ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ ЦЫПЛЯТ № 2722 В ГКВ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ДИАГНОСТИКУМОВ Российский патент 2013 года по МПК C12N7/00 A61K39/12 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке средств для лабораторной диагностики инфекционной анемии цыплят (ИАЦ).

Инфекционная анемия цыплят (ИАЦ) - контагиозная вирусная болезнь, характеризующаяся повышенной смертностью, она связана с атрофией костного мозга и лимфоидной системы, подкожными и внутримышечными кровоизлияниями. Впервые заболевание цыплят анемией описали японские ученые в 1979 г., наблюдая его у птицы, привитой против болезни Марека [1]. В последующие годы, по данным серологических исследований, было установлено широкое распространение этого заболевания в большинстве стран, часто оно протекает без клинических признаков, т.е. бессимптомно. Экономический ущерб в промышленном птицеводстве вне зависимости от формы проявления ИАЦ существен: он связан с гибелью птицы, низкими приростами и оплатой корма, снижением категорийности тушек, повышенной выбраковкой, расходами на лечение вторичных инфекций и проведение соответствующих ветеринарно-санитарных мероприятий.

Отечественная ветеринарная вирусология до настоящего времени не располагает штаммом вируса ИАЦ, пригодного для создания средств диагностики и специфической профилактики болезни.

В зарубежной литературе описан ряд штаммов вируса ИАЦ, используемых для производства вакцин. В большинстве случаев вакцинные штаммы непригодны для изготовления диагностикумов по причине их низкой антигенной активности. Известен штамм «CUX-1» вируса ИАЦ, репродуцируемый в 5-6-ти суточных эмбрионах СПФ-кур [2]. Недостатком данного штамма является его низкая антигенная активность.

Известен штамм «26Р4» вируса ИАЦ, адаптированный к культуре клеток MDCC-MSB1[3]. Однако размножение вируса в культуре клеток вызывает снижение его антигенной активности. Полученные образцы антигена и иммунной сыворотки с использованием данного штамма обладают низкой активностью и не поддаются стандартизации.

Задачей изобретения является получение нового штамма вируса ИАЦ, отвечающего всем требованиям для производства средств диагностики и представляющего собой свободный от контаминации вирусный материал, обладающий инфекционной и антигенной активностью.

Задачей изобретения достигается получением вирулентного штамма «АБИМ» вируса инфекционной анемии цыплят семейства Circoviridae.

Штамм «АБИМ» депонирован в государственной коллекции вирусов НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского 19 апреля 2012 г. под регистрационным номером 2722.

Исходный вирус для получения штамма «АБИМ» выделен из печены спонтанно больных цыплят-бройлеров в 2010 г. Штамм поддерживается последовательными пассажами на суточных цыплятах, свободных от специфических антител.

Штамм «АБИМ» вируса ИАЦ характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства

Штамм «АБИМ» относится к семейству Circoviridae, роду Circovirus, обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ИАЦ: форма вириона икосаэдрическая, размер вириона 22-25 нм, относится к ДНК-содержащим вирусам, устойчив к воздействию температуры до 56°С в течение 30 минут, эфира и хлороформа. Капсид вирионов состоит из 32 капсомеров и имеет один главный структурный белок.

Патогенные и антигенные свойства

Экспериментально подтверждено, что внутримышечное введение вируса в объеме 0,2 см³ цыплятам суточного возраста приводит к проявлению инфекции на 15 сутки опыта. Зараженные цыплята отстают в росте и развитии на 20%. Смертность была невысокая - 2%.

При патологоанатомическом вскрытии у павших птиц отмечаются признаки гидремии и общей анемии. Кровь разжижена, имеет светло-красный цвет, плохо свертывается. Внутренние органы, слизистые оболочки и серозные покровы выглядят бледными. В коже брюшной стенки, тазовых конечностей и медиальной поверхности крыльев наблюдается застойная гиперемия и нарастающий серозный отек. Часто в этих участках выявляются подкожные кровоподтеки и точечные кровоизлияния. Отмечены также серозные отеки и диффузные геморрагии в перимизии грудных мышц.

Гистологические изменения у экспериментально зараженных цыплят характеризуются: атрофией кроветворных островков, достоверное уменьшение количества клеток эритроцитарного и гранулоцитарного рядов, снижение лейкоэритробластического индекса, а также индексов созревания эозинофилов и псевдоэозинофилов в костном мозге; уменьшение размеров и делимфатизация коркового вещества, увеличение числа и размеров телец Гассаля в мозговом и корковом веществе долек тимуса; сужение корковой зоны лимфоидных узелков, снижение плотности расположения лимфоцитов в ней, появление на месте атрофированных узелков микрокист и псевдожелезистых структур в бурсе Фабрициуса.

Уровень гематокрита цыплят в подопытной группе снижен до 16% при норме 41%.

Для получения иммунной специфической сыворотки цыплятам мясных кроссов 30-ти дневного возраста подкожно вводят вирулентный штамм «АБИМ» инфекционной анемии цыплят и через 15-20 суток повторно вводят вирус в объеме 1,0 см в грудную мышцу.

Сыворотку крови птиц получают через 21 дней после повторного введения вируса ИАЦ. Активность сыворотки в ИФА достигает 1:3557. Специфичность иммунной реакции экспериментально зараженных цыплят подтверждена отсутствием в ИФА в сыворотке крови антител к гетерологичным возбудителям.

Штамм «АБИМ» вируса инфекционной анемии цыплят свободен от контаминации гетерогенными вирусами, микоплазмами, бактериальной и грибковой микрофлоры, специфичен и активен.

Источники информации

1. Pags-Mant A., N. Saubi; С. Artigas; Е. Espuna Experimental evaluation of an inactivated vaccine against chicken anemia virus. - Avian Pathology, 1997, Vol.26, №4, P.721-729.

2. Vielitz, E., Bulow, V. von, Landgraf, H. & Conrad, C. Anemia in broilers: development of a vaccine for parent stock. - Journal of Veterinary Medicine, 1987, Vol.34, P.553-557.

3. Yuasa, N.; Taniguchi, T. and Yoshida, I. Isolation and some characteristics of an agent inducing anemia in chicks. - Avian Dis. 1979, Vol.23, P.366-385.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается штамма вируса инфекционной анемии цыплят. Представленный штамм выделен из печени спонтанно больных цыплят-бройлеров и депонирован в Государственной коллекции вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского под №2722. Штамм относится к семейству Circoviridae, роду Circovirus обладает выраженной инфекционной и антигенной активностью. Штамм может быть эффективен для производства диагностикумов.

Штамм вируса инфекционной анемии цыплят семейства Circoviridae № 2722 (Государственная коллекция вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского) для производства диагностикумов.