СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОЗНИКНОВЕНИЯ РЕЦИДИВА РАКА ВУЛЬВЫ Российский патент 2014 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим исследованиям в онкологии, и может быть использовано при лечении рака вульвы у женщин.

В настоящее время отмечается увеличение заболеваемости раком наружных половых органов, которые составляют около 8% всех злокачественных опухолей женских гениталий. В связи с малосимптомным течением в ранней стадии и агрессивным характером заболевания с выраженной склонностью к быстрому росту и раннему метастазированию, что связано с особенностями анатомо-топографического строения наружных половых органов, более 50% больных поступают в лечебные учреждения в III-IV стадиях опухолевого процесса, когда эффективность проводимого лечения значительно снижена, а наличие некомпенсированных сопутствующих заболеваний делает вообще невозможным проведение радикального лечения. Увеличение заболеваемости раком наружных половых органов, тяжесть клинического течения, быстрота и частота рецидивирования, низкая эффективность существующих методов лечения рецидива рака вульвы являются основанием для разработки способов прогнозирования рецидивов рака вульвы, что способствовало бы индивидуализации и обоснованности своевременного противоопухолевого лечения больных данной патологией.

Известен способ прогнозирования рецидивов лор-органов, в частности гортани, по динамике уровней андростерона и эстрадиола. Авторы предлагают определять соотношения андростерона к эстрадиолу и при величине его выше 3-х прогнозировать быстрое появление рецидива, а соотношение этих гормонов ниже 3-х прогнозирует длительный безрецидивный период (RU 2389030, опубл. 10.05.2010, бюл. №13). Однако предлагаемый автором способ прогнозирования рецидива опухолевого образования по соотношению двух гормонов изучен только при раке гортани, следовательно, не может быть применен при прогнозировании появления рецидива при раке вульвы и для его выполнения необходимы дорогостоящие оборудование и тест-наборы.

Известен способ прогнозирования течения заболевания у женщин больных раком тела матки по соотношению монаминоксидазы А к монаминоксидазе Б. Авторы заявляют, что коэффициент соотношения монаминоксидазы А к монаминоксидазе Б в пределах 4,48-6,9 указывает на длительный безрецидивный период. Коэффициент соотношения, равный 18,7-50,2, свидетельствует о появлении рецидива в ближайшее время (максимум через 7 месяцев) (RU №2395097, опубл. 20.07.2010, бюл. №20). Однако описанный способ не может быть использован при прогнозе сроков появления рецидива при раке вульвы, так как биохимическое исследование уровней монаминоксидазы А и Б осуществляется в ткани удаленной опухоли матки. Кроме того, для выполнения необходимых биохимических исследований требуются необщедоступные реактивы.

Таким образом, представленные способы прогнозирования рецидивов, хотя и достаточно эффективны, но сложны по выполнению, требуют применения дорогостоящих реагентов и разработаны для больных с другими локализациями опухолевого процесса.

Для рака вульвы известен способ прогнозирования рецидива рака вульвы, выбранный нами в качестве прототипа (RU 02023266 C1, опубл. 15.11.1994). Сущность изобретения заключается в том, что в сыворотке крови больных до лечения определяют пролактин и при величине его концентрации, превышающей 400 Мм/мл, прогнозируют рецидив рака вульвы в ближайшие сроки. Положительный эффект: повышает точность прогноза. Однако данный способ требует для проведения анализа особых условий, дорогостоящих тест-наборов и серийного режима выполнения исследований с длительным промежутком времени для накопления материала.

Известен также «Способ прогнозирования лечения рака вульвы», предназначенный для доклинического выявления рецидива рака вульвы (RU 02153175, опубл. 20.07.2000). Сущность этого способа заключается в том, что проводят динамическое наблюдение больных раком вульвы в III клинической группе после проведения противоопухолевого лечения, определяют суточную экскрецию мелатонина в моче и при резком, в 2-3 раза, по сравнению с нормой повышении уровня мелатонина в суточной моче прогнозируют рецидив рака вульвы через 2-4 месяца. Способ позволяет планировать адекватное лечение больных, что дает возможность предупреждения появления рецидива, а с другой стороны экономить лекарственные средства без ущерба для результатов лечения, не подвергать больных воздействию химиотерапевтического лечения при исключении в будущем появления рецидивов. Однако для выполнения данного исследования необходим сбор суточной мочи, при разработке способа авторами использован метод определения мелатонина, требующий применения вредных для здоровья исполнителей веществ: концентрированной щелочи, соляной кислоты и хлороформа, а также установки для выпаривания хлороформа под вакуумом. Возможное в настоящее время определение мелатонин сульфата в моче методом иммуноферментного анализа требует дорогостоящего оборудования и тест-наборов и резко удорожает проведение исследования.

Целью изобретения является определение прогностических факторов рецидива рака вульвы на этапе контрольного осмотра.

Поставленная цель достигается тем, что при контрольных осмотрах больных раком вульвы в эритроцитах крови определяют погруженность белков в липидный матрикс мембран эритроцитов. При ее значении в пределах 0,21-0,35 прогнозируют появление рецидивов, а при 0,08-0,2 продолжительное нахождение больных в состоянии ремиссии.

Сравнительный анализ известных способов прогнозирования течения заболевания и разработанного способа позволяет выявить его новизну и отличия от известных. Предлагаемое авторами изобретение «Способ прогнозирования возникновения рецидива рака вульвы» является новым, так как оно неизвестно в онкологии для прогнозирования течения заболевания путем такого биохимического исследования. В открытых источниках информации России, стран СНГ и зарубежья аналогичного способа обнаружить не удалось.

Новизна «Способа прогнозирования возникновения рецидива рака вульвы» заключается в том, что при контрольных осмотрах определяют в эритроцитах крови больных погруженность белков в липидный матрикс, и при ее значении в пределах 0,21-0,35 прогнозируют появление рецидивов, а при 0,08-0,2 - продолжительное нахождение больных в состоянии ремиссии.

Использованный подход к поиску предикторов рецидивирования определяется тем, что оценка погруженности белков в липидный матрикс мембран с помощью флуоресцентного зонда пирена позволяет судить о белково-липидных взаимодействиях в мембране, а также об олигомеризации мембранных белков, одной из причин которой может быть их окислительная модификация (Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М., Наука, 1989. 276 с.) под влиянием процессов свободнорадикального окисления, характерных для онкологической патологии.

Данный показатель нередко коррелирует с состоянием больных и эффективностью проводимой терапии.

Значительные изменения погруженности белков в липидный матрикс мембран клеток крови выявлены нами ранее при раке яичников, у больных с рецидивами рака шейки матки, при раке молочной железы, раке легкого, раке орофарингеальной области, злокачественных поражениях головного мозга (Горошинская И.А., Голотина Л.Ю., Владимирова Л.Ю. и соавт. Прогностическое значение показателей состояния мембран и свободнорадикальных процессов в крови онкологических больных // Известия вузов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. Спецвыпуск. 2005. С.27-30; Горошинская И.А., Григоров С.В., Немашкалова Л.А., Качесова П.С. Использование показателей состояния мембран и свободнорадикального окисления для оценки неврологического и соматического статуса больных с опухолями головного мозга // Современные подходы к терапии больных распространенным раком отдельных локализаций. Сб. ст. под ред. акад. РАМН, проф. Ю.С.Сидоренко. 2005. С.189-193; Горошинская И.А., Чилингорянц С.Г. Анализ показателей состояния мембран и свободнорадикального окисления в крови больных раком легкого в зависимости от эффективности различных методов проведения послеоперационной химиотерапии // Известия вузов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки (приложение), 2005, №4. С.87-93; Шалашная Е.В., Горошинская И.А., Неродо Г.А. и соавт. Исследование влияния химиопрепаратов на уровень эндогенной интоксикации, интенсивность свободнорадикального окисления и мембранный аппарат клеток крови больных с рецидивами рака шейки матки в опытах in vitro // Сибирский онкологический журнал. 2008, Т.26. №2. С.50-54).

У больных раком молочной железы с высокой эффективностью химиотерапевтического лечения наблюдалась нормализация изначально увеличенной погруженности белков в липидный матрикс эритроцитов и лимфоцитов крови при отсутствии положительных изменений у больных со стабилизацией процесса (Горошинская И.А., Владимирова Л.Ю., Шалашная Е.В., Немашкалова Л. А. Исследование показателей свободнорадикальных процессов и состояния мембран у больных раком молочной железы // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. 2004, №4. С.46-51).

Разработанный способ прогнозирования возникновения рецидива заболевания является промышленно применимым. Он может быть воспроизведен и многократно повторен в хирургических клиниках общей лечебной сети и специализированных лечебных учреждениях здравоохранения. Способ прост в применении, не требует дорогостоящего оборудования и реагентов, выполняется на отечественном флуориметре.

Способ осуществляют следующим образом. Забор крови производят из локтевой вены в утреннее время натощак в стеклянные пробирки, содержащие раствор гепарина из расчета 25 Ед на 1 мл крови.

Определение степени погружения белка в липидный бислой основано на оценке величины индуктивно-резонансного переноса энергии с триптофана на молекулу пирена (Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М., Наука, 1989, 276 с.). При этом для измерения погруженности белков в липидный матрикс мембран эритроцитов суспензию эритроцитов, выровненную по содержанию белка - 0,5 мг/мл, флуориметрировали при длине волны 282 нм и длине волны эмиссии 330 нм. Затем в пробу добавляли флуоресцентный зонд пирен в концентрации 4 мкМ/мл и инкубировали при постоянном перемешивании 1 минуту. После этого опять измеряли интенсивность флуоресценции пробы. Высота пика флуоресценции в этом случае (F) была меньше, чем при первом измерении (F₀), вследствие тушения пиреном триптофановой флуоресценции. Определяли эффективность переноса энергии с триптофанилов на пирен, равную величине соотношения (F₀-F)/F₀, и полученное значение погруженности выражали в условных единицах флуоресценции.

Средние значения погруженности белков в липидный матрикс эритроцитов крови, полученные в результате обследования 34 больных раком вульвы, на разных стадиях заболевания представлены в таблице 1.

Таблица 1 Структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов больных раком вульвы Группа Погруженность белков в липидный матрикс (у.е. флуоресценции) Первичные опухоли вульвы (n=17) 0,243±0,012   р=0,000762   p₁=0,001333 Состояние ремиссии (III клиническая группа) (n=14) 0,182±0,013   р=0,412 Рецидивы рака вульвы (n=8) 0,242±0,019   р=0,004480   p₁=0,011958 Доноры (n=16) 0,193±0,006 Примечание: р - достоверность различий относительно доноров (группа женщин без онкопатологии); p₁ - достоверность различий относительно среднего значения у больных, находящихся в состоянии ремиссии

Из таблицы видно, что и у больных с первичной опухолью вульвы, и у больных с рецидивами заболевания уровень погруженности белков в липидный матрикс мембран эритроцитов достоверно выше средних значений как в группе доноров (на 25,4-25,9%), так и у больных, находящихся в состоянии ремиссии (на 33,0-33,5%).

Примеры клинического применения способа прогнозирования возникновения рецидива рака вульвы.

Пример 1. Больная Г., 1963 года рождения, история болезни №3389/л, находится под наблюдением РНИОИ с 2000 г. по поводу рака вульвы II стадии, гистоанализ №564068-069 - высокодифференцированный плоскоклеточный рак, инвазия 2 мм, в лимфоузлах метастаза опухоли нет. Больная подвергнута комплексному лечению (сочетание химиотерапии, операции и наружной лучевой терапии). Операция заключалась в гемивульвэктомии и двухсторонней пахово-бедренной лимфаденэктомии. Больная находится под регулярным наблюдением в течение 12 лет в состоянии ремиссии (III клиническая группа), периодически подвергаясь обследованию в биохимической лаборатории. Исследование в эритроцитах крови погруженности белков в липидный матрикс дало следующие значения: анализ от 19.01.11 - 0,13 у.е., анализ от 23.04.12 - 0,193 у.е., анализ от 22.10.12 - 0,154 у.е. (все значения ниже 0,2 у.е.).

Пример 2. Больная К., 1947 года рождения, история болезни №1718/я, находится на учете в РНИОИ с февраля 2010 г. по поводу рака вульвы II стадии, подверглась комбинированному лечению, гистоанализ - высокодиференцированный плоскоклеточный рак с инвазией 4 мм. До апреля 2011 г. больная наблюдалась в III клинической группе без признаков рецидива. При очередном контрольном осмотре у больной обнаружено на вульве образование, подозрительное на рецидив, и 20.04.11 выполнено исследование в эритроцитах крови погруженности белков в липидный матрикс, показавшее значение 0,323 у.е., что на 67,4% выше среднего уровня в группе доноров, после чего произведено хирургическое иссечение рецидива рака вульвы, гистоанализ №25056 - высокодиференцированный плоскоклеточный рак, инвазия 2 мм, больная наблюдается в III клинической группе в течение 1,5 лет без признаков рецидива, периодически сдает кровь на биохимические исследования: погруженность белков в липидный матрикс мембран эритроцитов - 0,12 у.е.

Пример 3. Больная Б., 1940 года рождения, история болезни №3297/у, находится под наблюдением РНИОИ с февраля 2007 г. по поводу рака вульвы II стадии, гистоанализ №923898-900 - умеренно-диференцированный плоскоклеточный рак с ороговением, инвазия 5 мм. Больная подверглась комбинированному лечению, наблюдалась без признаков рецидива 4 года. При очередном обследовании, проведенном 9.02.11, было обнаружено, что у больной значение погруженности белков в липидный матрикс мембран эритроцитов составляет 0,292 у.е., значительно превышая средний уровень доноров (0,193±0,006) и среднее значение, характерное для больных III клинической группы (0,182±0,013), хотя при визуальном осмотре признаков рецидива не было выявлено и больной было рекомендовано приехать повторно на обследование через 2-3 месяца. При повторном обследовании значение погруженности белков в липидный матрикс - 0,286 у.е. и при генитальном осмотре в области задней спайки обнаружено рецидивное образование, которое было удалено оперативно, гистоанализ: умеренно-диференцированный плоскоклеточный рак с ороговением и инвазией 3 мм. Больная наблюдается после иссечения рецидива в III клинической группе в течение 1,5 лет, при повторных биохимических исследованиях отмечено изменение уровня погруженности белков в сторону нормализации.

Технико-экономическая эффективность «Способа прогнозирования возникновения рецидива рака вульвы» заключается в возможности осуществлять индивидуально для каждой больной диагностику начала рецидива рака вульвы до ее клинического проявления на основе биохимического исследования крови больной. Ранняя диагностика рецидива рака вульвы дает возможность своевременного проведения противоопухолевого лечения, что приводит к увеличению продолжительности жизни и улучшению ее качества. Проведение предлагаемого биохимического исследования просто по исполнению, занимает мало времени (в течение 1 часа с момента взятия крови), доступно, не требует дорогостоящей аппаратуры и материальных затрат на наборы реактивов.

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим исследованиям в онкогинекологии, и описывает способ прогнозирования возникновения рецидива рака вульвы, включающий биохимическое исследование крови, причем при контрольных осмотрах больных раком вульвы в эритроцитах крови определяют погруженность белков в липидный матрикс мембран эритроцитов, и при ее значении в пределах 0,21-0,35 прогнозируют появление рецидивов, а при 0,08-0,2 - продолжительное нахождение больных в состоянии ремиссии. Способ обеспечивает возможность индивидуально для каждой больной прогнозировать возникновение рецидива рака вульвы до его клинического проявления на основе биохимического исследования крови, что дает возможность своевременного проведения противоопухолевого лечения и способствует увеличению продолжительности и улучшению качества жизни больных раком вульвы. 1 табл., 3 пр.

Способ прогнозирования возникновения рецидива рака вульвы, включающий биохимическое исследование крови, отличающийся тем, что при контрольных осмотрах больных раком вульвы в эритроцитах крови определяют погруженность белков в липидный матрикс мембран эритроцитов, и при ее значении в пределах 0,21-0,35 прогнозируют появление рецидивов, а при 0,08-0,2 - продолжительное нахождение больных в состоянии ремиссии.