ПРИМЕНЕНИЕ НЕУСВОЯЕМЫХ САХАРИДОВ ДЛЯ ЛУЧШЕЙ АДАПТАЦИИ МЛАДЕНЦЕВ ПОСЛЕ РОЖДЕНИЯ Российский патент 2012 года по МПК A61K31/7016 A61K31/702 A61K31/715 A61P1/14 A61P37/00 A23L1/308 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к композиции для развития здоровья младенца посредством введения композиции беременной женщине.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для матери является чрезвычайно важным, чтобы во время беременности ребенок хорошо развивался и получил оптимальную адаптацию при рождении. Поэтому, беременная женщина часто принимает пищевые композиции, целью которых является улучшить рост и развитие будущего ребенка.

Описано, что длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты (ДЦ-ПНЖК) стимулируют развитие мозга будущего ребенка. По этой причине беременные (и кормящие) женщины принимают пищевые композиции с ДЦ-ПНЖК. Подобную композицию описывает EP705539.

EP1296694 относится к профилактике аллергий и, в частности, относится к первичной профилактике атопических заболеваний посредством пре- и постнатального введения пробиотических бактерий, полезных микроорганизмов, обитающих в здоровой кишечной флоре, детям с высоким риском атопических заболеваний.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы изобретения установили, что введение водорастворимого неусвояемого сахарида беременным женщинам улучшает иммунную систему будущего младенца. Обнаружено, что будущий ребенок имеет увеличенную экспрессию рецепторов CD14 и TLR 2, которые представлены в мембране энтероцитов и моноцитов.

Дополнительно было установлено, что развитие кишечной флоры младенца, полученной от матери, которая принимала данный сахарид, происходит лучше по сравнению с развитием кишечной флоры младенца, полученной от матери, которая не принимала данный сахарид.

Авторы изобретения установили, что развитие кишечной флоры младенца улучшается вследствие улучшения кишечной и/или вагинальной флоры матери, принимающей данный сахарид. После принятия данных сахаридов стимулируется рост бифидобактерий и лактобактерий желудочно-кишечного тракта матери. Впоследствии посредством перекрестной колонизации вагинальная флора матери также улучшается в сторону высокого содержания и разнообразия бифидобактерий и лактобактерий. Во время рождения в неонатальный кишечник впервые происходит поступление материнской вагинальной и кишечной микрoфлоры. Следовательно, благоприятная вагинальная и кишечная флора матери приводит в результате к улучшенной флоре младенца в течение первого периода жизни.

Как результат стимуляции иммунной системы и оптимальной кишечной флоры с преобладанием видов бифидобактерии и лактобактерии младенец имеет сниженный риск развития иммунных заболеваний, таких как атопические заболевания, но также и желудочно-кишечных заболеваний, таких как инфекции, кишечное воспаление, диарея или запор.

В дополнительном аспекте было неожиданно установлено, что введение данного неусвояемого сахарида положительно влияет на иммунную систему беременных женщин и/или младенцев. Было найдено, что детская иммунная система перед доставкой примирована для более быстрого ответа Th1 после рождения. В результате риск развития иммунных болезней, таких как атопических заболеваний, еще более снижается.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к применению водорастворимого неусвояемого сахарида для получения композиции для

i) улучшения развития кишечной флоры младенца после рождения;

ii) усиления иммунной системы ребенка до рождения; и/или

iii) усиления иммунной системы и/или профилактики иммунных заболеваний у младенца после рождения,

где композицию вводят женщине, беременной указанным ребенком.

Настоящее изобретение дополнительно относится к применению водорастворимого неусвояемого сахарида для получения композиции для

i) усиления иммунной системы беременной женщины;

ii) улучшения кишечной флоры беременной женщины; и/или

iii) улучшения вагинальной флоры беременной женщины,

где композицию вводят беременной женщине.

Водорастворимый неусвояемый сахарид

Композиция, используемая в настоящем способе, включает водорастворимые неусвояемые сахариды. Термин "неусвояемый", используемый в настоящем изобретении, относится к сахаридам, которые не перевариваются в кишечнике под действием кислот или пищеварительных ферментов, присутствующих в верхнем отделе пищеварительного тракта человека (тонкий кишечник и желудок), но которые подвергаются ферментативной обработке человеческой кишечной флоры. Моно- и дисахариды, такие как глюкоза, галактоза, фруктоза, сахароза и лактоза, являются усвояемыми. Термин "поддающийся ферментации", как применяют в настоящем документе, относится к способности подвергаться расщеплению микроорганизмами в нижнем отделе желудочно-кишечного тракта (например, толстом кишечнике) до молекул меньшего размера, в частности до короткоцепочечных жирных кислот и лактата. Данный сахарид является водорастворимым, что можно определить с использованием способа, описанного L. Prosky et al, J. Assoc. Anal. Chem 71: 1017-1023, 1988.

Данные сахариды предпочтительно имеют степень полимеризации (СП), по меньшей мере 2 и предпочтительно ниже 100 моносахаридных единиц, предпочтительно ниже 60, даже более предпочтительно ниже 40, наиболее предпочтительно ниже 10. Предпочтительно, данный водорастворимый неусвояемый сахарид является сахаридом, содержащем галактозу. Сахарид с относительно низкой степенью полимеризации имеет большую способность к расщеплению лактобактериями и/или бифидобактериями и дополнительно не обладает технологическими недостатками, увеличивающими вязкость.

Водорастворимый неусвояемый сахарид, содержащий галактозу

Данный сахарид предпочтительно является водорастворимым неусвояемым сахаридом, содержащим галактозу (в настоящем документе далее обозначаемый как "ГАЛ-олиго"), который предпочтительно включает, по меньшей мере, 50% галактозных единиц от общего количества моносахаридных единиц сахарида. ГАЛ-олиго обладает улучшенным бифидогенным действием по сравнению с другими водорастворимыми неусвояемыми сахаридами. Человеческое грудное молоко также содержит высокую концентрацию ГАЛ-олиго, и младенцы, вскармливаемые человеческим грудным молоком, имеют более богатую бифидобактериями кишечную флору, чем младенцы, вскармливаемые детским молоком стандартной формулы. Предпочтительно данный ГАЛ-олиго содержит, по меньшей мере, 60% галактозных единиц от общего количества моносахаридных единиц, присутствующих в сахариде, более предпочтительно, по меньшей мере 65%.

Данный ГАЛ-олиго предпочтительно содержит, по меньшей мере, две концевые сахаридные единицы, где, по меньшей мере, одна концевая сахаридная единица выбрана из группы, состоящей из глюкозы и галактозы; и, по меньшей мере, одна концевая сахаридная единица выбрана из группы, состоящей из галактозы и фукозы. Предпочтительно, по меньшей мере, 75% сахаридов ГАЛ-олиго соединены β-связью, предпочтительно 100%.

Термин "концевой сахарид" относится к сахариду, который связан с другой сахаридной единицей (например, галактозе, глюкозе, фруктозе или фукозе). Данный ГАЛ-олиго предпочтительно содержит не более 4 концевых сахаридов, предпочтительно не более 2. В предпочтительном варианте осуществления ГАЛ-олиго включает, по меньшей мере, одну концевую галактозу и одну, выбранную, по меньшей мере, из одной концевой глюкозы и одной концевой фукозы. Даже более предпочтительно, данный ГАЛ-олиго включает, по меньшей мере, одну концевую галактозу и, по меньшей мере, одну концевую глюкозу. Предпочтительно данный ГАЛ-олиго содержит 2 концевые сахаридные единицы и имеет степень полимеризации (СП) от 2 до 60.

Предпочтительно, ГАЛ-олиго выбран из группы, состоящей из трансгалактоолигосахаридов, галактоолигосахаридов, лакто-N-тетраозы (LNT), лакто-N-неотетраозы (нео-LNT), фукозил-лактозы, фукозилированного LNT и фукозилированного нео-LNT. Предпочтительно, ГАЛ-олиго является сиалированным. Предпочтительно, ГАЛ-олиго выбран из группы, состоящей из сиалиллактозы, сиалилфукозиллактозы, сиалиллактозамина и сиалил-LNT и сиалил-нео-LNT, более предпочтительно сиалиллактозы. В особенно предпочтительном варианте осуществления данный способ включает введение трансгалактоолигосахаридов ([галактоза]n-глюкоза, где n является целым числом от 1 до 60, т.е. 2, 3, 4, 5, 6,...., 59, 60; предпочтительно n выбран из 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10). Предпочтительно, сахариды трансгалактоолигосахаридов соединены β-связью. Например, трансгалактоолигосахариды (ТГОС) присутствуют в композиции, продаваемой под торговой маркой Vivinal™ (Borculo Domo Ingredients, Нидерланды). Другими подходящими источниками ТГОС являются Cup-oligo и Bi²muno.

Различные водорастворимые неусвояемые сахариды

Для достижения еще лучшего эффекта в отношении кишечной флоры и/или (улучшения) иммунной системы новорожденного или в отношении кишечной флоры, вагинальной флоры и/или (улучшения) иммунной системы беременной женщины данная композиция предпочтительно включает два различных водорастворимых неусвояемых сахарида, отличающихся друг от друга по структуре. Каждый водорастворимый неусвояемый сахарид расщепляется различными видами микроорганизмов в кишечной и/или вагинальной флоре и/или в разных отделах пищеварительного тракта, что приводит в результате к улучшенной флоре и большему разнообразию бактерий.

Настоящее изобретение относится к композиции, которая предпочтительно содержит водорастворимый неусвояемый сахарид A и водорастворимый неусвояемый сахарид B. Сахарид A и сахарид B имеют различные гликозидные связи, разную степень полимеризации и/или различный состав моносахаридов. Предпочтительно, сахарид A является ГАЛ-олиго.

В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения, процентное содержание, по меньшей мере, одной моносахаридной единицы, выбранной из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы и галактозы в сахариде A, по меньшей мере на 40% выше, чем процентное содержание такой же моносахаридной единицы в сахариде B, предпочтительно, по меньшей мере, на 50%, более предпочтительно, по меньшей мере, на 75%, даже более предпочтительно, по меньшей мере, на 90%. Увеличение разнообразия моносахаридных единиц стимулирует расширение популяции кишечных (полезных) бактерий, обуславливая улучшение флоры. Процентное содержание моносахаридной единицы в сахариде можно легко рассчитать с помощью деления числа соответствующих моносахаридных единиц (например, глюкозы), присутствующих в сахариде, на общее число моносахаридных единиц, присутствующих в данном сахариде.

Предпочтительно водорастворимый неусвояемый сахарид A и B имеют степень полимеризации (СП) от 2 до 200. Предпочтительно, по меньшей мере, 80 вес.%, более предпочтительно, по меньшей мере, 95 вес.%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 98 вес.% суммарного веса водорастворимого неусвояемого сахарида A и B имеют степень полимеризации (СП) ниже 100, более предпочтительно ниже 60, наиболее предпочтительно ниже 40. Более низкая СП преимущественно уменьшает вязкость и увеличивает способность к сбраживанию неусвояемых сахаридов. Предпочтительно, по меньшей мере 50 вес.%, более предпочтительно, по меньшей мере, 75 вес.% суммарного веса водорастворимых неусвояемых сахаридов A и B имеют СП от 2 до 8. При использовании смеси с высокой массовой долей сахаридов с низкой СП способность к сбраживанию и стимулирующий эффект в отношении роста молочнокислых бактерий и бифидобактерий увеличивается.

В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения, СП водорастворимого неусвояемого сахарида A, по меньшей мере, на 5 моносахаридных единиц меньше, чем СП водорастворимого неусвояемого сахарида B, предпочтительно, по меньшей мере, на 10, даже более предпочтительно, по меньшей мере, на 15. Включение сахарида с большей степенью полимеризации уменьшает осмотическое давление и приводит к более длительному брожению в толстом кишечнике, таким образом, также увеличивая рост полезных бактерий в более дистальных отделах толстого кишечника. Предпочтительно, водорастворимый неусвояемый сахарид A имеет СП от 2 до 10, более предпочтительно от 2 до 8. Предпочтительно, водорастворимый неусвояемый сахарид B имеет СП от 11 до 100. Водорастворимые неусвояемые сахариды A и B с различными СП могут иметь одинаковый или немного различающийся моносахаридный состав, предпочтительно различный моносахаридный состав.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения процентное содержание, по меньшей мере, одной гликозидной связи водорастворимого неусвояемого сахарида A от общего числа гликозидных связей данного сахарида A, по меньшей мере, на 40% выше, чем процентное содержание такой же гликозидной связи в водорастворимом неусвояемом сахариде B, предпочтительно, по меньшей мере, на 50%, даже более предпочтительно, по меньшей мере, на 75%. Термин "гликозидная связь", используемый в настоящем изобретении, относится к C-O-C связи, образованной между кольцами двух циклических моносахаридных единиц посредством отщепления воды. Большее разнообразие в гликозидных связях стимулирует более широкий спектр полезных бактерий. Гликозидные связи отличаются тем, что они ковалентно связывают атомы углерода в моносахаридных единицах в различных пронумерованных положения и/или тем, что они образуют α или β связи. Примерами различных гликозидных связей, присутствующих в водорастворимых неусвояемых сахаридах, являются β(l,3), α(l,4), β(2,l), α(l,2) и β(l,4) связи. Предпочтительно, гликозидные связи в водорастворимом неусвояемом сахариде A включают, по меньшей мере, 40% β(l,4) гликозидных связей, более предпочтительно, по меньшей мере, 75%. Гликозидные связи в водорастворимом неусвояемом сахариде B предпочтительно включают, по меньшей мере, 40% β(2,l) гликозидных связей, более предпочтительно, по меньшей мере, 75%.

В предпочтительном варианте осуществления данная композиция содержит комбинацию ГАЛ-олиго и водорастворимого неусвояемого сахарида, выбранного из группы, состоящей из фруктополисахаридов (такого как инулин), более предпочтительно комбинацию ГАЛ-олиго, который имеет среднее значение СП от 2 до 10, и водорастворимого неусвояемого сахарида, выбранного из группы, состоящей из фруктополисахаридов и фруктоолигосахаридов, наиболее предпочтительно комбинацию трансгалактоолигосахаридов и инулина.

Предпочтительно, сахарид A и сахарид B находятся в массовом соотношении от 3/97 до 97/3, более предпочтительно от 5/95 до 95/5. Наличие сахаридов A и B, присутствующих в достаточно относительных пропорциях, будет оказывать более положительное действие на флору. Наиболее предпочтительно, массовое соотношении сахарида A к B находится от 2/3 до 95/5. Небольшой избыток сахарида A, который предпочтительно является ГАЛ-олиго и/или олигосахаридом, является еще более предпочтительным, т.к. он оказывает более положительное действие на флору.

Длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты (ДЦ-ПНЖК)

Предпочтительно, данная композиция дополнительно включает длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты и/или длинноцепочечные полиненасыщенные жирные ацильные цепи (ДЦ-ПНЖК). Термин ДЦ-ПНЖК в настоящем изобретении относится к жирной кислоте или жирной ацильной цепи с длиной 20 углеродов или более и, по меньшей мере, с двумя ненасыщенными связями. Предпочтительно, композиция содержит ДЦ-ПНЖК, выбранные из группы, состоящей из эйкозапентаеновой кислоты и/или ацильной цепи (ЭПК), докозагексаеновой кислоты и/или ацильной цепи (ДГК) и арахидоновой кислоты и/или ацильной цепи (АК). В одном из вариантов осуществления композиция содержит ДГК. В другом варианте осуществления композиция содержит АА. Более предпочтительно композиция содержит ДГК и АА. ДЦ-ПНЖК преимущественно укрепляет иммунную систему будущего ребенка. Следовательно введение беременным женщинам композиции, содержащей как водорастворимый неусвояемый олигосахарид, так и ДЦ-ПНЖК, оказывает больший эффект на иммунную систему ребенка по сравнению с только водорастворимым неусвояемым сахаридом.

Массовое соотношение ЭПК/ДГК предпочтительно является 1 или ниже, более предпочтительно ниже 0,5.

ДЦ-ПНЖК могут быть представлены в форме свободных жирных кислот, в форме триглицерида, в форме фосфолипида или как смесь одной или более вышеуказанных форм. Данная композиция предпочтительно включает, по меньшей мере, одну из AA и ДГК в фосфолипидной форме. Предпочтительно массовое соотношение ДГК к АА находится между 0,1 и 20, более предпочтительно между 0,5 и 5.

Предпочтительно композиция содержит от 50 до 3000 мг ДЦ-ПНЖК на суточную дозу, более предпочтительно от 100 до 1500 мг, наиболее предпочтительно от 200 до 500 мг.

Другие компоненты

В предпочтительном варианте осуществления композиция дополнительно включает пробиотики. Пробиотиками в настоящем изобретении обозначают микроорганизмы, которые в результате введения оказывают положительный эффект на организм хозяина. Пробиотики оказывают положительный эффект на кишечную флору, вагинальную флору и/или иммунную систему беременных женщин и их будущих детей, следовательно комбинация водорастворимого неусвояемого сахарида и пробиотиков будет оказывать больший эффект на кишечную флору и/или иммунную систему обоих. Предпочтительно, пробиотики выбраны из группы, состоящей из Lactobacillus и Bifidobacterium. Более предпочтительно, пробиотики выбраны из группы, состоящей из группы Lactobacillus accidophilus, L. rhamnosus, L. casei, L. paracasei, L. plantarum, L. reuteri, L. fermentum, Bifidobacterium infantis, B. animalis subsp. lactis, B. breve, B. longum и B. bifidum. Еще более предпочтительными пробиотиками являются L. paracasei и/или B. breve, т.к. введение водорастворимого неусвояемого сахарида стимулирует в равной степени большинство видов популяций Lactobacillus и Bifidobacterium, в меньшей степени стимулирует B. breve и L. paracasei. Так как бифидобактерии преобладают в кишечной флоре новорожденных над лактобактериями, B. breve является наиболее предпочтительным. Предпочтительно, пробиотики в суточной дозе находятся в концентрации от 1×10⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ) до 1×10¹³ КОЕ, более предпочтительно от 1×10⁷ до 1×10¹¹, наиболее предпочтительно от 1×10⁸ до 1×10¹⁰ для каждого пробиотика.

Композиция дополнительно содержит витамины и минералы, полезные для беременных женщин. Беременные женщины для их пользы или для пользы плода часто принимают пищевые добавки, содержащие витамины и минералы. Включение данных витаминов и минералов в данную композицию вызывает уменьшение количества композиций, принимаемых беременными женщинами, что является удобным. Предпочтительно, композиция содержит, по меньшей мере, один компонент, более предпочтительно, по меньшей мере, три компонента, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, шесть компонентов, выбранных из группы, состоящей из фолиевой кислоты, витамина B1, витамина B2, витамина B6, витамина A, витамина D, железа, цинка и иода. Предпочтительно, данные компоненты в суточной дозе находятся в концентрации от 25 до 100% рекомендуемой суточной нормы (РСН), более предпочтительно от 45 до 100%. Предпочтительно витамин A принимают в виде β-каротина.

Композиция

Композицию, содержащую водорастворимый неусвояемый сахарид, можно вводить беременным женщинам в форме пластинки, капсулы, таблетки, жидкости или порошка.

Предпочтительно, композиция является жидкостью на молоке, содержащей жиры, белки и усваиваемые углеводы. Предпочтительно содержание жиров в жидкости на молоке составляет менее чем 2 г/л для поддержания снижения количества калорий. Предпочтительно данную жидкость на молоке упаковывают в бутылку или пакет тетрапак объемом от 50 до 1000 мл, более предпочтительно от 60 до 500, наиболее предпочтительно от 75 до 125 мл. Предпочтительно, композиция является пластиной, т.е. твердой жевательной композицией с водной активностью ниже 0,8, предпочтительно ниже 0,65. Предпочтительно, композиция является порошком, упакованным в пакет, содержащий от 1 до 10 г, более предпочтительно от 1,5 до 7 г, наиболее предпочтительно от 2 до 5 г.

Доза

Предпочтительно в данном способе данный сахарид вводят беременным женщинам в количестве от 0,5 до 50 г в сутки, предпочтительно от 3 до 25 г в сутки, наиболее предпочтительно от 6 до 12 г в сутки. Предпочтительно, данную суточную дозу принимают одной порцией в сутки. Предпочтительно, данную суточную дозу делят на 2, или 3, или 4 порции, которые употребляют 2, 3 или 4 раза в сутки, соответственно.

Предпочтительно, композицию вводят беременным женщинам, по меньшей мере, за 2 недели до родов, более предпочтительно, по меньшей мере, за 6 недель, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, за 12 недель.

Практическое применение

В зависимости от компетенции, должно быть понятно, что в нижеследующей части настоящего документа, где упомянут способ конкретного лечения, указанный способ, включающий введение эффективного количества композиции, описанной в настоящем документе выше, или введение эффективного количества, по меньшей мере, водорастворимого неусвояемого сахарида беременной женщине, также относится к применению, по меньшей мере, водорастворимого неусвояемого сахарида для получения композиции с указанной целью. Оба способа изложения настоящего изобретения на словах также предусматривают такую формулировку как, данную композицию применяют с определенной целью или введение данной композиции применяют для определенной цели.

Предусмотрен способ улучшения кишечной флоры и/или иммунной системы новорожденного, где указанный способ включает введение композиции по настоящему изобретению, т.е. композиции, содержащей водорастворимые неусвояемые сахариды, женщине, беременной указанным ребенком.

В одном из вариантов осуществления укрепляют иммунную систему новорожденного. Укрепление иммунной системы в настоящем изобретении относится к улучшению, стимуляции и/или усилению иммунной системы. Предпочтительно улучшение, стимуляция и/или усиление сравнивают с контрольной группой, которая в контексте данного изобретения означает беременную женщину, не принимающую водорастворимый неусвояемый сахарид. Авторы изобретения обнаружили, что введение водорастворимого неусвояемого сахарида действует на неонатальную иммунную систему в отношении ответа Th1 и/или улучшенного соотношения Thl/Th2. Было обнаружено, что иммунная система будущего ребенка примирована до рождения посредством увеличения рецепторов CD14 и TLR2.

В одном из вариантов осуществления введение водорастворимого неусвояемого сахарида беременным женщинам применяют для профилактики развития атопических заболеваний у младенца. В одном из вариантов осуществления композицию вводят беременным женщинам с целью предотвратить заболевание и/или снизить тяжесть аллергии (т.е. пищевой аллергии), экземы (т.е. атопического дерматита), астмы, ринита, аллергии на пыльцу, риноконъюктивита и/или сопения младенца, наиболее предпочтительно аллергии и/или атопического дерматита. Экзема, т.е. атопический дерматит, характеризуется сухими, и/или красными, и/или зудящимися кожными покровами.

В одном из вариантов осуществления введение водорастворимого неусвояемого сахарида беременным женщинам применяют для улучшения кишечной флоры младенца. Введение данной композиции является вариантом осуществления, применяемым для увеличения процентного содержания бифидобактерий и/или лактобактерий в толстом кишечнике и/или в кале от общего числа бактерий, присутствующих во флоре и/или кале младенцев после рождения. Флора, обогащенная бифидобактериями и/или лактобактериями, укрепляет иммунную систему младенца и улучшает желудочно-кишечную деятельность. Улучшенная желудочно-кишечная деятельность связана со снижением заболеваний желудочно-кишечными инфекциями, укорочением периода кишечных инфекций, уменьшения заболеваемости и тяжести желудочно-кишечных воспалений, уменьшением заболеваемости и/или тяжести диареи, уменьшением запоров или уменьшением коликов по сравнению с желудочно-кишечной деятельностью младенцев, матери которых в течение беременности не принимали данную композицию, содержащую водорастворимый неусвояемый сахарид. Укрепление или укрепленный и улучшение или улучшенный в контексте данного изобретения относится к младенцу, мать которого в течение беременности не принимала данную композицию, содержащую водорастворимый неусвояемый сахарид, или относится к беременной женщине, не принимавшей данную композицию, содержащую водорастворимый неусвояемый сахарид. Укрепленная иммунная система выполняет защитную функцию при атопических заболеваниях и/или респираторных инфекциях. В одном из вариантов осуществления введение данной композиции беременной женщине используют для профилактики и/или уменьшения тяжести заболеваний, выбранных из группы, состоящей из аллергии (т.е. пищевой аллергии), экземы (т.е. атопического дерматита), астмы, ринита, аллергии на пыльцу, риноконъюктивита, сопения, кишечных инфекций, вагинальных инфекций, респираторных инфекций, диареи, запора, коликов и кишечного воспаления у детей после рождения. В одном из вариантов осуществления введение данной композиции беременной женщине используют для профилактики заболеваний, выбранных из группы, состоящей из кишечных инфекций, респираторных инфекций, диареи, запора, коликов и кишечного воспаления у детей после рождения.

Упаковки, включающие данную композицию по изобретению, с текстом, описывающем, что, при потреблении композиции беременная женщина предоставляет своему ребенку лучшую адаптацию после рождения, например в отношении кишечной колонизации, кишечной флоры, композиции флоры и/или иммунной системы, например иммунологической защиты или укрепленного, или улучшенного, или усиленного, или стимулированного иммунитета, также включены.

В одном из вариантов осуществления введение композиции по изобретению применяют для укрепления иммунной системы беременных женщин.

В одном из вариантов осуществления введение композиции по настоящему изобретению, содержащей водорастворимые неусвояемые сахариды, предпочтительно содержащей два различных водорастворимых неусвояемых сахарида, применяют для укрепления иммунной системы, кишечной флоры и/или вагинальной флоры беременной женщины. В предпочтительном варианте осуществления введение данной композиции, предпочтительно содержащей два различных водорастворимых неусвояемых сахарида, применяют для увеличения процентного содержания лактобактерий и/или бифидобактерий от общего количества бактерий, присутствующих в кишечнике и/или влагалище беременной женщины. Это является важным, т.к. во время беременности, как найдено, вагинальная флора часто нарушается, и увеличение роста патогенов и нарушение вагинального бактериального микроокружения можно предотвратить посредством устойчивой колонизации лактобактериями.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Клиническое испытание

Суммарно 33 беременных здоровых женщин-добровольцев было включено в CA проспективное, двойное слепое, рандомизированное исследование с контролем плацебо с запланированной параллельной группой. Они получали или экспериментальную пищевую добавку, или плацебо с 25 недели беременности до наступления родов. Экспериментальная пищевая добавка была на основе неусвояемых олигосахаридов и содержала 3 г GOS (от Vivinal GOS, Borculo Domo, Нидерланды) плюс инулин (RaftilinHP, Orafti, Бельгия), в массовом соотношении 9:1 и 3 г усвояемого мальтодекстрина. Данную пищевую добавку принимали 3 раза в сутки. Контрольная пищевая добавка состояла из 6 г усвояемого мальтодекстрина.

Образец стула брали перед первым приемом пищевой добавки на 25-й неделе беременности. Второй образец стула брали перед родами на последнем стандартизированном обычном госпитальном осмотре. Во время родов один образец пуповинной крови получали из плацентарной пупочной вены. На 5 день, 20 день и через 6 месяцев после родов образцы стула брали у новорожденных.

Бактериальную флору образцов стула матери и новорожденного исследовали посредством FISH и ПЦР в реальном времени. Пуповинная кровь (ПК) фенотипически характеризовали посредством анализа FACS и in vitro исследованиями стимуляции митогенами и аллергенами.

С использованием известных в данной области способов измеряли следующие параметры:

а) врожденный иммунный ответ

NKT-клетки, количество рецепторов моноклональных T-клеток (т.е. гомогенный N-регион Va24JaQ TCR, количественный анализ клеток, экспрессирующих Toll-подобный рецептор (TLR2, TLR4); подсчет гранулоцитов. Активность NK клеток;

b) приобретенный иммунный ответ

Подгруппы лимфоцитов подвергались цитометрии с четырьмя красками. Определение профилей TH1/TH2-связанной мРНК цитокиновых и хемокиновых рецепторов (TNF-α, INF-γ, IL-4, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, TGFβ, CD25, CD45RA, CD45RO, CTLA-4, CCR3, CCR4, CCR5, CXCR3) в нестимулированных клетках проводили с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени и после стимуляции цельной кровью ConA/PHA и LPS ex vivo. Провели анализ соотношения THl/TH2 продукции цитокинов в Т-клетках CD4⁺ и CD8⁺ популяций.

Плацентарные корковые образцы крови были получены от 28 родоразрешений и простимулированы конкавалином А(ConA)/(PHA), липополисахаридом (LPS), энтеротоксином стафилококка B (SEB), β-лактоглобулином (BLG), основным аллергеном домашней пыли от Dermatophagoides pteronyssinus (Der p1), овалбумином (Ova) в течение 24 часов.

CB T-лимфоциты (50 мкл образцы цельной крови) были окрашены с соответствующим образом разведенными FITC-, PE-, PC5- или APC-мечеными моноклональными антителами на человеческие CD4, CD8, CD45RA, CD45RO, CD25, CD69, CCR4, CCR5, CD14, CCRl, CCR2, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CRTH2 и соответствующие изотипные контроли. После окрашивания контаминированные эритроциты лизировали. Рассчитывали процентное содержание лимфоцитов, экспрессирующих хемокиновый рецептор (CKR⁺) и CKR⁺CD45RA⁺ внутри популяции CD4⁺ T-хелперов (Th) и процентное содержание клеток, экспрессирующих CKR⁺ внутри популяции CD4⁺CD45RA⁺. Подобную процедуру анализа выполняли внутри CD8⁺ T-цитотоксической (Tc) популяции и популяции CD8⁺CD45RA⁺ лимфоцитов. Определяли значение интенсивности флуоресценции (MFI) CXCR4. Определяли экспрессию CD4⁺CD25^high на T-регуляторных клетках.

Исследование стимуляции цельных СВ

Гепаринизированный CB разводили от 1 до 5 в RPMI-1640. 1 мл аликвоты, разведенные CB, стимулировали конкавалином A (Con A 50 мкг/мл), бета-лактоглобулином (100 мкг/мл BLG), овалбумином (100 мкг/мл OVA), липополисахаридом (0,1 мкг/мл LPS), энтеротоксином стафилококка B (0,1 мкг/мл SEB), Dermatophagoides pteronyssinus (10 мкг/мл Der p1) или средой отдельно в 24-луночном планшете для культур. Клетки инкубировали при 37°C в 5% CО₂-атмосфере в течение 24 ч или 48 ч, и супернатанты хранили при -80°C для анализа цитокинов.

Комплексное исследование

Цитокины оценивали количественно в супернантантах культур с помощью человеческого мультиплексного основанного на гранулах исследования проточной цитометрии. Концентрации TNF-α, INF-γ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-10, GM-CSF, G-CSF измеряли непосредственно в супернатантах без дополнительного разведения. Для определения IL-6, IL-8, MCP-1 и MIP-1B супернатанты разводили в соотношении 1:10 в RPMI. Определяли различия в экспрессии цитокинов по сравнению с отрицательным контролем и концентрации сравнивали с числом лимфоцитов (для IL-2) и общим количеством лейкоцитов (для всех остальных цитокинов), полученным из расчета цельной крови (пг/мл/10E3 клеток).

Несмотря на большие вариации между индивидуумами в композиции материнской микрофлоры, общая бактериальная загруженность и среднее количество клеток/мл бифидобактерий и лактобактерий не имело отличий между обеими группами до начала приема пищевых добавок. Однако на фоне приема пищевой добавки, содержащей GOS и инулин, было обнаружено увеличение процентного содержания общего количества бифидобактерий и лактобактерий в фекальной флоре беременной женщины. Смотри Таблицу 1. В образцах стула матерей наиболее часто встречающимися видами в обеих группах до и после приема пищевых добавок были B. catenulatum, B. infantis и L. acidophilus.

Кал младенцев от матерей экспериментальной группы на 5 день после рождения содержал 7,4% лактобактерий (n=17, с.о. 3,0), тогда как кал младенцев от матерей контрольной группы на 5 день после рождения содержал только 2,4% лактобактерий (n=16, с.о. 0,9).

Внутригрупповое сравнение младенцев показало достоверное увеличение числа лактобактерий в группе плацебо [p=0,038; pW] от 20 дня к 182 дню. Данный эффект подтвержден FISH анализом [p= 0,018; pW]. Процент новорожденных, положительных по L. Acidophilus, увеличивался в группе плацебо с 20 дня по 182 день [p=0,016]. Данную разницу подтвердили количественным ПЦР анализом (p=0,012).

FACS анализ пуповинной крови выявил достоверное снижение среднего значения уровней интенсивности флуоресценции TLR2⁺ на CD14⁺ моноцитах в экспериментальной группе (p<0,05). Измененные уровни экспрессии CD14⁺ и TLR2⁺ показывают, что неонатальная иммунная система до родов направлена на более быстрый Th1 ответ после родов.

Таблица 1 Процентное содержание бифидобактерий и лактобактерий в кале беременных женщин, принимающих смесь GOS и инулина (экпериментальная группа) или мальтодекстрина (контрольная группа)   Экпериментальное среднее значение (с.о.)% бифидобактерии Экпериментальное среднее значение (с.о.)% лактобактерии Контрольное среднее значение (с.о.)% бифидобактерии Контрольное среднее значение (с.о.)% лактобактерии Т=1^b 13,0 (1,7)^с 8,6 (2,0) 18,5 (4,1) 5,4 (1,9) Т=2^b 24,1 (2,6)^cd 9,9 (1,7) 14,7 (3,5)^d 7,8 (1,9) a - бифидобактерии количественно оценивали посредством FISH, лактобактерии количественно оценивали посредством ПЦР в реальном времени.
b - t=l на 25-й неделе беременности до начала приема пищевых добавок, t=2 является последним госпитальным визитом перед родами.
c - статистически достоверное различие, p<0,05, между t=l и t=2.
d - статистически достоверное различие, p<0,05, между экспериментальной и контрольной группами.

Для анализа влияния приема матерью пробиотической пищевой добавки на иммунитет плода выполняли сравнительный фенотипический анализ подгрупп лимфоцитов. CB CD4⁺ T-хелперные (Th) клетки и CD8⁺ T-цитотоксические (Tc) клетки преимущественно экспрессировали неиммунизированный фенотип (CD45RA⁺) (>84%), в то время как менее чем 13% экспрессировали CD45RO⁺. Соотношение CD4⁺/CD8⁺, а также процентное соотношение CD4⁺CD45RA⁺, CD8⁺CD45RA⁺, CD4⁺CD45RO⁺ и CD4⁺CD45RO⁺ статистически не различалось между группами пробиотиков и плацебо. В отличие от высокой частоты клеток CCR7⁺ (>87,3%), все другие CK рецепторы были экспрессированы с очень низкой частотой как на CD4⁺, так и на CD8⁺ клетках. MFI CXCR4 был высок как в CD4⁺, так и в CD8⁺ субпопуляциях, тогда как CXCR3 был экспрессирован с высокой частотой только на CD8⁺ клетках. Анализ частоты CKR⁺ лимфоцитов внутри субпопуляций CD4⁺, CD8⁺, CD4⁺CD45RA⁺ и CD8⁺CD45RA⁺ CB T-клеток, а также соотношение Thl/Th2 (CXCR3/CCR4 и CCR5/CCR4) внутри различных CD4⁺ и CD8⁺ популяциях, достоверно не различались между двумя группами. Маркер ранней активации CD69, а также маркер поздней активации CD25 были экспрессированы примерно на одном уровне на различных CD4⁺ популяциях в обеих группах (данные не представлены). Различий по частоте в CD4⁺ T-клеточных популяциях, экспрессирующих CD25^high, обнаружено не было (среднее: 1,5 против 1,4; p=0,683).

Сравнительный анализ продуцирования профилей цитокинов из лейкоцитов цельных CB культур, стимулированных митогенами и аллергенами в течение 24 ч, выявил типичные профили экспрессии цитокинов. Достоверных различий между двумя группами, получающими пищевые добавки, обнаружено не было, при анализе концентраций цитокинов, индуцированных посредством различных стимулов (отдельно от G-CSF (p<0,03 для Der p1, BLG и OVA).

Данные результаты показывают, что прием водорастворимых неусвояемых сахаридов приводит к увеличению процентного содержания бифидобактерий и лактобактерий в кишечной микрофлоре беременных женщин. Данные результаты свидетельствуют об улучшении заселения кишечника младенца во время родов и колонизации после рождения лактобактериями и/или бифидобактериями. В частности, важным является наличие лактобактерий вскоре после рождения, т.к. лактобактерии обладают большими способностями к ацидофикации толстого кишечника, тем самым формируя впоследствии более подходящее кишечное окружение для бифидобактерий и менее подходящее для кишечных патогенов. Кроме того, данные результаты свидетельствуют, что данный прием пищевой добавки улучшает иммунную систему будущего ребенка и младенца во время и после родов.

Пример 2

100 мл жидкой композиции на основе молока, упакованной в 100 мл бутылку, включает:

- 8,1 г трансгалактоолигосахарида (полученного от Vivinal GOS)

- 0,9 г фруктополисахарида (полученного от RaftilineHP)

- 750 мг рыбьего жира и масла энотеры, содержащего

300 мг DHA

42 мг EPA

8,4 мг AA

8,4 мг докозапентаноевой кислоты (ДПК)

15 мг гамма-линолевой кислоты (ГЛК).

Предложены: применение водорастворимого неусвояемого сахарида для получения композиции, где композицию вводят беременной женщине для улучшения развития кишечной флоры младенца после рождения; укрепления иммунной системы и/или профилактики заболеваний, связанных с иммунной системой, младенца после рождения; или для укрепления иммунной системы ребенка до рождения (варианты). Таже предложено применение водорастворимого неусвояемого сахарида, где сахарид является галактозосодержащим сахаридом, включающим, по меньшей мере, 50% единиц галактозы от общего числа моносахаридных единиц, присутствующих в сахариде, для получения композиции для укрепления иммунной системы беременной женщины; улучшения вагинальной флоры беременной женщины, где композицию вводят беременной женщине. Показано увеличение процентного содержания бифидобактерий и лактобактерий в кишечной флоре беременных, колонизация кишечника младенца лактобактериями вскоре после рождения и укрепление его иммунной системы. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 пр.

1. Применение водорастворимого неусвояемого сахарида для получения композиции, где композицию вводят беременной женщине для
i) улучшения развития кишечной флоры младенца после рождения;
ii) укрепления иммунной системы и/или профилактики заболеваний, связанных с иммунной системой, младенца после рождения.

2. Применение по п.1, где композицию вводят беременной женщине для профилактики, по меньшей мере, одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из аллергии, экземы, астмы, ринита, аллергии на пыльцу, риноконъюктивита, сопения, кишечных инфекций, вагинальных инфекций, респираторных инфекций, диареи, запора, колик и кишечного воспаления у младенца после рождения.

3. Применение водорастворимого неусвояемого сахарида для получения композиции, где композицию вводят беременной женщине для i) укрепления иммунной системы ребенка до рождения.

4. Применение по пп.1-3, где сахарид вводят в дозе от 0,5 до 50 г/сутки в течение, по меньшей мере, 2 недель до ожидаемого наступления родов.

5. Применение по пп.1-3
- для стимулирования бактериальной колонизации кишечника младенца после рождения и/или
- увеличения процентного содержания бифидобактерий и/или лактобактерий от общего количества бактерий в толстой кишке и/или кале младенца после рождения.

6. Применение по пп.1-3, где сахарид содержит, по меньшей мере, 50% моносахаридных единиц галактозы от общего числа моносахаридных единиц, присутствующих в сахариде.

7. Применение по пп.1-3, где сахарид выбран из группы, состоящей из трансгалактоолигосахаридов, галактоолигосахаридов, лакто-N-тетраозы (LNT), лакто-N-неотетраозы (HeoLNT), фукозиллактозы, фукозилированного LNT и фукозилированного нео-LNT и альфа-галактоолигосахарида, предпочтительно трансгалактоолигосахарида.

8. Применение по пп.1-3, где композиция содержит водорастворимый неусвояемый сахарид А и водорастворимый неусвояемый сахарид В, где сахарид А и сахарид В имеют i) различные гликозидные связи, ii) различную степень полимеризации и/или iii) различный моносахаридный состав.

9. Применение по п.8, где сахарид А содержит, по меньшей мере, 50% единиц галактозы от общего числа моносахаридных единиц, присутствующих в сахариде А, и где сахарид В выбран из группы, состоящей из фруктополисахаридов и фруктоолигосахаридов, предпочтительно инулин.

10. Применение водорастворимого неусвояемого сахарида, где сахарид является галактозосодержащим сахаридом, включающим, по меньшей мере, 50% единиц галактозы от общего числа моносахаридных единиц, присутствующих в сахариде, для получения композиции для
i) укрепления иммунной системы беременной женщины;
ii) улучшения вагинальной флоры беременной женщины;
где композицию вводят беременной женщине.

11. Применение по п.10, где композиция дополнительно содержит сахарид, выбранный из группы, состоящей из фруктополисахарида и фруктоолигосахарида, предпочтительно инулин.