетение ангиогенеза сосудов конъюнктивы в зонах пролиферирующих клеток при отсутствии некробиотических и деструктивных изменений в ткани.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Способ торможения грубого рубцевания конъюнктивы включает в себя проведение фотодинамической терапии с введением регуляторного полипептида, выступающего в качестве протектора облучаемых тканей. Сначала 0,05 г аласенса растворяют в 10 мл физраствора и вводят полученный раствор субконъюнктивально в дозе не более 1,0 мл. Через 1,5-2 часа проводят контактное воздействие лазерным излучением в течение 10-14 минут. Длина волны 632,8 нм, плотность мощности 47,7-55,7 мВт/см². Через 12-24 часа после воздействия проводят местное введение регуляторного полипептида в течение не менее 10 дней. В частном случае в качестве регуляторного полипептида может быть использован раствор висклерона. Дозировка может быть по одной капле 3 раза в день.

Способ осуществляют следующим образом.

Сначала аласенс, представляющий собой препарат на основе гидрохлорида 5-аминолевулиновой кислоты в виде порошка, разводят в физиологическом растворе в количестве не менее 0,05 г на 10 мл. Далее субконъюнктивально в зоне образующегося рубца вводят не более 1,0 мл полученного раствора. При необходимости проводят регистрацию зон пролиферации. Через 1,5-2 часа проводят контактное воздействие на зону свежего рубца гелий-неоновым лазерным излучением в течение 10-14 минут. Длина волны 632,8 нм, плотность мощности 47,7-55,7 мВт/см². В качестве источника излучения может быть использован аппарат ЛЭСА-01 «Биоспек». Через 12-24 часа после воздействия проводят местное введение регуляторного полипептида в течение не менее 10 дней. В частном случае в качестве регуляторного полипептида применяют висклерон, который используют путем закапывания раствора. Дозировка может быть не менее одной капли 3 раз в день.

Препарат «Висклерон» 5 мл (глазные капли) выпускается предприятием ООО «ВИО-ФАРМ» (http://www.vio-farm.ru.) и представляет собой комплекс природных небелковых низкомолекулярных регуляторных пептидов негормонального происхождения, полученных из склеры глаза животных. Содержит активного вещества в 1 мл с концентрацией пептида 10^-10 мг/мл. Фармакологическая активность препарата определяется содержанием в нем низкомолекулярных пептидов, оказывающих регуляторное воздействие на гомеостаз склеры глаза, оказывает регуляторное воздействие на биохимические и морфологические свойства склеры глаза. Кроме того, известно, что при действии препарата Висклерон за счет протекторных свойств наблюдается увеличение жизнеспособности фибробластов, которые участвуют в синтезе коллагена и других молекул внеклеточного матрикса, а также активно делятся при повреждении ткани по сравнению с контрольной группой (Качалина А.В., Краснов М.С. Изучение регуляторного белка, выделенного из склеры глаза быка // Тезисы докладов V Всероссийского научного семинара и Молодежной научной школы «Химия и медицина» в: «Новые лекарственные средства: успехи и перспективы», Уфа: Гилем, 2005, с.116; Скрипникова B.C., Качалина А.В., Краснов М.С., Ямскова В.П., Ямсков И.А. Исследование регуляторного белка, выделенного из склеры глаза быка // Труды VI ежегодной международной молодежной конференции ИБХФ РАН-ВУЗы «Биохимическая физика», Москва, 24-27 ноября, 2006, с.215-224).

Предлагаемое изобретение иллюстрируется нижеприведенными примерами.

Пример 1.

Эксперимент был проведен на 6 кроликах породы шиншилла, у которых была получена адекватная модель сосудистой пролиферации конъюнктивы в условии раневого процесса. Для этого после премедикации и обезболивания с помощью микрохирургических инструментов произведена рана конъюнктивы в верхнем отделе глаза длиной 0,5 см в 1,5-2,0 мм от лимба и параллельно ему.

Через пять дней всем кроликам в правые глаза с зарастающей раной конъюнктивы и большим количеством новообразованных сосудов в области нежного рубца под конъюнктиву ввели 1,0 мл препарата аласенс (в разведении 0,04 г на 10 мл физраствора). Затем через 1,2-2,0 ч в течение 14 мин проводили контактное облучение зоны рубца лазером с длиной волны 632,8 нм, плотностью мощности 47,7-55,7 мВт/см². Левые глаза оставались контрольными.

На следующие сутки после проведения ФДТ в опытные глаза закапывали официнальный раствор висклерона 3 раза в день в течение 10 дней.

Клинически при осмотре в щелевую лампу после введения аласенса и последующего лазерного воздействия в опытных правых глазах определяли резкое побледнение рубца и сужение сосудов конъюнктивы. При морфологическом исследовании через три дня после воздействия в правых глазах в поврежденной области эпителий отсутствовал на значительном протяжении вследствие его отслоения от подлежащей рыхлой соединительной ткани. В прилежащей к поврежденной области эпителий состоял из трех-четырех и более слоев недифференцированных, гипертрофированных эпителиоцитов, обнаруживалась непрочность эпителиально-стромальных взаимоотношений. Рыхлая волокнистая соединительная ткань значительно отечна и некротизирована. Это проявлялось в виде наличия множества разрушенных, безъядерных нейтрофильных лейкоцитов и грануляции волокнистых структур межклеточного вещества. В ткани присутствовало незначительное количество клеток фибробластического ряда. В коньюнктивальной области большое количество крупных запустевших и мелких новообразованных сосудов с форменными элементами в просвете в области, близкой к повреждению. В контрольных левых глазах определено образование рыхлой волокнистой соединительной ткани, покрытой тремя-четырьмя слоями эпителия, с большим количеством новообразованных сосудов и клеток фибробластического ряда.

При исследовании через десять (конъюнктивальная область через десять дней, опыт: новообразованные сосуды, в области повреждения эпителий полностью не восстановлен, расширение просвета сосудов венозного русла; конъюнктивальная область через десять дней, контроль: новообразованные кровеносные сосуды, незначительная лейкоцитарная инфильтрация) и тридцать дней (конъюнктивальная область через тридцать дней, опыт: мелкие кровоизлияния, скорее всего связанные с нарушением целостности сосудов, отечность клеток, образующих стенку новообразованного сосуда; конъюнктивальная область через тридцать дней, контроль: сосуды нормального диаметра, незначительная отечность рыхлой волокнистой соединительной ткани, сохраненная многослойность эпителия) достоверного отличия опытных и контрольных глаз не выявлено.

Таким образом, в опытных глазах присутствовали признаки, указывающие на наличие адекватного внутрисосудистого тромбоза (расширение просвета сосудов венозного русла через 10 дней) с подтвержденным морфологически значительно меньшим содержанием в ткани клеток (фибробластов), характерных для процессов образования грубых рубцов. В контрольных глазах определяли большое количество фибробластов, что говорит о процессе образования грубого рубца.

Пример 2.

Способ осуществляли по методике прототипа

После получения адекватной модели сосудистой пролиферации по представленной в примере 1 методике через пять дней всем кроликам в правые глаза с зарастающей раной конъюнктивы и большим количеством новообразованных сосудов введено 1,0 мл препарата аласенса под конъюнктиву в область рубца и перорально 4 мг/кг (8 мг) аласенса в разведении физраствором до 2,0 мл. Затем через 1,2-2,0 ч в течение 10 мин проводилось облучение зоны рубца лазером с длиной волны 632,8 нм, мощностью 60 мВт, диаметром пучка на конце световода - 4 мм. Левые глаза оставались контрольными.

Производили клиническое наблюдение, измерение накопления в тканях глаза протопорфирина IX в установленные сроки и морфологические исследования.

Клинически сразу после проведения процедуры при осмотре в щелевую лампу отмечали аналогичные изменения со стороны конъюнктивы, описанные в примере 1. При морфологическом исследовании через три дня после воздействия в правых глазах в поврежденной области эпителий также отсутствовал. В коньюнктивальной области выявляли большое количество крупных запустевших сосудов. В контрольных левых глазах определено образование рыхлой волокнистой соединительной ткани, покрытой тремя-четырьмя слоями эпителия, с большим количеством новообразованных сосудов и клеток фибробластического ряда. Во всех случаях получали большое количество грубой волокнистой соединительной ткани через 10-30 суток в сочетании с запустевшими сосудами, что говорит о недостаточном внутрисосудистом тромбозе.

Таким образом, предложенный способ представляет собой простую методику проведения процедуры ФДТ, индуцирующей внутрисосудистый тромбоз в зонах пролиферирующих клеток для адекватного предупреждения развития грубого рубца за счет использования агрессивных параметров лазерного воздействия, сочетаемого с введением регуляторного полипептида, выступающего в качестве протектора облучаемых тканей.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначено для торможения грубого рубцевания конъюнктивы при проведении фотодинамической терапии в условиях сосудистой пролиферации конъюнктивы. Сначала вводят субконъюнктивально не менее 2 мг аласенса. Через 1,5-2 часа проводят воздействие лазерным излучением в течение 10-14 минут с длиной волны 632,8 нм, плотностью мощности 47,7-55,7 мВт/см². Через 12-24 часа после вмешательства в конъюнктивальный мешок пораженного глаза вводят препарат висклерон по 1 капле 3 раза в день в течение не менее 10 дней. Способ обеспечивает эффективное угнетение ангиогенеза сосудов конъюнктивы в зонах пролиферирующих клеток за счет использования агрессивных параметров лазерного воздействия при одновременном предупреждении некробиотических и деструктивных изменений за счет протекторного действия на облучаемые ткани. 2 пр.

Способ торможения грубого рубцевания конъюнктивы, включающий проведение фотодинамической терапии, при которой сначала вводят субконъюнктивально не менее 2 мг аласенса, а затем через 1,5-2 ч воздействуют лазерным излучением длиной волны 632,8 нм, отличающийся тем, что воздействие лазерным излучением плотностью мощности 47,7-55,7 мВт/см² проводят в течение 10-14, а через 12-24 ч после вмешательства в конъюнктивальный мешок пораженного глаза вводят препарат висклерон по 1 капле 3 раза в день, в течение не менее 10 дней.