СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МУЖСКИХ И ЖЕНСКИХ ФОРМ БЕСПЛОДИЯ Российский патент 2013 года по МПК G01N33/483 

Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии, и касается диагностики мужских и женских форм бесплодия.

Известны способы диагностики бесплодия, основанные на оценке гормонального фона, оценке качества половых клеток, оценке уровня воспалительных изменений, на генетическом исследовании хромосомного набора, анатомо-физиологических отклонений (патенты РФ №2140640, №2302641, №2291439, №2314748, №2063631).

Недостатком вышеуказанных методов является вероятность ошибки в диагностике из-за невозможности учета всех причин, влияющих на репродуктивную функцию.

Причины любого заболевания, в том числе и бесплодия мужчин и женщин, приводят к функционально-структурным изменениям тех или иных форменных элементов крови. Особый интерес вызывают изменения эритроцитов, которые составляют 98% от общего объема форменных элементов крови. Мембраны эритроцитов являются моделью молекулярной организации плазматических мембран. От структурной организации мембран красных кровяных клеток во многом зависит их агрегационная активность и деформируемость, являющиеся важнейшими компонентами в микроциркуляции. Нормальные эритроциты способны значительно деформироваться при прохождении через капилляры, при этом не меняя своего объема и площади поверхности, что поддерживает процессы диффузии газов на высоком уровне па протяжении всего микроциркуляционного русла различных органов. При высокой деформируемости эритроцитов происходит максимальный перенос кислорода в клетки, а при ухудшении деформируемости (повышение жесткости) - поступление кислорода в клетки резко снижается, тканевое парциальное давление кислорода падает. Частой причиной бесплодия и невынашивания беременности является нарушение микроциркуляции и кровоснабжения детородных органов вследствие измененных свойств крови. В связи с этим всестороннее изучение кровоснабжения репродуктивных органов приобретает все большее значение.

Методик диагностики бесплодия, основанных на оценке нарушений микроциркуляции, в патентной и научно-технической литературе не найдено.

Задачей изобретения является возможность диагностики мужских и женских форм бесплодия путем оценки нарушений микроциркуляции.

Поставленная задача достигается тем, что в способе диагностики мужских и женских форм бесплодия согласно изобретению исследуют суспензию эритроцитов группы здоровых обследуемых и группы пациентов с бесплодием, измеряют средние скорости движения клеток суспензии, их минимальные, средние и максимальные диаметры с вычислением среднего арифметического значения в период воздействия переменного электрического поля с частотой f, равной от 5·10⁴ Гц - 10⁶ Гц, и средней напряженностью Е электрического поля в зазоре между электродами в пределах 10⁴-10⁶ вольт/м и градиенте напряженности 10¹¹ В/м² - 10¹³ В/м²; на основании полученных данных определяют по известным уравнениям теории диэлектрофореза электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов (поляризуемость клеток на разных частотах, обобщенные показатели жесткости и вязкости, электропроводность мембран эритроцитов под действием неоднородного переменного электрического поля, индекс агрегации, индекс деструкции эритроцитов, емкость мембран клеток, скорость поступательного движения клеток к электродам, положение равновесной частоты, величину дипольного момента), затем проводят аналогичные измерения образцов проб эритроцитов пациента с вероятной патологией бесплодия с определением электрических и вязкоупругих параметров эритроцитов, сравнивают полученные данные с соответствующими значениями, определенными для группы здоровых обследуемых и группы пациентов с бесплодием, и при наличии более 60% отличающихся параметров от нестрадающих бесплодием и входящих в границы значений для группы пациентов с бесплодием, выявляют пациентов с неопределяемым существующими методами бесплодием, вызванным нарушениями микроциркуляции, приводящими к ишемии.

При исследовании суспензии эритроцитов измерение скорости движения клеток суспензии, их минимальных, максимальных и средних диаметров с определением среднего арифметического значения проводят в период воздействия переменного электрического ноля с чистотой f, равной 5·10⁴ Гц - 10⁶ Гц, средней напряженностью электрического поля в зазоре между электродами Е, равной 10⁴ В/м · 10⁶ В/м и градиенте напряженности равном 10¹¹ В/м² - 10¹³ В/м². При частоте f<5·10⁴ Гц - реакция клеток на поле минимальна, при f>10⁶ Гц - клетки разрушаются. При средней напряженности E<10⁴ в/м - нет реакции клеток на поле, при E>10⁶ в/м - клетки разрушаются под действием поля. При градиенте напряженности - не фиксируется движение клеток, при - невозможно зафиксировать из-за высокой скорости движения клеток. Электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов определяют по полученным данным по известным уравнениям теории диэлсктрофореза [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7].

Электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов группы здоровых обследуемых и группы пациентов с бесплодием приведены в таблице.

Исследованы электрические вязкоупругие параметры эритроцитов у 48 человек с бесплодием первичным и вторичным (32 женщины, 16 мужчин), в возрасте от 28 до 39 лет, у которых было проведено комплексное исследование репродуктивной функции. Группу сравнения составили 36 человек (24 женщины, 12 мужчин) сопоставимого возраста без нарушения репродуктивной системы.

При исследовании параметров эритроцитов оказалось, что обследуемые с бесплодием имели клетки красной крови с достоверно сниженной амплитудой деформации под действием неоднородного переменного электрического поля на фоне повышенных обобщенных показателей вязкости и жесткости. Эритроциты пациентов с бесплодием были склонны к образованию агрегатов, деструкции, имели значительно сниженную поляризуемость на всех частотах исследуемого диапазона при достоверно более высокой относительной поляризуемости. Средний диаметр эритроцитов имел тенденцию к снижению. Эритроциты пациентов с бесплодием обладали высокой электропроводностью. Клетки имели сниженный поверхностный заряд, отражаемый сниженными показателями скорости движения клеток к электродам, дипольного момента. Мембраны обследуемых с бесплодием продемонстрировали достоверно более низкие показатели емкости. Равновесная частота у обследуемых с бесплодием оказалась сдвинутой в высокочастотный диапазон по сравнению с группой здоровых обследуемых.

После получения электрических и вязкоупругих показателей группы здоровых обследуемых и группы пациентов с бесплодием проводят аналогичные измерения образцов проб эритроцитов с вероятной патологией бесплодия и сравнивают полученные данные с соответствующими значениями, определенными для группы здоровых обследуемых и пациентов с бесплодием.

Ниже приведены примеры обследования пациентов с вероятной формой бесплодия по предлагаемому способу. При исследовании электрических и вязкоупругих параметров эритроцитов кровь объемом 2 мл забирали вокутайнерами в 3,7% нитратный буфер в соотношении 9:1, через 1 час кровь 0,1 мкл вносили в 0,3 молярный раствор сахарозы (рН 7,36) в соотношении 1:20. Измерения параметров эритроцитов проводили сразу после разведения. В измерительной ячейке на клетки воздействовали неоднородным переменным электрическим полем со следующими параметрами: напряженность электрического поля E=10⁵ м/в, градиент напряженности поля В/м², частота f=5·10⁴-10⁶ Гц.

Пример 1.

Обследуемая М., 38 лет с диагнозом: Бесплодие I неясного генеза. Соматически здорова.

Пациентке было проведено всестороннее обследование, в ходе которого были осуществлены УЗИ-мониторинг овуляции, обследования на заболевания, передающиеся половым путем, гормональные обследования (гормоны репродуктивной системы и гормоны щитовидной железы), проверка проходимости труб, было исключено иммунологическое бесплодие, с помощью гистероскопии были исключены синехии, не видимые на УЗИ, мелкие полипы, внутриматочный эндометрит, гиперплазия эндометрия. Проведенные исследования не выявили значимых отклонений. При параллельном обследовании мужа были исключены причины мужского и сочетанного бесплодия.

Исследование системы гемостаза не выявило изменений, значимых для репродуктивной функции. В данных общего анализа крови, биохимии - без особенностей.

Пациентке было проведено исследование электрических и вязкоупругих параметров эритроцитов.

Средний диаметр эритроцитов - в пределах значений для группы здоровых обследуемых - 7,42 мкм. Имеется повышенное количество агрегатов эритроцитов средних и крупных размеров - по 12-13 клеток в агрегате (индекс агрегации составляет 0,63 усл.ед. и находится в пределах значений для группы пациентов с бесплодием). Деформабельность эритроцитов снижена: при частоте 1 МГц и напряжении 10 В амплитуда деформации дискоцитов составляет 0,61·10^-6 м, что находится в границах величин пациентов с бесплодием. Равновесная частота находится в низкочастотном диапазоне - 0,33 МГц, что входит в границы значений для здоровых обследуемых. На частотах 0,05, 0,1, 0,5 МГц наблюдается избыточный гемолиз эритроцитов (индекс деструкции - 4,8% - уровень группы пациентов с бесплодием), скорость движения эритроцитов к электродам составляет 6,9 мкм/с и сочетается со сниженным дипольным моментом (0,87·10^-21 Кл·м) (оба показателя - в пределах значений для группы пациентов с бесплодием). Электропроводность мембраны повышена и составляет 7,82·10^-5 см/м при повышенных обобщенных показателях жесткости 6,32·10^-6 Н/м и вязкости 0,58 Па·с (эти параметры входят в пределы значений для пациентов с бесплодием). Емкость клеточной мембраны оказалась незначительно сниженной 4,94·10^-14 Ф и входила в пределы значений для группы здоровых обследуемых. Показатели поляризуемости на всех частотах были в рамках значений для пациентов с бесплодием (на частоте 5·10⁴ Гц - 4,22·10^-15 м³, на частоте 10⁵ Гц - 2,94·10^-15 м³, на частоте 5·10⁵ Гц +2,84·10^-15 м³, на частоте 10⁶ Гц +4,92·10^-15 м³), относительная поляризуемость составляла - 0,11. Итого, 13 исследованных показателей из 16 оказались в пределах значений для группы пациентов с бесплодием, что составляет 81% (т.е. более 60%), это позволяет сделать заключение о высокой вероятности ишемической формы бесплодия у данной пациентки.

Таким образом, при исследовании параметров эритроцитов выявилось, что преобладающая популяция клеток красной крови имеет значительно измененные электрические и вязкоупругие характеристики - сниженную способность к деформации, обусловленную высокими значениями обобщенных показателей жесткости и вязкости клеток, повышенную электропроводность мембраны, сниженную резистентность, биологическую активность, что сказывается как на поведении клеток в микроциркуляторном русле (склонность к гемолизу, образование агрегатов), так и на работе мембраносвязанных ферментов. Подобные изменения приводят к выраженным ишемическим нарушениям па периферии, в том числе в органах репродуктивной системы, что позволяет сделать заключение о наличии цитолитического, ишемического и дисрегуляторного механизма бесплодия у данной пациентки. Ниже приведены примеры, демонстрирующие, что при наличии менее 60% отличающихся параметров от значений здоровой группы будут наблюдаться нарушения микроциркуляции, существенно не влияющие на состояние репродуктивной системы.

Пример 2.

Больная П., 35 лет с диагнозом: Бесплодие П. В анамнезе - 2 медицинских аборта (1995, 1997 гг.), самопроизвольный выкидыш на сроке 9-10 недель в 2000 г. В последующие годы беременность не наступала.

При обследовании патологии внутренних органов не выявлено. Обследование на воспалительные, иммунологические процессы, гормональный фон, нарушения в системе гемостаза, углубленные гинекологические исследования не позволили установить возможную причину вторичного бесплодия.

При УЗИ органов малого таза выявлен умеренный спаечный процесс, однако проходимость труб не нарушена. При исследовании электрических и вязкоупругих параметров эритроцитов было выявлено, что преобладающая часть их значений находится в пределах для группы обследованных с бесплодием: снижение размеров эритроцитов (средний диаметр эритроцита - 7,02 мкм), преобладание эритроцитов с низкой амплитудой деформации (0,51·10^-6 м) на фоне высоких показателей обобщенных вязкости (0,71 Па·с), жесткости (7,92·10^-6 Н/м), со значительно сниженным поверхностным зарядом (отражаемым низкими показателями скорости движения клеток к электродам 7,05 мкм/с, дипольного момента 0,54·10^-21 Кл·м), утолщенной мембраной (низкие уровни емкости мембран эритроцитов 3,91·10^-10 Ф). Мембраны эритроцитов хорошо проводили электрический ток, что отражалось высокими уровнями электропроводности 7,64·10^-5 см/м, что также находилось в границах значений для больных с бесплодием. При этом клетки не обладали выраженной склонностью к образованию агрегатов (0,44 усл.ед.) и деструкции (1,3%) (эти параметры оказались в границах значений для группы здоровых обследованных). Показатели поляризуемости были снижены лишь на высоких частотах и входили в границы значений для группы пациентов с бесплодием (на частоте 5·10⁵ Гц +2,71·10^-15 м³, на частоте 10⁶ Гц +5,1·10^-15 м³). На низких показатели поляризуемости входили в пределы значений для здоровых обследуемых (на частоте 5·10⁴ Гц - 2,06·10^-15 м³, на частоте 10³ Гц - 1,14·10^-15 м), как и показатель относительной поляризуемости (-0,71). Положение равновесной частоты находилось к диапазоне, близком к группе здоровых обследуемых (0,48 МГц). Таким образом, у пациентки 10 показателей из 16 оказались в пределах значений для группы пациентов с бесплодием, что составляет 62,5% (т.е. более 60%), это позволяет рассматривать мембранные, ишемические, дисрегуляторные механизмы определяющими для развития бесплодия.

Пример 3.

Обследуемый К., мужчина 34 года с диагнозом: Бесплодие неясного генеза. При обследовании хронической патологии внутренних органов не выявлено. Мужчине проведено комплексное обследование по выявлению возможных причин бесплодия.

Данные спермограммы, МАР-тест не выявили отклонений от нормальных значений, были исключены инфекции, передаваемые половым путем; посев сока простаты на банальную флору также не выявил источники воспаления; ультразвуковое исследование позволило исключить кисты придатков, везикулит, простатит; доплеровское исследование вен мошонки исключило наличие варикоцеле. Гормональное исследование не обнаружило отклонений в уровнях гормонов, влияющих на сперматогенез (тестостерон, пролактин, ЛГ, ФСТ, эстрадиол). Кариотипирование, генетическое исследование хромосомного набора не выявило изменений.

При исследовании электрических и вязкоупругих параметров эритроцитов были выявлены изменения. У обследуемого ряд показателей находился в пределах таковых для группы здоровых обследуемых: средний диаметр эритроцита - 7,62 мкм, умеренно сниженная пластичность клеток (амплитуда деформации эритроцитов - 1,95·10^-6 м), умеренно повышенные обобщенные показатели вязкости (0,35 Па·с), жесткости (4,5·10^-6 Н/м), электропроводность мембран (3,04·10^-5 см/м). Остальные показатели входили в уровни значений для группы пациентов с бесплодием. Было отмечено преобладание агрегатов эритроцитов крупных и гигантских размеров, индекс агрегации составил 0,76 усл.ед. Эритроциты обладали выраженной склонностью к деструкции на всех частотах исследуемого диапазона (индекс деструкции составил 6,3%).

Сниженная резистентность клеток сочеталась с низкими уровнями поляризуемости на всех частотах (на частоте 5·10 Гц - 7,02·10^-15 м³, на частоте 10⁵ Гц - 3,55·10^-15 м³, на частоте 5·10⁵ Гц +1,96·10^-15 м³, на частоте 10⁶ Гц +4,13·10^-15 м³). Относительная поляризуемость составила 0,13. Емкость клеточной мембраны составила 4,14·10^-14 Ф, отражая утолщение оболочек эритроцитов. Выявлен сниженный поверхностный заряд (отражаемый низкими показателями скорости движения клеток к электродам 6,4 мкм/с, дипольного момента 0,47·10^-21 Кл·м). Равновесная частота оказалась смещенной в высокочастотный диапазон - 0,72 МГц.

Таким образом, у обследуемого оказались входящими в пределы значений группы пациентов с бесплодием 11 показателей из 16, что составляет 68,8%, это позволяет рассматривать нарушения микроциркуляции, мембранные изменения, вероятно, связанные с наличием у обследуемого недифференцированной дисплазии соединительной ткани, предполагающей наличие дизагрегационного, цитолитического и дисрегуляторного развития бесплодия у данного пациента.

Пример 4.

Обследуемый С., 36 лет, обратился по поводу бесплодия.

При обследовании на вирусные инфекции был выявлен хронический вирусный гепатит В в стадии репликации вируса с умеренной степенью биохимической активности, по косвенным признакам степень фиброза соответствовала II ст.

Исследование спермограммы выявило небольшое снижение уровня подвижных сперматозоидов, гормональные, иммунологические, ультразвуковые исследования мочеполовой системы не выявили существенных отклонений.

Наличие хронической активной вирусной инфекции оказало воздействие на параметры эритроцитов, которые оказались значительно отличающимися от группы здоровых обследуемых и входили в пределы значений для пациентов с бесплодием. Клетки красной крови имели сниженные размеры (средний диаметр эритроцита - 6,96 мкм), обладали низкой пластичностью (амплитуда деформации эритроцитов в составе агрегатов - 0,52·10^-6 м) на фоне высоких обобщенных показателей вязкости (0,73 Па·с), жесткости (8,17·10^-6 Н/м), высокой электропроводностью мембран (8,22·10^-5 см/м), отражающей выраженные изменения ее структуры под действием вируса. Оболочка эритроцитов оказалась значительно утолщенной в связи с адсорбцией на ее поверхности крупномолекулярных воспалительных белков, иммуноглобулинов, иммунных комплексов, связанных с наличием иммуновоспалительного синдрома (емкость клеточной мембраны оказалась равной 2,74·10^-14 Ф). Эритроциты обладали низким поверхностным зарядом, который «экранируется» вышеописанными белками (что отражают низкие показатели скорости движения клеток к электродам 5,2 мкм/с, дипольного момента 0,56·10^-21 Кл·м). Клетки в связи с этим обладали выраженной склонностью к агрегации (индекс агрегации составил 0,80 усл.ед.). Низкая биологическая активность, отражаемая низкими показателями поляризуемости на всех частотах (на частоте 5·10 Гц - 6,87·10^-15 м, на частоте 10⁵ Гц -3,11·10^-15 м³, на частоте 5·10⁵ Гц +1,80·10^-15 м³, на частоте 10⁶ Гц +3,27·10^-15 м³), привела к выраженному снижению резистентности, и, как следствию, выраженному гемолизу в условиях стресса различной интенсивности (индекс деструкции составил 7,4%), что усиливало образование смешанных клеточных агрегатов. Относительная поляризуемость составила - 0,27. Все вышеописанные показатели входили в границы значений таковых для пациентов с бесплодием.

Равновесная частота была значительно смещена в низкочастотный диапазон (0,44 МГц), этот показатель входил в границы группы здоровых обследуемых.

Таким образом, у обследуемого 15 из 16 показателей оказались входящими в пределы значений для группы пациентов с бесплодием, что составляет 93,8%. Следствием этих изменений характеристик эритроцитов у данного пациента в равной степени являются выраженные различные патогенетические механизмы: мембранный, дизагрегационный, цитолитический, ишемический, что вызвало бесплодие в данном случае.

Ниже приведены примеры, демонстрирующие, что при наличии менее 60% отличающихся параметров от значений здоровой группы будут наблюдаться нарушения микроциркуляции, не оказывающие существенного влияния на репродуктивную систему.

Пример 5.

Больная С., 32 лет, мать троих здоровых детей (в анамнезе - 4 беременности, трое родов, протекших без осложнений, 1 - медицинский аборт) обратилась для обследования с диагнозом: Тромбоз сосудов сетчатки правого глаза.

Офтальмологические исследования предполагали выявление нарушений в системе гемостаза (был выявлен умеренный дефицит протеина С, повышение уровня фибриногена), исследование параметров эритроцитов.

При исследовании электрических и вязкоупругих параметров эритроцитов было выявлено, что преобладающая часть их значений находится в пределах для группы здоровых лиц: размеры эритроцитов (средний диаметр эритроцита - 7,58 мкм), показатели поляризуемости па высоких (на частоте 5·10⁵ Гц +5,46·10^-15 м³, на частоте 10⁶ Гц +7,52·10^-15 м³) и низких частотах (на частоте 5·10⁴ Гц -1,82·10^-15 м³, на частоте 10⁵ Гц -0,97·10^-15 м³), показатель относительной поляризуемости (-0,60), скорость движения клеток к электродам 13,4 мкм/с, электропроводность 2,75·10^-5 см/м. Клетки не обладали выраженной склонностью к образованию агрегатов (0,41 усл.ед.) и деструкции (0,9%) (эти параметры также оказались в границах значений для группы здоровых обследованных). Положение равновесной частоты находилось в диапазоне, близком к группе здоровых обследуемых (0,45 МГц).

Вместе с тем, у пациентки выявлено преобладание эритроцитов со сниженной амплитудой деформации (0,59·10^-6 м) на фоне повышенных показателей обобщенных вязкости (0,67 Па·с), жесткости (7,63·10^-6 Н/м), низким дипольным моментом (0,62·10^-21 К·лм), утолщенной мембраной (низкие уровни емкости мембран эритроцитов 3,21·10^-14 Ф), что обусловлено адсорбцией на мембранах эритроцитов фибриногена. Вероятно, нарушения микроциркуляции в сосудах сетчатки обусловлены изменением параметров эритроцитов (клетки с низкой пластичностью, утолщенными мембранами, сниженным поверхностным зарядом) в сочетании с нарушениями системы гемостаза. Для реализации этих нарушений оказались важными особенности капиллярной сети сетчатки глаз.

Таким образом, у пациентки лишь 5 показателей из 16 оказались в пределах значений для группы пациентов с бесплодием, что составляет 31,3% (т.е. менее 60%). Оставшаяся часть параметров эритроцитов находилась в пределах группы здоровых лиц. Это позволяет рассматривать совокупность выявленных нарушений параметров эритроцитов значимой для развития тромбоза сетчатки глаза, но не определяющей для развития бесплодия.

Пример 6.

Пациентка А., 28 лет, с диагнозом: 2-я беременность 12-14 недель, роды 2, обратилась на консультацию в связи с пожелтением кожных покровов.

Биохимическое обследование позволило выявить повышение уровня общего билирубина до 45 мкмоль/л, преимущественно за счет непрямой фракции - 41 мкмоль/л. Остальные печеночные пробы оказались в пределах нормы. Маркеры вирусных гепатитов, определенные методами ИФА и ГИДР, дали отрицательные результаты. Данные УЗИ органов брюшной полости не выявили отклонения от нормы.

Поскольку в уровень непрямого билирубина могут вносить вклад разрушающиеся эритроциты, пациентке было проведено исследование электрических и вязкоупругих параметров клеток красной крови.

При исследовании показателей эритроцитов оказалось, что у пациентки клетки красной крови обладали нормальными размерами (средний диаметр эритроцита - 7,48 мкм), были достаточно пластичны (амплитуда деформации эритроцитов 2,41·10^-6 м) с невысокими обобщенными показателями вязкости (0,34 Па·с) и жесткости (4,15·10^-6 Н/м), достаточным поверхностным зарядом (нормальные значения скорости движения клеток к электродам 12,7 мкм/с и дипольного момента 1,37·10^-21 Кл·м), умеренной толщиной мембраны (5,48·10^-14 Ф) и невысокой электропроводностью (3,12·10^-5 см/м). Значения всех вышеописанных показателей входили в пределы значений для группы здоровых лиц.

Вместе с тем, было выявлено, что эритроциты пациентки обладали сниженной жизнеспособностью (показатели поляризуемости па всех частотах были значительно снижены: на частоте 5·10⁴ Гц -5,13·10^-15 м³, на частоте 10⁵ Гц -3,82·10^-15 м³, на частоте 5·10⁵ Гц +2,95·10^-15 м³, на частоте 10⁶ Гц +4,83·10^-15 м³; относительная поляризуемость составила -0,13), были склонны к значительной деструкции (5,8%) и, как следствие, склонны к образованию агрегатов (0,68 усл.ед.). При этом равновесная частота оказалась сдвинутой в высокочастотный диапазон 0,68 МГц. Все эти параметры находились в пределах значений для пациентов с бесплодием.

Таким образом, половина из исследуемых показателей (50%, т.е. менее 60%) оказалась в пределах значений для пациентов с бесплодием. Для нарушения репродуктивной функции этого оказалось недостаточным. Пациентка вынашивает вторую беременность. Подобные изменения параметров эритроцитов оказались связанными с наличием у обследуемой гетерозиготной мутации при синдроме Жильбера (было проведено генотипирование уридиндифосфатглюкоронилтрансферазы генатоцитов). При этом мембранные дефекты гепатоцитов коррелируют с мембранными сдвигами в мембранах эритроцитов, определяя наблюдаемые изменения их параметров.

Преимуществами метода по сравнению с известными являются:

- возможность диагностики мужского и женских форм бесплодия путем оценки нарушений микроциркуляции;

- возможность выявления случаев бесплодия, не выявленных другими методами и относимых по классификации к бесплодию неясного генеза;

- возможность выявления изменения параметров эритроцитов, влияющих на репродуктивную функцию и вызванных совокупностью причин (воспалительных, гормональных, иммунологических, дисплазией соединительной ткани);

- получение комплекса показателей эритроцитов, отражающих различные нарушения (структурные, функциональные, смешанные), которые дают возможность определять дальнейшую терапевтическую возможность работы в реальном режиме времени, возможность демонстрации, сравнения, сопоставления результатов в динамике;

- доступность объекта исследования эритроцитов (необходимость взятия крови в минимальном объеме - 0,1 мкл без специальной подготовки пациента);

- минимальная травматизация клеток при исследовании;

- малая трудоемкость исследования, высокая пропускная способность метода.

Литература

1. Фейнман Р., Лейтон Р., Сэндс М. Фейнмановские лекции по физике. Т.7. М.: Мир, 1977. 287 с.

2. Яворский Б.М., Детлаф А.А. Справочник но физике. М.: Издательство наука, 1965. 848 с.

3. Ландау Л.Д., Лифшиц В. М. Электродинамика сплошных сред. М.: Наука, 1982. Т.8. 620 с.

4. Фейнман Р., Лейтон Р., Сэндс М. Фейнмановские лекции но физике. Т.5. М.: Мир, 1977. 299 с.

5. Генералов В.М., Бакиров Т.С., Пак Л.В., Звольский И.Л., Зайцев Б.Н., Дурыманов Л.Г., Кручинина М.В., Курилович С.Л., Сергеев А.Н. Автоматизированная установка измерения вязкоупругих характеристик эритроцитов // Наукоемкие технологии. 2008. Т.9, №12. С.28-33.

6. Бакиров Т.С., Генералов В.М., Чермашенцев В.М. А.С. 1642353. Способ определения поляризационных характеристик биочастиц. Заявка №4641682 от 25.01.1989; опубл. 15.04.1991. Бюл. №14.

7. Бакиров Т.С., Генералов В.М., Топорков B.C. Измерение поляризации отдельной клетки в неоднородном переменном электрическом поле // Биотехнология. 1998. №2. С.73-82.

Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии, и касается диагностики мужских и женских форм бесплодия путем оценки нарушений микроциркуляции. Способ диагностики мужских и женских форм бесплодия заключается в том, что предварительно исследуют суспензию эритроцитов группы здоровых обследуемых и группы пациентов с бесплодием, измеряют средние скорости движения клеток суспензии, их минимальные, средние и максимальные диаметры в период воздействия переменного электрического поля. На основании полученных данных определяют электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов. Затем проводят аналогичные измерения образцов проб эритроцитов пациента с вероятной патологией бесплодия. Далее сравнивают полученные данные с соответствующими значениями у группы здоровых обследуемых. При наличии более 60% отличающихся параметров от нестрадающих бесплодием и входящих в границы значений для группы пациентов с бесплодием выявляют пациентов с неопределяемым существующими методами бесплодием, вызванным нарушениями микроциркуляции, приводящими к ишемии. Способ позволяет определить дальнейшую терапевтическую тактику, снижает трудоемкость исследования. 1 табл., 6 пр.

Способ диагностики мужских и женских форм бесплодия, заключающийся в том, что предварительно исследуют суспензию эритроцитов группы здоровых обследуемых и группы пациентов с бесплодием, измеряют средние скорости движения клеток суспензии, их минимальные, средние и максимальные диаметры с вычислением среднего арифметического значения в период воздействия переменного электрического поля с частотой f, равной от 5·10⁴ Гц - 10⁶ Гц, и средней напряженностью Е электрического поля в зазоре между электродами в пределах 10⁴-10⁶ В/м и градиенте напряженности на основании полученных данных определяют по известным уравнениям теории диэлектрофореза электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов (поляризуемость клеток на разных частотах, обобщенные показатели жесткости и вязкости, электропроводность мембран эритроцитов под действием неоднородного переменного электрического поля, индекс агрегации, индекс деструкции эритроцитов, емкость мембран клеток, скорость поступательного движения клеток к электродам, положение равновесной частоты, величина дипольного момента), затем проводят аналогичные измерения образцов проб эритроцитов пациента с вероятной патологией бесплодия с определением электрических и вязкоупругих параметров эритроцитов, сравнивают полученные данные с соответствующими значениями, определенными для группы здоровых обследуемых и группы пациентов с бесплодием и при наличии более 60% отличающихся параметров от нестрадающих бесплодием и входящих к границы значений для группы пациентов с бесплодием выявляют пациентов с неопределяемым существующими методами бесплодием, вызванным нарушениями микроциркуляции, приводящими к ишемии.