СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОРАЖЕНИЯ ВЕГЕТАТИВНЫХ ПАРАСИМПАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ГОЛОВЫ ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ Российский патент 2014 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии и к челюстно-лицевой хирургии, и может быть использовано в качестве дополнительного исследования для диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Лицевая боль представляет собой важную медицинскую проблему, в первую очередь из-за хронического рецидивирующего и, в ряде случаев, достаточно устойчивого ко многим методам лечения болевого синдрома.

Изучение проблемы лицевой боли в современной научной литературе представлено недостаточно широко. Как показывает практика, чаще остальных с конкретными случаями, связанными с лицевой болью, сталкиваются стоматологи, неврологи, оториноларингологи, офтальмологи и нейрохирурги (Ахадов Т.А. Проявления нейростоматологических симптомов // Журн. неврол. и психиатр. - 1996. - Вып.1. - 70-74).

Одной из самых распространенных причин лицевой боли является поражение вегетативных парасимпатических нервных узлов головы вирусной этиологии, в частности герпесвирусной этиологии (Журавлев В.П., Николаева А.А. Проблемы стоматологии «Поражение вегетативных парасимпатических узлов головы в структуре нейростоматологического приема», №3, 2013 г., стр.36-39). В настоящее время ряд исследований, как отечественных, так и зарубежных, показывают высокий уровень инфицированности населения герпесвирусами, а именно: вирусом простого герпеса I и II типа, цитомегаловирусом, вирусом Эпштейна-Барра. Имеются данные, что к 15 годам вирусами герпеса инфицировано почти 90% детей и подростков, а к 60 годам - почти 99% населения (Герпетические инфекции. Эпидемиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика // Методические рекомендации. Каражас Н.В., Малышев Н.А., Рыбалкина Т.Н., Калугина М.Ю., Бошьян Р.Е., Кистенева Л.Б., Чешик С.Г. М.: 2007).

При лицевых болях внешне герпесвирусная инфекция никак себя проявляет (высыпания на коже отсутствуют). Поэтому клинические проявления пораженных вегетативных парасимпатических узлов в виде лицевой боли часто провоцируют неоправданное вмешательство в зубочелюстную систему. Отсутствие эффективной диагностики инфекции вегетативных парасимпатических узлов герпесвирусной этиологии приводит к некорректному диагнозу и неадекватной терапии больного. Отсюда вытекает задача создания диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Известен способ диагностики герпесвирусной инфекции, в соответствии с которым выполняют иммуноферментный анализ, в результате чего определяют антигены с помощью антител, меченых ферментом. Способ обладает большой степенью чувствительности, операции способа стандартны и автоматизированы, что снижает частоту субъективных ошибок. Чувствительность метода составляет 70-80%. Вирусные антитела классов IgG, IgA, IgM в сыворотке крови определяют методом интерферонового анализа (Мальцева И.Н., Эбралидзе Л.К., Звонарев А.Ю. // Сборник трудов НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней. МЗ Каз. ССР. 1988. Т.36. С.135-141). Однако способ обеспечивает диагностику наличия герпесвирусной инфекции в организме человека, т.е. не позволяет конкретизировать инфицированный орган, что, в свою очередь, не позволяет диагностировать поражение герпесвирусной этиологии вегетативных парасимпатических узлов головы.

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, вытекающий из статьи Николаева А.А., Базарный В.В., Журавлев В.П. «Иммунологический статус у пациентов с поражением вегетативных парасимпатических узлов головы вирусного происхождения» // журнал «Стоматология», терапия, ноябрь 2012 г., №12 (104), с.104. Выполняют иммунологическое исследование крови пациента, в результате которого определяют показатели клеточного иммунитета и показатели иммунофенотипирования. Критерием для диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии являются: снижение по сравнению с нормой, продукция эндогенного интерферона, активности натуральных киллеров и антителозависимой клеточной цитоттоксичности, уменьшение абсолютного числа и снижение активности Т-лимфоцитов (CD3+ и CD4+ клеток) и нейтрофилов, повышение количества иммунных комплексов.

Недостаток выявленного способа, наиболее близкого к предлагаемому, заключается в том, что он в результате диагностики не позволяет конкретизировать тип вирусной этиологии, а именно: не позволяет диагностировать поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Предлагаемое изобретение решает задачу создания способа диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, осуществление которого позволяет достичь технического результата, заключающегося в возможности диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Сущность изобретения состоит в том, что в способе диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, в соответствии с которым в крови больного определяют содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа и цитомегаловирусу, новым является то, что, кроме того, определяют содержание интерферона альфа и интерферона гамма и, если содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа находится в пределах от (1:2973,75 до 1:3058,25), к цитомегаловирусу - в пределах от (1:2916,91 до 1:2997,37), содержание интерферона альфа - в пределах от 178,56 до 194,78 ед/мл, содержание интерферона гамма - в пределах от 14,37 до 16,87 ед/мл, то диагностируют поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Технический результат достигается следующим образом.

Существенные признаки формулы изобретения: «Способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, в соответствии с которым в крови больного определяют содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа и цитомегаловирусу, …» являются неотъемлемой частью заявленного способа и обеспечивают его работоспособность, а следовательно, обеспечивают достижение заявленного технического результата.

Авторами изобретения впервые установлена взаимосвязь иммунологических показателей крови пациента с воспалительным процессом в вегетативных парасимпатических узлах головы, вызванном инфекцией герпесвирусной этиологии. Это обусловило возможность использования для диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии иммунологические показатели в крови пациента.

Авторами установлено, что наличие герпесвирусной инфекции в вегетативных парасимпатических узлах головы сопровождается недостаточностью как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета, что обусловлено уменьшением продолжительности жизни клеток, а также снижением содержания иммуннокомпетентных клеток. В результате совокупность выявленных иммунологических изменений способствует персистенции вирусов герпеса в организме и рецидивирующему течению болезни.

Авторами изобретения впервые установлена взаимосвязь между воспалительным процессом в вегетативных парасимпатических узлах головы, вызванном инфекцией герпесвирусной этиологии, и содержанием специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа и цитомегаловирусу, а также содержанием интерферона альфа и содержанием интерферона гамма в крови пациента.

В заявленном способе исследуют гуморальный иммунитет больного, для чего в крови больного с поражением вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии определяют содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа и цитомегаловирусу. При этом авторами впервые установлено, что содержание в крови больного специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа в пределах от (1:2973,75 до 3058,25) и к цитомегаловирусу - в пределах от (1:2916,91 до 2997,37) является признаком поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной вирусной этиологии.

Важную роль в противовирусном ответе играет продукция интерферонов. В заявленном способе определяют содержание интерферона альфа и интерферона гамма.

Системе интерферонов придается большое значение в противовирусной защите организма. Система интерферонов осуществляет не только первую линию защиты организма от инфекций (когда иммунная система еще не успевает отреагировать), но и участвует в дальнейших (уже иммунных) процессах уничтожения чужеродных объектов. Если иммунная система в целом отвечает за неизменность белкового состава организма, то система интерферонов отвечает за поддержание генетического гомеостаза, то есть за сохранение постоянства состава организма на уровне генома (Ершов Ф.И., Киселев О.И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств, М.: «Гэотар-Медиа», 2005; Зарубаев В.В., Сунихин В.П., Слита А.С., Сироткин А.К., Коваленко A. JL. Влияние циклоферона на морфогенез и репродукцию вируса простого герпеса 1 типа в культуре клеток VERO // НИИ гриппа РАМН, СПб.: 2002).

Интерфероны - общее название, под которым в настоящее время объединяют ряд белков со сходными свойствами, выделяемых клетками организма в ответ на вторжение вируса. Благодаря интерферонам клетки становятся невосприимчивыми по отношению к вирусу. Интерфероны стимулируют иммунную систему для борьбы с вирусами. Интерфероны повышают синтез молекул главного комплекса гистосовместимости I и II классов и активируют иммунопротеасому.

Интерфероны человека подразделяют на группы в зависимости от типа клеток, в которых они образуются: α, β и γ. Интерфероны альфа действуют как ингибиторы репликации вируса и оказывают преимущественно противовирусный эффект. Кроме того, использование в заявленном способе именно интерферона альфа обусловлено тем, что интерфероны альфа включают несколько видов белков (22 подтипа интерферона альфа) с одинаковой молекулярной массой (около 20 кДа), что повышает достоверность их количественного определения в крови больного.

Интерферон гамма относится к второму типу интерфернов: это интерфероны, проявляющие иммуномодуляторную активность.

Таким образом, авторами изобретения впервые выполнены углубленные исследования особенностей иммунных и иммунорегуляторных нарушений у пациентов с выявленным инфицированием вегетативных узлов головы герпесвирусами. При этом в качестве критериев для оценки состояния иммунитета приняты содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа и цитомегаловирусу, а также содержание интерферона альфа и содержание интерферона гамма в крови пациента. В результате по результатам иммунологического исследования состава крови больного установлены достоверные показатели иммунитета и их числовые критерии, соответствующие диагнозу герпесвирусной инфекции вегетативных парасимпатических узлов головы, а именно: если содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа находится в пределах от (1:2973,75 до 1:3058,25), к цитомегаловирусу - в пределах от (1:2916,91 до 1:2997,37), содержание интерферона альфа - в пределах от 178,56 до 194,78 ед/мл, содержание интерферона гамма - в пределах от 14,37 до 16,87 ед/мл, то диагностируют поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Количественные критерии для диагностики заявленным способом поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии получены опытным путем в результате набора статистических данных и являются оптимальными.

Таким образом, из вышеизложенного следует, что предлагаемый способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, при осуществлении которого обеспечивают достижение технического результата, заключающегося в возможности диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Заявленный способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии осуществляют следующим образом.

В крови больного определяют содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа и цитомегаловирусу, определяют содержание интерферона альфа и интерферона гамма. Если содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа находится в пределах от (1:2973,75 до 1:3058,25), к цитомегаловирусу - в пределах от (1:2916,91 до 1:2997,37), содержание интерферона альфа - в пределах от 178,56 до 194,78 ед/мл, содержание интерферона гамма - в пределах от 14,37 до 16,87 ед/мл, то диагностируют поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

В подтверждение работоспособности заявленного способа диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии заявленный способ был опробован на 105 больных, а именно: исследован иммунный статус у 105 больных (основная группа) с поражением вегетативных парасимпатических узлов вирусной этиологии. Распределение больных по возрасту: 55-64 года - 52 человека, 45-54 года - 24 человека, 35-44 года - 19 человек, 25-34 года - 9 человек, 15-24 года - 1 человек.

Диагноз поражение вегетативных парасимпатических узлов герпесвирусной вирусной этиологии установлен на основании стандартных клинико-лабораторных критериев.

Контрольную группу составили 25 практически здоровых добровольцев.

Комплекс лабораторных тестов включал общеклинический анализ крови (Cell Dyne 3500, Abbott).

С диагностической целью у пациентов определяли специфические антитела класса G к вирусу простого герпеса 1 типа (ВПГ1) и цитомегаловирусу (ЦМВ). Исследование уровня специфических антител к ВПГ 1 и ЦМВ основывалось на методе ИФА и иммунохемилюминисцентного анализа (современный вариант ИФА с использованием парамагнитных частиц).

Определение ДНК ВПГ-1 и ЦМВ проводилось с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПНР).

Оценка фенотипа лимфоцитов (Лф) крови проводилась методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител.

Уровень интерферона-альфа (ИФН-α) и интерферона-гамма (ИФН-γ) определяли методом ИФА («Вектор-Бест», Россия).

Результаты лабораторных данных обработаны стандартными методами вариационной статистики с определением средних величин (М) и их ошибок (m) для каждой группы с оценкой критерия достоверности (t) по Стьюденту. При всех расчетах использовался 95% уровень значимости.

Результаты обследования сведены в таблицы 1 и 2.

Таблица 1 Показатели гуморального иммунитета у больных с поражением вегетативных парасимпатических узлов головы вирусом простого герпеса и цитомегаловирусом Показатели Основная группа IgG ВПГ 1 (1: 3016±42,25 IgG ЦМВ (1: 2957,14±40,23

Среднее содержание IgG к вирусу простого герпеса и цитомегаловирусу, важнейшего иммуноглобулина, определяющего завершенность и эффективность иммунного ответа, в группе больных с поражением вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии было увеличено (IgG ВПГ 1 (1:3016±42,25) и IgG ЦМВ (1:2957,14±40,23) по сравнению с контрольной группой.

Таблица 2 Иммунологические показатели клеточного иммунитета у пациентов с поражением вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии Показатели Контрольная группа Основная группа CD3+CD20- лимфоциты 1,09±0,03 0,69±0,16 CD4+ лимфоциты ×10⁹/л 1,42±0,85 0,84±0,05 CD8+ лимфоциты ×10⁹/л 0,58±0,06 0,42±0,03 CD 16+ лимфоциты ×10⁹/л 0,35±0,05 0,29±0,02 В-лимфоциты (от всех В) 0,22±0,06 0,09±0,01

CD20±CD5-     HLA-DR+ лимфоциты 0,63±0,10 0,21±0,02 CD25+ лимфоциты 0,11±0,06 0,37±0,069 ИФН-α ед./мл 640,7±11,5 186,67±8,11 ИФН-γ ед./мл 128,3±5,9 15,62±1,25

Анализ численных показателей результатов контроля состояния иммунитета больных с поражением вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии подтверждает, что у всех больных содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа находится в пределах от (1:2973,75 до 1:3058,25), к цитомегаловирусу - в пределах от (1:2916,91 до 1:2997,37), содержание интерферона альфа - в пределах от 178,56 до 194,78 ед/мл, содержание интерферона гамма - в пределах от 14,37 до 16,87 ед/мл.

Продукция противовирусного интерферона альфа снижена в 3,4 раза, и регуляторного ИФН гамма - в 8,2 раза.

Поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии подтверждают и остальные общепринятые контролируемые иммунологические показатели клеточного иммунитета, которые также фиксируют снижение иммунного статуса пациентов.

Количество CD3+CD20-лимфоцитов снижены в группе больных с поражением вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии (0,69±0,16) практически в два раза по сравнению с группой сравнения.

Показатели CD4, регулирующие силу иммунного ответа организма на чужеродный антиген, контролирующие постоянство внутренней среды организма и обусловливающие повышенную выработку антител, достоверно снижены во второй группе (0,84±0,05). Так как фенотипы CD4 являются в определенной степени рецептором для связывания с ВПГ, то они закономерно вовлекаются в патологический процесс с постепенным их разрушением и уменьшением содержания в периферической крови (Величкина Н.Ю., Малышева О.А., Козлов В.А. Факторы резистентности клеток иммунной системы к инфекции вируса простого герпеса. Цитокины и воспаление. 2002; 2; т.1: с.109; Komai Т., Henriksson М., Masucci M.G. The herpes simplex virus-1 Us3 protein kinase blocks CD8T cell lysis by preventing the cleavage of Bid by granzyme B. // Cell Death Differ. - 2008, 10).

Содержание субпопуляции лимфоцитов CD8, представляющих преимущественно цитотоксические Т-лимфоциты, также достоверно (снижено <0,001) в группе больных с поражением вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии (0,42±0,03), по сравнению с контрольной группой (0,58±0,06).

Количество CD 16 клеток, выполняющих преимущественно киллерную функцию, их принято считать естественными (натуральными) киллерами, достоверно не отличается от аналогичных показателей относительно здоровых лиц (р>0,05).

По данным литературы, натуральным киллерам в основном отводится роль в противоопухолевой защите. При вирусных инфекциях, в частности при герпесвирусной инфекции, данная субпопуляция клеток имеет определенное значение на начальном этапе развития заболевания. У наблюдаемых больных с поражением вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии это заболевание является хроническим. Возможно, поэтому у наблюдаемых больных содержание CD 16 клеток существенно не отличается от нормы (По данным литературы: Величкина Н.Ю., Малышева О.А., Козлов В.А. Факторы резистентности клеток иммунной системы к инфекции вируса простого герпеса // Цитокины и воспаление. 2002, том 1, №2, с.109; Тотолян А.А. Клетки иммунной системы; А.А. Тотолян, И.О. Фрейдлин. Т.5. СПб.: Наука, 2001; Barcy S., Corey L. Herpes simplex inhibits the capacity of lymphoblastoid В cell lines to stimulate CD4+T cells. // J Immunol. 2001; 166(10). Barcy S., Huang M.L., Corey L., Koelle D.M. Longitudinal analysis of herpes simplex virus-specific CD4+ cell clonotypes in infected tissues and blood. // J Infect Dis. 2005; 191).

Количество B1- и В2-лимфоцитов, несущие соответственно иммунофенотипы CD20+CD5-, достоверно (<0,001) ниже нормы (0,09±0,01). Снижение количества клеток, несущих иммунофенотипы CD20, отвечающих за синтез антител, способствует низкому накоплению противогерпетических антител, что может быть одной из причин персистенции вирусных антигенов.

Количественное содержание активированных Т-лимфоцитов (от числа CD3+), несущих иммунофенотипы HLA-DR, снижается (0,21±0,02 при р<0,05) по сравнению с показателями у здоровых лиц. По-видимому, при герпесвирусной инфекции активизируется иммунный ответ в плане распознавания чужеродной информации и его реализации.

Содержание Т-лимфоцитов, несущих ИЛ-2 рецепторы, иммунофенотипа CD25+ достоверно увеличено по сравнению с нормой (0,37±0,069 при р<0,001), они отвечают за активацию и пролиферацию цитотоксических Т-лимфоцитов.

Полученные результаты иммунологического исследования крови пациентов с диагнозом поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии достоверно показывают, что протекание герпесвирусной инфекции у таких пациентов сопряжено со снижением защитных сил организма и нарушением реактивности. Это подтверждает правомерность, информативность и достоверность выбранных для диагностики данного заболевания критериев, а именно: содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа и к цитомегаловирусу, и содержание интерферона альфа и интерферона гамма, а также обеспечивает достоверность диагностики заявленным способом поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии и к челюстно-лицевой хирургии, и может быть использовано в качестве дополнительного исследования для диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии. Сущность изобретения: в крови больного определяют содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа и цитомегаловирусу, а также содержание интерферона альфа и интерферона гамма. Если содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа находится в пределах от 1:2973,75 до 1:3058,25, к цитомегаловирусу в пределах от 1:2916,91 до 1:2997,37, содержание интерферона альфа в пределах от 178,56 до 194,78 ед/мл, содержание интерферона гамма в пределах от 14,37 до 16,87 ед/мл, то диагностируют поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии. Применение изобретения дает возможность диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии, неивазивность способа. 2 табл.

Способ диагностики поражения вегетативных парасимпатических узлов головы вирусной этиологии, в соответствии с которым в крови больного определяют содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа и цитомегаловирусу, отличающийся тем, что, кроме того, определяют содержание интерферона альфа и интерферона гамма и, если содержание специфических антител класса G к вирусу простого герпеса 1 типа находится в пределах от (1:2973,75 до 1:3058,25), к цитомегаловирусу - в пределах от (1:2916,91 до 1:2997,37), содержание интерферона альфа - в пределах от 178,56 до 194,78 ед/мл, содержание интерферона гамма - в пределах от 14,37 до 16,87 ед/мл, то диагностируют поражение вегетативных парасимпатических узлов головы герпесвирусной этиологии.