СПОСОБ ПОСТМОРТАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ СИНДРОМА ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ Российский патент 2014 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к судебной медицине и биохимии и может быть использовано для установления причины смерти, обусловленной наличием синдрома эндогенной интоксикации.

Известен способ постмортальной диагностики эндогенной интоксикации [Морозов Ю.Е., Васильева Е.В., Лопатин О.Н. Средние молекулы в диагностике эндогенной интоксикации // Альманах судебной медицины. 2003, №6. С. 91-94] путем определения пептидов средней молекулярной массы в сыворотке крови скрининговым методом (с использованием трихлоруксусной кислоты для осаждения белков). При этом отмечается увеличение содержание пептидов средней молекулярной массы в сыворотке крови.

Недостатки прототипа: способ с использованием трихлоруксусной кислоты не позволяет полностью отделить пептиды средней молекулярной массы от пептидов высокой молекулярной массы, что приводит к недостаточной точности диагностики. Использование в качестве объекта сыворотки крови не всегда возможно, особенно при длительном постмортальном периоде ввиду гемолиза крови.

Технический результат: повышение точности, достоверности способа, возможность диагностики в течение длительного постмортального периода.

Указанные задачи достигаются путем дополнительного определения пептидов средней молекулярной массы (ПСММ) в стекловидном теле глаза и использования модифицированного способа определения ПСММ с использованием хлорной кислоты для осаждения белков и этанола для дополнительного осаждении высокомолекулярных пептидов (Камышников К.С. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика: Справочник: в 2 Т. Т. 1. - 2-е изд. - Мн.: Интерпресссервис, 2003. - 495 с. (С. 347-348). При содержании ПСММ более 0,50 г/л в стекловидном теле глаза и более 2,8 г/л в сыворотке крови определяют наличие синдрома эндогенной интоксикации.

Способ осуществляют следующим образом: стекловидное тело глаза забирают одноразовым шприцом в объеме не менее 2,0 мл путем прокола наружного угла глаза. Стекловидное тело перед исследованием центрифугируют при 6000 g 20 минут в пластиковой пробирке. Венозную кровь из бедренной вены трупа забирают одноразовым шприцом в объеме не менее 5,0 мл. Кровь центрифугируют для получения сыворотки при 400 g в течение 15-20 минут. Сыворотку и стекловидное тело обрабатывают добавлением равного количества 1,2 М хлорной кислоты для осаждения белков, центрифугируют сыворотку при 1600 g, а стекловидное тело при 5600-7000 g 20 мин. В отдельные пробирки отбирают аликвотное количество надосадочной жидкости и нейтрализуют добавлением 2 М карбоната калия в объемном соотношении 5:1. Затем вновь центрифугируют при 150-200 g в течение 3 мин. Вновь в отдельные пробирки отбирают аликвотное количество надосадочной жидкости и проводят осаждение высокомолекулярных примесей этанолом в объемном соотношении 1: 4, закрывают пробками, помещают в морозильную камеру бытового холодильника на 15-20 мин, затем центрифугируют 15 мин при 1600 g. Перед исследованием пробы разводят дистиллированной водой в 10 раз (1: 9). Измерение оптической плотности проводят на спектрофотометре (например СФ-46, СФ-2000, Россия) при длине волны 210 нм.

Расчет проводят по формуле:

$$C=D_{210}$$

С - концентрация пептидов средней молекулярной массы в образце (г/л);

D₂₁₀ - оптическая плотность образца при длине волны 210 нм;

30,45 - оптическая плотность раствора ангиотензина (1046 Д) в концентрации 1 мг/мл при указанных выше условиях измерения;

2 - коэффициент разведения хлорной кислотой;

1,2 - коэффициент разведения карбонатом калия; 5 - коэффициент разведения этанолом;

10 - коэффициент разведения дистиллированной водой;

Р - коэффициент дополнительного разведения.

(Камышников К.С. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика: Справочник: в 2 Т. Т. 1. - 2-е изд. - Мн.: Интерпресссервис, 2003. - 495 с. (С.347-348). Николайчик В.В., Моин В.М., Кирковский В.В. и др. Способ определения «средних молекул» // Лаб. Дело. 1991. №10. С.13-18).

Данная методика используется для определения ПСММ в сыворотке крови у живых лиц для диагностики эндогенной интоксикации. Для постмортальной диагностики используется впервые.

При содержании ПСММ в стекловидном теле более 0,50 г/л и в сыворотке крови более 2,8 г/л определяют синдром эндогенной интоксикации.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Умершая Б., жен., 58 лет, причина смерти - отравление неустановленным ядом. Скончалась в стационаре.

Содержание ПСММ в сыворотке крови - 6,01 г/л; в стекловидном теле глаза - 1,13 г/л.

В данном примере содержание ПСММ в сыворотке крови резко повышено по сравнению с показателями у живых людей (по литературным данным), в стекловидном теле глаза также отмечается высокое содержание ПСММ. Наличие синдрома эндогенной интоксикации обусловлено развитием почечной недостаточности.

Пример 3. Умерший М., муж., 41 лет, причина смерти - ожоговая болезнь. Скончался в стационаре.

Содержание ПСММ в сыворотке крови - 3,51 г/л; в стекловидном теле глаза - 0,50 г/л.

В данном примере содержание ПСММ в сыворотке крови резко повышено по сравнению с показателями у живых людей (по литературным данным), в стекловидном теле глаза относительно низкое содержание ПСММ. Наличие синдрома эндогенной интоксикации обусловлено массивным разрушением белковых структур.

Пример 3. Умерший К., муж., 56 лет, причина смерти - Хроническая ишемическая болезнь сердца.

Содержание ПСММ в сыворотке крови - 1,91 г/л; в стекловидном теле глаза

- 0,49 г/л.

В данном примере содержание ПСММ в сыворотке крови соответствует показателям у живых людей (по литературным данным), в стекловидном теле глаза - на границе по сравнению с показателями при эндогенной интоксикации. Наличия синдрома эндогенной интоксикации нет.

Пример 4. Умерший Б., муж., 40 лет. Причина смерти - острое отравление алкоголем (содержание этанола в крови 5,1‰, в моче - 5,2‰). Содержание ПСММ в сыворотке крови - 1,49 г/л; в стекловидном теле глаза - 0,24 г/л.

В данном примере содержание ПСММ как в сыворотке крови, так и в стекловидном теле глаза ниже по сравнению с показателями при эндогенной интоксикации. Наличия синдрома эндогенной интоксикации нет.

Параллельное определение пептидов средней молекулярной массы (ПСММ) в сыворотке крови и в стекловидном теле глаза было проведено от 8 трупов, с синдромом эндогенной интоксикации (причины смерти - почечная недостаточность, ожоговая болезнь). Содержание ПСММ в сыворотке крови составило 4,24±0,37 г/л (3,23-6,01 г/л), в стекловидном теле - 1,13±0,19 г/л (0,50-2,31 г/л).

Также было исследовано 14 трупов без наличия синдрома эндогенной интоксикации (причины смерти - ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, острое отравление алкоголем, механическая асфиксия в результате сдавления органов шеи петлей). Содержание ПСММ в сыворотке крови составило 1,82±0,19 г/л (0,38-2,79 г/л), в стекловидном теле - 0,30±0,03 г/л (0,11-0,49 г/л).

Исследуемый параметр - содержание пептидов средней молекулярной массы в стекловидном теле глаза - сохраняет свою значимость в течение длительного постмортального периода.

При наступлении смерти, обусловленной наличием синдрома эндогенной интоксикации, отмечается достоверно повышенное содержание пептидов средней молекулярной массы в стекловидном теле глаза (р<0,01) и в сыворотке крови у трупов без наличия синдрома эндогенной интоксикации (р<0,001).

Содержание ПСММ в стекловидном теле глаза более 0,50 г/л и в сыворотке крови более 2,8 г/л свидетельствует о наличии синдрома эндогенной интоксикации.

Изобретение относится к судебной медицине и биохимии и может быть использовано для установления причины смерти, обусловленной наличием синдрома эндогенной интоксикации. Сущность изобретения: определяют содержание пептидов средней молекулярной массы (ПСММ) модифицированным способом определения веществ группы средних молекул в биологических жидкостях в стекловидном теле глаза и сыворотке крови трупа. При содержании ПСММ в стекловидном теле более 0,50 г/л и в сыворотке крови более 2,8 г/л диагностируют синдром эндогенной интоксикации. Использование способа обеспечивает повышение точности, достоверности способа, возможность диагностики в течение длительного постмортального периода. 4 пр.

Способ постмортальной диагностики синдрома эндогенной интоксикации путем определения в сыворотке крови трупа пептидов средней молекулярной массы (ПСММ) с помощью осаждения белков отличающийся тем, что определяют ПСММ в сыворотке крови и в стекловидном теле глаза трупа модифицированным способом определения веществ группы средних молекул в биологических жидкостях, и при содержании ПСММ более 0,50 г/л в стекловидном теле глаза и более 2,8 г/л в сыворотке крови определяют наличие синдрома эндогенной интоксикации.