СПОСОБ НЕИНВАЗИВНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ ВИРУСНОЙ НАГРУЗКИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С Российский патент 2012 года по МПК A61B5/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и предназначено для более простого, доступного, быстрого и неинвазивного определения уровня вирусной нагрузки у больных хроническим гепатитом С (ХГС).

ХГС относится к числу наиболее распространенных вирусных заболеваний печени, отличаясь выраженной склонностью к развитию цирроза и рака печени. На сегодняшний день лишь применение комбинированной противовирусной терапии может обеспечить предупреждение этих неблагоприятных исходов ХГС.

Для прогноза и динамического контроля за эффективностью противовирусной терапии у больных ХГС необходимо определение в крови количественного содержания РНК вируса гепатита С (HCV), обозначаемого как вирусная нагрузка. Снижение последней до неопределяемого уровня РНК HCV свидетельствует о благоприятном результате проводимого лечения (В.А.Исаков. Современная терапия хронического вирусного гепатита С: Какая длительность комбинированной терапии оптимальна и почему? // Клиническая гастроэнтерология и гепатология. - 2009. - Т.2, №1. - С.9-12).

Определение вирусной нагрузки может быть осуществлено с помощью ДНК-гибридизации (К.-П.Майер. Гепатит и последствия гепатита: Практ. руководство: пер. с нем., - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ГЕОТАР-МЕД, 2004. - С.267). К сожалению, этот способ характеризуется большой трудоемкостью и низкой надежностью получаемых результатов, поэтому в клинической практике почти не применяется.

Существует еще один способ непосредственного определения в крови количества РНК HCV, основанный на использовании полимеразной цепной реакции после обратной транскрипции к комплементарной ДНК и амплификации rt-ПЦР (М.Г.Авдеева с соавт. Вирусные гепатиты: стратегия и тактика терапии, организация медицинской помощи: пособие для врачей. - Краснодар: ООО «Качество», 2009. - 262 с.); Инвитро-диагностика. Лабораторная диагностика (Под редакцией Е.А.Кондрашевой, А.Ю.Островского. - 3-е изд., переработанное и дополненное - М.: Медиздат, 2009. - 832 с.).

Последний способ выбран нами в качестве прототипа, как наиболее близкий к заявляемому по техническому решению.

Несмотря на то, что этот способ получил широкое распространение в клинической практике, он также не лишен некоторых недостатков. Так, для его выполнения требуется дорогостоящая аппаратура и специально подготовленные врачи-лаборанты, что возможно только в крупных научно-практических центрах. Недостатком является также и то, что для проведения этого исследования и получения результата требуется несколько дней. Кроме того, определение вирусной нагрузки методом rt-ПЦР сопряжено с большим числом ложноотрицательных результатов. И, наконец, для выполнения исследования, необходим забор крови из вены, что является достаточно инвазивной манипуляцией.

Целью настоящего изобретения является разработка более простого, быстрого, доступного для каждого врача-клинициста и неинвазивного способа определения уровня вирусной нагрузки у больных ХГС.

Технический результат заявляемого изобретения заключается в повышении быстродействия и безопасности метода определения.

Поставленная задача достигается тем, что у больных ХГС уровень вирусной нагрузки измеряют путем электрометрического исследования рН-показателей кислотности кожи красной каймы губ, и при наличии среднего показателя рН менее 4,40 ед. квалифицируют высокую, более 6×10⁵ МЕ/мл; от 4,40 до 5,57 ед. - умеренную 6×10⁵ ME/мл-3×10⁵ ME/мл и более 5,57 ед. - низкую, менее 3×10⁵ МЕ/мл, вирусную нагрузку.

Способ осуществляют следующим образом. Больным ХГС в утренние часы, натощак, после настройки рН-метра по нескольким стандартным буферным растворам, на увлажненную кожу красной каймы губ накладывают перпендикулярно ее поверхности электроды на расстоянии друг от друга не более 1 см, проводят измерение рН-показателей кожи верхней и нижней губ и рассчитывают ее средний показатель (см. Федорович С.В. К методике определения рН поверхности кожи // Вестник дерматологии и венерологии. - 1976. - №3. - С.74-76). При величине среднего показателя рН менее 4,40 ед. квалифицируют с вероятностью более 95,5% высокую, более 6×10⁵ МЕ/мл; от 4,40 до 5,57 ед. - умеренную 6×10⁵ МЕ/мл-3×10⁵ ME/мл и более 5,57 ед. - низкую, менее 3×10⁵ ME/мл вирусную нагрузку.

Заявляемый способ основан на фактическом материале, полученном нами при углубленном клинико-лабораторном обследовании 167 больных с РНК-положительным ХГС. Все они нуждались в проведении КПТ и не имели к ней противопоказаний. Возраст пациентов колебался от 20 до 44 лет. Генотип 1β HCV регистрировался в 54,5% случаев, 3а - в 29,3%, 2а - в 12,6%. У шестерых больных генотип HCV не был идентифицирован. Количество РНК HCV менее 3×10⁵ МЕ/мл было отмечено у 29,9% наблюдавшихся лиц, от 3×10⁵ МЕ/мл до 6×10⁵ МЕ/мл - у 56,3% и более 6×10⁵ МЕ/мл - у 13,8%.

Полученные при рН-метрии показатели кислотности у больных ХГС были распределены в зависимости от уровня вирусной нагрузки (см. табл.). В результате были получены данные, свидетельствующие о том, что величина среднего показателя рН кожи красной каймы губ отражает уровень вирусной нагрузки у больных ХГС.

Взаимосвязь показателей рН кожи красной каймы губ с уровнем вирусной нагрузки у больных ХГС. рН кожи (ед.) Уровень вирусной нагрузки у больных ХГС (МЕ/мл) <3×10⁵ 3×10⁵-6×10⁵ >6×10⁵ <4,40 0/48 1/94 22/23 (0%) (1,1%) (95,6%) 4,40-5,57 2/48 91/94 1/23 (4,2%) (96,8%) (4,3%) >5,57 46/48 2/94 0/23 (95,8%) (2,1%) (0%)

Заявляемый способ имеет по сравнению с прототипом ряд преимуществ: во-первых, он технически более прост и менее затратен; во-вторых, не требует для своего проведения специально оборудованной лаборатории и профессионально подготовленных врачей-лаборантов; в-третьих, обеспечивает немедленное получение результата; в-четвертых, позволяет намного чаще осуществлять контроль за эффективностью проводимой больным ХГС КПТ и, наконец, в-пятых, не требует проведения достаточно инвазивной манипуляции - внутривенного забора крови.

Изобретение иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Больной К., 37 лет (и.б. №1028-09), обратился в Гепатологический центр г.Ростова-на-Дону 10.05.2009 г. в связи с обнаружением в крови антител к структурным и неструктурным белкам HCV. После проведения дополнительного обследования был диагностирован ХГС в стадии реактивации. В связи с наличием показаний для противовирусной терапии, пациенту необходимо было определить в крови количество РНК HCV. Была проведена пункция локтевой вены и забрана кровь, которая была направлена для исследования методом rt-ПЦР в специализированную лабораторию. Перед взятием крови больному была проведена рН-метрия кожи красной каймы губ и определена ее кислотность, оказавшаяся равной 3,89 ед. В соответствии с заявленным способом это свидетельствовало о наличии у обследуемого высокой (более 6×10⁵ МЕ/мл) вирусной нагрузки. Спустя 7 дней был получен результат ПЦР-диагностики, показавший, что количество РНК HCV в крови составляет 7,5×10⁵ ME/мл. Это полностью подтверждало данные, полученные при рН-метрии кожи красной каймы губ больного К.

Больная Л., 42 лет (и.б. №1544-09), страдающая ХГС, поступила в Гепатологический центр г.Ростова-на-Дону 20.10.2009 г. для проведения противовирусной терапии. До ее начала у пациентки методом rt-ПЦР была определена вирусная нагрузка, оказавшаяся равной 4,9×10⁵ ME/мл. Аналогичное заключение было сделано и по результатам определения кислотности кожи красной каймы губ, уровень рН которой составил 5,88 ед. Это соответствовало умеренной вирусной нагрузке, при которой количество РНК HCV находится в пределах от 3×10⁵ МЕ/мл до 6×10⁵ ME/мл.

По мере проведения больной противовирусной терапии величина рН кожи красной каймы губ постепенно повышалась, достигнув спустя 4 недели 7,11 ед. В соответствии с заявленным способом это означало, что вирусная нагрузка у пациентки значительно снизилась и стала меньше 3×10⁵ МЕ/мл. И действительно, при исследовании в этот же день крови методом rt-ПЦР РНК HCV вообще перестала определяться.

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням. Для неинвазивного определения уровня вирусной нагрузки у больных хроническим гепатитом С определяют рН кожи красной каймы губ путем электрометрического измерения. При наличии среднего показателя рН менее 4,40 ед. определяют высокую вирусную нагрузку со значениями более 6×10⁵ МЕ/мл. При среднем показателе рН, находящемся в диапазоне от 4,40 до 5,57 ед., определяют умеренную вирусную нагрузку со значениями 6×10⁵ МЕ/мл-3×10⁵ МЕ/мл. При среднем показателе рН более 5,57 ед. определяют низкую вирусную нагрузку со значениями менее 3×10⁵ МЕ/мл. Способ повышает точность и сокращает сроки определения уровня вирусной нагрузки у больных хроническим гепатитом С. 2 пр., 1 табл.

Способ неинвазивного определения уровня вирусной нагрузки у больных хроническим гепатитом С, характеризующийся тем, что уровень вирусной нагрузки определяют путем электрометрического измерения показателя рН кожи красной каймы губ, и при наличии среднего показателя рН менее 4,40 ед. определяют высокую вирусную нагрузку со значениями более 6·10⁵ МЕ/мл; при среднем показателе рН, находящемся в диапазоне от 4,40 до 5,57 ед. определяют умеренную вирусную нагрузку со значениями 6·10⁵ МЕ/мл-3·10⁵ МЕ/мл; при среднем показателе рН более 5,57 ед. определяют низкую вирусную нагрузку со значениями менее 3·10⁵ МЕ/мл.