ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ УМЕНЬШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ИНСУЛИНУ И ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА И СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА ИНСУЛИНОМ И/ИЛИ ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКИМИ ПРЕПАРАТАМИ Российский патент 2014 года по МПК A61K39/395 A61P3/10 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для уменьшения резистентности к инсулину и для лечения сахарного диабета, а также для повышения эффективности лечения сахарного диабета инсулином и/или другими гипогликемическими препаратами, в том числе и инсулинорезистентных больных.

Из уровня техники известно антидиабетическое лекарственное средство в виде потенцированного инсулина, приготовленного по гомеопатической технологии (RU 2134122 С1, A61K 39/395, 10.08.1999).

Из уровня техники известны способ регуляции углеводного и жирового обмена и лекарственное средство на основе активированной формы сверхмалых доз антител к рецепторам инсулина (RU 2199345 С1, A61K 39/395, 27.02.2003). Однако данные лекарственные средства не во всех случаях обеспечивают достаточную терапевтическую эффективность.

Известен также способ лечения больных сахарным диабетом путем введения гипогликемических препаратов и/или инсулина или производных инсулина (RU 2358738 С2, А61К 31/5517, 2006). Однако эффективность лечения сахарного диабета такого рода лекарственным средством в ряде случаев может быть недостаточной.

Изобретение направлено на создание лекарственного средства в виде фармацевтической композиции на основе активированной-потенцированной формы антител к рецептору инсулина, обеспечивающего уменьшение резистентности к инсулину и эффективное лечение сахарного диабета, а также на повышение эффективности лечения сахарного диабета инсулином и/или иными гипогликемическими препаратами

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что лекарственное средство для уменьшения резистентности к инсулину и для лечения сахарного диабета, содержащее активированную-потенцированную форму антител к рецептору инсулина, согласно изобретению выполнено в виде фармацевтической композиции и включает в качестве дополнительного-усиливающего компонента активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом лекарственное средство может содержать активированную -потенцированную форму антител к β-субъединице рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму аффинно-очищенных антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом лекарственное средство предпочтительно содержит активированную-потенцированную форму антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Кроме того, лекарственное может содержать активированную-потенцированную форму антител к α-субъединице рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Причем активированную-потенцированную форму антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

Кроме того, фармацевтическая композиция может быть выполнена в твердой лекарственной форме и содержать эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного смесью активированной-потенцированной формой антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированной-потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе, и фармацевтически приемлемые добавки, которые включают изомальт, кросповидон и магния стеарат.

При этом водные или водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и к эндотелиальной NO-синтазе могут быть получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения из матричных растворов аффинно-очищенных антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и к эндотелиальной NO-синтазе с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

Причем каждый из компонентов используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, приготовленных по гомеопатической технологии.

Решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что в способе уменьшения резистентности к инсулину и лечения сахарного диабета I и II типа, включающего введение в организм активированной-потенцированной формы антител к рецептору инсулина, согласно изобретению одновременно и сочетанно вводят дополнительный-усиливающий компонент в виде активированной-потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом в организм возможно введение фармацевтической композиции в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащей активированную-потенцированную форму антител к β-субъединице рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Предпочтительно в организм вводят фармацевтическую композицию в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащую активированную-потенцированную форму антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Кроме того, в организм возможно введение фармацевтической композиции в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащей активированную-потенцированную форму антител к α-субъединице рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Кроме того, в организм возможно введение фармацевтической композиции в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащей активированную-потенцированную форму антител к α-субъединице рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к β-субъединице рецептора инсулина в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Причем активированную-потенцированную форму антител к рецептору инсулина, или фрагментам рецептора инсулина, включая С-концевой фрагмент β-субъединицы рецептора инсулина, и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

Кроме того, в фармацевтической композиции каждый из компонентов используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, приготовленных по гомеопатической технологии.

Решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что в способе лечения сахарного диабета путем введения инсулина и/или гипогликемических препаратов согласно изобретению в организм дополнительно вводят фармацевтическую композицию, содержащую активированную-потенцированную форму антител к рецептору инсулина, преимущественно к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина, и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом активированную-потенцированную форму антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

Предпочтительно фармацевтическую композицию используют в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащей смесь различных разведений антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина в сочетании со смесью различных разведений антител к эндотелиальной NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии.

Кроме того, лекарственное средство может содержать действующие компоненты в объемном соотношении 1:1, при этом каждый компонент используют в виде смеси трех соответствующих матричных растворов, разведенных соответственно в 100¹², 100³⁰, и 100²⁰⁰ раз, что эквивалентно сотенным разведениям С 12, С 30, С 200, приготовленным по гомеопатической технологии.

Заявленное лекарственное средство может быть использовано при лечении сахарного диабета самостоятельно как гипогликемический препарат или в комплексной терапии в дополнение к заместительной инсулинотерапии и/или совместно с пероральными сахароснижающими препаратами (бигуанидами (метформин); производными сульфонилмочевины (глибенкламид, глипизид, гликлазид, гликвидон, глимепирид); тиазолидиндионами (розиглитазон); ингибиторами α-гликозидазы (акарбоза) и пр.), а также в дополнение к сопроводительной терапии сахарного диабета в целях профилактики его осложнений.

Заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать, предпочтительно, по 1-2 таблетке 2-6 раз в день (предпочтительно 2-4 раза в день).

Для уменьшения резистентности к инсулину и при лечении и профилактике сахарного диабета возможно раздельное, но сочетанное и одновременное применение (введение в организм) компонентов фармацевтической композиции заявленного лекарственного средства в виде двух отдельно приготовленных препаратов как в виде растворов, так и в твердых лекарственных формах (в таблетках), каждый из которых содержит активированную-потенцированную форму сверхмалых доз аффинно-очищенных антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и, соответственно, активированную-потенцированную форму сверхмалых доз аффинно-очищенных антител к NO-синтазе.

Предложенное сочетание активированных-потенцированных форм антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и к NO-синтазе в фармацевтической композиции (т.е. формы антител к С-концевому фрагменту α-субъединицы рецептора инсулина и к NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии потенцирования путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения, которая обладает активностью в фармакологических моделях и/или клинических методах лечения и профилактики сахарного диабета или уменьшения резистентности к инсулину) обеспечивает получение неожиданного синергетического терапевтического эффекта, подтвержденного на адекватных экспериментальных моделях и клинических исследованиях, который заключается в уменьшении резистентности к инсулину, повышении эффективности инсулинотерапии у больных сахарным диабетом I типа и инсулинонезависимым сахарным диабетом II типа, стабилизации применяемых доз и уменьшении доз антидиабетических препаратов при комплексной терапии, снижении риска развития побочных эффектов, уменьшении выраженности осложнений диабета, например сердечно-сосудистых нарушений, нейропатий, нефропатий, что обусловлено повышением чувствительности соматических клеток к инсулину за счет неспецифической NO-зависимой активации внутриклеточной трансдукции сигнала от инсулинового рецептора.

Кроме того, заявленное лекарственное средство расширяет арсенал препаратов для лечения сахарного диабета, в том числе в комплексной инсулинотерапии, как для профилактики осложнений, так и для снижения побочных эффектов противодиабетических препаратов.

На Фиг.1 представлен график, на котором показано влияние тестируемых препаратов на уровень глюкозы в плазме крови крыс со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом; на Фиг.2 показано влияние тестируемых препаратов на 14 день введения на показатели площади под кривыми концентрация - время (AUC) в тесте толерантности к глюкозе у крыс со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом; на Фиг.3 показано влияние тестируемых препаратов на уровень глюкозы в плазме крови крыс со спонтанным инсулиннезависимым сахарным диабетом; на Фиг.4 показано влияние тестируемых препаратов на 28 день введения на показатели площади под кривыми концентрация - время (AUC) в тесте толерантности к глюкозе у крыс со спонтанным инсулиннезависимым сахарным диабетом; на Фиг.5 приведена динамика уровня глюкозы и гликированного гемоглобина у пациентов с сахарным диабетом I типа на фоне приема препарата AT РИ+AT NOS; на Фиг.6 приведена динамика уровня глюкозы и гликированного гемоглобина у пациентов с сахарным диабетом II типа на фоне приема комплексного препарата AT РИ+AT NOS.

Лекарственный препарат приготовляют, преимущественно, следующим образом.

Для приготовления активированной-потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или, преимущественно, поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы / Под ред. Г.Фримеля. М.: «Медицина», 1987, с.9-33; или, например, в статье Laffly E., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток.

Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение в индивидуальном виде проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемыми в соответствии с изобретением веществами - антигенами: С-концевым фрагментом β-субъединицы рецептора инсулина и NO-синтазой. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифические антисыворотки с высоким содержанием антител, которые используют для получения активированных-потенцированных форм. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Предпочтительным для приготовления заявленной фармацевтической композиции является использование поликлональных антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и к эндотелиальной NO-синтазе, которые в качестве матричного (первичного) раствора с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, используют для последующего приготовления активированной-потенцированной формы.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водно-спиртовых разведений первичного матричного раствора антител, разведенных соответственно в 100¹², 100³⁰, и 100²⁰⁰ раз, что соответствует сотенным гомеопатическим разведениям С 12, С30 и С 200. При выполнении заявленного лекарственного средства в твердой лекарственной форме на нейтральный носитель - лактозу - наносится смесь указанных компонентов в объемном соотношении 1:1.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного препарата является использование поликлональных антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и к NO-синтазе, которые могут быть получены иммунизацией кроликов следующим образом.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Для иммунизации кроликов возможно использовать в качестве иммуногена (антигена) адъювант и молекулу рецептора инсулина человека с последовательностью:

1 mgtggrrgaa aapllvavaa lllgaaghly pgevcpgmdi rnnltrlhel encsvieghl

61 qillmfktrp edfrdlsfpk limitdylll frvygleslk difpnitvir gsrlffnyal

121 vifemvhike lglynlmnit rgsvrieknn eicylatidw srildsvedn hivlnkddne

181 ecgdicpgta kgktncpatv ingqfvercw thshcqkvcp tickshgcta eglcchsecl

241 gncsqpddpt kcvacmfyi dgrcvetcpp pyyhfqdwrc vnfsfcqdih hkcknsrrqg

301 chqyvihnnk cipecpsgyt mnssnilctp cigpcpkvch llegektids vtsaqelrgc

361 tvingsliin irggnnlaae leanlgliee isgylkirrs yalvslsffr kirlirgetl

421 eignysfyal dnqnirqlwd wskhnltttq gklffhynpk lclseihkme evsgtkgrqe

481 mdialktng dkascenell kfsyirtsfd killrwepyw ppdfrdllgf mifykeapyq

541 nvtefdgqda cgsnswtvvd idpplrsndp ksqnhpgwim rglkpwtqya ifvktivtfs

601 derrtygaks diiyvqtdat npsvpldpis vsnsssqiil kwkppsdpng nithylvfwe

661 rqaedseife ldyclkglkl psrtwsppfe sedsqkhnqs eyedsagecc scpktdsqil

721 keleessfrk tfedylhnvv fvprktssgt gaedprpsrk rrslgdvgnv tvavptvaaf

781 pntsstsvpt speehrpfek vvnkeslvis girhftgyri elqacnqdtp eercsvaayv

841 sartmpeaka ddivgpvthe ifennvvhim wqepkepngi iviyevsyrr ygdeelhlcv

901 srkhfalerg crirglspgn ysvriratsl agngswtept yfyvtdyldv psniakiiig

961 plifvflfsv vigsiylflr krqpdgplgp lyassnpeyl sasdvfpcsv yvpdewevsr

1021 ekitllreig qgsfgmvyeg nardiikgea etrvavktvn esaslrerie flneasvmkg

1081 ftchhvvrll gvvskgqpti vvmelmahgd lksylrsirp eaennpgrpp ptiqemiqma

1141 aeiadgmayl nakkfvhrdi aamcmvahd ftvkigdfgm trdiyetdyy rkggkgllpv

1201 rwmapeslkd gvfttssdmw sfgvvlweit slaeqpyqgl sneqvlkfvm dggyldqpdn

1261 cpervtdlmr mcwqfnpkmr ptfleivnil kddlhpsfpe vsffhseenk apeseeleme

1321 fedmenvpid rsshcqreea ggrdggsslg fkrsyeehip ythmnggkkn griltlprsn

1381 ps;

или адъювант и α-субъединицу рецептора инсулина человека с последовательностью:

28-762:

28 hly pgevcpgmdi mnltrlhel encsvieghl

61 qillmfktrp edfrdlsfpk limitdylll frvygleslk difpnitvir gsrlffnyal

121 vifemvhike lglynlmnit rgsvrieknn eicylatidw srildsvedn hivlnkddne

181 ecgdicpgta kgktncpatv ingqfvercw thshcqkvcp tickshgcta eglcchsecl

241 gncsqpddpt kcvacrnfyi dgrcvetcpp pyyhfqdwrc vnfsfcqdih hkcknsrrqg

301 chqyvihnnk cipecpsgyt mnssnilctp cigpcpkvch llegektids vtsaqelrgc

361 tvingsliin irggnnlaae leanlgliee isgylkirrs yalvslsffr kirlirgetl

421 eignysfyal dnqnirqlwd wskhnltttq gklffhynpk lclseihkme evsgtkgrqe

481 mdialktng dkascenell kfsyirtsfd killrwepyw ppdfrdllgf mifykeapyq

541 nvtefdgqda cgsnswtvvd idpplrsndp ksqnhpgwim rglkpwtqya ifvktivtfs

601 derrtygaks diiyvqtdat npsvpldpis vsnsssqiil kwkppsdpng nithylvfwe

661 rqaedseife ldyclkglkl psrtwsppfe sedsqkhnqs eyedsagecc scpktdsqil

721 keleessfrk tfedylhnvv fvprktssgt gaedprpsrk rr

или адъювант и полипептидный фрагмент а-субъединицы рецептора инсулина человека, выбираемый, например, из следующих последовательностей:

131-144:

lglynlmnit rgsv;

191-203:

kgktncpatv ing;

441-453:

wskhnltttq gkl;

541-560:

nvtefdgqda cgsnswtvvd;

611-620:

diiyvqtdat npsvpldpis;

702-719:

yedsagecc scpktdsqi

или адъювант и β-субъединицу рецептора инсулина человека с последовательностью:

763-1382

763 sigdvgnv tvavptvaaf

781 pntsstsvpt speehrpfek vvnkeslvis girhftgyri elqacnqdtp eercsvaayv

841 sartmpeaka ddivgpvthe ifennvvhim wqepkepngi iviyevsyrr ygdeelhlcv

901 srkhfalerg crirglspgn ysvriratsl agngswtept yfyvtdyldv psniakiiig

961 plifvflfsv vigsiylflr krqpdgplgp lyassnpeyl sasdvfpcsv yvpdewevsr

1021 ekitllreig qgsfgmvyeg nardiikgea etrvavktvn esaslrerie flneasvmkg

1081 ftchhvvrll gvvskgqpti vvmelmahgd lksylrsirp eaennpgrpp ptiqemiqma

1141 aeiadgmayl nakkfvhrdi aamcmvahd ftvkigdfgm trdiyetdyy rkggkgllpv

1201 rwmapeslkd gvfttssdmw sfgvvlweit slaeqpyqgl sneqvlkfvm dggyldqpdn

1261 cpervtdlmr mcwqfnpkmr ptfleivnil kddlhpsfpe vsffhseenk apeseeleme

1321 fedmenvpid rsshcqreea ggrdggsslg fkrsyeehip ythmnggkkn griltlprsn

1381 ps

или адъювант и полипептидный фрагмент С-концевого фрагмента -β-субъединицы рецептора инсулина человека, выбираемый, например, из следующих последовательностей:

1368-1377:

KKNGRILTLP;

1372-1382:

RILTLPRSNPS;

1369-1375:

KNGRILT;

1366-1382:

GGKKNGRILTLPRSNPS;

1365-1382:

NGGKKN GRILTLPRSN PS

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенные инъекции для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°С) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Добавляют к антисыворотке 20% (весовая концентрация) NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранят до использования в замороженном состоянии при температуре -20°С (или без добавления NaN₃ при температуре -70°С). Для выделения из антисыворотки антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина человека производят абсорбцию на твердой фазе в следующей последовательности:

1) 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl добавляют 6,26 г Na₂SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°С;

2) выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3) после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;

4) фракцию антител определяют измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Затем производят очистку антител методом аффинной хроматографии путем прикрепления полученных антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина человека, который находится на нерастворимом матриксе с последующим элюированием концентрированными растворами соли.

Поликлональные антитела к эндотелиальной NO-синтазе получают аналогичным вышеуказанным способом, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и цельную молекулу эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

1 MGNLKSVGQE PGPPCGLGLG LGLGLCGKQG PASPAPEPSR

АРАРАТРНАР DHSPAPNSPT

61 LTRPPEGPKF PRVKNWELGS ITYDTLCAQS QQDGPCTPRR

CLGSLVLPRK LQTRPSPGPP

121 PAEQLLSQAR DFINQYYSSI KRSGSQAHEE RLQEVEAEVA

STGTIHLRES ELVFGAKQAW

181 RNAPRCVGRI QWGKLQVFDA RDCSSAQEMF TYICNHIKYA

TNRGNLRSAI TVFPQRAPGR

241 GDFRIWNSQL VRYAGYRQQD GSVRGDPANV EITELCIQHG

WTPGNGRFDV LPLLLQAPDE

301 APELFVLPPE LVLEVPLGAP HTGVVRGPGL RWYALPAVSN

MLLEIGGLEF SAAPFSGWYM

361 STEIGTRNLC DPHRYNILED VAVCMDLDTR TTSSLWKDKA

AVEINLAVLH SFQLAKVTIV

421 DHHAATVSFM KHLDNEQKAR GGCPADWAWI VPPIYGSLPP

VFHQEMVNYI LSPAFRYQPD

481 PWKGSATKGA GITRKKTFKE VANAVKISAS LMGTLMAKRV

KATILYASET GRAQSYAQQL

541 GRLFRKAFDP RVLCMDEYDV VSLEHEALVL VVTSTFGNGD

PPENGESFAA ALMEMSGPYN

601 SSPRPEQHKS YKIRFNSVSC SDPLVSSWRR KRKESSNTDS

AGALGTLRFC VFGLGSRAYP

661 HFCAFARAVD TRLEELGGER LLQLGQGDEL CGQEEAFRGW

AKAAFQASCE TFCVGEEAKA

721 AAQDIFSPKR SWKRQRYRLS AQAEGLQLLP GLIHVHRRKM

FQATVLSVEN LQSSKSTRAT

781 ILVRLDTAGQ EGLQYQPGDH IGISAPNRPG LVEALLSRVE

DPPPPTESVA VEQLEKGSPG

841 GPPPSWVRDP RLPPCTVRQA LTFFLDITSP PSPRLLRLLS

TLAEEPSEQQ ELETLSQDPR

901 RYEEWKLVRC PTLLEVLEQF PSVALPAPLL LTQLPLLQPR

YYSVSSAPNA HPGEVHLTVA

961 VLAYRTQDGL GPLHYGVCST WLSQLKTGDP VPCFIRGAPS

FRLPPDPYVP CILVGPGTGI

1021 APFRGFWQER LHDIESKGLQ PHPMTLVFGC RCSQLDHLYR

DEVQDAQERG VFGRVLTAFS

1081 REPDSPKTYV QDILRTELAA EVHRVLCLER GHMFVCGDVT

MATSVLQTVQ RILATEGDME

1141 LDEAGDVIGV LRDQQRYHED IFGLTLRTQE VTSRIRTQSF

SLQERHLRGA VPWAFDPPGP

1201 DTPGP

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) цельной молекулы эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

1 MGNLKSVAQE PGPPCGLGLG LGLGLCGKQG PATPAPEPSR

APASLLPPAP EHSPPSSPLT

61 QPPEGPKFPR VKNWEVGSIT YDTLSAQAQQ DGPCTPRRCL

GSLVFPRKLQ GRPSPGPPAP

121 EQLLSQARDF INQYYSSIKR SGSQAHEQRL QEVEAEVAAT

GTYQLRESEL VFGAKQAWRN

181 APRCVGRIQW GKLQVFDARD CRSAQEMFTY ICNHIKYATN

RGNLRSAITV FPQRCPGRGD

241 FRIWNSQLVR YAGYRQQDGS VRGDPANVEI TELCIQHGWT

PGNGRFDVLP LLLQAPDDPP

301 ELFLLPPELV LEVPLEHPTL EWFAALGLRW YALPAVSNML

LEIGGLEFPA APFSGWYMST

361 EIGTRNLCDP HRYNILEDVA VCMDLDTRTT SSLWKDKAAV

EINVAVLHSY QLAKVTIVDH

421 HAATASFMKH LENEQKARGG CPADWAWIVP PISGSLTPVF

HQEMVNYFLS PAFRYQPDPW

481 KGSAAKGTGI TRKKTFKEVA NAVKISASLM GTVMAKRVKA

TILYGSETGR AQSYAQQLGR

541 LFRKAFDPRV LCMDEYDVVS LEHETLWLVV TSTFGNGDPP

ENGESFAAAL MEMSGPYNSS

601 PRPEQHKSYK IRFNSISCSD PLVSSWRRKR KESSNTDSAG

ALGTLRFCVF GLGSRAYPHF

661 CAFARAVDTR LEELGGERLL QLGQGDELCG QEEAFRGWAQ

AAFQAACETF CVGEDAKAAA

721 RDIFSPKRSW KRQRYRLSAQ AEGLQLLPGL IHVHRRKMFQ

ATIRSVENLQ SSKSTRATIL

781 VRLDTGGQEG LQYQPGDHIG VCPPNRPGLV EALLSRVEDP

PAPTEPVAVE QLEKGSPGGP

841 PPGWVRDPRL PPCTLRQALT FFLDITSPPS PQLLRLLSTL

AEEPREQQEL EALSQDPRRY

901 EEWKWFRCPT LLEVLEQFPS VALPAPLLLT QLPLLQPRYY

SVSSAPSTHP GEIHLTVAVL

961 AYRTQDGLGP LHYGVCSTWL SQLKPGDPVP CFIRGAPSFR

LPPDPSLPCI LVGPGTGIAP

1021 FRGFWQERLH DIESKGLQPT PMTLVFGCRC SQLDHLYRDE

VQNAQQRGVF GRVLTAFSRE

1081 PDNPKTYVQD ILRTELAAEV HRVLCLERGH MFVCGDVTMA

TNVLQTVQRI LATEGDMELD

1141 EAGDVIGVLR DQQRYHEDIF GLTLRTQEVT SRIRTQSFSL

QERQLRGAVP WAFEPPGSDT

1201 NSP

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) синтетического пептида эндотелиальной NO-синтазы, выбранного, например, из следующих аминокислотных последовательностей:

1192-1195

PWAF

1189-1192:

GAVP

1185-1205:

RHLRGAVPWAF DPPGPDTPGP

1194-1205:

AF DPPGPDTPGP

1186-1196:

HLRGAVPWAF D

1186-1205:

HLRGAVPWAF DPPGPDTPGP

Полученные, таким образом, буферные растворы каждого компонента поликлональных антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и к эндотелиальной NO-синтазе с концентрацией 0,5-5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0-3,0 мг/мл используют в качестве матричных (первичных) растворов для последующего приготовления активированных-потенцированных форм лекарственного средства.

Активированную-потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части упомянутого матричного раствора в 9 частях (для десятичного разведения D), или в 99 частях (для сотенного разведения С), или в 999 частях (для тысячного разведения М) нейтрального растворителя в сочетании с многократным (не менее 10 раз) вертикальным встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В.Швабе. "Гомеопатические лекарственные средства". М., 1967 г., с.14-29).

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения С 12 одну часть упомянутого матричного раствора антител к С-концевому фрагменту Р -субъединицы рецептора инсулина (или к эндотелиальной NO-синтазе) с концентрацией 3,0 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя (преимущественно 15% этилового спирта) и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют полученное 1-е сотенное С1 разведение. Из 1-го сотенного С1 разведения приготовляют 2-е сотенное разведение С2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение С12. Таким образом, 12-е сотенное разведение С 12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно в разных емкостях 12 раз 1-й части исходного матричного раствора антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина с концентрацией 3,0 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, приготовленный разведением матричного раствора в 100¹² раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений С 30 и С 200.

При использовании в качестве компонента (например, активированной-потенцированной формы антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина) смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, каждое разведение компонента (например, С 12, С 30, С 200) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно до получения С 11, С 29, С 199) и затем вносят в одну емкость по одной части каждого полученного предпоследнего разведения и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно с 97 частями для сотенного разведения). При этом получают активированную-потенцированную форму антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина в сверхмалой дозе, приготовленную сверхразведением матричного раствора соответственно в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных разведений С 12, С 30 и С 200 по гомеопатической технологии.

Возможно использование каждого компонента в виде смеси других различных разведений по гомеопатической технологии, например десятичных и/или сотенных (С 12, С 30, С 100; С 12, С 30, С 50; D 20, С 30, С 100 или D 20, С 30, М 100 и т.д.), эффективность которых определяют экспериментально.

При потенцировании вместо встряхивания в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять внешнее воздействие ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Для получения заявленной фармацевтической композиции водные или водно-спиртовые растворы действующих компонентов смешивают, преимущественно, в объемном соотношении 1:1 и используют в жидкой лекарственной форме.

Заявленная фармацевтическая композиция может быть использована и в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество частиц нейтрального носителя (например, изомальта), насыщенного путем пропитывания до насыщения смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной-потенцированной формой антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие, преимущественно, изомальт, кросповидон и магния стеарат.

Для получения твердой оральной формы заявленного лекарственного средства производят в установке кипящего слоя (например, типа «Huttlin Pilotlab» производства компании Huttlin GmbH) орошение до насыщения вводимых в псевдоожиженный-кипящий слой частиц нейтрального вещества - изомальта - предварительно полученной смесью водных или водно-спиртовых растворов активированных-потенцированных форм антител к С-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и к эндотелиальной NO-синтазе, преимущественно, в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг изомальта (1:5-1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°С. Расчетное количество 9,5÷30 масс. частей высушенных частиц, насыщенных активированной-потенцированной формой антител, загружают в смеситель и смешивают с 60÷88 масс. частями ненасыщенного чистого изомальта. Затем в эту смесь добавляют 1÷5 масс. частей кросповидона с 0,1÷1 масс. часть стеарата магния. Полученную таблеточную массу равномерно перемешивают и таблетируют прямым сухим прессованием (например, в таблет-прессе Korsch - XL 400) с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг, преимущественно массой 250 мг.

Возможно приготовление твердой оральной формы заявленного лекарственного средства путем насыщения нейтрального носителя - лактозы (10÷34 масс. частей от общей массы загрузки или от массы твердой оральной формы) водным или водно-спиртовым раствором активированных-потенцированных форм антител к С-концевому фрагменту Р-субъединицы рецептора инсулина и к эндотелиальной NO-синтазе с последующим смешиванием с микрокристаллической целлюлозой β-10 масс. частей от общей массы загрузки), «ненасыщенной» чистой лактозы (25÷85 масс. частей от общей массы загрузки), стеаратом магния (0,1÷1 масс. частей от общей массы загрузки). Полученную таблеточную массу равномерно перемешивают и таблетируют прямым сухим прессованием (например, в таблет-прессе Korsch - XL 400) с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг, преимущественно массой 300 мг.

В качестве нейтрального носителя возможно также использование глюкозы, сахарозы, мальтозы, крахмала, изомальтозы, изомальта и других моносахаридов, олигосахаридов и полисахаридов, использующихся в производстве фармацевтических препаратов, а также технологических смесей на основе последних с добавлением лубрикантов, дезинтегрантов, связующих и красителей.

Предпочтительно заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать по 1-2 таблетке 2-4 раза в день.

В нижеприведенных Примерах 1 и 2 изучали влияние активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно-очищенных на антигене антител к С-концевому фрагменту β-субъединице рецептора инсулина в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз (AT РИ), активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно-очищенных на антигене антител к эндотелиальной NO-синтазе в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз (AT NOS), и заявленного лекарственного средства в виде композиции, содержащей активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно-очищенных на антигене антител к С-концевому фрагменту β-субъединице рецептора инсулина в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, и активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно-очищенных на антигене антител к эндотелиальной NO-синтазе в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз (AT РИ+AT NOS) на уровень глюкозы в плазме крови крыс со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом. Нарушение толерантности к глюкозе (снижение ее утилизации организмом) является одним из важнейших показателей в лечении и диагностике сахарного диабета.

Согласно критериям ВОЗ сахарный диабет (I и II типов) характеризуется повышением уровня глюкозы в крови (гипергликемией) и нарушением толерантности к глюкозе. Последнее может быть вызвано нарушением секреции инсулина и/или уменьшением чувствительности к инсулину периферических тканей. Чувствительным методом оценки нарушения толерантности тканей организма к глюкозе является глюкозотолерантный тест, основанный на динамической оценке способности тканей организма утилизировать глюкозу.

Пример 1

В исследовании использовано 150 крыс-самцов линии Wistar (вес на начало исследования 250-300 г, возраст 3,5-4 месяца). 10 крыс были интактными (группа контроля). Остальным внутривенно вводили стрептозотоцин в дозе 50 мг/кг для моделирования экспериментальной модели сахарного диабета. Введение стрептозотоцина приводило к значительному повышению глюкозы в плазме крови крыс по сравнению с интактными животными (18 ммоль/л vs 3,5 ммоль/л, р<0,05). Через 72 часа после введение стрептозотоцина крыс с уровнем глюкозы в плазме крови не менее 12 ммоль/л разделили на 7 групп (по 20 крыс в каждой), которым в течение 21 дня вводили дистиллированную воду (в/ж, 1 раз в сутки, 5 мл/кг/сут), инсулин («Инсулин», Актрапид, Дания) (п/к, 2 раза в сутки, 8 Ед/кг/сут), росиглитазон («Роглит», Гедеон Рихтер, Венгрия) (препарат сравнения, в/ж, 2 раза в сутки, 8 мг/кг/сут), AT РИ (в/ж, 1 раз в сутки, 2,5 мл/кг/сут), AT РИ+AT NOS (в/ж, 1 раз в сутки, 5 мл/кг/сут), росиглитазон и инсулин (по схемам, соответствующим изолированному введению каждого препарата), AT РИ+AT NOS и инсулин (по схемам, соответствующим изолированному введению каждого препарата). На 7, 14 и 21 день введения препаратов у крыс натощак измеряли уровень глюкозы в плазме крови ферментативным (глюкозооксидазным методом) с использованием наборов «Глюкоза ФКД» (Россия). Через 14 дней введения препаратов вводили глюкозу перорально (1 г/кг) и проводили тест толерантности к глюкозе.

В группе, которой вводили препарат AT РИ, через 7, 14 и 21 день уровень глюкозы был ниже, чем в контроле на 22-28%, однако отличия не достигали уровня достоверности. Заявленное лекарственное средство AT РИ+AT NOS было более эффективным - снижение уровня глюкозы на 14 и 21 день исследования достигло 47% и 42% соответственно (р<0,05 относительно контроля). Препарат сравнения росиглитазон также снижал уровень глюкозы на 14 и 21 день исследования, причем достоверный эффект был зарегистрирован только на 14 день исследования (36%, р<0,05 относительно контроля). Инсулин, введенный в ½ эффективной дозы (подобрана в предварительном исследовании) наиболее эффективно снижал уровень глюкозы на всех сроках наблюдения (до уровня интактного контроля) (Фиг.1). Следует учитывать, что в исследовании применяли инсулин короткого действия и глюкозу в плазме крови измеряли через 1 час после его введения, что и определило выраженный эффект ½ дозы инсулина на уровень глюкозы крови, на фоне которого в данные сроки исследования не удалось выявить эффект комбинированного применения инсулина с росиглитазоном или AT РИ+AT NOS.

На Фиг.2 показано влияние тестируемых препаратов на 14 день введения на показатели площади под кривыми концентрация - время (AUC) в тесте толерантности к глюкозе у крыс со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом.

Таким образом, в тесте пероральной сахарной нагрузки (14 день введения препаратов) наиболее эффективно увеличивали толерантность к глюкозе заявленное лекарственное средство AT РИ+AT NOS и инсулин при изолированном введении. Росиглитазон снижал площадь под кривой концентрация-время (увеличивал толерантность к глюкозе), однако его эффективность не была достоверной относительно группы интактного контроля (Фиг.2).

Пример 2

В исследовании было использовано 36 крыс-самцов линии Goto-Kakizaki (вес на начало исследования 250-280 г, возраст 10-12 недель). Крысы этой линии характеризуются спонтанным развитием инсулиннезависимого диабета. Животные были разделены на группы (по 12 крыс в каждой), которые в течение 28 дней получали дистиллированную воду (в/ж, 1 раз в день, 5 мл/кг, группа 1), AT РИ (в/ж, 2,5 мл/кг, группа 2), AT РИ+AT NOS (в/ж, 5 мл/кг, группа 3). Уровень глюкозы в плазме крови определяли с помощью анализатора глюкозы (Beckman, Fullerton, Калифорния, США) до начала введения препаратов и на 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 день введения препаратов. На 28 день крысам давали глюкозу перорально (1 г/кг) и проводили тест толерантности к глюкозе.

Введение AT РИ приводило к достоверному (р<0,05) снижению уровня глюкозы в плазме крови крыс, однако применение заявленного лекарственного средства AT РИ+AT NOS было более эффективным (р<0,001 vs контроль) (Фиг.3).

На Фиг.4 показано влияние тестируемых препаратов на 28 день введения на показатели площади под кривыми концентрация - время (AUC) в тесте толерантности к глюкозе у крыс со спонтанным инсулиннезависимым сахарным диабетом.

Таким образом, введение AT РИ приводило к увеличению толерантности к глюкозе (недостоверному снижению на 44% площади под кривой концентрация-время относительно контроля). В то же время снижение этого показателя, вызванное введением заявленного лекарственного препарата AT РИ+AT NOS, составило 62% и было достоверным (р<0,05 относительно контроля).

Пример 3

Для экспериментального изучения заявленного технического решения были использованы таблетки массой 250 мг в виде фармацевтической композиции, содержащей водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм (сверхмалые дозы - СМД) антител к С-концевому фрагменту бета-субъединицы рецептора инсулина (AT РИ) и к эндотелиальной NO-синтазе (AT NOS), нанесенные на изомальт в виде водно-спиртовой смеси гомеопатических разведений С 12, С30, С200 (комплексный препарат АТРИ+ATNOS).

В открытое несравнительное исследование эффективности и безопасности применения препарата AT РИ+AT NOS у больных с сахарным диабетом (СД) I типа включались пациенты с диагнозом СД I типа легкой и средней степени тяжести без признаков тяжелой макро- и микрососудистой патологии. После получения добровольного информированного согласия пациента на участие в клиническом исследовании проводилось начальное обследование с целью установления соответствия пациента критериям включения/исключения. До начала применения препарата проводился «отмывочный период» в течение 2 недель, на котором производилась оценка состояния пациентов (сбор жалоб, определение гликемии натощак, гликированного гемоглобина, суточного профиля гликемии, липидограммы, отмечалась эффективность и безопасность лечения). Исследование 12-недельное, основные этапы обследования проводились на неделях «отмывки», затем через 6 и 12 недель. У 4-х пациентов на неделе «отмывки» и в конце исследования проводится суточный мониторинг уровня гликемии с помощью системы суточного мониторирования гликемии CGMS. Система суточного мониторирования гликемии (CGMS) позволяет в течение трех суток контролировать уровень гликемии. Результаты исследования показывают, как изменяется уровень глюкозы в течение 3 суток, в зависимости от инсулинотерапии и образа жизни. Эти данные помогают выделять периоды высокого или низкого уровня глюкозы в зависимости от диеты, приема медикаментов или физической нагрузки. Система в графическом виде показывает минимальные значения гликемии 2,2 ммоль/л, максимальные до 22,2 ммоль/л, а также среднесуточное значение гликемии.

Пациенты с СД I типа, средней и легкой степени тяжести в стадии декомпенсации до включения и во время исследования получали стандартную инсулинотерапию в виде:

1. Инсулин длительного действия (Протафан, Лантус) в средних дозах от 12 до 26 ЕД/сутки.

2. Инсулин короткого действия (Апидра, Новорапид, Актропид) в средних дозах:

- утро от 8 до 10 ЕД/сутки;

- обед от 8 до 12 ЕД/сутки;

- ужин от 8 до 13 ЕД/сутки.

После подтверждения возможности пациента принять участие в исследовании пациент включался в исследование и получал в дополнение к стандартной терапии СД I типа комплексный препарат AT РИ+AT NOS в зависимости от степени тяжести и компенсации СД I типа в различных дозировках:

1. Четверо пациентов - по 1 таблетке 4 раза в день 8:00, 12:00, 18:00, 22:00.

2. Двое пациентов - по 1 таблетке 2 раза в день 8:00, 18:00.

На 3 и 8 неделях дополнительно контролировался гликемический профиль (восьмиточечный), проводились телефонные «визиты». Контроль клинического состояния осуществлялся еженедельно. В общей сложности пациент наблюдался в течение 14 недель.

В исследование были включены 6 пациентов, из которых закончили исследование 5 пациентов. Оценку гликемии проводили по суточному восьмиточечному тесту исходно, через 3, 6 и 12 недель лечения. Уровень гликированного гемоглобина определяли исходно и через 12 недель терапии.

Все пациенты, включенные в исследование с СД I типа, спустя 6 недель после приема исследуемого препарата отметили тенденцию к снижению суточной гликемии. У больных с СД I типа по данным восьмиточечного суточного профиля отметилось снижение гликемии, в среднем на 20%. Через 12 недель терапии гликированный гемоглобин снизился в среднем на 10-15% в сравнении с исходной величиной.

При анализе результатов мониторирования гликемии с помощью системы CGMS у всех пациентов, включенных в исследование, через 3 месяца после терапии препаратом AT РИ+AT NOS выявлены снижения среднесуточной гликемии и уменьшение колебаний минимума и максимума гликемии на 15-20% от исходного.

Хотелось бы отметить, что у одного пациента с сахарным диабетом I типа в стадии декомпенсации отмечалось выраженное снижение суточной гликемии на 48% (1 неделя - 8,0 ммоль/л, 12 неделя - 4,8 ммоль/л), в связи с чем была произведена коррекция инсулинотерапии (снижение суточной дозы инсулина короткого действия на 8 ЕД/сут). Динамика средних значений уровня глюкозы крови и гликированного гемоглобина представлена на Фиг 5.

В ходе исследования не было зарегистрировано нежелательных явлений и серьезных нежелательных явлений, что может говорить о безопасности препарата.

Пример 4

Для экспериментального изучения эффективности заявленного технического решения были использованы таблетки массой 250 мг в виде фармацевтической композиции, содержащей водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм (сверхмалые дозы - СМД) антител к С-концевому фрагменту бета-субъединицы рецептора инсулина (AT РИ) и к эндотелиальной NO-синтазе (AT NOS), нанесенные на изомальт в виде водно-спиртовой смеси гомеопатических разведений С12, С30, С200 (AT РИ+AT NOS).

В открытое несравнительное исследование эффективности и безопасности применения препарата AT РИ+AT NOS у больных с сахарным диабетом (СД) II типа включались пациенты с диагнозом СД II типа легкой и средней степени тяжести без признаков тяжелой макро- и микрососудистой патологии, получающие средние терапевтические дозы Метформина. После получения добровольного информированного согласия пациента на участие в клиническом исследовании проводилось начальное обследование с целью установления соответствия пациента критериям включения/исключения. При подтверждении возможности принять участие в исследовании пациент получал в дополнение к стандартной терапии СД II типа комплексный препарат AT РИ+AT NOS по 1 таблетке 4 раза в день. До начала применения препарата проводился «отмывочный период» в течение 2 недель, на котором производилась оценка состояния пациентов (сбор жалоб, определение гликемии натощак, гликированного гемоглобина, суточного профиля гликемии, липидограммы, определения показателей индекса инсулинорезистентности (HOMA-IR)), отмечалась эффективность и безопасность лечения. Исследование 12-недельное, основные этапы обследования проводились на неделях «отмывки», затем через 6 и 12 недель. У 4-х пациентов на неделе «отмывки» и в конце исследования проводится суточный мониторинг уровня гликемии с помощью системы суточного мониторирования гликемии (CGMS). На 3 и 8 неделях дополнительно контролировался гликемический профиль (восьмиточечный), проводились телефонные «визиты». Контроль клинического состояния осуществлялся еженедельно. В общей сложности пациент наблюдался в течение 14 недель.

В группу больных с СД II типа в стадии декомпенсации было включено одиннадцать пациентов. Один пациент выбыл из исследования по собственному желанию. Два пациента закончили исследование через 12 недель, остальные пациенты продолжали лечение.

У больных с СД II типа по данным восьмиточечного суточного профиля отметилось снижение гликемии в среднем на 20% к 6-й неделе. На 12-й неделе отметилось снижение гликированного гемоглобина в среднем на 15-19% от исходного.

Показатели OAK (эритроциты, гемоглобин, лейкоциты, тромбоциты, лейкоцитарная формула, СОЭ), липидограмма, ЭКГ, печеночные тесты (АЛТ, ACT, билирубин и его фракции) на протяжении 12 недель у всех пациентов оставались в пределах нормы. Инсулинорезистентность, определяемая по HOMA-IR тесту, снизилась в среднем на 17 -19% от исходного.

При оценке профиля безопасности на протяжении 12 недель серьезных нежелательных явлений выявлено не было. Со стороны функциональной активности печени отклонений также не выявлено.

Динамика средних значений уровня глюкозы крови и гликированного гемоглобина представлена на Фиг.6.

Пример 5

Больной X., 74 года. Страдает сахарным диабетом II типа. В течение ряда лет получает манинил (действующее вещество - глибенкламид, производитель Berlin - Chemie) no 5 мг 2 раза в день. Несмотря на сахароснижающую терапию на правой стопе 3 года назад образовалась глубокая некротическая язва - до пяточной кости. Дважды госпитализировался в хирургический стационар, но лечение не привело к значительному улучшению. Затем к терапии был добавлен заявленный лекарственный препарат в виде таблетки массой 250 мг на основе фармацевтической композиции, содержащей водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм (сверхмалые дозы - СМД) антител к С-концевому фрагменту бета-субъединицы рецептора инсулина (AT РИ) и к эндотелиальной NO-синтазе (AT NOS), нанесенные на изомальт в виде водно-спиртовой смеси гомеопатических разведений С 12, С 30, С 200 (AT РИ+AT NOS), который больной получал на фоне манинила, доза которого была через 4 недели уменьшена до 1 таблетки (5 мг) на ночь. На фоне лечения нормализовался уровень глюкозы в крови: с 8-10 ммоль/л до 5-6 ммоль/л. В течение месяца язва на стопе претерпела обратное развитие, очистилась от некроза, произошла эпителизация. При осмотре язвы нет, на пяточной кости интенсивное белое шелушение, круглое, диаметром 3,5 см.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается лечения сахарного диабета. Для этого вводят фармацевтическую композицию, содержащую активированные-потенцированные формы антител к рецептору инсулина и к эндотелиальной NO-синтазе. Это обеспечивает эффективное лечение сахарного диабета за счет синергетического действия компонентов композиции на основные патогенетические механизмы заболевания - уменьшение резистентности к инсулину и снижение уровня глюкозы в крови. 5 н. и 15 з.п. ф-лы, 6 ил., 5 пр.

1. Фармацевтическая композиция для уменьшения резистентности к инсулину и для лечения сахарного диабета, содержащая активированную-потенцированную форму антител к рецептору инсулина, отличающаяся тем, что дополнительно включает в качестве усиливающего компонента активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что содержит активированную-потенцированную форму антител к C-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

3. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что активированную-потенцированную форму антител к C-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

4. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что выполнена в твердой лекарственной форме и содержит эффективное количество насыщенных активированной-потенцированной формой антител к C-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированной-потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе гранул нейтрального носителя и фармацевтически приемлемые добавки.

5. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что водные или водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм антител к C-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и к эндотелиальной NO-синтазе получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения из матричных растворов аффинно-очищенных антител к C-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и к эндотелиальной NO-синтазе с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

6. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что каждый из компонентов используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, приготовленных по гомеопатической технологии.

7. Фармацевтическая композиция по п.4, характеризующаяся тем, что фармацевтически приемлемые добавки включают изомальт, кросповидон и магния стеарат.

8. Способ уменьшения резистентности к инсулину, включающий введение в организм активированной-потенцированной формы антител к рецептору инсулина, отличающийся тем, что дополнительно одновременно и сочетанно вводят усиливающий компонент в виде активированной-потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе.

9. Способ лечения сахарного диабета, включающий введение в организм активированной-потенцированной формы антител к рецептору инсулина, отличающийся тем, что дополнительно одновременно и сочетанно вводят усиливающий компонент в виде активированной-потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе.

10. Способ лечения по п.9, отличающийся тем, что для лечения сахарного диабета I типа в организм вводят активированную-потенцированную форму антител к рецептору инсулина одновременно и сочетанно с активированной-потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе.

11. Способ лечения по п.9, отличающийся тем, что для лечения сахарного диабета II типа в организм вводят активированную-потенцированную форму антител к рецептору инсулина одновременно и сочетанно с активированной-потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе.

12. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что активированную-потенцированную форму антител к рецептору инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

13. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что в организм вводят фармацевтическую композицию в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащую активированную-потенцированную форму антител к β-субъединице рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что в организм вводят фармацевтическую композицию в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащую активированную-потенцированную форму антител к C-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

15. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что в организм вводят фармацевтическую композицию в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащую активированную-потенцированную форму антител к α-субъединице рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

16. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что, в организм вводят фармацевтическую композицию в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащую активированную-потенцированную форму антител к α-субъединице рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к β-субъединице рецептора инсулина в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе.

17. Способ лечения сахарного диабета инсулином и/или гипогликемическими препаратами, отличающийся тем, что в организм дополнительно вводят фармацевтическую композицию, содержащую активированную-потенцированную форму антител к рецептору инсулина, преимущественно к C-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина, и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

18. Способ по п.17, отличающийся тем, что активированную-потенцированную форму антител к C-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

19. Способ лечения по п.17 или 18, отличающийся тем, что тем, что фармацевтическую композицию используют в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащей смесь различных разведений антител к C-концевому фрагменту β-субъединицы рецептора инсулина в сочетании со смесью различных разведений антител к эндотелиальной NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии.

20. Способ снижения уровня глюкозы, включающий введение в организм активированной-потенцированной формы антител к рецептору инсулина, отличающийся тем, что дополнительно одновременно и сочетанно вводят усиливающий компонент в виде активированной-потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе.