СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВНУТРИУТРОБНОГО ИНФИЦИРОВАНИЯ У МАТЕРЕЙ С УРОГЕНИТАЛЬНЫМ ХЛАМИДИОЗОМ Российский патент 2010 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины. Применяется в акушерстве и неонатологии.

В последние годы во всем мире отмечается тенденция к увеличению частоты инфекций, передающихся половым путем (ИППП). Особого внимания заслуживают инфекции, возбудители которых способны повреждать ткани последа, проникать через плацентарный барьер и вызывать внутриутробное инфицирование (ВУИ). Одной из ведущих причин, приводящей к формированию плацентарной недостаточности и определяющей состояние здоровья новорожденных в современной популяции беременных, является урогенитальная хламидийная инфекция. Ее частота у беременных достигает 40,0% [1, 2]. Внутриутробное развитие плода и здоровье новорожденного во многом определяется состоянием фетоплацентарного комплекса [4]. Трансплацентарный путь инфицирования подтверждается высокой частотой поражения последа с картиной хронического воспаления в плаценте и внеплацентарных оболочках [3].

Инфекционные заболевания хламидийной этиологии развиваются у 20,5% детей [5]. Клиническими проявлениями хламидийной инфекции у новорожденных являются конъюнктивит, возникающий в нетипичные для ВУИ сроки - через 1-2 недели, а иногда и через 5 недель после рождения, интерстициальная пневмония, развивающаяся в течение 2-4 месяцев с момента рождения [6]. Могут развиваться менингоэнцефалиты, отиты, гастроэнтериты, воспалительные заболевания мочеполовых органов [5].

Хламидийная инфекция у детей диагностируется поздно, а отсутствие ранней специфической терапии ведет к развитию хронических форм заболевания.

Известны морфологические исследования тканей последа у матерей с хламидийной инфекцией [4]. Предложены морфологические критерии оценки реализации ВУИ у новорожденного [7], но эти способы не позволяют установить вид возбудителя. При помощи метода электронной микроскопии Chlamydia trahomatis выявлялась в плаценте [8], но для диагностики ВУИ данный метод не использовался.

Предложен способ диагностики ВУИ новорожденных у матерей с хламидийной инфекцией, включающий морфологическое и иммуногистохимическое исследование тканей последа, взятого после родоразрешения. Исследование плаценты проводится на полутонких срезах. При выявлении неспецифических изменений, характерных для инфекционного плацентита, с целью выявления возбудителя проводится обработка материала антителами, меченными пероксидазой с последующей реакцией на пероксидазу посредством диаминобензидина (ДАБ). При наличии комплексов пероксидаза-хламидии диагностируют хламидийную инфекцию у новорожденного.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследовали кусочки ткани последа, взятые из краевой области, 1-2 см от места прикрепления пуповины и зоны наибольшего патологического изменения, у женщин с хламидийной инфекцией во время беременности. Микроскопирование и фотографирование полутонких срезов осуществлялось на фотомикроскопе Microphot-FXA (фирма NIKON-Япония) при увеличениях X 25, 50, 150, 250 (иммерсия). Для иммуногистохимического выявления хламидий использовали Конферм G антивидовой конъюгат. Окончательное выявление проводилось при помощи ДАБ на TRIS буфере при рН 7,6 на полутонких срезах. При этом выявлено, что у женщин при диагностированной во время беременности хламидийной инфекции отмечаются признаки, характерные для инфекционного плацентита. А именно задержка созревания ворсин, сопровождающаяся дефектами развития сосудистой системы: капилляры в терминальных ворсинах малочисленны, узки и занимают в строме центральное положение. Синцитиотрофобласт утолщен и значительно вакуолизирован. Строма отечна. Редко или вообще не выявляются кровеносные капилляры, около которых встречаются тучные клетки. Выраженное полнокровие ворсин с образованием сладжей эритроцитов. Отмечалось увеличение синцитиальных почек. Нередко наблюдались картины их отрыва в материнский кровоток.

При иммуногистохимическом исследовании выявлено, что комплексы пероксидаза-хламидии представляют собой в клетках мелкие округлой формы образования величиной от 250 до 500 нм и более крупные (от 300 до 1000 нм), окрашивающиеся в темно-коричневый цвет (стрелки). Находятся в просвете кровеносных сосудов, синцитиотрофобласте, строме ворсин. Отмечено скопление комплексов пероксидаза-хламидии в синцитиальных почках.

На фиг.1 представлена плацента женщины, у которой во время беременности была диагностирована хламидийная инфекция. Наблюдается задержка созревания ворсин, сопровождающаяся дефектами развития сосудистой системы: капилляры в терминальных ворсинах не только малочисленны, но и узки и занимают в строме центральное положение. Синцитиотрофобласт утолщен и значительно вакуолизирован (а). Строма отечна. Редко или вообще не выявляются кровеносные капилляры, около которых встречаются тучные клетки (б-стрелка). Полутонкий срез. Увеличение: а - 1000, б - 1350.

На фиг.2 изображена плацентарная ткань, при хламидийной инфекции во время беременности. Выраженное полнокровие с образованием сладжей эритроцитов. Расширенные кровеносные капилляры заполнены эритроцитами (стрелки). Полутонкий срез. Увеличение: 1350.

На фиг.3 показана ткань последа у беременной с хламидийной инфекцией. При больших скоплениях ядер отмечалось увеличение синцитиальных почек, они образовывали значительные выпячивания в просвет. Нередко наблюдались картины их отрыва в материнский кровоток (считается, что обилие синцитиальных почек, является одним из морфологических признаков «токсемической» плаценты). Полутонкий срез. Увеличение: 1350.

На фиг.4 изображены комплексы пероксидаза-хламидии, представляют собой в клетках мелкие округлой формы образования величиной от 250 до 500 нм и более крупные (от 300 до 1000 нм), окрашивающиеся в темно-коричневый цвет (стрелки). Находятся в просвете кровеносных сосудов, синцитиотрофобласте, строме ворсин. Реакция на пероксидазу. Увеличение: 1350.

На фиг.5 представлено скопление комплексов пероксидаза-хламидии в синцитиальных почках. Реакция на пероксидазу. Увеличение: 1350.

Таким образом, нарушение функций фетоплацентарного комплекса у беременных с хламидийной инфекцией обусловлено морфологическими изменениями тканей последа, а развитие инфекции у новорожденного проникновением инфекционного агента через плацентарный барьер. Это подтверждено последующими наблюдениями за пациенткой Х.Н.

Пример конкретного выполнения

Роженица Х.Н., 26 лет. Клинический диагноз: Роды I в срок. Преждевременное отхождение околоплодных вод. Хроническая плацентарная недостаточность в стадии субкомпенсации. Хроническая внутриутробная гипоксия плода. Маловодие. Урогенитальный хламидиоз. Асфиксия новорожденного средней степени. Везикулез новорожденного. Продолжительность родов составила 9 ч 25 мин. Безводный период - 5 ч 15 мин. Новорожденный оценен по шкале Апгар на первой минуте 5 баллов, на пятой минуте 7 баллов. На коже - элементы везикулеза. Взят материал из тканей последа на морфологическое и иммуногистохимическое исследование.

При оценке препарата отмечена задержка созревания ворсин, капилляры в терминальных ворсинах малочисленны, узки. Синцитиотрофобласт утолщен и значительно вакуолизирован. Строма отечна (фиг.1). Полнокровие ворсин с образованием сладжей эритроцитов (фиг.2). При иммуногистохимическом исследовании комплексы пероксидаза-хламидии располагаются в просвете кровеносных сосудов, что дает основание предполагать о гематогенном пути передачи инфекции от матери к плоду, синцитиотрофобласте, строме ворсин (фиг.5).

Учитывая полученные результаты, с первых суток начато специфическое лечение новорожденного. Ранний неонатальный период протекал без осложнений. Диагноз хламидиоз, был подтвержден при помощи молекулярно-биологических методов исследования.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Глазкова Л.К., Башмакова Н.В., Моторнюк Ю.И., Ремизова И.И. Особенности течения хламидийной инфекции у беременных. Совершенствование диагностики и лечения. ИППП. 2002. - №2. - С.15-20.

2. Унгвицкая И.В. Хламидийная инфекция у беременных: диагностика, клиника, лечение: Дис. канд. мед. наук. Пермь, 1996.

3. Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод: руководство для врачей. - Медицина, 1999. - 448 с.: ил.

4. Цинзерлинг В.А., Мельникова В.Ф. Перинатальные инфекции (вопросы патогенеза, морфологической диагностики и клинико-морфологических сопоставлений). Практическое руководство. СПб.: Элби СПб, 2002. - 325 с. илл.

5. Особенности ранней послеродовой адаптации у новорожденных с хламидийной инфекцией. Фомичева Е.Н., Зарубина Е.Н., Кожевникова Г.М. Акуш. и гинек. 1997. - №4. - С.25-27.

6. Федорова М.В., Серов В.Н., Стрижаков А.Н., Тареева Т.Г. Внутриутробные инфекции. Вестн. Росс. ассоц. акуш.-гин. 1997; 2.

7. Морфологические критерии прогнозирования реализации внутриутробной инфекции у новорожденного. Линева О.И., Федорина Т.А., Прохорова Л.В., Цуркан С.В. Акуш. и гинек. 2004. - №3. - С.23-26.

8. Зубжицкая Л.Б., Айламазян Э.К., Парусов В.Н., Кошелева Н.Г., Семенов В.В., Михнина Е.А. Выявление Chlamydia trahomatis в плаценте методом электронной микроскопии и патогенное влияние иммунных комплексов на плацентарный барьер. Вестн. Росс, ассоц. акуш.-гин. 1997; 1; 25-29.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и неонатологии. Для диагностики внутриутробного инфицирования хламидиозом у новорожденных проводят морфологическое исследование тканей последа, полученного после родоразрешения. Исследуют полутонкие срезы плаценты, выявляют в них неспецифические изменения, характерные для инфекционного плацентита. Затем на стекла с материалом наносят антитела, проявляют пероксидазу посредством диаминобензидина, заключают под покровное стекло, исследуют в световом микроскопе. При наличии комплексов пероксидаза-хламидии диагностируют хламидийную инфекцию у новорожденного. Способ позволяет осуществить раннюю диагностику внутриутробного инфицирования хламидиозом у новорожденных. 5 ил.

Способ диагностики внутриутробного инфицирования хламидиозом у новорожденных, включающий морфологическое исследование тканей последа, полученного после родоразрешения, отличающийся тем, что исследуют полутонкие срезы плаценты, выявляют в них неспецифические изменения, характерные для инфекционного плацентита, затем на стекла с материалом наносят антитела, проявляют пероксидазу посредством диаминобензидина, заключают под покровное стекло, исследуют в световом микроскопе и при наличии комплексов пероксидаза-хламидии диагностируют хламидийную инфекцию у новорожденного.