СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ У ХРЯКОВ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ Российский патент 2013 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к инфекционной патологии животных и может использоваться в ветеринарной практике для диагностики хламидиоза у хряков-производителей.

Основные диагностические тесты направлены на выявление хламидий или их антигенов в клиническом материале от больных животных. Известен способ диагностики хламидиоза у хряков-производителей. Сущность способа состоит в том, что проводят серологическое исследование сыворотки крови и определяют титр антител к этой инфекции [1]. Известно применение антигенов для обнаружения антител к хламидиям в сыворотке крови больных с применением постановки реакции иммуноферментого анализа (РИФ). Антиген представляет собой полисахаридно-белковый комплекс в рабочей концентрации 5-15 мкг/мл адсорбционного буфера. Набор содержит также хламидийную (положительную) и нормальную (отрицательную) контрольные сыворотки в разведении 1:50-1:150 в инкубационном буфере и коньюгат антивидового иммуноглобулина класса G с пероксидазой (патент РФ 2156620, 1998).

Недостатком известных способов является недостаточная информативность диагностики хламидиозов, в частности отрицательный результат при персистентной форме инфекции.

Целью изобретения является разработка способа диагностики хламидийной инфекции у хряков - производителей, обеспечивающего достоверную информативность, в том числе и у животных, имеющих персистентную форму инфекции.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является более достоверная (100%) диагностика хламидийной инфекции у хряков-производителей.

Поставленная цель достигается тем, что при диагностике хламидиоза у хряков-производителей проводят исследование спермы на хламидийную инфекцию методом электронной микроскопии.

Взятие спермы у хряков-производителей осуществляют мануальным способом. Концентрат спермы получают путем центрифугирования, фиксируют 2,5% глютаральдегидом, в течение 4-6 часов. Далее комочки спермы отмывают в фосфатном буфере и обрабатывают осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 часов при температуре плюс 4 градуса. Затем производят заливку в аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получают на ультратоме LKB-Ш, концентрируют 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 минут и цитратом свинца по Рейнольдсу [2], просматривают в электронном микроскопе типа ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75К. Поиск и индикацию очагов поражения осуществляют методом прицельного ультрамикротомирования путем получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И. Лысенко [3].

Заявляемый способ диагностики хламидиоза хряков-производителей является новым и в литературе не описан.

Сущность изобретения поясняется следующим примером.

Для обоснования информативности заявляемого способа диагностики хламидиоза хряков-производителей было использовано 95 хряков-производителей, принадлежащих СЗПК «Русь» Пермского района Пермского края и 25 голов, принадлежащих свинокомплексу «Рощинский» Республики Башкортостан. Взятие спермы у хряков-производителей осуществляли мануальным способом. Диагностику хламидийной инфекции у хряков-производителей проводили известным способом с применением постановки реакции иммуноферментого анализа (РИФ) и заявляемым способом. Для осуществления заявляемого способа, путем центрифугирования получали концентрат спермы, который сразу же фиксировали 2,5% глютаральдегидом, в течение 4-6 часов. Далее комочки спермы отмывали в фосфатном буфере и обрабатывали осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 часов при температуре плюс 4 градуса. Затем производили заливку в аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получали на ультратоме LKB-Ш, концентрировали 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 минут и цитратом свинца по Рейнольдсу.

Полученные срезы просматривали в электронном микроскопе типа ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75К. Поиск и индикацию очагов поражения осуществляли методом прицельного ультрамикротомирования путем получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И. Лысенко.

Результаты сравнительного исследования известного способа и заявляемого способа диагностики хламидиоза хряков-производителей представлены в таблице.

Таблица. Результаты исследований по диагностике хламидиозов хряков-производителей с помощью РИФ и заявляемым способом Название хозяйства Количество животных в опыте Количество положительно реагирующих на хламидиоз животных голов % Диагностика РИФ СЗПК «Русь» 95 36 37,9 Свинокомплекс «Рощинский» 25 7 28,0 Заявляемый способ СЗПК «Русь» 95 43 45,3 Свинокомплекс «Рощинский» 25 9 36,0

При использовании заявляемого способа, в 52 срезах (40,6%) нативной спермы хряков-производителей обнаружили ретикулярные тельца хламидий. Хламидии имели различную форму: округлую, овальную, неправильную, с неравномерно плотной мембраной, ограничивающей мелкозернистый с фибриллярными структурами матрикс. Встречались одиночные ретикулярные тельца хламидий или неопределенной формы с закругленными контурами, в цитоплазме которых на фоне разрежения матрикса содержалось множество мелких шаровидных или овальных структур. Некоторые ретикулярные тельца были нафаршированы «дочерними» тельцами и в местах их скоплений наблюдалась деструкция и лизис мембраны с выходом этих структур во внеклеточное пространство. При изучении ультраструктуры сперматозоидов наблюдалось разрежение и деформация ядра головки и шейки. Отмечалось нарушение клеточной оболочки по всему телу, что выражалось в отслаивании, лизисе и обволакивании тела вокруг гомогенной массой (фиг.1, 2, 3).

При этом, при использовании общеизвестного способа хламидийная инфекция диагностировалась только у 43 животных (32,9%).

Таким образом, предлагаемый способ значительно повышает достоверность диагностики хламидийной инфекции у хряков-производителей.

Источники информации

1. Хамадеев Р.Х. Хламидиозы рогатого скота и свиней (эпизоотология, диагностика, специфическая профилактика и меры борьбы). Автореф. дисс.… доктора ветеринарных наук. Казань, 1991. - 40 с.

2. Б. Уикли Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 1975. - 324 с.

3. Лысенко А.И. Методы ориентирования и прицельно ультратомирования ткани для электронной микроскопии // Архив патологии. - 1973. №5. - С.68-72.

4. Патент РФ, 2156620, 1998.

Изобретение относится к ветеринарии. Способ диагностики хламидиоза у хряков-производителей включает исследования спермы и определения в ней ретикулярных телец хламидий методом электронной микроскопии. Полученный, путем центрифугирования, концентрат спермы фиксируют 2,5% глютаральдегидом, отмывают в фосфатном буфере, обрабатывают осмиевым фиксатором, производят заливку в аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получают на ультратоме LKB-Ш, концентрируют 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата и цитратом свинца по Рейнольдсу, просматривают в электронном микроскопе типа ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75, поиск и индикацию очагов поражения осуществляют методом прицельного ультрамикротомирования получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И.Лысенко. 1 табл., 3 ил.

Способ диагностики хламидийной инфекции у хряков-производителей путем исследования спермы и определения в ней ретикулярных телец хламидий, отличающийся тем, что проводят исследование производителей на хламидийную инфекцию методом электронной микроскопии, при этом у хряков-производителей перед исследованием получают концентрат спермы путем ее центрифугирования, фиксируют его 2,5%-ным глютаральдегидом в течение 4-6 ч, отмывают в фосфатном буфере, обрабатывают осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 ч при температуре плюс 4°С и производят заливку в аралдит и эпон идентичных форм, срезы получают на ультратоме LKB-Ш, концентрируют 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 мин и цитратом свинца по Рейнольдсу, просматривают в электронном микроскопе типа ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75, поиск и индикацию очагов поражения осуществляют методом прицельного ультрамикротомирования получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И. Лысенко.