СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА И ЗАЩИТЫ ЯГОДНЫХ КУЛЬТУР ОТ БОЛЕЗНЕЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ГРИБНЫМИ ПАТОГЕНАМИ Российский патент 2013 года по МПК A01C1/00 A01N63/00 C12N1/20 

Изобретение относится к способам стимуляции роста и защиты ягодных культур от болезней, вызываемых грибными патогенами, и может быть использовано в сельскохозяйственной микробиологии, сельскохозяйственной биотехнологии, защите растений.

Известен способ выращивания и защиты растений (Патент РФ №2154935, МПК A01G 1/00, опубл. 27.08.2000 г.), включающий подготовку почвы, посадку или посев растений, периодическую культивацию, и отличается тем, что проводят предпосадочную обработку семян и клубней смесью активаторов, иммуностимуляторов, антагонистов и биоудобрений [Авертроп, Агат-25 или Ризоплан, Ампеломицин, Гербамин, Диприн или Нематол, Комплексное биологическое удобрение (КБУ), Симбионт-Универсал] в половинных дозах от рекомендуемых для данного препарата (смесь 1), эту же смесь в сочетании с биологическими удобрениями (Биогумус, Корневая смесь в рекомендуемых дозах) вносят в лунки перед посадкой, в почву вместе с биопрепаратами вносят отходы трихограммного производства или отходы производства вирусных биопрепаратов (мертвые бабочки) с сапропелем или с перепревшим куриным пометом, или с порошком из естественно опавших листьев или хвои (смесь 2), в дальнейшем смесью 1 проводят периодические наземные опрыскивания или полив вегетирующих растений (раз в две недели) с предварительным разбрасыванием Биогумуса и внесением в почву Корневой смеси (в тех же нормах), почву заселяют комплексом микроорганизмов, микробиологических антагонистов, содержащихся в биопрепаратах [Алирин-В, Алирин-С, Бацифит, Глиокладин, Микостоп, Нарцисс, Нематофагин или Нематофагин-А (активированный супернатантом - отходом от производства биопрепарата Диприн), Пентофаг, Ризоплан-Ф, различные формы Триходермина, Трихотецин, Фитофлавин, Фитофлавин-Л] (смесь 4), в половинных дозах от рекомендуемых для данного препарата, которую вносят в лунки перед посадкой, в дальнейшем проводят периодические (1 раз в две недели) опрыскивания или полив растений; вводят как элементы фауны хищников и энтомофагов (Афидиусы, Амблисейусы, Божьи коровки, Верблюдки, Галлицы, Златоглазки, Лизефлебусы, Сирфиды, Фитосейулюс) - комплекс 1 - путем периодического выпуска в половинных дозах от рекомендуемых для данного препарата и микроорганизмы, являющиеся действующим началом биопрепаратов (Авертроп, Вертицилин, Цефалоспорин, Энтоморфин, Бикол, Битоксибацилин, Боверин, Вертимекс, Микоафидин-Т, Турицид, Энтофторин) (смесь 5), в половинных дозах от рекомендуемых для данного препарата путем периодических обработок - опрыскивание или полив; перед опрыскиванием Диприном и/или Нематолом используют альгинат натрия для предотвращения высыхания и гибели нематод, а при использовании энтомофагов, в начале вегетационного периода выращивания с/х культур, дополнительно подсаживают в междурядья основных культур сложноцветные и/или зонтичные растения, которые являются дополнительным источником питания для имаго энтомофагов.

Недостатком вышеописанного аналога является сложность и затратность воспроизведения способа защиты растений.

Известен способ биологической защиты растений на примере картофеля, включающий обработку клубней и растений картофеля в период вегетации биопрепаратом в смеси с прилипателем, отличающийся тем, что для обработки клубней картофеля в качестве биопрепарата используют планриз из расчета 1000 мл на тонну клубней, а для обработки 1 га посадок растений в период вегетации используют смесь биопрепаратов планриз в количестве 0,5 л и банкол в количестве 0,2 л, разведенных в 300-350 л минеральной воды «Заманкул», при этом в качестве прилипателя используют кукурузный клейстер в количестве 1-1,5% от объема смеси (патент РФ №2343667, МПК А01С 1/00, A01N 63/00, опубл. 20.01.2009 г.).

Однако в данном способе отсутствуют данные о возможности стимулирования роста и защиты ягодных культур от болезней.

Известен способ выращивания растений на обедненных азотом и микроэлементами почвах, включающий обработку семян и/или вегетирующих растений биопрепаратом, содержащим суспензию бактерий штамма Pseudomonas, отличающийся тем, что в качестве биопрепарата используют смесь суспензий штаммов Pseudomonas species 7Г, 7Г2К и 17-2, взятых в соотношении 1:2:1 с концентрацией 2,5-5,0×10¹⁰ кл/мл, при этом обработку семян производят из расчета 30-50 мл суспензии на 1 т семян, а обработку растений в фазу активного роста - из расчета 30-75 мл/га (патент РФ №2403748, МПК A01N 63/00, опубл. 20.11.2010 г.).

Однако в данном способе отсутствуют данные о возможности стимулирования роста и защиты ягодных культур от болезней.

Известен способ стимуляции роста и защиты растений от болезней, включающий обработку семян композицией из бактериальных клеток микроорганизма рода Pseudomonas в виде комплекса штаммов Pseudomonas Species 7Г, Pseudomonas Species 7Г 2К, Pseudomonas Species 17-2 и физиологически активных компонентов, отличающийся тем, что в качестве физиологически активных компонентов используют гуминовое удобрение "Дарина", соотношение штаммов бактерий составляет 0,7:1,5:0,7-1,5:0,7:1.5, концентрация бактериальных клеток 2-5·10¹⁰ кл/мл, соотношение комплекса штаммов и "Дарины" составляет 1:1-1:1,8, композицию готовят перед обработкой семян разведением в культуральной жидкости трехдневной Chlorella Vulgaris, причем для обработки 1 т семян используют 2,3-2,7 мл комплекса штаммов бактерий, а норма расхода рабочего раствора составляет 10-12 л на тонну зерновых и зернобобовых культур и 70-80 л на тонну клубней картофеля (патент РФ №2291620, МПК A01G 5/00, опубл. 20.01.2007 г.).

Однако в данном способе также отсутствуют данные о возможности стимулирования роста и защиты ягодных культур от болезней.

Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ защиты плодовых и ягодных культур от болезней, включающий их обработку препаратом в жидкой форме, содержащим смесь из культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis 24 Д (ВНИИСХМ 129) в концентрации 5·10⁹ кл/мл, гуматов и микроэлементов, описанный в патенте РФ (патент РФ №2216173, МПК A01N 63/00, опубл. 20.11.2003 г.). Способ используется на ягодных кустарниках, плодовых деревьях. Берется 50 мл препарата и разводится в двух литрах воды. Данным раствором поливают 2-3 дерева/кустарника или 100 м² посадок земляники.

Однако данный способ имеет недостаточную эффективность защиты ягодных культур вследствие применения препарата на основе одного штамма бактерий Bacillus subtilis 24Д (ВНИИСХМ 129), а также отсутствуют данные о стимулировании роста растений с использованием способа-прототипа.

Техническим результатом является повышение защиты ягодных культур от болезней, вызываемых грибными патогенами за счет использования смеси штаммов разных видов бактерий-пробиотиков с высокой антагонистической активностью и более разнообразными формами обработки растений, а также обеспечение возможности стимулирования роста ягодных культур.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе стимуляции роста и защиты ягодных культур от болезней, вызываемых грибными патогенами, включающем обработку ягодных культур биопрепаратом в жидкой форме, согласно изобретению растения обрабатывают путем замачивания корней саженцев перед посадкой, или опрыскивания их после посадки, или опрыскивания растений в период вегетации и плодоношения, или опрыскивания почвы вокруг растений с последующим ее промачиванием водой, а в качестве биопрепарата используют смесь штаммов бактерий В.subtilis ВКПМ В-10641; В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, В.licheniformis ВКПМ В-10561 и В.licheniformis ВКПМ В-10562 или смесь штаммов бактерий В.subtilis ВКПМ В-10641; В. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 и В.licheniformis ВКПМ В-10562 с титром каждого штамма не менее 10⁵ КОЕ/мл в виде водной суспензии. При стимуляции роста и защите земляники от грибных болезней ее посадку в почву осуществляют после замачивания корней саженцев в водной суспензии препарата, содержащей смесь в равных соотношениях штаммов бактерий: штамм В.licheniformis ВКПМ В-10562; штамм В.subtilis ВКПМ В-10641; штамм В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром каждого штамма, равным 10⁵ КОЕ/мл, а плодоносящие растения земляники опрыскивают водной суспензией препарата, содержащей смесь в равных соотношениях штаммов бактерий: В.licheniformis ВКПМ В-10562; В.subtilis ВКПМ В-10641; В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром каждого штамма, равным 10⁶ КОЕ/мл.

При стимуляции роста рассады облепихи опрыскивают почву между растениями водной суспензией препарата, содержащей смесь в равных соотношениях штаммов бактерий: В.licheniformis ВКПМ В-10562; В.subtilis ВКПМ В-10641; В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром каждого штамма, равным 10⁶ КОЕ/мл, с последующим промачиванием почвы на глубину 10-15 см поливом водой.

При защите посадок малины или черной смородины от болезней посадки опрыскивают водной суспензией препарата, содержащей смесь в равных соотношениях штаммов бактерий В.licheniformis ВКПМ В-10561; В.licheniformis ВКПМ В-10562; В.subtilis ВКПМ В-10641; В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром каждого штамма, равным 10⁶ КОЕ/мл, с расходом водной суспензии 500 л на 1 га.

При стимуляции роста рассады черной смородины опрыскивают почву между растениями водной суспензией препарата, содержащей смесь в равных соотношениях штаммов бактерий: В.licheniformis ВКПМ В-10561, В.licheniformis ВКПМ В-10562; В.subtilis ВКПМ В-10641; В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром каждого штамма, равным 10⁶ КОЕ/мл с последующим промачиванием почвы между растениями на глубину 10-15 см поливом водой.

Используемые в заявляемом способе штаммы бактерий принадлежат заявителю и депонированы во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика:

- Bacillus subtilis, обеспечивающий восстановление микробиоценоза почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладающий бактерицидной, фунгицидной и вирулицидной активностью и депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика под регистрационным номером ВКПМ В-10641 (справка о депонировании прилагается);

- Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, обеспечивающий восстановление микробиоценоза почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладающий бактерицидной и фунгицидной активностью и депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика под регистрационным номером ВКПМ В-10642 (справка о депонировании прилагается);

- штаммы Bacillus licheniformis, обеспечивающие восстановление микробиоценоза почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладающих бактерицидной и фунгицидной активностью и депонированные от 18.03.2010 г. во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика соответственно под №ВКПМ: В-10561, В-10562.

Ниже приведено описание заявляемого способа.

Способ стимуляции роста и защиты ягодных культур от грибных болезней осуществляют следующим образом. Способ включает обработку ягодных культур биопрепаратом в жидкой форме путем замачивания корней саженцев перед посадкой, или опрыскивания их после посадки, или опрыскивания растений в период вегетации и плодоношения, или опрыскивания почвы вокруг растений с последующим ее промачиванием водой.

В качестве биопрепарата используют следующие его варианты:

Препарат №1. Смесь в равных соотношениях штаммов бактерий В.subtilis ВКПМ В-10641; В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 и В.licheniformis ВКПМ В-10562 с титром каждого штамма не менее 10⁶ КОЕ/мл в виде водной суспензии.

Препарат №2. Смесь в равных соотношениях штаммов бактерий В.subtilis ВКПМ В-10641; В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, и В.licheniformis ВКПМ В-10562 с титром каждого штамма не менее 10⁶ КОЕ/мл в виде водной суспензии.

Препарат №3. Смесь в равных соотношениях штаммов бактерий В.subtilis ВКПМ В-10641; В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, В. licheniformis ВКПМ В-10561 и В.licheniformis ВКПМ В-10562 с титром каждого штамма не менее 10⁶ КОЕ/мл в виде водной суспензии. При стимуляции роста и защите земляники от болезней ее посадку в почву осуществляют после замачивания корней саженцев в водной суспензии препарата №1 из расчета 9-10 л водной суспензии на 3000 корней земляники. Время замачивания одной партии корней земляники составляет 2 часа.

Для защиты плодоносящих растений земляники, например, от серой гнили ее опрыскивают водной суспензией препарата №2. Расход рабочей жидкости из расчета 500 л/га - 50 мл/м.

При стимуляции роста рассады облепихи опрыскивают почву между растениями водной суспензией препарата №1 из расчета 40 литров водной суспензии препарата на 4000 корней с последующим промачиванием почвы на глубину 10-15 см поливом водой.

При защите посадок малины или черной смородины от болезней посадки опрыскивают водной суспензией препарата №3 с расходом водной суспензии 500 л на 1 га.

При стимуляции роста рассады черной смородины опрыскивают почву между растениями водной суспензией препарата №3 из расчета 700 корней рассады на 10 л водной суспензии препарата с последующим промачиванием почвы между растениями на глубину 10-15 см поливом водой.

Ниже приведены экспериментальные данные в примерах 1-8, подтверждающие эффективность использования заявляемого способа.

Пример 1

Была изучена эффективность бактериальных штаммов препарата №1, используемого в заявляемом способе, при выращивании земляники садовой сорта Юния Смайдс по влиянию на рост, развитие и фитосанитарное состояние посадок культуры. Сроки посадки земляники - с 3-й декады мая до середины июня. Концентрация применяемых штаммов в опытных вариантах составляет 10⁵ КОЕ/мл. Количество обрабатываемых растений 3000 штук на 1 вариант (обработка одним штаммом). Способ нанесения штаммов - замачивание корневой системы саженцев земляники в рабочей жидкости, содержащей штамм в концентрации 10⁵ КОЕ/мл. Расход рабочей жидкости на 1 вариант - 9 литров. Экспозиция - 2 часа.

Изучали влияние штаммов на приживаемость, рост, развитие молодых растений и поражение их белой пятнистостью. Для закладки опыта использовали растения, выращенные в маточнике СХА «Сады Сибири». У выкопанных саженцев корневую систему погружали в растворы изучаемых штаммов на 2 часа непосредственно перед посадкой на постоянное место на производственном квартале хозяйства.

При учете в конце вегетационного периода степень поражения растений белой пятнистостью (возбудитель - Ramularia tulasnei Sacc, Hyphomycetales, Deuteromycota) при обработке штаммами В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, В.licheniformis ВКПМ В-10562, В.subtilis ВПКМ В-10641 снижалась в 2,0-2,4 раза.

На молодых листьях, которые выросли после высадки на производственный квартал, степень поражения была крайне низкой 0,1-1,9%, то есть наблюдались единичные пятна. Распространенность симптомов заметно снижалась в вариантах с применением штаммов - в вариантах с использованием штаммов В. subtilis ВПКМ В-10641 и В.licheniformis ВКПМ В-10562 - соответственно в 7,2 и 9 раз. По данному показателю биологическая эффективность обработки составила, соответственно, 86 и 89%.

Таким образом, обработка штаммами бактерий В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, В. licheniformis ВКПМ В-10562, В.subtilis ВПКМ В-10641 препарата №1 оказывала антидепрессорное влияние и повышала уровень устойчивости растений земляники к белой пятнистости.

Показана существенное влияние обработки бактериальными штаммами на показатели биомассы растений. Общая биомасса 1 растения достоверно возрастала в 1,7 раза (таблица 1) в варианте с применением штамма В. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 (23,2 г) относительно контроля (13,4 г). После удаления с растений старых листьев, сформировавшихся еще до опытной обработки, различия проявились еще более четко. В контроле биомасса одного растения составила 7,0 г; в варианте со штаммом В. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 - 12,5 г (увеличение в 1,8 раза); в варианте со штаммом В.subtilis ВПКМ В-10641 - 12,2 г (в 1,7 раза); в варианте со штаммом В.licheniformis ВКПМ В-10562 - 11,7 г (в 1,7 раза).

В вариантах со штаммами В.subtilis ВПКМ В-10641 и В.licheniformis ВКПМ В-10562 обнаружено также достоверное (Р<0,05) увеличение биомассы корневой системы растений (корневища и корни) в 1,4-1,5 раза.

Длина надземной части достоверно увеличивалась в варианте со штаммом В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 (в 1,4 раза - на 7,0 см) и со штаммом В.licheniformis ВКПМ В-10562 (в 1,2 раза - на 3,1 см).

Длина корневой системы достоверно увеличивалась в вариантах со штаммом В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 (на 14%) и в варианте со штаммом В.subtilis ВПКМ В-10641 (на 21%).

Таблица 2 Влияние бактериальных штаммов препарата №1 на биомассу и длину растений земляники в производственном опыте (СХА "Сады Сибири", 14 сентября 2010 г.)   Биомасса, г Длина, см Вариант общая без старых листьев корневой системы надземной части корней Контроль (без обработки) 13,4 7,0 3,2 19,1 15,1 В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 23,2* 12,5* 4,2 26,1* 17,2* В subtilis ВПКМ В-10641 18,6 12,2* 4,9* 22,8 18,2* В.licheniformis ВКПМ В-10562 19,0 11,7* 4,5* 23,2* 16,4 Препарат №1 на основе смеси штаммов 20,3 12,1* 4,5* 24,0* 17,3* НСР₀₅ 6,5 3,7 1,1 3,9 2,0

Таким образом, полученные данные показывают наличие стимулирующего действия у всех 3-х испытанных штаммов препарата №1 на различные параметры роста и развития растений земляники, а также на поражение белой пятнистостью.

Пример 2

Установлено положительное влияние штаммов В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, В.subtilis ВПКМ В-10641 препарата №1 при посадке на укоренение одревесневших черенков облепихи. Сроки посадки черенков облепихи в опыте - 2 декада мая. Концентрация применяемых штаммов в опытных вариантах составляет 10⁵ КОЕ/мл. Количество обрабатываемых растений - 4000 штук на 1 вариант. Способ нанесения биоагентов - опрыскивание поверхности почвы рабочей жидкостью, содержащей биоагент, с последующим промачиванием почвы на глубину 10-15 см путем полива водой. Расход рабочей жидкости на 1 вариант - 40 литров.

Испытание действия бактериальных штаммов на укореняющиеся черенки облепихи проводили на растениях сорта Обильная.

На черенках облепихи не было выявлено вредоносного фона развития болезней или вредителей в течение вегетации.

Выявлено, что длина однолетнего прироста надземной части (по длине главного побега) в контроле составила 28,4 см (табл.3; рис.1). Под влиянием обработки штаммом В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 происходило статистически достоверное (Р<0,05) удлинение прироста на 3,8 см (на 20%), под влиянием штамма В. subtilis ВПКМ В-10641 - на 4,3 см (на 22%).

Длина корневой системы в контроле составила 26,2 см. При обработке штаммом В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 корневая система достоверно удлинялась на 6,9 см (на 26%), при обработке штаммом В. subtilis ВПКМ В-10641 - на 8,9 см (на 34%).

Таблица 3 Влияние обработки бактериальными штаммами препарата №1 на параметры роста и развития одревесневших черенков облепихи (сорт Обильная, питомник СХА «Сады Сибири», учет 25 сентября) Вариант Длина однолетнего прироста, см Длина корневой системы, см Средняя биомасса 1 растения, г % к контролю Контроль (без обработки) 28,4 26,2 12,2 - В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 34,2* 33,1* 16,3* 33,6 В.subtilis ВПКМ В-10641 34,7* 35,1* 16,3* 33,2 В.licheniformis ВКПМ В-10562 28,0 30,2 12,6 33,3 Препарат №1 на основе смеси штаммов 32,3* 32,8* 15,1 33,3 НСР₀₅ 5,0 4,4 4,1  

Биомасса одного растения в контроле составила 12,2 г. В вариантах с обработкой штаммами В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 и В.subtilis ВПКМ В-10641 биомасса 1 растения достигала 16,3 г (прирост на 33-34%).

Таким образом, штаммы В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 и В.subtilis ВПКМ В-10641 препарата №1 оказывали на укоренение одревесневших черенков облепихи выраженное стимулирующее действие.

Пример 3

Модельный опыт на плодоносящей землянике на площади 20 м² по влиянию на серую гниль плодов. Вариант для каждого штамма препарата №2 включает 20 плодоносящих растений земляники, расположенных в 2-х соседних рядах на площади 1 м², а также контроль без обработки. Биоагенты наносятся при опрыскивании в начале созревания плодов 3-я декада июня (за 3-5 суток до 1-го сбора урожая). Концентрация применяемых штаммов препарата №2 в опытных вариантах составляет 10⁶ КОЕ/мл. Расход рабочей жидкости из расчета 500 л/га - 50 мл/м². Оцениваются индивидуальные растения в повторности 20 экземпляров в каждом варианте.

В модельном опыте по испытанию действия бактериальных штаммов препарата №2 на поражение плодов земляники серой гнилью (возбудитель - Botrytis cinerea Pers., Hyphomycetales, Deuteromycota) обработка растений проведена 26 июня в фенофазу налива - начала созревания плодов. Опытные растения сорта Юния смайдс (по 20 растений в каждом варианте) опрыскивали однократно, препарат наносили на всю надземную часть и на поверхность почвы в рядах. Первые зрелые плоды сформировались 2-3 июля. Учеты поражения проведены в 2 срока, перед массовыми сборами ягод - 10 июля и 15 июля. Оценено в каждый срок по 250-300 плодов в каждом варианте.

В 1-й срок наблюдения (10 июля) под влиянием штамма В. subtilis ВПКМ В-10641 пораженность ягод серой гнилью достоверно (Р<0,05) снизилась в 1,7 раза (БЭ=41%), под влиянием штамма В. licheniformis ВКПМ В-10562 - в 2,5 раза (БЭ=61%). Во 2-й срок наблюдения (15 июля) действие штаммов проявилось еще более четко. Все 3 испытываемые штамма достоверно снизили поражение серой гнилью от 2,2 до 3 раз, с БЭ=54-61%.

Таким образом, все 3 испытанных штамма препарата №2 проявляли примерно одинаковую эффективность действия против серой гнили плодов земляники: штамм В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 оказывал выраженное влияние на прирост надземной части и увеличение биомассы земляники и облепихи, на прирост корней облепихи, а также этот штамм снижал поражение серой гнилью ягод земляники; штамм В.subtilis ВПКМ В-10641 увеличивал биомассу и длину корней земляники и облепихи, увеличивал длину однолетнего прироста надземной системы у облепихи, снижал пораженность пятнистостями листьев и пораженность земляники серой гнилью; штамм В.licheniformis ВКПМ В-10562 вызывал увеличение биомассы корневой системы земляники, эффективно влиял против грибных пятнистостей надземной системы земляники, а также против серой гнили ягод земляники.

Пример 4

С целью защиты ягодных культур в период вегетации от грибных болезней проводили двукратную обработку малины сорта Зоренька Алтая водной суспензией препарата №3 (В.licheniformis ВКПМ В-10561; В.licheniformis ВКПМ В-10562; В. subtilis ВКПМ В-10641; В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642) против пурпуровой пятнистости. В качестве контроля использовали растения, обработанные водой.

Результаты влияния препарата №3 на развитие пурпуровой пятнистости в полевом опыте представлены в таблице 4.

Под влиянием биопрепаратов распространенность и развитие болезни уменьшились в 1,5-1,7 и 1,6-1,8 раза по сравнению с контролем. Глубокое поражение побегов малины в этом году не было отмечено. Развитие болезни в контроле не превышало экономический порог вредоносности (ЭПВ) (ЭПВ - 25%). Прибавка урожайности 0,1 т/га.

Таким образом, испытания показали, что штаммы В.licheniformis - ВКПМ В-10561 и ВКПМ В-10562 и штаммы В.subtilis ВКПМ В-10641, В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 препарата №3 активно подавляют развитие и распространенность пурпуровой пятнистости и могут быть агентами биологического контроля возбудителя пурпуровой пятнистости малины.

Таблица 4 Влияние штаммов В. subtilis, В. licheniformis и Bacillus amyloliquefaciens препарата №3 на поражение малины пурпуровой пятнистостью Вариант Распространенность, % Развитие, % Урожайность, т/га Контроль 75.0 18,7 1,4 Штамм В.licheniformis -ВКПМ В-10562 42,5 10,6 1,5 Штамм В.licheniformis -ВКПМ В-10561 45,0 11,3 1,5 Штамм B.subtilis ВКПМ В-10641 42,5 11,9 1,5 Штамм В. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 47,5 11.9 1,5 Препарат №3 на основе смеси штаммов 44,4 11,4 1,5 Топаз 0,1% 40 11,3 1,5 НСР₀₅   3,0  

Пример 5

Обработка на малине направлена против основного заболевания культуры -пурпуровой пятнистости при появлении первых симптомов заболевания. Обработка однократная - при появлении первых симптомов заболевания. Концентрация применяемых штаммов препарата №3 в опытных вариантах составляет 10⁶ КОЕ/мл. Способ нанесения биоагентов - наземное механизированное опрыскивание (МТ3-80+ОВГ-2200). Расход рабочей жидкости из расчета 500 л на 1 га - 125 л на вариант.

В производственном опыте по испытанию действия бактериальных штаммов на поражение малины грибными болезнями обработки были проведены 15 июля 2010 г. Препарат наносили на растения тракторным опрыскивателем ОВГ-2200.

В момент обработки на растениях наблюдались единичные симптомы септориоза (возбудитель - Septoria rubi (West.) Sacc, Spaeropsidales, Deuteromycota) на листьях. К сроку 1-го учета, проведенного 28 июля, степень поражения септориозом в контроле достигла 10%, распространенность болезни - 15% (таблица 5). Доказано снижение распространенности болезни в варианте со штаммом В. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 - в 1,6 раз, со штаммом В. licheniformis ВКПМ В-10562 - в 1,5 раз.

Таблица 5 Влияние бактериальных штаммов препарата №3 на поражение листьев малины септориозом (%, СХА «Сады Сибири», учет 28 июля) Варианты Распространенность по листьям, % Степень поражения, % Контроль (без обработки) 15,0 10,0 В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 9,3* 8,8 В.subtilis ВПКМ В-10641 11,0 12,0 В.licheniformis ВКПМ В-10562 10,0* 8,0 Препарат №3 на основе смеси штаммов 10,1* 9,0 НСР₀₅ 4,6 F_ф<F₀₅

Позднее, в течение августа развитие болезни во всех вариантах практически не происходило из-за сухой, относительно прохладной погоды. На этом фоне при 2-м учете (итоговом) - 21 августа тенденции снижения поражения проявлялись менее выражено и статистически уже не подтвердились (таблица 6). В целом поражение септориозом, в том числе и в контрольном варианте, было слабым и не оказывало вредоносного влияния.

Таблица 6 Влияние бактериальных штаммов и препарата №2 на поражение листьев малины септориозом (%, СХА «Сады Сибири», учет 21 августа) Варианты Распространенность по листьям, % Степень поражения, % Контроль(без обработки) 17,0 11,0 В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 11,6 6,8 В.subtilis ВПКМ В-10641 12,2 6,2 В.licheniformis ВКПМ В-10562 13,0 11,0 Препарат №2 на основе смеси штаммов 12,3 8,0 НСР₀₅ F_ф<F₀₄ F_ф<F₀₅

Пораженность пурпуровой пятнистостью (возбудитель - Didymella applanata (Nessl) Sacc., Dothideales, Ascomycota) в опыте была несколько выше, чем септориозом. Первые признаки болезни были выявлены при закладке опыта 15 июля. Прирост поражения в контроле начался с конца 3-й декады июля, в опытных вариантах - в августе. В результате при учете 21 августа в контроле распространенность болезни составила 44,0%, развитие - 12,5% (таблица 7). Достоверное (Р<0,05) снижение распространенности пурпуровой пятнистости выявилось в вариантах со штаммом В.subtilis ВПКМ В-10641 (в 1,6 раза, БЭ=36,4%) и со штаммом В.licheniformis ВКПМ В-10562 (в 2,0 раза, БЭ=50,0%). Достоверное снижение поражения в 1,8 раза подтвердилось в варианте со штаммом В.licheniformis ВКПМ В-10562 также и по показателю развития болезни.

В результате проведенной серии экспериментов (полевых, модельных, производственных) выявилась общая картина эффектов от применения бактериальных штаммов на разных культурах.

Таблица 7 Влияние бактериальных штаммов и препарата №2 на поражение стеблей малины пурпуровой пятнистостью (%, СХА «Сады Сибири», учет 21 августа) Варианты Распространенность болезни, % БЭ, % Развитие болезни, % Контроль 44,0   12,5 В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 36,0 18,2 10,0 В.subtilis ВПКМ В-10641 28,0* 36,4 9,0 В.licheniformis ВКПМ В-10562 22,0* 50,0 7,0* Препарат №2 (смесь штаммов) 28,7 34,9 8,7 НСР₀₅ 15,7 - 4,7

Штаммы В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, В.subtilis ВПКМ В-10641, В.licheniformis ВКПМ В-10561, В.licheniformis ВКПМ В-10562 препарата №3 снижали поражение малины различными пятнистостями, вызываемыми грибными патогенами, в частности - пурпуровой пятнистостью.

Пример 6

С целью защиты ягодных культур в период вегетации от грибных болезней проводили двукратную обработку черной смородины сорта Галинка водной суспензией В.licheniformis ВКПМ В-10561; В.licheniformis ВКПМ В-10562; В.subtilis ВКПМ В-10641; В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 препарата №3 против септориоза. В качестве контроля использовали растения, обработанные водой.

Проведенные полевые испытания всех изучаемых штаммов против пораженности септориозом смородины показали, что развитие болезни уменьшилось в 2,5 раза по сравнению с контролем - 15% на 10 июля.

Учеты в течение вегетационного периода показывают, что развитие болезни в вариантах со штаммами не превышало 15% в середине вегетационного периода и составляло от 18 до 20% в конце вегетационного периода, однако в контроле пораженность растений достигала 27%. В конце третьей декады августа пораженность септориозом при использовании биопрепаратов не превышала 40%, а в контроле достигала 55%.

Биологическая эффективность штаммов В. licheniformis - ВКПМ В-10561 и ВКПМ В-10562 на 10 июля составляла 68% и 79% соответственно, под влиянием штамма Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 около 85%, a Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 - 70%. К 17 июля биологическая эффективность Bacillus licheniformis ВКПМ В-10561, ВКПМ В-10562 была одинаковой и составила 67%. Биологическая эффективность В. subtilis ВКПМ В-10641 составляла 77%, а В. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 составляла 67 - 68%.

Пример 7

Установлено положительное влияние штаммов В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, В. licheniformis ВКПМ В-10562, В.subtilis ВПКМ В-10641 препарата №1 при посадке на укоренение одревесневших черенков черной смородины. Сроки посадки черенков смородины в опыте - 2 декада мая. Концентрация применяемых штаммов в опытных вариантах составляет 10⁵ КОЕ/мл. Количество обрабатываемых растений - 700 штук на 1 вариант. Способ нанесения биоагентов - опрыскивание поверхности почвы рабочей жидкостью, содержащей биоагент с последующим промачиванием почвы на глубину 10-15 см путем полива водой. Расход рабочей жидкости на 1 вариант - 10 литров.

Испытание действия бактериальных штаммов препарата №3 на укореняющиеся черенки черной смородины проводили на растениях сорта Ксюша.

В течение вегетации проводилось наблюдение за состоянием растений, которое не выявило вредоносного фона инфекционных болезней и вредителей. Итоговая оценка состояния растений проведена в конце вегетации 25 сентября. При этом оцениваемые растения выкапывали, измеряли и взвешивали.

В контроле длина вегетативного прироста главного побега составляла 14,4 см (таблица 8). Под влиянием обработок штаммами В. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 и В. licheniformis ВКПМ В-10562 достоверные различия по данному параметру не выявлены. Под влиянием штамма В. subtilis ВПКМ В-10641 прирост существенно (Р<0,05) увеличивался на 4,5 см (в 1,4 раза).

Таблица 8 Влияние обработки бактериальными штаммами препарата №1 на параметры роста и биомассу одревесневших черенков черной смородины (сорт Ксюша, питомник СХА «Сады Сибири», учет 25 сентября) Вариант Длина однолетнего прироста, см Длина корневой системы, см Биомасса 1 растения г % к контролю Контроль (без обработки) 14,4 20,7 12,1 - В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 14,5 23,8* 13,7 11,9 В.subtilis ВПКМ В-10641 19,9* 24,9* 18,8* 54,1 В.licheniformis ВКПМ В-10562 15,4 23,5* 14,1 15,2 Препарат №1 на основе смеси штаммов 16,6 24,1* 15,5 27,1 НСР₀₅ 2,1 1,8 3,4  

Длина корневой системы у саженцев в контроле в среднем составляла 20,7 см, под влиянием обработок штаммами длина корней достоверно увеличивалась. В частности, под действием штамма В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 - на 3,1 см (на 15%), под действием штамма В.subtilis ВПКМ В-10641 - на 4,2 см (на 20%), под действием штамма В.licheniformis ВКПМ В-10562 - на 2,8 см (на 14%). В контрольном варианте средняя биомасса 1 растения составила 12,1 г. В опытных вариантах наблюдалась тенденция увеличения биомассы под влиянием обработок.

Однако достоверно доказано возрастание биомассы относительно контроля только под действием штамма В. subtilis ВПКМ В-10641 - на 6,7 г (на 54,1%).

Таким образом, наибольший эффект по влиянию на растения черной смородины в процессе укоренения одревесневших черенков был достигнут при использовании штамма В. subtilis ВПКМ В-10641 препарата №1.

Пример 8

Обработка на черной смородине направлена против септориоза и антракноза. Обработка однократная - при появлении первых симптомов заболевания. Концентрация применяемых штаммов препарата №3 в опытных вариантах составляет 10⁶ КОЕ/мл. Способ нанесения биоагентов - наземное механизированное опрыскивание (МТ3-80+ОВГ-2200). Расход рабочей жидкости из расчета 500 л на 1 га - 125 л на вариант.

В производственном опыте по испытанию действия бактериальных штаммов на поражение черной смородины грибными болезнями обработки были проведены 15 июля 2010 г. Препарат наносили на растения тракторным опрыскивателем ОВГ-2200.

В момент обработки на растениях смородины единичные пятна поражения антракнозом (возбудитель - Gloeosporium ribis (Lib.) Mont, et Desm., Melanconiales, Deuteromycota) наблюдались на 3-5% от общего количества листьев. К сроку 1-го учета - 28 июля степень поражения в контроле достигла 14,5%, распространенность болезни - 17,6% (таблица 9). По распространенности болезни на этот срок наметилась тенденция снижения данного показателя в 1,4 - 1,5 раза относительно контроля. По степени поражения антракнозом различия через 2 недели после опрыскивания проявились достоверно (Р<0,05): степень поражения листьев под влиянием штамма В. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 снижалась в 3,2 раза, В. subtilis ВПКМ В-10641 - в 2,3 раза, В.licheniformis ВКПМ В-10562 - в 2,2 раза.

До 3-й декады августа произошло возрастание распространенности антракноза в контрольном варианте в 2 раза - до уровня 34,6%. Различия с контролем в итоге оказались достоверными (Р<0,05) для всех применяемых штаммов: под влиянием штамма В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 распространенность антракноза сокращалась в 3,8 раза, под влиянием штамма В.subtilis ВПКМ В-10641 - в 1,6 раза, под влиянием штамма В.licheniformis ВКПМ В-10562 - в 2,3 раза.

Таблица 9 Влияние бактериальных штаммов препарата №2 на поражение листьев черной смородины антракнозом и септориозом (СХА «Сады Сибири») Варианты Антракноз, % Септориоз, %   распространенность по листьям степень поражения БЭ, % распространенность по листьям степень поражения БЭ, %   28 июля 21 августа 28 июля 21 августа   21 августа 21 августа   Контроль 17,6 34,6 14,5 23,3 - 23,0 17,0 - В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 11,9 9,2* 4,6* 6,0* 74,2 15,2 6,6* 61,2 В.subtilis ВПКМ В-10641 12,9 21,6* 6,3* 13,2* 43,3 16,0 9,2* 45,9 В.licheniformis ВКПМ В-10562 11,6 15,2* 6,5* 7,8* 66,5 17,0 10,0* 41,2 Препарат №2 на основе смеси штаммов 12,1 15,3* 5,8* 9,0* 61,3 16,1 8,6* 49,4 НСР₀₅ по вариантам 9,3 4,8 - F_ф<F₀₅ 5,0 - НСР₀₅ по срокам 6,6 3,4 - - - -

Аналогично проявились различия с контролем и по показателю степени поражения болезнью. В контроле степень поражения составила в итоге 23,3%. Под влиянием штамма В. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 данный показатель достоверно снижался в 3,9 раза (БЭ=74%), под влиянием штамма В. subtilis ВПКМ В-10641 - в 1,8 раза (БЭ=43%), под влиянием штамма В. licheniformis ВКПМ В-10562 - в 3,0 раза (БЭ=67%).

Поражение листьев белой пятнистостью (септориозом, возбудитель - Septoria ribis Desm., Spaeropsidales, Deuteromycota) было обнаружено в начале августа. К 21 августа заболевание распространилось на все произрастающие на опытном участке растения, затронув на них 23,0% листьев. В вариантах с применением бактериальных штаммов проявлялась тенденция снижения распространенности заболевания в 1,6 - 1,7 раза, а по показателю степени поражения эффект влияния был достоверно доказан у всех 3-х штаммов. Под влиянием обработки штаммом В. amyloliquefaciens ВКПМ В 10642 степень поражения септориозом снизилась в 2,6 раза (БЭ=61%), В. subtilis ВПКМ В-10641 - в 1,8 раза (БЭ=46%), В. licheniformis ВКПМ В-10562 - в 1,7 раза (БЭ=41%). Таким образом, против септориоза и, в целом, листовых пятнистостей черной смородины наибольшую эффективность имела обработка штаммом В. licheniformis ВКПМ В-10562.

В результате проведенной серии экспериментов (полевых, модельных, производственных) выявилась общая картина эффектов от применения бактериальных штаммов препарата №3 на разных культурах: штамм В. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 оказывал выраженное влияние прирост корней черной смородины. Кроме того, данный штамм снижал поражение различных культуры пятнистостями, вызываемыми грибными патогенами; штамм В. subtilis ВПКМ В-10641 увеличивал биомассу и длину корней черной смородины, увеличивал длину однолетнего прироста надземной системы у черной смородины, снижал пораженность всех культуры пятнистостями листьев; штамм В. licheniformis ВКПМ В-10561 вызывал увеличение длины корней у черенков черной смородины, эффективно подавлял развитие грибных пятнистостей черной смородины.

Положительное влияние обработки бактериальными штаммами и препарата №3 на основе этих штаммов на параметры роста и биомассу ягодных культур представлено в таблице 10.

Таблица 10 Влияние обработки бактериальными штаммами и препарата №3 на основе этих штаммов на параметры роста и биомассу ягодных культур Вариант Длина однолетнего прироста, см Длина корневой системы, см Биомасса 1 растения г % к контролю Контроль (без обработки) 15,1 22,0 12,0 - В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 14,2 24,7* 13,9 11,5 В.subtilis ВПКМ В-10641 16,8* 24,9* 18,4* 15,3 В.licheniformis ВКПМ В-10562 15,0 24,8* 16,0 13,3 В.licheniformis ВКПМ В-10561 16,0 24,6* 16,2 13,5 Препарат №3 на основе смеси штаммов 15,5 24,7 16,1 13,4 НСР₀₅ 14,3 20,2 12,0 -

Способ стимуляции роста и защиты ягодных культур от болезней, вызываемых грибными патогенами, включает обработку растений биопрепаратом в жидкой форме путем замачивания корней саженцев перед посадкой, или опрыскивания их после посадки, или опрыскивания растений в период вегетации и плодоношения, или опрыскивания почвы вокруг растений с последующим ее промачиванием водой. В качестве биопрепарата используют смесь штаммов бактерий В.subtilis ВКПМ В-10641, В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, В.licheniformis ВКПМ В-10561 и В.licheniformis ВКПМ В-10562 или смесь штаммов бактерий В.subtilis ВКПМ В-10641, В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 и В.licheniformis ВКПМ В-10562 с титром каждого штамма не менее 10⁵ КОЕ/мл в виде водной суспензии. Изобретение обеспечивает повышение защиты ягодных культур от болезней, вызываемых грибными патогенами, за счет использования смеси штаммов разных видов бактерий рода Bacillus, обладающих более высокой антагонистической активностью, а также обеспечение возможности стимулирования роста ягодных культур. 4 з.п. ф-лы, 10 табл., 8 пр.

1. Способ стимуляции роста и защиты ягодных культур от болезней, вызываемых грибными патогенами, включающий обработку растений биопрепаратом в жидкой форме, отличающийся тем, что растения обрабатывают путем замачивания корней саженцев перед посадкой, или опрыскивания их после посадки, или опрыскивания растений в период вегетации и плодоношения, или опрыскивания почвы вокруг растений с последующим ее промачиванием водой, а в качестве биопрепарата используют смесь штаммов бактерий В.subtilis ВКПМ В-10641, В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, В.licheniformis ВКПМ В-10561 и В.licheniformis ВКПМ В-10562 или смесь штаммов бактерий В.subtilis ВКПМ В-10641, В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 и В.licheniformis ВКПМ В-10562 с титром каждого штамма не менее 10⁵ КОЕ/мл в виде водной суспензии.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при стимуляции роста и защите земляники от болезней, вызываемых грибными патогенами, ее посадку в почву осуществляют после замачивания корней саженцев в водной суспензии препарата, содержащей смесь в равных соотношениях штаммов бактерий: штамм В.licheniformis ВКПМ В-10562, штамм В.subtilis ВКПМ В-10641, штамм В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром каждого штамма равном 10⁵ КОЕ/мл, а плодоносящие растения земляники опрыскивают водной суспензией препарата, содержащей смесь в равных соотношениях штаммов бактерий: В.licheniformis ВКПМ В-10562, В.subtilis ВКПМ B-10641, В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром каждого штамма равном 10⁶ КОЕ/мл.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что при стимуляции роста рассады облепихи опрыскивают почву между растениями водной суспензией препарата, содержащей смесь в равных соотношениях штаммов бактерий: В.licheniformis ВКПМ В-10562, В.subtilis ВКПМ В-10641, В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром каждого штамма равном 10⁶ КОЕ/мл с последующим промачиванием почвы на глубину 10-15 см поливом водой.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что при защите посадок малины или черной смородины от болезней, вызываемых грибными патогенами, посадки опрыскивают водной суспензией препарата, содержащей смесь в равных соотношениях штаммов бактерий: В.licheniformis ВКПМ В-10561, В.licheniformis ВКПМ В-10562, В.subtilis ВКПМ В-10641, В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром каждого штамма равном 10⁶ КОЕ/мл с расходом водной суспензии 500 л на 1 га.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что при стимуляции роста рассады черной смородины опрыскивают почву между растениями водной суспензией препарата, содержащей смесь в равных соотношениях штаммов бактерий: В.licheniformis ВКПМ В-10561, В.licheniformis ВКПМ В-10562, В.subtilis ВКПМ В-10641, В.amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром каждого штамма равном 10⁶ КОЕ/мл с последующим промачиванием почвы между растениями на глубину 10-15 см поливом водой.