СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИННОЙ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩЕЙ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДИН АНТИГЕН И ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДИН АДЬЮВАНТ Российский патент 2013 года по МПК A61K39/00 A61K9/107 A61K9/113 A61K39/39 A61K31/78 A61P37/04 

Описание патента на изобретение RU2500421C2

Изобретение относится к способу получения вакцинной композиции, содержащей по меньшей мере один антиген и по меньшей мере один адъювант.

Разработка инактивированных вакцин или вакцин, содержащих очищенные антигены, становится все более важной проблемой, поскольку позволяет устранить побочные эффекты у пациента, проходящего лечение. Однако улучшение качества антигенов развивается в ущерб их иммуногенного характера. По этой причине антигены ассоциируют с иммунными адъювантами.

Иммунные адъюванты представляют собой продукты, которые усиливают реакции иммунной системы, когда они вводятся в присутствии антигенов вирусного, бактериального или синтетического происхождения. Они провоцируют массовое появление микрофагов по месту инъекции, а затем и в лимфатических узлах, увеличивают продуцирование специфических иммуноглобулинов, антител и стимулируют многочисленные клетки, задействованные в механизмах иммунной защиты.

Эти адъюванты имеют разнообразную природу. Они могут, например, представлять собой эмульсии типа вода-в-масле Е/Н, или масло-в-воде Н/Е, или вода-в-масле-в-воде Е/Н/Е, или масло-в-воде-в-масле Н/Е/Н.

Очень эффективными являются адъюванты Фрейнда; их получают из комбинации минерального масла и сложного эфира маннита, содержащего или не содержащего убитую микобактерию. Вакцины, полученные путем смешивания в равных частях адъюванта Фрейнда с антигенсодержащей водной средой, остаются стандартами во всем мире для проведения лабораторных исследований. Они находятся в виде эмульсий вода-в-масле (Е/Н), т.е. эмульсий, в которых непрерывная фаза представляет собой масло или смесь масел, а дисперсная фаза представляет собой водную фазу, которая может включать солюбилизирующие вспомогательные вещества, такие как, например, глицерин или диметилсульфоксид. Действующее начало обычно локализуется в водной фазе, которая часто является солевым забуференным раствором. Эта фаза находится в форме капель, отделенных между собой масляной пленкой. Этот состав позволяет получить более сильные и продолжительные во времени биологические ответы.

Однако эмульсии этого типа Е/Н обычно являются высоковязкими эмульсиями, и следовательно, создают трудности при введении их путем инъекции. Эти эмульсии часто вынуждают использовать шприцы с большим диаметром иглы, что является причиной болезненных ощущений при инъецировании и травмируют место инъекции.

Массовое содержание водной фазы в эмульсиях Е/Н для внутривенного вливания находится в диапазоне 30-40% на 100% эмульсии. Максимальное содержание может иногда достигать 50% масс. Однако это предельное значение является тормозящим моментом, в частности, для разработки поливалентных вакцин, в которых имеется несколько антигенов и для которых более предпочтительно получать эмульсии Е/Н с содержанием водной фазы выше 50% масс.

Тем не менее, в эмульсии Е/Н с низким содержанием водной фазы, достигающим 20% масс., вязкость эмульсии очень близка вязкости масла. Увеличение массовой доли водной фазы увеличивает вязкость. По этой причине эмульсия с 20% масс. воды, имеющая вязкость 100 мПа·с, измеренную с помощью вискозиметра BROOKFIELD LVT, оснащенного двигателем №2, вращающимся со скоростью 60 оборотов в минуту, превращается в кремообразную массу, которую с очень большим трудом вводят путем инъецирования после того, как содержание воды увеличилось до 50% масс.

Некоторые масляные адъюванты, выпускаемые в продажу, находятся в форме эмульсий Е/Н, такие как MONTANIDETM ISA 70, которые позволяют получить инъецируемые эмульсии Е/Н, содержащие около 30% масс. водной фазы, 70% масс. масляной фазы и имеющие вязкость около 50-100 мПа·с, измеренную с помощью вискозиметра BROOKFIELD LVT, оснащенного двигателем №2, вращающимся со скоростью 60 оборотов в минуту. Другие адъюванты, такие как MONTANIDETM ISA 50V2, позволяют получить инъецируемые эмульсии Е/Н, содержащие около 50% масс. водной фазы, 50% масс. масляной фазы и имеющие вязкость ниже 250 мПа·с, измеренную с помощью вискозиметра BROOKFIELD LVT, оснащенного двигателем №2, вращающимся со скоростью 60 оборотов в минуту.

В международной заявке на патент, опубликованной под номером WO 99/20305, раскрыто применение поверхностно-активных веществ, включающих олеат маннита, с минеральными маслами, такими как MARCOLTM 52, для получения эмульсий, называемых жидкими, с вязкостью порядка 500 мПа·с, измеренной с помощью вискозиметра BROOKFIELD LVT, оснащенного двигателем №2, вращающимся со скоростью 60 оборотов в минуту.

Понятие жидкая эмульсия зависит в большой степени от области ее применения. Что касается инъецируемых эмульсий, то верхний предел вязкости для жидких эмульсий определяют по отношению к вязкости эмульсии типа Е/Н, используемой в качестве стандарта, которая содержит 50% масс. водной фазы и 50% масс. неполного адъюванта Фрейнда (IFA); эта вязкость, измеренная с помощью вискозиметра BROOKFIELD LVT, оснащенного двигателем №3, вращающимся со скоростью 30 оборотов в минуту, составляет около 2000 мПа·с. Такая эмульсия рассматривается как очень вязкая.

Эмульсия типа Е/Н будет называться жидкой, если ее вязкость в 4 раза меньше вязкости стандартной эмульсии, т.е. ниже 500 мПа·с при 25°С, измеренной с помощью вискозиметра BROOKFIELD LVT, оснащенного двигателем №2, вращающимся со скоростью 30 оборотов в минуту.

Однако жидкие эмульсии являются, как правило, менее стабильными, чем эмульсии более вязкие, поскольку спустя всего лишь несколько дней после их получения наблюдается разделение фаз при комнатной температуре.

Существуют полимеры, загущающие водные фазы и находящиеся в форме порошков, такие как гомополимеры акриловой кислоты в натриевой форме или сополимеры на основе акриловой кислоты и ее сложных эфиров. Можно назвать, например, полимеры, выпускаемые фирмой Noveon под товарным знаком CARBOPOLTM и PEMULENTM. Они описаны, в частности, в американских патентах US 5373044, US 2798053 и в европейском патенте ЕР 0310532. Эти полимеры первоначально разрабатывались в качестве загустителей, предназначенных для загущения составов, предназначенных главным образом для косметических целей, и описаны и используются в течение нескольких лет. Эти полимеры получают из мономера, такого как, например, акриловая, метакриловая кислота, сложные эфиры акриловой кислоты или метакриловой кислоты, растворенной в среде органического растворителя. В процессе реакции полимеризации, протекающей после добавления различных катализаторов в специфических условиях температуры и давления, полимер переходит в нерастворимое состояние из первоначальной среды растворителя и выпадает в осадок на дне реактора. Этот способ называется «полимеризация с осаждением».

Полученные таким образом полимеры, из которых самыми известными являются полимеры марки CARBOPOL®, зарекомендовали себя очень эффективными и широко используются в косметике. Эти полимеры используются также для различных фармацевтических целей:

- получение полимерных матриц для достижения замедленного высвобождения,

- получение полимерных гелей и образование комплексов указанных полимеров с белками,

- получение полимерных пленок, осуществляющих защиту в процессе контактирования с биологическими средами,

- получение биоадгезивных составов, обеспечивающих наибольшую остаточную деформацию при нанесении на слизистую оболочку,

- получение адъювантов для вакцин.

Применение полимеров в качестве адъюванта для вакцин при конечных массовых содержаниях полимера порядка «процента» осуществляется в форме жидкой, прозрачной и легко инъецируемой вакцины.

Адъювантные свойства синтетических веществ тесно связаны с их физической формой введения. Так, размер частиц, используемых для создания значительного адъювантного эффекта, является главным параметром, который может контролировать возможность выполнения функций иммунокомпетентными клетками. Кроме того, в зависимости от размера частиц создается также возможность ориентировать ответ на продуцирование антител (гуморальный иммунный ответ) или же на стимулирование специфических клеток иммунной системы (клеточный иммунный ответ). Синтез микросфер из различных полимеров в среде растворителя в форме дисперсий широко описан в литературе и создает возможность инкапсулирования биологически активного агента (которым может быть антиген в случае вакцин) или служит адсорбционной подложкой для транспорта и презентации активного агента, соединенного с внешней поверхностью микросфер с помощью более или менее сильных сил взаимодействия.

Регулирование размера частиц адъюванта постоянно остается нерешенной проблемой, поскольку она должна решаться одновременно с обеспечением стабильности частиц адъюванта во времени. В частности, важно избегать агрегирования частиц при хранении, а также разделения фаз. Регулирование размера частиц должно также сопровождаться стабильностью композиции после инъекции живому существу, в частности, в связи со стрессами, которым она подвергается из-за изменения рН, присутствия ферментов и температурных изменений.

Поэтому заявитель поставил задачу разработать оригинальный способ синтеза полимеров, позволяющих контролировать размер агломератов полимеров (или «микрогелей»), который позволил бы добиться очень хороших адъювантных характеристик. Для решения этой задачи была применена технология полимеризации в эмульсии вода-в-масле Е/Н или в обратной эмульсии для получения этих полимеров. Так, размер капель мономерного раствора контролируется применением эмульгирующих поверхностно-активных систем типа вода-в-масле, адаптированных для технологии получения эмульсий Е/Н. Речь идет, главным образом, о комбинации липофильного эмульгирующего поверхностно-активного вещества, имеющего, например, число ГЛБ от 2 до 7, с гидрофильным эмульгирующим поверхностно-активным веществом, имеющим, например, число ГЛБ от 10 до 15, при средневзвешенном числе, обеспечивающем достижение гомогенной эмульсии Е/Н. Полимеризация мономеров происходит при добавлении катализаторов и других сшивающих агентов в обычных концентрациях, в условиях рН и температуры, подходящих для полной реакции мономера до образования полимеров.

Размер частиц адъюванта имеет непосредственное влияние на иммунологические свойства составов, которые их содержат. Кроме того, в зависимости от особенностей пациента, подлежащего вакцинации, и от типа самой вакцины может различаться оптимальный размер частиц. Благодаря особой технологии составления эмульсий (оптимизация ГЛБ, природа ПАВ, концентрация, способ получения) стало возможным в процессе полимеризации в обратной эмульсии влиять на распределение частиц эмульсии по размеру и, таким образом, регулировать средний размер и гранулометрическое распределение агломератов. Под дисперсией подразумевают, в зависимости от содержания поверхностно-активных веществ и энергии сдвига, возникающей при эмульгировании, гетерогенные системы, которыми могут быть

- суспензии,

- эмульсии,

- микроэмульсии.

Эти различные диспергированные формы позволяют регулировать разброс частиц микрогелей в диапазоне от 50 нм до 100 мкм.

Химические условия синтеза полимера (тип мономеров, катализаторы, инициаторы) позволяют контролировать индивидуальные свойства полученного полимера (среднюю молекулярную массу, степень сшивки, анионный характер).

Синтезированный таким образом адъювант находится в форме эмульсии типа «капли полимера в масле» или «обратимого латекса». Когда эмульсия диспергирована в водном растворе антигена, содержащем физиологический буфер, происходит обращение эмульсии, она диспергируется с образованием жидкой и прозрачной дисперсии микрогелей полимеров в воде. Например, капли микрогелей полиакрилата натрия могут иметь средний размер в диапазоне 0,5-5 микрометров, например около 2 микрометров.

Обратимые латексы и способы их получения подробно описаны, например, в WO 99/36445 (см., в частности, примеры на стр.9 и последующих WO 99/36445).

Изобретение относится к способу получения вакцины, использующему обратимый латекс. Более конкретно, изобретение относится к способу получения вакцины, включающему

- стадию а) получения адъювантной композиции путем диспергирования в физиологически приемлемом водном растворе по меньшей мере одного обратимого латекса или полимерного порошка, полученного распылением указанного обратимого латекса;

- стадию b) перемешивания композиции, полученной на стадии а), в антигенсодержащей среде, предназначенной для образования вакцинной композиции.

Под обратимым латексом понимают эмульсию полимера вода-в-масле, в которой водная фаза, диспергированная в непрерывной масляной фазе, содержит указанный полимер. Обратимый латекс, полученный полимеризацией в обратной эмульсии, находится, таким образом, в форме жидкой эмульсии. Последующее распыление полученного обратимого латекса, при необходимости или при желании, может быть осуществлено с целью получения вышеуказанного порошка. Распыление описано, например, в европейском патенте ЕР 149081.

Под водным физиологически приемлемым раствором понимают в рамках настоящего изобретения водные растворы, которые пригодны для получения вакцин, это может быть, например, вода, качество которой соответствует, например, европейской или американской фармакопеям, как, например, физиологические сыворотки, или это могут быть солевые растворы и/или, в случае необходимости, водно-спиртовые растворы, соответствующие названным фармакопеям.

Под адъювантной композицией имеют в виду иммунную адъювантную композицию.

Можно также добавить по меньшей мере одно поверхностно-активное вещество гидрофильного характера перед стадией а) для улучшения стабильности такой дисперсии во времени.

Под поверхностно-активным веществом гидрофильного характера подразумевают эмульгирующие поверхностно-активные вещества, имеющие число ГЛБ, достаточно высокое, от 10 до 15, для того, чтобы получить стабильные эмульсии масло-в-воде, такие как этоксилированные сложные эфиры маннитана, этоксилированные сложные эфиры сорбитана, например олеат сорбитана, этоксилированный 20 моль этиленоксида, выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием MONTANOXTM80.

Под антигенсодержащей средой подразумевают среду, включающую по меньшей мере один антиген или по меньшей мере один генератор in vivo соединения, содержащего аминокислотную последовательность. Под антигеном или по меньшей мере одним генератором in vivo соединения, содержащего аминокислотную последовательность, подразумевают либо убитые микроорганизмы, такие как вирусы, бактерии или паразиты, либо очищенные фракции этих микроорганизмов, либо живые микроорганизмы, патогенность которых аттенуирована. В качестве примеров вирусов, представляющих собой антиген согласно изобретению, можно назвать вирус бешенства, герпесвирусы, такие как вирус болезни Ауески, ортомиксовирусы, такие как вирус гриппа, пикорнавирусы, такие как вирус афтозной лихорадки, или ретровирусы, такие как вирус ВИЧ. В качестве микроорганизма бактерийного типа, который может являться антигеном согласно настоящему изобретению, можно назвать Е.coli и микроорганизмы вида Pasteurella, Furonculosis, Vibriosis, Staphylococcus и Streptococcus. В качестве примеров паразитов можно назвать паразиты вида Trypanosoma, Plasmodium и Leishmania. Можно также назвать рекомбинантные вирусы, в частности вирусы без оболочки, такие как аденовирусы, вирус коровьей оспы, вирус Canarypox, герпесвирусы или бакуловирусы. Можно также назвать рекомбинантный вектор живого вируса без оболочки, геном которого, встроенный, предпочтительно, в несущественную часть для репликации соответствующего вируса с оболочкой, содержит последовательность, кодирующую субъединицу антигена, индуцирующую синтез антител и/или защитный эффект против указанного вируса с оболочкой или патогенного микроорганизма; этими субъединицами антигенов могут быть, например, протеин, гликопротеин, пептид или пептидная и/или протективная фракция против инфекции, вызванной живым микроорганизмом, таким как вирус с оболочкой, бактерия или паразит. Экзогенный ген, введенный в микроорганизм, может быть выделен, например, из вируса болезни Ауески или ВИЧ.

Можно назвать, в частности, рекомбинантную плазмиду, состоящую из последовательности нуклеотидов, в которую встроена экзогенная нуклеотидная последовательность, происходящая из микроорганизма или патогенного вируса. Эта последняя нуклеотидная последовательность имеет целью обеспечить экспрессию соединения, содержащего аминокислотную последовательность, причем само это соединение предназначено для запуска иммунной реакции в организме-хозяине.

Под генератором in vivo соединения, содержащего аминокислотную последовательность, понимают любой биологический продукт, способный экспрессировать указанное соединение в организме-хозяине, в который введен указанный генератор in vivo. Соединением, содержащим аминокислотную последовательность, может быть протеин, пептид или гликопротеин. Эти генераторы in vivo обычно получают способами, основанными на генной инженерии. Более конкретно, эти способы заключаются в использовании живых микроорганизмов, как правило, вируса, играющего роль рекомбинантного вектора, в который встраивают нуклеотидную последовательность, в частности экзогенный ген. Эти соединения известны как таковые и используются, в частности, как рекомбинантная субъединичная вакцина. По этому вопросу можно сослаться на статью M. ELOIT et al., Journal of virology (1990) 71, 2925-2431, и на международные заявки на патент, опубликованные под номерами WO-A-91/00107 и WO-A-94/16681. Генераторы in vivo согласно изобретению могут представлять собой рекомбинантную плазмиду, содержащую экзогенную нуклеотидную последовательность, способную экспрессировать в организме-хозяине соединение, включающее аминокислотную последовательность. Такие рекомбинантные плазмиды и способ их введения в организм-хозяин описаны в 1990 г. LIN et al., Circulation 82: 2217, 2221; COX et al., J. of VIROL, сент. 1993, 67, 9, 5664-5667, и в международной заявке, опубликованной под номером WO 95/25542. В зависимости от природы нуклеотидной последовательности, находящейся в генераторе in vivo, соединение, содержащее аминокислотную последовательность, которое экспрессируется внутри организма-хозяина, может

(i) быть антигеном и обеспечить запуск иммунной реакции,

(ii) оказывать лечебное действие в отношении болезни, главным образом болезни, имеющей функциональный характер, которая развивается в организме-хозяине. В этом случае генератор in vivo позволяет лечить хозяина методом генной терапии.

Например, такое лечебное действие может заключаться в синтезе генератором in vivo цитокинов в качестве интерлейкинов, в частности интерлейкина 2. Эти вещества могут запустить или усилить иммунную реакцию, направленную на селективное удаление канцерогенных клеток.

Вакцинная композиция, описанная выше, включает антиген в концентрации, которая зависит от природы этого антигена и природы организма пациента. Особенно стоит отметить, что адъювант согласно изобретению позволяет значительно уменьшить обычную дозу вводимого антигена. Адекватная концентрация антигена может быть определена специалистом классическим способом. Обычно эта доза составляет от 0,1 мкг/см3 до 1 г/см3, более конкретно, от 1 мкг/см3 до 100 мг/см3. Концентрация указанного генератора in vivo в композиции согласно изобретению зависит также, в частности, от природы указанного генератора и организма-хозяина, в который его вводят. Эта концентрация может быть легко определена специалистом на основании рутинного эксперимента. Например, когда генератором in vivo является рекомбинантный микроорганизм, его концентрация в композиции согласно изобретению составляет, как правило, интервал от 102 до 1015 микроорганизмов/см3, предпочтительно, от 105 до 1012 микроорганизмов/см3. Когда генератором in vivo является рекомбинантная плазмида, то его концентрация в композиции, полученной согласно изобретению, может составлять от 0,01 г/дм3 до 100 г/дм3. Вакцину, описанную выше, готовят смешиванием среды, содержащей адъювант, и среды, содержащей антиген, добавляя необязательно воду или разбавляющую фармацевтически приемлемую среду.

Непрерывная масляная фаза, используемая для получения обратимого латекса, используемого на стадии а) способа согласно изобретению, включает одно или несколько соединений, выбираемых из масел минерального, растительного или животного происхождения, сложных алкиловых эфиров указанных масел, сложных алкиловых эфиров жирных кислот или простых алкиловых эфиров жирных кислот, сложных эфиров жирных кислот и полиолов или простых эфиров жирных спиртов и полиолов, синтетических масел.

Может быть также использовано коммерчески доступное минеральное масло, т.е. коммерчески доступное минеральное масло, содержащее насыщенные углеводороды, такие как парафины, изопарафины, циклопарафины, имеющие при комнатной температуре плотность от 0,7 до 0,9 и точку кипения выше 180°С, такие как, например, EXXSOLTM D 100 S или MARCOLTM 52, выпускаемые фирмой EXXON CHEMICAL, изогександекан или изододекан либо смесь нескольких названных масел.

Согласно предпочтительному аспекту настоящего изобретения масляная фаза состоит из MARCOLTM 52 или изогексадекана; изогексадекан, который идентифицируется в регистрационной системе Chemical Abstracts под номером RN=93685-80-4, представляет собой смесь изопарафинов С12, С16 и С20, содержащую не менее 97% изопарафинов С16, среди которых основным компонентом является 2,2,4,4,6,8,8-гептаметилнонан (RN=4390-04-9). Он выпускается во Франции фирмой BAYER. MARCOLTM 52 является коммерчески доступным маслом, соответствующим определению вазелиновых масел во французской фармакопее Codex. Это белое минеральное масло соответствует регламентам FDA 21 CFR 172.878 и CFR 178.3620 (a) и вписано в Фармакопею США, US XXIII (1995) и в Европейскую Фармакопею (1993).

В качестве примеров масел растительного происхождения можно назвать арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло, соевое масло, масло зародышей пшеницы, масло из виноградных косточек, подсолнечное масло, касторовое масло, льняное масло, соевое масло, кукурузное масло, копровое масло, пальмовое масло, масло грецкого ореха, масло лесного ореха, рапсовое масло или же сквален или сквалан растительного происхождения, выпускаемый во Франции фирмой SOPHIM под наименованием PHYTOSQUALANTM, идентифицированный регистрационной системой Chemical Abstracts под номером RN=11-01-3 и состоящий из смеси углеводородов, содержащей более 80% масс. 2,6,10,15,19,23-гексаметилтетракозана.

В качестве примеров масел животного происхождения можно назвать спермацетовое масло, олеиновую кислоту, сквалан или сквален, извлеченные из печени рыб.

В качестве примеров сложных алкиловых эфиров масел можно назвать сложные метиловые, этиловые, пропиловые эфиры, линейные или разветвленные, или бутиловые эфиры, линейные или разветвленные, указанных масел.

В качестве жирных кислот, пригодных для получения названных выше сложных эфиров, можно назвать, более конкретно, жирные кислоты, содержащие 12-22 атома углерода, такие как, например, миристиновая кислота, пальмитиновая кислота, олеиновая кислота, рицинолевая кислота или изостеариновая кислота, и, преимущественно, жирная кислота, являющаяся жидкой при 20°С.

В качестве примеров сложных эфиров жирных кислот или простых эфиров жирных кислот можно назвать сложные алкиловые эфиры жирных кислот, такие как этилолеат, метилолеат, изопропилмиристат или октилпальмитат, сложные эфиры жирных кислот и полиолов или простые эфиры жирных спиртов и полиолов, такие как моноглицериды жирных кислот, диглицериды жирных кислот, триглицериды жирных кислот, сложные эфиры жирных кислот и полиглицерина или сложные эфиры жирных кислот и пропиленгликоля, более конкретно, сложные эфиры жирных кислот с гексолом, такие как, например, сорбитол или маннит, сложные эфиры жирных кислот с ангидридом гексола, такие как сорбитан или маннитан.

В качестве примеров синтетических масел можно назвать гидрированный полидецен или гидрированный полиизобутен, выпускаемый во Франции фирмой Ets B. Rossow et Cie под наименованием PARLEAM - POLYSYNLANETM, цитируемый Michel и Irene Ash, “Thesautus of Chemical Products”, Chemical Publishing Co., Inc. 1986, том 1, стр.211 (ISBN 0 7131 3603 0).

В рамках настоящего изобретения непрерывная масляная фаза, используемая для получения обратимого латекса, используемого на стадии а) способа согласно изобретению, может содержать только одно из соединений, указанных выше, или смесь нескольких соединений, указанных выше.

Доля масляной фазы в обратном латексе составляет 10-50% масс., предпочтительно, 15-25% масс. от общей массы обратимого латекса.

По меньшей мере один вышеуказанный полимер, получаемый путем полимеризации в обратной эмульсии, приводящей к обратимому латексу, лежащему в основе получения адъювантной композиции на стадии а) способа согласно изобретению, выбирают из анионных полиэлектролитов, разветвленных или сшитых, выбранных из сополимеров акриловой кислоты и 2-метил-[(1-оксо-2-пропенил)амино]-1-пропансульфоновой кислоты (AMPS), сополимеров акриламида и 2-метил-[(1-оксо-2-пропенил)амино]-1-пропансульфоновой кислоты, сополимеров 2-метил-[(1-оксо-2-пропенил)амино]-1-пропансульфоновой кислоты и (2-гидроксиэтил)акрилата, гомополимера 2-метил-[(1-оксо-2-пропенил)амино]-1-пропансульфоновой кислоты, частично или полностью переведенной в соль, гомополимера акриловой кислоты, частично или полностью переведенной в соль, гомополимера метакриловой кислоты, частично или полностью переведенной в соль, сополимеров хлорида акрилоилэтилтриметиламмония и акриламида, сополимеров AMPS и винилпирролидона, сополимеров AMPS и N-метилакриламида, сополимеров AMPS и N,N-диметилакриламида, сополимеров AMPS и метакриламида, сополимеров AMPS и N-изопропилакриламида, сополимеров AMPS и N-[2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил]пропенамида [или трис(гидроксиметил)акриламидометана, или N-трис(гидроксиметил)метилакриламида, обозначаемого также ТНАМ], сополимеров акриловой кислоты и акриламида, сополимеров акриловой кислоты и N-метилакриламида, сополимеров акриловой кислоты и N,N-диметилакриламида, сополимеров акриловой кислоты и метакриламида, сополимеров акриловой кислоты и N-изопропилакриламида, сополимеров акриловой кислоты и N-[2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил]пропенамида [или трис(гидроксиметил)акриламидометана, или N-трис(гидроксиметил)метилакриламида, обозначаемого также ТНАМ], сополимеров акриловой кислоты и алкилакрилатов, углеводородная цепь которых включает от десяти до тридцати атомов углерода, сополимеров AMPS и алкилакрилатов, углеводородная цепь которых включает от десяти до тридцати атомов углерода.

Под разветвленным полимером понимают нелинейный полимер, который имеет такие боковые цепи, которые способны, если этот полимер находится в воде в растворенном состоянии, создать высокоразветвленную структуру, которая приводит к очень высоким вязкостям при низком градиенте скорости.

Под сшитым полимером понимают нелинейный полимер, находящийся в виде трехмерной сетчатой структуры, нерастворимой в воде, но способной в воде набухать и, следовательно, образовывать химический гель.

Если этот полиэлектролит сшит, то, предпочтительно, его сшивают диэтиленненасыщенным или полиэтиленненасыщенным соединением, молярное содержание которого, выраженное по отношению к используемым мономерам, составляет от 0,005 до 1%, предпочтительно, от 0,01 до 0,2%, более предпочтительно, от 0,01 до 0,1%. Предпочтительно, сшивающий агент и/или разветвляющий агент, предпочтительно, выбирают из этиленгликольдиметилакрилата, диэтиленгликольдиакрилата, диаллилоксиацетата натрия, этиленгликольдиакрилата, диаллилмочевины, триаллиламина, триметилолпропантриакрилата или метилен-бис-(акриламида), аллилсахарозы.

Когда обратимый латекс используется на стадии получения адъювантной композиции, т.е. стадии а) способа согласно изобретению, он содержит, как правило, от 1 до 5% масс. эмульгирующей системы типа вода-в-масле (Е/Н).

Под эмульгирующей системой типа вода-в-масле (Е/Н) обозначают в контексте данного выше определения либо только одно поверхностно-активное вещество, либо смесь поверхностно-активных веществ при условии, что указанная смесь должна иметь значение числа ГЛБ, достаточно низкое для инициирования формирования эмульсий вода-в-масле. В качестве эмульгирующего агента типа вода-в-масле можно назвать, например, сложные эфиры сорбитана, например олеат сорбитана, как, например, олеат сорбитана, выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием MONTANETM 80, изостеарат сорбитана, как, например, изостеарат сорбитана, выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием MONTANETM 70, или сесквиолеат сорбитана, как, например, сесквиолеат сорбитана, выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием MONTANETM 83. Существуют также некоторые полиэтоксилированные сложные эфиры сорбитана, например этоксилированный (5 моль) моноолеат сорбитана, такой как выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием MONTANETM 81, или этоксилированный (5 моль) изостеарат сорбитана, такой как выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием MONTANETM 71. Можно назвать также этоксилированный (2 моль) олеоцетиловый спирт, такой как выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием SIMULSOLTM OC 72, полиэфиры c молекулярной массой от 1000 до 3000, представляющие собой продукты конденсации поли(изобутенил)сукциновой кислоты или ее ангидрида с диэтаноламином, такие как HYPERMERTM 2296, выпускаемый фирмой UNIQEMA, или блок-сополимеры с молекулярной массой от 2500 до 3500, такие как HYPERMERTM В246, выпускаемый фирмой UNIQEMA, или SIMALINETM IE 200, выпускаемый фирмой SEPPIC.

Когда обратимый латекс используется на стадии получения адъювантной композиции, т.е. на стадии а) способа согласно изобретению, он обычно содержит 2-8% масс. эмульгирующей системы типа масло-в-воде (Н/Е).

Под эмульгирующей системой типа масло-в-воде (Н/Е) обозначают в контексте данного выше определения либо только одно поверхностно-активное вещество, либо смесь поверхностно-активных веществ при условии, что указанная смесь должна иметь значение числа ГЛБ, достаточно высокое для инициирования формирования эмульсий масло-в-воде. В качестве эмульгирующего агента типа масло-в-воде можно назвать, например, этоксилированные сложные эфиры сорбитана, такие как олеат сорбитана, полиэтоксилированный 20 моль этиленоксида, выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием MONTANOXTM 80, лаурат сорбитана, полиэтоксилированный 20 моль этиленоксида, выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием MONTANOXTM 20, касторовое масло, полиэтоксилированное 40 моль этиленоксида, выпускаемое под наименованием SIMULSOLTM OL50, этоксилированный 10 моль олеодециловый спирт, выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием SIMULSOLTM OC 710, этоксилированный 7 моль лауриловый спирт, выпускаемый под наименованием SIMULSOLTM Р7, или моностеарат сорбитана, полиэтоксилированный 20 моль этиленоксида, выпускаемый фирмой SEPPIC под наименованием MONTANOXTM 60.

Используемый полимер, получаемый эмульсионной полимеризацией, приводящий к обратимому латексу, лежащему в основе получения адъювантной композиции, получаемой на стадии а) способа согласно изобретению, преимущественно выбирают из группы, состоящей из гомополимера акриловой кислоты, частично или полностью переведенной в соль, гомополимера метакриловой кислоты, частично или полностью переведенной в соль, сополимеров акриловой кислоты и 2-метил-[(1-оксо-2-пропенил)амино]-1-пропансульфоновой кислоты, сополимеров акриламида и 2-метил-[(1-оксо-2-пропенил)амино]-1-пропансульфоновой кислоты, сополимеров 2-метил-[(1-оксо-2-пропенил)амино]-1-пропансульфоновой кислоты и (2-гидроксиэтил)акрилата и, более предпочтительно, полиакрилата натрия.

Массовая доля по меньшей мере одного обратимого латекса в адъювантной композиции, получаемой на стадии а) способа согласно изобретению, составляет 0,5-30% от общей массы адъювантной композиции, преимущественно, 5-15% от общей массы адъювантной композиции.

На стадии а) способа согласно изобретению может быть добавлено иммуностимулирующее вещество. Иммуностимулирующее вещество может быть выбрано, например, из одного или нескольких известных агентов, иммунных стимуляторов, таких как AvridineTM, N,N-диоктадецил-N',N'-бис(2-гидроксиэтил)пропандиамин, производные MDP (мурамилдипептида), в частности треонил-MDP, производные муколиновой кислоты или производные Липида-А. Более конкретно, такое вещество является веществом ионизуемым. Ионизуемое вещество выбирают, например, из одной или нескольких водорастворимых органических солей, образованных катионами металлов, таких как, например, растворимый глюконат кальция, глюконат магния, салицилат алюминия или ацетат алюминия. Когда адъювантная композиция согласно изобретению включает фармацевтически приемлемую соль, то эта соль находится в концентрации 0,02-3000 мг/см3, предпочтительно, 0,1-1000 мг/см3, более предпочтительно, 0,1-150 мг/см3. Можно также использовать и нерастворимые соли, как правило, в качестве иммунных адъювантов, такие как гидроксид алюминия или фосфат кальция.

Согласно варианту изобретения на стадии а) добавляют по меньшей мере одно поверхностно-активное вещество с гидрофильным характером, предназначенное для стабилизации эмульсии. Значение числа ГЛБ по меньшей мере одного поверхностно-активного вещества с гидрофильным характером составляет от 10 до 15.

Композиция, полученная на стадии а), содержит 0,1-15% по меньшей мере одного поверхностно-активного вещества, предпочтительно, 0,1-5% по меньшей мере одного поверхностно-активного вещества.

В контексте настоящего изобретения значение числа ГЛБ поверхностно-активного вещества рассчитывают по формуле ГЛБ=20(1-Is/Ia), где Is обозначает индекс омыления и Ia обозначает индекс кислотности жирной кислоты, используемой для получения указанного поверхностно-активного вещества. В случае использования смеси поверхностно-активных веществ значение ГЛБ смеси рассчитывается как средневзвешенная сумма чисел ГЛБ каждого поверхностно-активного вещества. Указанные два показателя, т.е. индекс омыления и индекс кислотности, определяют по методикам, описанным в Европейской Фармакопее.

Согласно конкретному другому варианту изобретения, композиция, полученная на стадии а) способа согласно изобретению, имеет массовое содержание масляной фазы от 0,1 до 5% от общей массы композиции, полученной на стадии а) способа согласно изобретению, предпочтительно, от 0,2 до 1% масс.

Используемое поверхностно-активное вещество с гидрофильным характером обычно выбирают из модифицированных жировых веществ.

Модифицированные жировые вещества, используемые в настоящем изобретении, могут быть минерального, растительного или животного происхождения. В качестве модифицированных жировых веществ минерального происхождения используют масла, полученные из нефти.

В качестве модифицированных жировых веществ растительного происхождения используют, например, арахисовое, оливковое, кунжутное, соевое, из зародышей пшеницы, из косточек винограда, подсолнечное, касторовое, льняное, соевое, кукурузное, копровое, пальмовое, масло лесного ореха, масло грецкого ореха или рапсовое модифицированное масло.

В качестве модифицированных жировых веществ животного происхождения используют, например, модифицированный сквалан, модифицированный сквален, модифицированное спермацетовое масло или модифицированный животный жир.

Под модифицированными жировыми веществами подразумевают, в частности, алкоксилированные производные жирового вещества, более конкретно, алкоксилированные производные масел или алкоксилированные производные сложных алкиловых эфиров масел, более конкретно, этоксилированные и/или пропоксилированные производные масел или этоксилированные и/или пропоксилированные производные метиловых, этиловых, пропиловых линейных или разветвленных сложных эфиров или бутиловых линейных или разветвленных сложных эфиров указанных масел. Более конкретно, изобретение относится к композиции, описанной выше, в которой модифицированное жировое вещество выбрано из этоксилированных производных масел, в которых число моль этиленоксида составляет 1-10.

Под модифицированными жировыми веществами подразумевают также сложные эфиры жирных кислот и полиолов или простые эфиры жирных спиртов и полиолов, более конкретно, сложные эфиры жирных кислот с гексолом, таким как, например, сорбит или маннит, или сложные эфиры жирных кислот с ангидридом гексола, таким как сорбитан или маннитан, алкоксилированные производные сложных эфиров жирных кислот и полиолов или алкоксилированные производные простых эфиров жирных спиртов и полиолов, такие как триглицериды алкоксилированных жирных кислот, алкоксилированные сложные эфиры полиглицерина и жирных кислот, более конкретно, алкоксилированные сложные эфиры жирных кислот с гексолом, таким как, например, сорбит или маннит, или алкоксилированные сложные эфиры жирных кислот с ангидридом гексола, таким как сорбитан или маннитан, имеющие число моль этиленоксида от 1 до 20.

Под сложными эфирами жирных кислот и полиолов подразумевают в объеме настоящего изобретения сложные моноэфиры жирных кислот и полиолов или сложные полиэфиры жирных кислот и полиола, такие как, например, сложные диэфиры жирных кислот и полиолов или сложные триэфиры жирных кислот и полиолов. То же самое относится к полиалкоксилированным производным вышеуказанных сложных эфиров.

Под простыми эфирами жирных кислот и полиолов подразумевают в объеме настоящего изобретения простые моноэфиры жирных кислот и полиолов или простые полиэфиры жирных кислот и полиола, такие как, например, простые диэфиры жирных кислот и полиолов или простые триэфиры жирных кислот и полиолов. То же самое относится к полиалкоксилированным производным вышеуказанных простых эфиров.

Модифицированные жировые вещества могут быть выбраны из этоксилированных производных сложных эфиров жирных кислот и полиолов или этоксилированных производных простых эфиров жирных спиртов и полиолов, более конкретно, из этоксилированных сложных эфиров жирных кислот с гексолом, таким как, например, сорбит или маннит, или этоксилированных сложных эфиров жирных кислот с ангидридом гексола, таким как сорбитан или маннитан, имеющих число моль этиленоксида от 5 до 10.

В качестве жирных кислот, подходящих для получения модифицированных жировых веществ, описанных выше, пригодны жирные кислоты, содержащие 12-22 атома углерода, такие как, например, жирные кислоты, содержащие 16-18 атомов углерода, такие как олеиновая кислота, рицинолевая кислота или изостеариновая кислота, и, преимущественно, жирные кислоты, являющиеся жидкими при 20°С.

Согласно варианту изобретения на стадии b) добавляют по меньшей мере один иммуностимулирующий агент, выбираемый из сапонинов, животных, и/или растительных, и/или минеральных, и/или синтетических масел, поверхностно-активных веществ, гидроксида алюминия, лецитинов и производных лецитина.

Согласно конкретному варианту изобретения, вакцина, полученная на стадии b), содержит от 10 до 20% препарата, полученного на стадии а), и от 80 до 90% антигенсодержащей среды.

Вакцинная композиция, описанная выше, может быть использована в качестве профилактического или лечебного средства. В зависимости от природы антигена или генератора in vivo композицию согласно изобретению можно вводить рыбам, ракообразным, таким как креветки, домашним птицам, в частности гусям, индюшкам, голубям и цыплятам, животным семейства собачьих, таким как собака, животным семейства кошачьих, таким как кот, свиньям, приматам, рогатому скоту, овцам, лошадям, грызунам, таким как крыса, зайцеобразным, таким как кролик, семейству козлов и баранов, крупным млекопитающим, таким как слоны. Композицию согласно изобретению можно вводить также и людям.

Введение композиции можно осуществлять классическими путями, такими как парентеральный путь, в частности путем подкожной, внутримышечной или внутривенной инъекции. Введение может также осуществляться пероральным путем, назальным путем, окулярным путем, погружением или промыванием.

Изобретение относится также к применению адъювантной композиции, полученной согласно стадии а) способа, описанного выше, для получения вакцинной композиции.

Процентные содержания ингредиентов, приведенные в тексте изобретения, представляют собой массовые доли.

Заявитель неожиданно обнаружил, что сравнение адъювантных свойств дисперсий из обратимого латекса с полимерами такого же химического состава, но полученными путем полимеризации в среде растворителя с последующим осаждением, показало очень высокий адъювантный эффект как на уровне гуморального ответа (диаграмма 1), так и на уровне клеточного ответа, сопровождавшийся при этом высокой безопасностью адъюванта (диаграмма 2).

Следующие примеры иллюстрируют изобретение, не ограничивая его объема.

Пример 1: Адъювантная композиция на основе полиакрилата натрия, полученного в эмульсии вода-в-минеральном масле

Используют жидкое минеральное масло “Marcol® 52”, выпускаемое фирмой EXXON. Эмульсия полимера, полученная после полимеризации, находится в форме белого вязкого масляного геля. Состав эмульсии представляет собой 30% минерального масла (непрерывная фаза), 5% поверхностно-активного вещества, предназначенного для стабилизации эмульсии, 25% полиакрилата натрия и 40% воды. При контактировании с водным раствором антигена, забуференным до рН 7, и при концентрации буфера 3%, происходит обращение эмульсии полимера в масле с образованием жидкой дисперсии, содержащей следы масла.

Пример 2: Вакцинный адъювант на основе полиакрилата натрия, полученного путем эмульсионной полимеризации

Дисперсию в воде, содержащую 10% полимера, описанного в примере 1, получают при удовлетворительном механическом перемешивании. Вязкость дисперсии регулируют путем добавления инертных ионизуемых веществ (солей) (например, хлорида натрия) или иммуностимулирующего вещества (например, глюконата магния). Полученный гель, готовый к употреблению, может быть повторно диспергирован до необходимой концентрации в заданной антигенсодержащей среде. В гель можно также добавить дополнительные поверхностно-активные вещества, предназначенные для стабилизации дисперсии масла в воде.

Пример 3: Вакцина, содержащая полиакрилат натрия, полученный эмульсионной полимеризацией

В вакцину, состоящую из 85% антигенсодержащей среды, вводят 15% препарата, описанного в примере 2. Возможно добавление других иммуностимулирующих веществ, таких как, например, сапонины, животные, и/или растительные, и/или минеральные, и/или синтетические масла, поверхностно-активные вещества, гидроксид алюминия, лецитины и производные лецитина.

Похожие патенты RU2500421C2

название год авторы номер документа
ВОДНАЯ КОСМЕТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ АЛКИЛЦЕЛЛЮЛОЗУ, НЕЛЕТУЧИЕ МАСЛА, ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДИН ВОСК И ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДНО ДИМЕРНОЕ ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНОЕ ВЕЩЕСТВО 2012
  • Лаусс Флоранс
RU2664450C2
АДЪЮВАНТЫ-РАЗБАВИТЕЛИ ДЛЯ ЖИВЫХ ВАКЦИН ОТ БОЛЕЗНЕЙ СВИНЕЙ 2011
  • Бертран Франсуа
  • Девилль Себастьен
  • Дюпюи Лоран
RU2557968C2
КОСМЕТИЧЕСКАЯ ЭМУЛЬСИЯ ТИПА "ВОДА В МАСЛЕ", В ЧАСТНОСТИ, УПАКОВАННАЯ В ФОРМЕ АЭРОЗОЛЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДИН ВИНИЛОВЫЙ ПОЛИМЕР, СОДЕРЖАЩИЙ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДНО ЗВЕНО НА ОСНОВЕ КАРБОСИЛОКСАНОВОГО ДЕНДРИМЕРА, ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДИН ОЛЕФИНОВЫЙ СОПОЛИМЕР И ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДНО АНТИПЕРСПИРАНТНОЕ ДЕЙСТВУЮЩЕЕ ВЕЩЕСТВО 2013
  • Обрэн Одиль
  • Себийот-Арно Лоранс
  • Жаленк Ксавье
RU2715706C2
ИММУНОГЕННАЯ КОМПОЗИЦИЯ 2011
  • Коси Йоитиро
  • Нисио Рейдзи
  • Какизава Йосинори
RU2593789C2
ЗАГУСТИТЕЛЬ, СОДЕРЖАЩИЙ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДИН КАТИОННЫЙ ПОЛИМЕР 2012
  • Аризанди Кристофер
  • Лайрер Райнхольд Дж.
  • Бенламар Уидад
RU2632660C2
НОВЫЕ ВАКЦИННЫЕ СОСТАВЫ, ВКЛЮЧАЮЩИЕ САПОНИНСОДЕРЖАЩИЕ АДЪЮВАНТЫ 2010
  • Детра Ноэль Жозеф Франсуа
  • Риго Гийом
RU2555342C2
Противоящурная вакцина 2016
  • Доминовски Пол Джозеф
  • Хэрдэм Джон Морган
  • Джексон Джеймс Алан
  • Гай Кирил Джерард
  • Родригес Луи Леандро
  • Круг Питер Уилльям
  • Ридер Аида Элизабет
RU2698305C2
НОВЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ ИНВЕРСНЫЙ ЛАТЕКС, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ В ПРОМЫШЛЕННОСТИ 2005
  • Браун Оливье
  • Малло Поль
RU2403265C2
ЖИВАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПТИЦ 2011
  • Бертран Франсуа
  • Девилль Себастьен
  • Дюпюи Лоран
RU2542440C2
КОСМЕТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ, ПО КРАЙНЕЙ МЕРЕ, ОДИН СОПОЛИМЕР СИЛИКОНА И АКРИЛАТА И, ПО КРАЙНЕЙ МЕРЕ, ОДИН ЗАГУСТИТЕЛЬ 2000
  • Дюпюи Кристин
RU2204987C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 500 421 C2

Реферат патента 2013 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИННОЙ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩЕЙ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДИН АНТИГЕН И ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДИН АДЬЮВАНТ

Группа изобретений относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложен способ получения вакцины с применением обратимого латекса. На первой стадии получают адъювантную композицию путем диспергирования в водном физиологически приемлемом растворе обратимого латекса или полимерного порошка, полученного распылением указанного обратимого латекса. На второй стадии смешивают полученную адъювантную композицию с антигенсодержащей средой, предназначенной для получения вакцинной композиции. Адъювант на основе обратимого латекса отличается высокой безопасностью и обладает высоким адъювантным эффектом как на уровне гуморального ответа, так и на уровне клеточного ответа. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 пр.

Формула изобретения RU 2 500 421 C2

1. Способ получения вакцины, включающий
- стадию а) получения адъювантной композиции путем диспергирования в водном физиологически приемлемом растворе обратимого латекса или полимерного порошка, полученного распылением указанного обратимого латекса;
- стадию b) смешивания композиции, полученной на стадии а), с антигенсодержащей средой, предназначенной для получения вакцинной композиции.

2. Способ получения вакцины по п.1, отличающийся тем, что по меньшей мере один указанный обратимый латекс содержит по меньшей мере один анионный полиэлектролит, разветвленный или сшитый, выбранный из группы, состоящей из гомополимера акриловой кислоты, полностью или частично переведенной в соль, гомополимера метакриловой кислоты, полностью или частично переведенной в соль, сополимеров акриловой кислоты и 2-метил-[(1-оксо-2-пропенил)амино]-1-пропансульфоновой кислоты, сополимеров акриламида и 2-метил-[(1-оксо-2-пропенил)амино]-1-пропансульфоновой кислоты, сополимеров 2-метил-[(1-оксо-2-пропенил)амино]-1-пропансульфоновой кислоты и (2-гидроксиэтил)акрилата.

3. Способ получения вакцины по п.2, отличающийся тем, что анионный полиэлектролит, разветвленный или сшитый, полученный полимеризацией в обратной эмульсии, приводящей к обратимому латексу, представляет собой гомополимер акриловой кислоты, полностью или частично переведенной в соль.

4. Способ получения вакцины по п.1, отличающийся тем, что на стадии а) добавляют по меньшей мере одно иммуностимулирующее вещество.

5. Способ получения вакцины по п.1, включающий по меньшей мере стадию
- смешивания 10-20% адъювантной композиции, полученной на стадии а), с 80-90% антигенсодержащей среды.

6. Способ получения вакцины по п.1, дополнительно включающий в процессе осуществления стадии b)
- стадию, на которой вводят по меньшей мере одно иммуностимулирующее вещество, выбираемое из сапонинов, животных, и/или растительных, и/или минеральных, и/или синтетических масел, поверхностно-активных веществ, гидроксида алюминия, лецитинов и производных лецитина.

7. Применение адъювантной композиции, полученной на стадии а) способа по любому из пп.1-6, для получения вакцинной композиции.

8. Применение по меньшей мере одного обратимого латекса или полимерного порошка, полученного распылением указанного обратимого латекса, для получения вакцины способом по п.1.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2013 года RU2500421C2

Способ приготовления мыла 1923
  • Петров Г.С.
  • Таланцев З.М.
SU2004A1
Дорожная спиртовая кухня 1918
  • Кузнецов В.Я.
SU98A1
Переносная печь для варки пищи и отопления в окопах, походных помещениях и т.п. 1921
  • Богач Б.И.
SU3A1
Перекатываемый затвор для водоемов 1922
  • Гебель В.Г.
SU2001A1
Способ обработки целлюлозных материалов, с целью тонкого измельчения или переведения в коллоидальный раствор 1923
  • Петров Г.С.
SU2005A1
СТРУКТУРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ПОЛИМЕРНЫЕ ФЛОКУЛЯНТЫ 2001
  • Уиппл Уэсли Л.
  • Малтеш Чидамбарам
  • Джонсон Кэти
  • Гаддендорф Трейси
  • Сивакумар Анантхасубраманиан
  • Загала Анджела
RU2243240C2
RU 2060258 C1, 20.05.1996.

RU 2 500 421 C2

Авторы

Дюпюи Лоран

Гошерон Жером

Браун Оливье

Даты

2013-12-10Публикация

2008-10-06Подача