ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ ИЛИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО, ПРИМЕНЯЕМОЕ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЗАДНЕГО ОТДЕЛА ГЛАЗА Российский патент 2012 года по МПК A61K31/428 A61P27/06 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к профилактическому или терапевтическому средству для лечения заболеваний заднего отдела глаза, содержащему в качестве активного ингредиента избирательный агонист D₂ рецептора, где агонист является неэрготаминовым агонистом.

Уровень техники

Дофаминовые рецепторы специфично связываются с дофамином, они работают, позволяя проявляться действию дофамина, и находятся в дофаминергических нейронах мозга. Дофаминовые рецепторы обычно разделяют на два подсемейства рецепторов, основываясь на их взаимосвязи с аденилатциклазой. А именно дофаминовые рецепторы подразделяют на подсемейство D₁ рецептора (D₁ и D₅ рецепторы), в котором рецептор взаимосвязан с аденилатциклазой стимулирующим образом через посредство стимуляторного G-белка (Gs), и подсемейство D₂ рецептора (D₁, D₂ и D₄ рецепторы), в котором рецептор взаимодействует с аденилатциклазой ингибирующим образом через посредство ингибиторного G-белка (Gi) и взаимодействует с метаболизмом фосфатидилинозита и высвобождением арахидоновой кислоты стимулирующим образом или взаимодействует с калиевым или кальциевым каналом.

Избирательный агонист D₂ рецептора является соединением, которое избирательно связывается с членами подсемейства D₂ рецептора и работает, позволяя им проявлять свое действие. Агонист применяется для лечения болезни Паркинсона, как и леводопа (L-допа), являющаяся предшественником дофамина, и показано, что он эффективнее, чем леводопа, по ряду аспектов. Например, показано, что агонист не нуждается в ферментативном превращении для проявления своего лекарственного действия и поэтому не зависит от функциональной способности нигростриатальных нейронов; агонист часто проявляет большую продолжительность действия, чем леводопа, и поэтому часто применяется для управления зависимым от дозы изменением моторного состояния. Дополнительно избирательный агонист D₂ рецептора обладает избирательной активностью в отличие от левоподы, которая активна против всех типов дофаминовых рецепторов мозга, агонист обладает относительной избирательностью для различных подтипов дофаминовых рецепторов. Например, прамипексол или подобные ему соединения обладают избирательной активностью против членов подсемейства D₂ рецепторов и почти не действуют на членов подсемейства D₁ рецепторов. В этой связи прамипексол применяется в качестве терапевтического средства при болезни Паркинсона.

С другой стороны, имеются не являющиеся патентами документы 1-3, свидетельствующие о том, что дофамин принимает участие в процессах неоваскуляризации или сосудистой гиперпроницаемости. В не являющемся патентом документе 1 описано исследование действия дофамина на сосудистую гиперпроницаемость или неоваскуляризацию с применением животной модели (мышей), которым внутрибрюшинно вводили МОТ (мышиную опухоль яичников). В этом документе показано, что дофамин подавляет сосудистую гиперпроницаемость и неоваскуляризацию, опосредованную VEGF, а также способствует эндоцитозу VEGFR-2 с участием D₂ рецептора и подавляет связывание рецептора VEGF и фосфорилирование VEGFR-2. В не являющемся патентом документе 2 показано, что дофамин и тирозингидроксилаза не обнаруживаются в тканях рака желудка человека и крысы, и дофамин подавляет неоваскуляризацию опухоли путем ингибирования фосфорилирования VEGFR-2 в сосудистом эндотелии опухоли. В не являющемся патентом документе 2 показано также, что у мышей с ампутированным периферическим дофаминэргическим нервом наблюдается увеличение неоваскуляризации, опосредованной VEGF, и рост злокачественных опухолей из-за повышения микроваскулярной проницаемости.

Дополнительно прамипексол является избирательным агонистом D₂ рецептора и выпущен на рынок в качестве терапевтического средства при болезни Паркинсона, как описано выше. Помимо вышеупомянутых документов имеются патентные документы 1 и 2, относящиеся к прамипексолу. Патентный документ 2 описывает прамипексол и применимость этого соединения при болезни Паркинсона и нейропсихиатрических заболеваниях центральной нервной системы. В патентном документе 1 предлагается применение прамипексола для лечения глаукомы.

Однако в литературе нет сообщений об исследованиях ингибирования неоваскуляризации, подавления повреждения фоторецепторных клеток, подавления сосудистой гиперпроницаемости в тканях заднего отдела глаза, таких как сосудистая оболочка глаза (хориоидеа) или сетчатка (ретина), относящихся к неэрготаминовому избирательному агонисту D₂ рецептора, примером которого является прамипексол. Дополнительно нет сообщений об исследовании фармакологического действия такого агониста на болезни заднего отдела глаза и конкретно нет сообщений об исследовании его профилактического или улучшающего действия на возрастную макулярную дегенерацию, диабетическую ретинопатию, диабетический макулярный отек и т.п.

Возрастная макулярная дегенерация является заболеванием, отличающимся тем, что ткани сетчатки в макулярном районе с возрастом повреждаются, что ведет к нарушению зрения и является одной из причин ухудшения зрения у престарелых, что может привести к полной потере зрения. Возрастную макулярную дегенерацию можно подразделить на три основные типа: (1) начальная возрастная макулярная дегенерация, отличающаяся образованием друз и пигментацией или депигментацией (иногда считающаяся нарушением, предшествующим возрастной макулярной дегенерации), (2) атрофическая возрастная макулярная дегенерация, природой которой является атрофическая дегенерация эпителиальных пигментных клеток сетчатки в районе макулы и атрофическая дегенерация фоторецепторных клеток сетчатки, вторичная по отношению к атрофической дегенерации эпителиальных пигментных клеток сетчатки, и (3) экссудативная возрастная макулярная дегенерация, при которой кровеносные сосуды из сосудистой оболочки глаза прорастают в сетчатку в макулярном районе и происходит кровоизлияние или выделение клеточного экссудата.

Патентный документ 1: WO 91/01136

Патентный документ 2: JP-B-05-72907

Непатентный документ 1: Nature Med., 7, 569-574 (2001)

Непатентный документ 12: Cancer Res., 64, 5551-5555 (2004)

Непатентный документ 3: Clinical Cancer Research, 10, 4349-4356 (2004)

Раскрытие изобретения

Задачи изобретения

Соответственно объектом поиска является новое медицинское применение неэрготаминовго агониста из числа избирательных агонистов D₂ рецептора.

Проводятся поиски способа лечения атрофической возрастной макулярной дегенерации, однако клинически эффективный способ лечения этого заболевания пока не найден. Дополнительно проводятся поиски способа лечения экссудативной возрастной макулярной дегенерации, однако эффективный способ лечения, который позволил бы полностью восстановить утраченную остроту зрения, пока не обнаружен. Поэтому открытие терапевтического средства для лечения возрастной макулярной дегенерации, которое было бы низкомолекулярным соединением и могло вводиться орально, и отличалось бы невысокой ценой, конкретно, терапевтического средства, эффективного для лечения атрофической возрастной макулярной дегенерации, имеет необычайно высокое клиническое значение.

Дополнительно проводятся интенсивные исследования способа лечения диабетической ретинопатии или диабетического макулярного отека, однако терапевтическое средство с высокой клинической эффективностью пока не обнаружено. Поэтому открытие терапевтического средства против этих заболеваний имеет огромное значение.

Способы решения задач изобретения

Авторы настоящего изобретения провели интенсивное исследование в поисках нового медицинского применения избирательного агониста D₂ рецептора, являющегося неэрготаминовым агонистом, и обнаружили, что прамипексол, являющийся агонистом, обладает превосходным ингибирующим действием на неоваскуляризацию, подавляющим действием на повреждение фоторецепторных клеток и подавляющим действием на сосудистую гиперпроницаемость в тканях заднего отдела глаза, таких как сосудистая оболочка глаза или сетчатка, и таким образом удовлетворяет целям изобретения. С другой стороны, было оценено ингибирующее действие на неоваскуляризацию бромкриптина, являющегося эрготаминовым избирательным агонистом D₂ рецептора, и дофамина, являющегося неизбирательным агонистом дофаминового рецептора. Однако обнаружено, что эти соединения проявляют небольшое или вовсе не проявляют ингибирующего действия на неоваскуляризацию в тканях сосудистой оболочки глаза или сетчатки. Дополнительно по тому же способу оценено подавление бромкриптином повреждения фоторецепторных клеток и обнаружено, что он не обладает никаким подавляющим действием на повреждение фоторецепторных клеток. Таким образом, эти результаты показывают, что неэрготаминовый избирательный агонист D₂ рецептора, примером которого является прамипексол, проявляет гораздо более высокое фармакологическое действие, чем эрготаминовый избирательный агонист D₂ рецептора и неизбирательный агонист дофаминового рецептора, и подтверждают превосходную применимость неэрготаминового агониста D₂ рецептора.

Дополнительно эти три соединения, прамипексол, бромкриптин и дофамин, обладают разным сродством к подтипам дофаминового рецептора, однако все они являются агонистами дофаминового рецептора и фармакологически обладают одинаковой активностью. Однако, как описано выше, только прамипексол проявляет ингибирующее действие на неоваскуляризацию сосудистой оболочки глаза или сетчатки, а в случае бромкриптина и дофамина ингибирующее действие было очень слабым или вовсе отсутствовало. Дополнительно при сравнении подавляющего действия прамипексола и бромкриптина на повреждение фоторецепторных клеток обнаружено, что только прамипексол значительно подавляет повреждение фоторецепторных клеток, а бромкриптин проявляет низкое или никакого подавляющего действия на повреждение фоторецепторных клеток. Конкретно, удивительно то, что, хотя прамипексол и бромкриптин оба являются избирательными агонистами D₂ рецептора, имеется явное различие в фармакологической активности этих двух соединений в отношении ингибирования неоваскуляризации сосудистой оболочки глаза или сетчатки и подавления повреждение фоторецепторных клеток.

Таким образом, изобретение относится к профилактическому или терапевтическому средству для лечения заболеваний заднего отдела глаза, таких как возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия, диабетический макулярный отек, пигментная дегенерации сетчатки, пролиферативная витреоретинопатия, закупорка ретинальных артерий, закупорка ретинальных вен, увеит, болезнь Лебера, ретинопатия недоношенных, отслоение сетчатки, отслоение пигментного эпителия сетчатки, центральная серозная хориоретинопатия, центральная экссудативная хориоретинопатия, полипоидная хориоидальная васкулопатия, мультифокальный хориоидит, неоваскулярная макулопатия, макроаневризма ретинальной артерии, повреждение зрительного нерва, вызванное любым из этих заболеваний, повреждение зрительного нерва, вызванное глаукомой или ишемическое повреждение зрительного нерва, содержащему в качестве активного ингредиента избирательный агонист D₂ рецептора, где агонист является неэрготаминовым агонистом (здесь и далее называемый «соединением согласно настоящему изобретению»).

Соль соединения согласно настоящему изобретению не ограничена конкретными солями, пока они являются фармацевтически приемлемыми солями, и примеры таких солей включают соли неорганических кислот, например, соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, йодистоводородной кислоты, азотной кислоты, серной кислоты или фосфорной кислоты и соли органических кислот, например, уксусной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты, лимонной кислоты, виннокаменной кислоты, адипиновой кислоты, глюконовой кислоты, глюкогептоновой кислоты, глюкуроновой кислоты, терефталевой кислоты, метансульфоновой кислоты, молочной кислоты, гиппуровой кислоты, 1,2-этандисульфоновой кислоты, изетионовой кислоты, лактобионовой кислоты, олеиновой кислоты, памоевой кислоты, полигалактуроновой кислоты, стеариновой кислоты, дубильной кислоты, трифторметансульфоновой кислоты, бензсульфоновой кислоты, р-толуолсульфоновой кислоты, лаурилсульфата, метилсульфата, нафталинсульфоната или сульфосалициловой кислоты.

В случае, когда имеются геометрические или оптические изомеры соединения согласно настоящему изобретению, эти изомеры также охвачены областью притязаний данного изобретения. Дополнительно соединение согласно настоящему изобретению может находиться в форме гидрата или сольвата.

Термин «избирательный агонист D₂ рецептора», как применяется здесь, означает агонист или стимулятор, который связывается с членами подсемейства D₂ рецептора (D₂, D₃ или D₄ рецепторы) и обладает более высоким сродством к членам подсемейства D₂ рецептора, чем к членам подсемейства D₁ рецептора (D₁ или D₅ рецепторы). Дополнительно термин «эрготаминовый агонист» относится к агонисту, имеющему в химической структуре боковую цепочку алкалоида спорыньи, а термин «неэрготаминовый агонист» относится к агонисту, у которого в химической структуре нет боковой цепочки алкалоида спорыньи. В этой связи отметим, что алкалоид спорыньи является алкалоидом индольного ряда, содержащимся в склероции Claviceps purpurea, который обычно паразитирует на ржи.

Предпочтительные примеры соединений согласно настоящему изобретению включают прамипексол, апоморфин, пирибедил, хинаголид, талипексол, ротиготин или их соли.

Более предпочтительные примеры соединений согласно настоящему изобретению включают прамипексол или его соли.

Наиболее предпочтительные примеры соединений согласно настоящему изобретению включают прамипексол гидрохлорид, представленный следующей химической структурной формулой:

Заболевание заднего отдела глаза, как применяется здесь, относится к заболеваниям стекловидного тела, сетчатки, сосудистой оболочки глаза, склеры или зрительного нерва и их примеры включают такие глазные болезни, как возрастная макулярная дегенерация (образование друз на ранней стадии возрастной макулярной дегенерации, атрофическая возрастная макулярная дегенерация, экссудативная возрастная макулярная дегенерация), диабетическая ретинопатия (простая диабетическая ретинопатия, препролиферативная диабетическая ретинопатия, пролиферативная диабетическая ретинопатия), диабетический макулярный отек, пигментная дегенерация сетчатки, пролиферативная витреоретинопатия, закупорка ретинальных артерий, закупорка ретинальных вен, увеит, болезнь Лебера, ретинопатия недоношенных, отслоение сетчатки, отслоение пигментного эпителия сетчатки, центральная серозная хориоретинопатия, центральная экссудативная хориоретинопатия, полипоидная хориоидальная васкулопатия, мультифокальный хориоидит, неоваскулярная макулопатия, макроаневризма ретинальной артерии, повреждение зрительного нерва, вызванное любым из этих заболеваний, повреждение зрительного нерва, вызванное глаукомой и ишемическое повреждение зрительного нерва. Предпочтительные примеры включают такие глазные болезни, как возрастная макулярная дегенерация (конкретно экссудативная возрастная макулярная дегенерация и/или атрофическая возрастная макулярная дегенерация), диабетическая ретинопатия и диабетический макулярный отек. В связи с этим из известных источников ((Journal of Japanese Ophthalmological Society, 103, 923-947 (1999), and Shin Zusetsu Rinsho Ganka Koza (New Illustrated Handbook of Clinical Ophthalmology), Vol.5, "Vitreoretinal Diseases", First edition, edited by Y.Tano, MEDICAL VIEW, pp.184-189 and 232-237, (2000)) явствует, что ингибирование неоваскуляризации или подавление сосудистой гиперпроницаемости в тканях заднего отдела глаза, таких как сосудистая оболочка глаза или сетчатка, применимо для лечения вышеперечисленных заболеваний. Дополнительно из известного документа (Ohan Shikkan Tekisuto & Atorasu (Macular Disease Textbook and Atlas), First Edition, edited by M.Uyama, et al., Igaku-Shoin Ltd., pp.43-45) ясно, что подавление повреждения фоторецепторных клеток применимо для лечения возрастной макулярной дегенерации из числа вышеперечисленных заболеваний.

Соединение согласно настоящему изобретению можно включать в простой препарат или комбинированный препарат путем добавления при необходимости фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ с помощью широко известной техники.

В случае применения соединения согласно настоящему изобретению для профилактики или терапии вышеперечисленных глазных болезней, его можно вводить больному орально или парентерально. Примеры путей введения включают оральное введение, топикальное введение в глаза (например, закапывание, введение в конъюнктивальный мешок, введение в стекловидное тело, субконъюнктивальное введение и введение в субтеноново пространство), внутривенное введение и чрезкожное введение. Дополнительно соединение согласно настоящему изобретению включают в лекарственные формы, применимые для введения вместе с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами при необходимости. Примеры лекарственных форм, применимых для орального введения, включают таблетки, капсулы, гранулы и порошки, примеры лекарственных форм для парентерального введения включают составы для инъекции, глазные капли, глазные мази, пластыри, гели и вставки (инсерты). Эти формы можно готовить с помощью обычных приемов, широко применяемых в данной области техники. Дополнительно соединение согласно настоящему изобретению можно включать в препараты для внутриглазного импланта или DDS (систем доставки лекарств), такие как микросфера или другие препараты.

Таблетки можно получать путем правильного выбора и применения наполнителя, например, лактозы, глюкозы, D-маннита, безводного гидрофосфата кальция, крахмала или сахарозы; дезинтегратора, например, карбоксиметилцелллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы кальция, кроскармеллозы натрия, кроссповидона, крахмала, частично желатинизированного крахмала или малозамещенной гидроксипропилцеллюлозы; связующего вещества, такого как гидроксипропилцеллюлоза, этилцеллюлоза, гуммиарабик, крахмал, частично желатинизированный крахмал, поливинилпирролидон или поливиниловый спирт; лубриканта, такого как стеарат магния, стеарат кальция, тальк, водная двуокись кремния или гидрированное масло: агента оболочки, такого как очищенная сахароза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, метилцеллюлоза, этилцеллюлоза или поливинилпирролидон; агента для улучшения вкуса, такого как лимонная кислота, аспартам, аскорбиновая кислота или ментол и т.п.

Состав для инъекции можно получать путем выбора и применения агента для поддержания тоничности, такого как хлорид натрия; буферного агента, такого как фосфат натрия; поверхностно-активного вещества, такого как полиоксиэтиленсорбитан мононоолеат; загустителя, такого как метилцеллюлоза, или т.п. по необходимости.

Глазные капли можно получать путем выбора и применения агента для поддержания тоничности, такого как хлорид натрия или концентрированный глицерин; буферного агента, такого как фосфат натрия или ацетат натрия; поверхностно-активного вещества, такого как полиоксиэтиленсорбитан мононоолеат, полиоксил 40 стеарат или полиоксиэтилен гидрированное касторовое масло; стабилизатора, такого как цитрат натрия или ЭДТА натрия; консерванта, такого как хлорид бензалкония или парабен или т.п. при необходимости. Значение рН глазных капель разрешается любое в интервале, приемлемом для глазных препаратов, но предпочтительно оно поддерживается в интервале от 4 до 8. Дополнительно глазную мазь можно получать с помощью широко применяемых основ, таких как белый вазелин или жидкий парафин.

Вставку (инсерт) можно получать путем измельчения и смешивания биодеградируемого полимера, такого как гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксивиноловый полимер или полиакриловая кислота вместе с соединением согласно настоящему изобретению и формованием под давлением получившегося порошка. При необходимости можно применять наполнитель, связующий агент, стабилизатор и агент для доведения рН. Препарат для внутриглазного импланта можно получать с применением биодеградируемого полимера, такого как полимолочная кислота, полигликолевая кислота, сополимер молочной и гликолевой кислот или гидроксипропилцеллюлоза.

Настоящее изобретение также относится к способу профилактики или терапии заболеваний заднего отдела глаза, включающему введение больному фармацевтически эффективного количества прамипексола или его соли.

Дозу соединения согласно настоящему изобретению можно корректировать в зависимости от лекарственной формы, серьезности симптомов, возраста или веса тела больного, которому следует вводить соединение согласно настоящему изобретению, мнению врачей и т.п. В случае орального введения соединение согласно настоящему изобретению можно вводить взрослому однократно или в несколько приемов в дозировке от 0,01 до 5000 мг, предпочтительно от 0,1 до 2500 мг, более предпочтительно от 0,5 до 1000 мг в день. В случае инъекции соединение согласно настоящему изобретению можно вводить взрослому однократно или в несколько приемов в дозировке от 0,0001 до 2000 мг в день. В случае глазных капель или вставки препарат, содержащий активный ингредиент в количестве от 0,000001 до 10% (w/v), предпочтительно от 0,00001 до 1% (w/v), более предпочтительно от 0,0001 до 0,1% (w/v), можно вводить однократно или в несколько приемов в день. Дополнительно в случае пластыря взрослому можно прикладывать пластырь, содержащий активный ингредиент в количестве от 0,0001 до 2000 мг, а в случае препарата для внутриглазного импланта в глаз взрослого можно помещать внутриглазной имплант, содержащий активный ингредиент в количестве от 0,0001 до 2000 мг.

Преимущество изобретения

При проведении нижеописанного теста показано, что прамипексол гидрохлорид, являющийся соединением согласно настоящему изобретению (здесь и далее называемый также соединением А), значительно ингибирует неоваскуляризацию сосудистой оболочки глаза в модели индуцированной лазером неоваскуляризации сосудистой оболочки глаза у крыс. То есть неэрготаминовый игбирательный агонист, представленный соединением А или подобным, применим в качестве профилактического или терапевтического средства для лечения болезни заднего отдела глаза, сопровождающейся неоваскуляризацией, например, возрастной макулярной дегенерации, конкретно экссудативной возрастной макулярной дегенерации и т.п.

С другой стороны, такому же тестированию подвергают бромкриптин месилат, являющийся эрготаминовым избирательным агонистом D₂ рецептора (здесь и далее называемый также «соединение В»), и дофамин гидрохлорид, являющийся неизбирательным агонистом дофаминового рецептора (здесь и далее называемый также «соединением С»). Однако обнаружено, что эти соединения проявляют небольшое или вовсе не проявляют ингибирования неоваскуляризации сосудистой оболочки глаза. То есть эти результаты показывают, что неэрготаминовый избирательный агонист D₂ рецептора, представленный соединением А, проявляет значительно более выраженное ингибиторное действие на неоваскуляризацию, чем эрготаминовый избирательный агонист D₂ рецептора и неизбирательный агонист дофаминового рецептора, и подтверждают превосходную применимость неэрготаминового избирательного агониста D₂ рецептора.

Дополнительно при фармакологическом тестировании, описанном ниже, показано, что соединение А значительно подавляет повреждение фоторецепторных клеток в модели светового повреждения у мыши. То есть неэрготаминовый избирательный агонист D₂ рецептора, представленный соединением А, является применимым в качестве профилактического и терапевтического средства против заболеваний заднего отдела глаза, сопровождающихся повреждением фоторецепторных клеток, таких как возрастная макулярная дегенерация, конкретно атрофическая возрастная макулярная дегенерация или т.п.

С другой стороны, соединение В, являющееся эрготаминовым избирательным агонистом D₂ рецептора, подвергнуто такому же тестированию. Однако обнаружено, что это соединение слабо подавляет или вообще не подавляет повреждение фоторецепторных клеток. То есть эти результаты показывают, что неэрготаминовый избирательный агонист D₂ рецептора, представленный соединением А, проявляет значительно более мощное подавление повреждения фоторецепторных клеток, чем эрготаминовый избирательный агонист D₂ рецептора, и подтверждают превосходную применимость неэрготаминового избирательного агониста D₂ рецептора.

Дополнительно при фармакологическом тестировании, описанном ниже, показано, что соединение А значительно подавляет ретинальную васкулярную гиперпроницаемость в модели индуцированной тромбином ретинальной васкулярной гиперпроницаемости у крыс. То есть показано, что неэрготаминовый избирательный агонист D₂ рецептора, представленный соединением А, проявляет заметное профилактическое или улучшающее действие при болезнях заднего отдела глаза, связанных с ретинальной ангиопатией, таких как диабетическая ретинопатия и диабетический макулярный отек.

Осуществление изобретения

Здесь и далее приведены результаты фармакологического тестирования и получение примеров, однако эти примеры приведены для облегчения понимания и не предназначены для ограничения области притязаний изобретения.

Фармакологический тест 1

Проведена оценка применимости соединения согласно настоящему изобретению, эрготаминового избирательного агониста D₂ рецептора и неизбирательного агониста дофаминового рецептора с помощью модели индуцированной лазером неоваскуляризации сосудистой оболочки глаза у крыс.

Способ создания модели индуцированной с помощью криптонового лазера неоваскуляризаци сосудистой оболочки глаза у крыс

Крысам дают общую анестезию путем внутримышечного введения 1 мл/кг смеси 5% (w/v) раствора для инъекций кетамина гидрохлорида и 2% раствора для инъекций ксилазина гидрохлорида (7:1), затем в глаз закапывают 0,5% (w/v) глазной раствор тропикамида-0,5% фенилэфрина гидрохлорида, чтобы вызвать мидриаз, и затем проводят фотокоагуляцию с помощью установки для фотокоагуляции с криптоновым лазером. Фотокоагуляцию проводят на глазном дне, производя восемь раздельных пятен на глаз путем фокусирования на глубоком слое сетчатки, избегая толстых кровеносных сосудов сетчатки (условия коагуляции: размер пятна 100 мкм, мощность на выходе 100 мВт, время коагуляции 0,1 с). После фотокоагуляции глазное дно фотографируют и подтверждают наличие участков, облученных лазером.

Способ введения лекарств

Соединение А растворяют в 1% (w/v) растворе метилцеллюлозы (полученном путем растворения метилцеллюлозы в очищенной воде) в концентрации 0,06 мг/мл или 0,2 мг/мл, таким образом получают растворы соединения А в таких концентрациях. Каждый раствор соединения А с указанной концентрацией вводят орально раз в день в дозе 0,3 мг/кг или 1 мг/кг, начиная в день операции фотокоагуляции в течение 7 дней, включая день операции. Соединение В вводят орально по такому же способу. То есть соединение В растворяют в 1% (w/v) растворе метилцеллюлозы (полученном путем растворения метилцеллюлозы в очищенной воде) в концентрации 0,06 мг/мл или 0,2 мг/мл, таким образом получают растворы соединения В в таких концентрациях. Каждый раствор соединения В с указанной концентрацией вводят орально раз в день в дозе 0,3 мг/кг или 1 мг/кг, начиная в день операции фотокоагуляции в течение 7 дней, включая день операции. С другой стороны, соединение С растворяют в PBS (фосфатном буфере) в концентрации 100 мг/мл и полученный раствор соединения С вводят внутрибрюшинно раз в день в дозировке 100 мг/кг, начиная в день операции фотокоагуляции в течение 7 дней, включая день операции. В группе плацебо (контрольной) подобным образом вводят 1% (w/v) раствор метилцеллюлозы или PBS.

Способ оценки

На седьмой день после фотокоагуляции каждой крысе дают общую анестезию путем внутримышечного введения 1 мл/кг смеси 5% (w/v) раствора для инъекций кетамина гидрохлорида и 2% раствора для инъекций ксилазина гидрохлорида (7:1), затем в глаз закапывают 0,5% (w/v) глазной раствор тропикамида-0,5% фенилэфрина гидрохлорида, чтобы вызвать мидриаз, и затем в хвостовую вену вводят 0,1 мл 10% раствора флуоресцеина и делают снимки флуоресценции глазного дна. На снимках флуоресценции глазного дна те пятна, где флуоресценции не наблюдается (отсутствие неоваскуляризации), оценивают как негативные, а пятна, где флуоресценция наблюдается, оценивают как позитивные (присутствие неоваскуляризации). Когда наблюдаются два пятна с низкой флуоресценцией, их оценивают как позитивные (присутствие неоваскуляризации). Затем частоту встречаемости неоваскуляризации сосудистой оболочки глаза (%) рассчитывают по количеству позитивных пятен относительно восьми пятен (участков) лазерного облучения по уравнению 1, а процент ингибирования (%) тестируемым лекарством рассчитывают по уравнению 2. Результаты расчетов для соединений А-С приведены в таблице 1. Количество животных в каждой группе от 7 до 8.

Уравнение 1

Частота встречаемости хороидальной неоваскуляризации (%)=((число положительных пятен)/(общее число участков фотокоагуляции))×100

Уравнение 2

(Процент ингибирования, (%))=(A₀-А_X)/A₀×100

A₀ - частота встречаемости неоваскуляризации сосудистой оболочки глаза в группе плацебо,

А_X - частота встречаемости неоваскуляризации сосудистой оболочки глаза в группе, получавшей лекарство

Таблица 1 Группа   Процент подавления (%) Соединение А 0,3 мг/кг 60,9   1 мг/кг 60,9 Соединение В 0,3 мг/кг -2,1   1 мг/кг 4,1 Соединение С 100 мг/кг 11,8

Обсуждение

Как ясно из таблицы 1, показано, что соединение А ингибирует неоваскуляризацию сосудистой оболочки глаза в модели, индуцированной лазером неоваскуляризации сосудистой оболочки глаза у крыс. С другой стороны, в случае соединения В, являющегося эрготаминовым избирательным агонистом D₂ рецептора, и соединения С, являющегося неизбирательным агонистом дофаминового рецептора, ингибирование неоваскуляризации почти или совсем не наблюдается. Удивительно то, что хотя все соединения от А до С оказывают активирующее действие на D₂ рецептор, только соединение А, являющееся неэрготаминовым избирательным агонистом D₂ рецептора, проявляет сильное ингибиторное действие на неоваскуляризацию сосудистой оболочки глаза.

Вышеприведенные результаты показывают, что соединение согласно настоящему изобретению, представленное соединением А, проявляет превосходное ингибирующее действие на неоваскуляризацию сосудистой оболочки глаза и обладает заметным профилактическим и улучшающим действием при болезнях заднего отдела глаза, связанных с неоваскуляризацией, таких как возрастная макулярная дегенерация, конкретно экссудативная возрастная макулярная дегенерация или подобное.

Фармакологический тест 2

Соединение согласно настоящему изобретению и эрготаминовый избирательный агонист D₂ рецептора тестируют на применимость с помощью модели светового повреждения у мышей. Модель светового повреждения у мышей является животной моделью, при которой светом индуцируют повреждение, в основном, фоторецепторных и пигментных эпителиальных клеток сетчатки и которая широко применяется как животная модель ретинальной дегенерации (например, возрастной макулярной дегенерации, конкретно атрофической возрастной макулярной дегенерации или пигментной дегенерации сетчатки) (Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2005; 46: 979-987).

Способ создания модели светового повреждения у мышей

После закапывания в глаз мыши 0,5% (w/v) раствора тропикамида-0,5% фенилэфрина гидрохлорида, чтобы вызвать мидриаз, индуцируют световое повреждение у мыши путем светового воздействия (условия светового воздействия: уровень освещенности 5000 Люкс, время освещения 2 часа) с помощью установки для индукции светового повреждения (Sakami Medical Instrument).

Способ введения лекарства

Соединение А растворяют в 1% (w/v) растворе метилцеллюлозы (полученном путем растворения метилцеллюлозы в очищенной воде) в концентрации 0,006, 0,02, 0,06 или 2 мг/мл, таким образом получают растворы соединения А. Каждый раствор соединения А вводят орально однократно в дозе 0,03, 0,1, 0,3 или 1 мг/кг за час до светового воздействия. Соединение В также вводят орально по тому же способу. То есть соединение В растворяют в 1% (w/v) растворе метилцеллюлозы (полученном путем растворения метилцеллюлозы в очищенной воде) в концентрации 0,02 мг/мл или 0,2 мг/мл, таким образом получают растворы соединения В. Каждый раствор соединения В вводят орально однократно в дозе 0,1 мг/кг или 1 мг/кг за час до светового воздействия. В контрольной группе (плацебо) по такому же способу вводят 1% (w/v) раствор метилцеллюлозы.

Способ оценки

За день до светового воздействия каждой мыши дают общую анестезию путем внутримышечного введения 2 мл/кг смеси 5% (w/v) раствора для инъекций кетамина гидрохлорида и 2% раствора для инъекций ксилазина гидрохлорида и физиологического раствора (7:1:8), затем в глаз закапывают 0,5% (w/v) глазной раствор тропикамида-0,5% фенилэфрина гидрохлорида, чтобы вызвать мидриаз. Затем снимают электроретинограмму (ERG) с помощью переносного аппарата ERG & VEP LE-3000 (Tomey Corporation) (условия измерения: освещенность в пике (стимуле) 3000 кандела/м², продолжительность пика 10 мс, базовая освещенность 0 кандела/м²) и рассчитывают амплитуды а- и b-волн из полученной формы сигнала. Затем процент подавления (%) тестируемым лекарством уменьшения амплитуд а- и b-волны (повреждения фоторецепторных клеток), вызванного световым воздействием, рассчитывают по уравнениям 3 и 4. Результаты расчетов для соединения А и соединения В приведены в таблице 2. Количество животных в каждой группе составляет от 6 до 8 особей и среднее значение применяют для расчета процента подавления.

Уравнение 3

(Процент подавления повреждения фоторецепторных клеток (%) по амплитуде а-волны) = (A_AZ-А_AY)/(А_АХ-А_AY)×100

А_AX - амплитуда а-волны в группе, не подвергавшейся световому воздействию,

A_AY - амплитуда а-волны в группе, подвергавшейся световому воздействию и получившей плацебо,

A_AZ - амплитуда а-волны в группе, подвергавшейся световому воздействию и получившей лекарство.

Уравнение 4

(Процент подавления повреждения фоторецепторных клеток (%) по амплитуде b-волны)=(A_BZ-А_ВY)/(А_ВХ-А_ВY)×100

А_ВХ - амплитуда b-волны в группе, не подвергавшейся световому воздействию,

A_BY - амплитуда b-волны в группе, подвергавшейся световому воздействию и получившей плацебо,

A_BZ - амплитуда b-волны в группе, подвергавшейся световому воздействию и получившей лекарство.

Таблица 2 Группа Процент подавления (%) по амплитуде а-волны Процент подавления (%) по амплитуде b-волны Соединение А 0,03 мг/кг 41,4 49,2 0,1 мг/кг 47,3 44,1 0,3 мг/кг 70,0 72,1 1 мг/кг 102,0 92,1 Соединение В 0,1 мг/кг 0,2 -3,8 1 мг/кг 4,8 4,9

Обсуждение

Как видно из таблицы 2, показано, что соединение А значительно подавляет повреждение фоторецепторных клеток в модели светового повреждения у мышей. С другой стороны, в случае соединения В, являющегося эрготаминовым избирательным агонистом D₂ рецептора, подавление повреждения фоторецепторных клеток почти или совсем не наблюдается. Удивительно то, что хотя оба соединения А и В оказывают активирующее действие на D₂ рецептор, только соединение А, являющееся неэрготаминовым избирательным агонистом D₂ рецептора, проявляет сильное подавление повреждения фоторецепторных клеток.

Вышеприведенные результаты показывают, что неэрготаминовый избирательный агонист D₂ рецептора, представленный соединением А, проявляет превосходное защитное действие от повреждения фоторецепторных клеток и обладает заметным профилактическим и улучшающим действием при заболеваниях заднего отдела глаза, связанных с повреждением фоторецепторных клеток, таких как возрастная макулярная дегенерация, конкретно атрофическая возрастная макулярная дегенерация, пигментная дегенерация сетчатки или т.п.

Фармакологический тест 3

Соединение согласно настоящему изобретению тестируют на применимость с помощью модели индуцированной тромбином ретинальной васкулярной гиперпроницаемости у крыс. Ранее показано, что тромбин индуцирует образование тромба в кровеносных сосудах сетчатки при инъекции его в стекловидное тело (Journal of Japanese Ophthalmological Society, 1989; 93, 978-985), и модель на крысах широко применяется в качестве модели болезненных состояний, сопровождающихся ретинальной ангиопатией (закупоркой сосудов) (таких как диабетическая ретинопатия, диабетический макулярный отек, закупорка ретинальных вен или закупорка ретинальных артерий).

Способ создания модели индуцированной тромбином ретинальной васкулярной гиперпроницаемости у крыс.

Крысам дают общую анестезию путем внутримышечного введения 1 мл/кг смеси 5% (w/v) раствора для инъекций кетамина гидрохлорида и 2% раствора для инъекций ксилазина гидрохлорида (7:1), затем в глаз закапывают 0,5% (w/v) глазной раствор тропикамида-0,5% фенилэфрина гидрохлорида, чтобы вызвать мидриаз. Затем в стекловидное тело инъецируют 5 мкл тромбина (600 Ед/мл) с помощью иглы размером 33 (33-gauge), чтобы не повредить хрусталик или сетчатку. Крысам контрольной (плацебо) группы вводят PBS (фосфатный буфер) вместо раствора тромбина.

Способ введения лекарства

Соединение А растворяют в 1% (w/v) растворе метилцеллюлозы (полученном путем растворения метилцеллюлозы в очищенной воде) в концентрации 0,2 мг/мл, таким образом получают раствор соединения А. Раствор соединения А вводят орально сразу перед и через 20 час после инъекции тромбина в стекловидное тело в дозе 1 мг/кг. В группе плацебо таким же способом вводят 1% (w/v) раствор метилцеллюлозы.

Способ оценки

Через 24 час после инъекции тромбина в стекловидное тело каждую крысу убивают путем обескровливания и затем извлекают глазное яблоко крысы, избегая загрязнения кровью. После удаления глазного яблока вблизи зрачка производят небольшой надрез с помощью хирургического скальпеля и быстро отбирают стекловидное тело. Собранное стекловидное тело соответствующим образом разводят очищенной водой и определяют концентрацию белка по способу Бредфорда. Определенную по такому способу концентрацию белка в стекловидном теле применяют в качестве индекса ретинальной васкулярной проницаемости. Затем рассчитывают процент подавления (%) тестируемым лекарством индуцированной тромбином ретинальной васкулярной гиперпроницаемости по уравнению 5. Полученные результаты расчета для соединния А приведены в таблице 3. Количество животных в каждой группе составляет от 7 до 8 и среднее значение применяют для расчета процента подавления.

Уравнение 5

(Процент подавления ретинальной васкулярной гиперпроницаемости, (%))=(Р_Y-P_Z)/(P_Y-P_X)×100

Р_Х - концентрация белка в стекловидном теле в контрольной группе животных, которым не вводят тромбин,

P_Y - концентрация белка в стекловидном теле в контрольной группе животных, которым вводят тромбин путем инъекции в стекловидное тело и вводят плацебо,

P_Z - концентрация белка в стекловидном теле в группе животных, которым вводят тромбин путем инъекции в стекловидное тело и вводят лекарство.

Таблица 3 Группа Процент подавления (%) Соединение А 1 мг/кг 9,9

Обсуждение

Вышеприведенные результаты показывают, что соединение А обладает превосходным подавляющим действием на ретинальную васкулярную гиперпроницаемость и обладает заметным профилактическим и улучшающим действием при заболеваниях заднего отдела глаза, связанных с ретинальной ангиопатией, таких как диабетическая ретинопатия и диабетический макулярный отек.

Примеры смесей (лекарственных форм)

Лекарственное средство согласно настоящему изобретению описано более конкретно со ссылкой на примеры получения смесей (лекарственных форм), однако область притязаний настоящего изобретения не ограничена этими примерами.

Пример смеси 1: глазные капли

в 100 мл

Соединение А 10 мг Хлорид натрия 900 мг Полисорбат 80 q.s. Фосфат натрия двузамещенный q.s. Фосфат натрия однозамещенный q.s. Стерильная очищенная вода q.s.

Соединение А и все остальные вышеперечисленные ингредиенты добавляют к стерильной очищенной воде и хорошо перемешивают, получая таким образом глазные капли. Изменяя добавленное количество соединения А, получают глазные капли, содержащие соединение А в концентрации 0,05% (w/v), 0,1% (w/v), 0,5% (w/v) или 1% (w/v).

Пример смеси 2: глазная мазь

В 100 г

Соединение А 10 мг Жидкий парафин 10,0 г Белый вазелин q.s.

Соединение А добавляют к расплавленному до однородности белому вазелину и жидкому парафину, эти ингредиенты хорошо перемешивают и получившуюся смесь постепенно охлаждают, получая таким образом глазную мазь. Изменяя добавленное количество соединения А, получают глазную мазь, содержащую соединение А в концентрации 0,05% (w/v), 0,1% (w/v), 0,5% (w/v) или 1% (w/v).

Пример смеси 3: таблетка

В 100 мг

Соединение А 1 мг Лактоза 66,4 мг Кукурузный крахмал 20 мг Карбоксиметилцеллюлоза кальция 6 мг Гидроксипропилцеллюлоза 6 мг Стеарат магния 0,6 мг

Соединение А и лактозу смешивают в миксере, туда же добавляют карбоксиметилцеллюлозу кальция и гидроксипропилцеллюлозу и получившуюся смесь гранулируют. Полученные гранулы высушивают и затем сортируют по размеру. Затем добавляют стеарат магния и смешивают его с сортированными по размерам гранулами, из получившейся смеси делают таблетки с помощью машины для штамповки таблеток. Изменяя добавленное количество соединения А, получают таблетки, содержащие соединение А в количестве 0,1 мг, 10 мг или 50 мг на 100 мг таблетки.

Пример смеси 4: состав для инъекции

в 10 мл

Соединение А 10 мг Хлорид натрия 90 мг Полисорбат 80 q.s. Стерильная очищенная вода q.s.

Соединение А и хлористый натрий растворяют в стерильной очищенной воде, получая таким образом состав для инъекций. Изменяя добавленное количество соединения А, получают состав для инъекций, содержащий соединение А в количестве 0,1 мг, 10 мг или 50 мг на 10 раствора.

Промышленная применимость

Прамипексол или его соль проявляют превосходное ингибирующее действие на неоваскуляризацию, подавляющее действие на повреждение фоторецепторных клеток и подавляющее действие на сосудистую гиперпроницаемость в тканях заднего отдела глаза, таких как сосудистая оболочка глаза или сетчатка и поэтому является применимым в качестве профилактического или терапевтического средства при болезнях заднего отдела глаза, таких как возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия или диабетический макулярный отек.

Группа изобретений относится к области офтальмологии. Профилактическое или терапевтическое средство применяется при заболеваниях заднего отдела глаза. Прамипексол, являющийся неэрготаминовьм избирательным агонистом D₂ рецептора, или его соль проявляют ингибирующее действие на неоваскуляризацию, подавляющее действие на повреждение фоторецепторных клеток и подавляющее действие на сосудистую гиперпроницаемость в тканях заднего отдела глаза, таких как сосудистая оболочка глаза или сетчатка. Группа изобретений позволяет применять средство как профилактическое или терапевтическое при заболеваниях заднего отдела глаза, таких как возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия или диабетический макулярный отек. 4 н. и 10 з.п. ф-лы, 3 табл., 4 пр.

1. Профилактическое или терапевтическое средство, применяемое при заболеваниях заднего отдела глаза, включающее избирательный агонист D₂ рецептора в качестве активного ингредиента, где агонист представляет собой прамипексол или его соль.

2. Профилактическое или терапевтическое средство по п.1, где заболеванием заднего отдела глаза является заболевание стекловидного тела, сетчатки, сосудистой оболочки глаза (хориоидеи), склеры или зрительного нерва.

3. Профилактическое или терапевтическое средство по п.1, где заболеванием заднего отдела глаза является возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия, диабетический макулярный отек, пигментная дегенерация сетчатки, пролиферативная витреоретинопатия, закупорка ретинальных артерий, закупорка ретинальных вен, увеит, болезнь Лебера, ретинопатия недоношенных, отслоение сетчатки, отслоение пигментного эпителия сетчатки, центральная серозная хориоретинопатия, центральная экссудативная хориоретинопатия, полипоидная хориоидальная васкулопатия, мультифокальный хориоидит, неоваскулярная макулопатия, макроаневризма ретинальной артерии, повреждение зрительного нерва, вызванное любым из этих заболеваний, или ишемическое повреждение зрительного нерва.

4. Профилактическое или терапевтическое средство по п.1, где заболеванием заднего отдела глаза является возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия или диабетический макулярный отек.

5. Профилактическое или терапевтическое средство по п.4, где возрастной макулярной дегенерацией является экссудативная возрастная макулярная дегенерация или атрофическая возрастная макулярная дегенерация.

6. Профилактическое или терапевтическое средство по любому из пп.1-5, где путем введения является введение закапыванием, введение внутрь стекловидного тела, субконъюнктивальное введение, введение в конъюнктивальный мешок, введение в субтеноново пространство или оральное введение.

7. Профилактическое или терапевтическое средство по любому из пп.1-5, где лекарственной формой являются глазные капли, глазная мазь, вставка (инсерт), пластырь, инъекция, таблетка, тонкие гранулы или капсула.

8. Способ профилактики или лечения заболеваний заднего отдела глаза, включающий введение пациенту фармацевтически эффективного количества прамипексола или его соли.

9. Способ по п.8, где заболеванием заднего отдела глаза является заболевание стекловидного тела, сетчатки, сосудистой оболочки глаза (хориоидеи), склеры или зрительного нерва.

10. Способ по п.8, где заболеванием заднего отдела глаза является возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия, диабетический макулярный отек, пигментная дегенерация сетчатки, пролиферативная витреоретинопатия, закупорка ретинальных артерий, закупорка ретинальных вен, увеит, болезнь Лебера, ретинопатия недоношенных, отслоение сетчатки, отслоение пигментного эпителия сетчатки, центральная серозная хориоретинопатия, центральная экссудативная хориоретинопатия, полипоидная хориоидальная васкулопатия, мультифокальный хориоидит, неоваскулярная макулопатия, макроаневризма ретинальной артерии, повреждение зрительного нерва, вызванное любым из этих заболеваний, или ишемическое повреждение зрительного нерва.

11. Способ по п.8, где заболеванием заднего отдела глаза является возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия или диабетический макулярный отек.

12. Способ по п.11, где возрастной макулярной дегенерацией является экссудативная возрастная макулярная дегенерация или атрофическая возрастная макулярная дегенерация.

13. Способ профилактики или лечения заболеваний заднего отдела глаза, включающий введение пациенту фармацевтически эффективного количества прамипексола или его соли путем закапывания, введения внутрь стекловидного тела, субконъюнктивального введения, введения в конъюнктивальный мешок, введения в субтеноново пространство или орального введения.

14. Применение прамипексола или его соли для изготовления профилактического или терапевтического средства, применяемого при заболеваниях заднего отдела глаза по любому из пп.1-7.