СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ОРГАНИЗМА, СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ОРГАНИЗМА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭТИОЛОГИИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ОРГАНИЗМА Российский патент 2010 года по МПК A61B10/00 G01N1/28 

Группа изобретений относится к исследованию физических свойств биологических жидкостей, а также к области медицины, в частности к диагностике, и может быть использована в клинической лабораторной практике для установления наличия эндогенной интоксикации, определения степени ее выраженности и этиологии.

Интоксикация - патологическое состояние, возникающее в результате действия на организм токсических веществ эндогенного или экзогенного происхождения. Соответственно различают экзогенные и эндогенные интоксикации.

Экзогенную интоксикацию могут вызвать многие вещества, относящиеся как к отдельным химическим элементам (например, тяжелые металлы, мышьяк), так и к различным классам химических соединений; токсины микроорганизмов, растений и животных.

Эндогенная интоксикация вызывается ядовитыми продуктами, образующимися при повреждении тканей (травмах, ожогах, лучевых поражениях), обширных воспалительных процессах различной этиологии, инфекционных болезнях, злокачественных новообразованиях и др. Она возникает при избыточном образовании и накоплении физиологически активных веществ (например, гормонов щитовидной железы при тиреотоксикозе), при нарушении выделительных процессов (уремическая интоксикация при почечной недостаточности). Причинами эндогенной интоксикации служат также патологические продукты метаболизма или недостаточное обезвреживание постоянно вырабатываемых в организме токсических веществ (например, аммиака, свободного билирубина, фенолов при заболеваниях печени; кетоновых тел при сахарном диабете); токсическими свойствами обладают продукты свободно-радикального окисления, образующиеся при многих патологических процессах. Тяжесть эндогенной интоксикации в значительной мере определяется также индивидуальной реактивностью организма, в частности функциональными возможностями детоксикационных механизмов (иммунной и выделительной систем, наружных и внутренних барьеров, систем эндогенной химической детоксикации, неспецифической защиты организма и др.). (Лабораторная диагностика синдрома эндогенной интоксикации/Методические рекомендации. Пермь. 2005 / Под редакцией д-ра медицинских наук, заслуженного деятеля науки РФ, проф. Корюкиной И.П., с.320).

Поэтому чрезвычайно актуальной является разработка новых способов диагностики эндогенной интоксикации, определения степени ее выраженности и установление природы интоксикации.

Наиболее достоверным способом выявления интоксикации организма в судебной медицине является гистохимическое исследование тканей методом замораживания кусочков органов углекислотой при помощи замораживающего микротома и окрашиванием гистопрепарата гематоксилином и эозином (Науменко В.Г., Митяева Н.А. Гистологический и цитологический методы исследования в судебной медицине / М., Медицина, 1980 г., с.305). При выявлении дистрофических изменений в ткани исследуемых органов, наличия отека или нарушений кровообращения диагностируют наличие интоксикации. Различные типы интоксикации характеризуются специфическими гистологическими признаками (Дифференциальная диагностика алкогольной и токсической кардиомиопатии, ишемической болезни сердца, острой алкогольной интоксикации // Информационно-методическое письмо Нижегородского областного Бюро судебно-медицинской экспертизы от 20 февраля 2006 года).

Однако данный способ имеет ряд недостатков. Самый существенный из них состоит в том, что он может применяться только для посмертной диагностики. Кроме того, для проведения такого исследования требуется достаточно длительное время, необходимое для приготовления и обработки гистологического среза.

Более десяти лет назад был предложен способ диагностики эндогенной интоксикации организма, включающий исследование биологических жидкостей, в том числе и сыворотки крови (Малахова М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации: Пособие для врачей. С-Пб, МАПО. - 1995. - С.33). Известный способ основан на определении ее субстрата - веществ низкой и средней молекулярной массы (ВН и СММ).

По современным представлениям (Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Лабораторные методы диагностики неотложных состояний. - М.: Медицина, 2002. - С.568; Добротина Н.А., Копытова Т.В. Эндоинтоксикация организма человека: методологические и методические аспекты // учебное пособие. Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского. Нижний Новгород, 2004. - С.72) различают четыре фазы развития эндогенной интоксикации, заключающиеся в перераспределении между биологическими средами веществ низкой и средней молекулярной массы (ВН и СММ) - основного субстрата эндогенной интоксикации.

В первой (латентной) фазе наблюдается повышение ВН и СММ в эритроцитах без значительного роста их концентрации в плазме. Происходит элиминация поступающих токсинов из очага интоксикации.

Во второй фазе эндогенной интоксикации концентрация ВН и СММ в эритроцитах значительно возрастает при умеренном повышении их концентрации в плазме. Это фаза накопления токсических продуктов, при которой их образование превышает элиминацию.

В третьей фазе (полного насыщения) имеет место максимальная концентрация ВН и СММ в эритроцитах; параллельно происходит повышение токсических веществ в плазме.

Четвертая фаза характеризуется нарастанием количества ВН и СММ в плазме, причем в эритроцитах из-за нарушения проницаемости мембраны их концентрация снижается. Это фаза необратимой декомпенсации систем и органов детоксикации.

За прототип предлагаемого способа оценки степени тяжести эндогенной интоксикации организма выбран известный способ, включающий исследование сыворотки крови с последующим осаждением белков и интегральным определением веществ низкой и средней молекулярной массы (Малахова М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации: Пособие для врачей. С-Пб, МАЛО. - 1995. - С.33).

Известный способ выполняют следующим образом.

В биологических субстратах - плазма, эритроциты, моча осаждают белки трихлоруксусной кислотой. Затем исследования проводят на спектрофотометре в ультрафиолетовом диапазоне с длиной волны 238-300 нм. Рассчитывают площадь под графиком во всех трех биологических жидкостях и устанавливают наличие эндогенной интоксикации и оценивают степень ее тяжести.

Разнообразие токсических веществ и их сочетаний не позволяет создать оптимальный метод клинического лабораторного анализа, поэтому рациональным является подход, когда одновременно определяется возможно большее количество ТХУ-неосаждаемых компонентов (веществ низкой и средней молекулярной массы как универсальных маркеров эндогенной интоксикации) одновременно в нескольких средах организма путем регистрации их в конкурентной зоне ультрафиолетового излучения. Интегральное определение значительного количества (более 200 наименований) веществ нормального и аномального метаболизма путем регистрации спектра веществ, оставшихся после удаления крупномолекулярных белков, позволяет оценить метаболический статус организма относительно определяемых ингредиентов. Расчет конечного результата производят путем интегрального измерения площади фигуры, образованной полученными значениями экстинкций для каждого типа определения ВН и СММ плазмы, эритроцитов, мочи путем умножения суммы полученных значений экстинкций на шаг длины волны. Оценивают суммарную площадь под кривой и путем сравнения результатов во всех трех биологических жидкостях устанавливают либо отсутствие интоксикации, либо одну из четырех ее стадий.

Однако данный способ имеет ряд недостатков. Для его осуществления требуется достаточно большое количество всех трех вышеупомянутых биологических сред (например, не менее 3 мл цельной крови), а также наличие дорогостоящего оборудования - как минимум спектрофотометра и центрифуги со скоростью вращения не ниже 3 тысяч об/мин. Кроме того, для проведения реакции необходима предварительная обработка биологических объектов.

Трихлоруксусная кислота, используемая в данной методике для осаждения белков, имеет свой спектр поглощения, который зачастую препятствует анализу. Так, оптическая плотность супернатанта эритроцитов на длине волны 238 нм может быть очень высокой и регистрируется спектрофотометрами не всех марок.

Способ не позволяет выявить особенностей различных патологических процессов. Вследствие осаждения крупномолекулярных пептидов и белков метод Малаховой не дает возможности оценить вклад в развитие эндогенной интоксикации иммунной, ферментативной систем, степень нарушения белкового обмена. С другой стороны, присутствие в общем пуле веществ супернатанта плазмы крови или эритроцитов большого количества липидов мешает определению выраженности изменений концентрации эндотоксинов.

Основным же недостатком данного способа является отсутствие четких методических рекомендаций по разделению на фазы эндогенной интоксикации. Это подразделение носит субъективный характер и зависит от суждений исследователя относительно нормы ВН и СММ. В то же время, существуют значимые различия в количестве ВН и СММ между полами, что также затрудняет оценку стадии интоксикации.

За прототип предлагаемого способа определения этиологии эндогенной интоксикации организма выбран известный способ определения типа интоксикации, включающий исследование сыворотки крови методом клиновидной дегидратации с последующим анализом структурного макропортрета дегидратированной капли (Шатохина С.Н., Шабалин В.Н. // Морфология биологических жидкостей человека - 2001 г. - М.: Хризостом, - C.118-123).

Известный способ осуществляют следующим образом.

Каплю сыворотки крови высушивают на горизонтально расположенном стекле при комнатной температуре в течение 18-24 часов, затем анализируют структурный макропортрет капли с помощью светового микроскопа. При повышенном содержании в крови белково-пептидных и белково-аминокислотных агрегаций в структурном макропортрете наблюдают «морщины» - особые концентрационные волны. При воспалительных процессах любого характера выявляют структуры типа языков Арнольда и ковров Серпинского. При нарушениях липидного обмена наблюдают эффект смазанности.

Авторы известного способа установили, что исследование биологических жидкостей с помощью метода клиновидной дегидратации позволяет осуществить раннюю диагностику патологических состояний на уровне молекулярных нарушений и своевременно предпринять адекватные меры.

Однако известный способ не позволяет подразделять интоксикацию на эндогенную и экзогенную. Кроме того, применяя его, затруднительно достоверно определить причину возникновения интоксикации. Согласно современным представлениям (Черний В.И., Новикова Р.И., Костенко В.С., Шраменко Е.К., Логвиненко Л.В. Применение эфферентных методов терапии при критических состояниях (методические рекомендации), 2007), по основному механизму развития выделяют следующие виды эндогенной интоксикации:

1. Обменная (продукционная) - развивается вследствие нарушения тканевых обменных процессов с изменением состава тканевой жидкости, лимфы и крови.

2. Ретенционная - является результатом задержки конечных или промежуточных продуктов нормального обмена (углекислота при гиповентиляции, компоненты желчи при механической желтухе, продукты азотистого обмена при почечной недостаточности).

3. Резорбционная - развивается вследствие поступления во внутреннюю среду организма продуктов распада тканей или содержимого кишечника, мочевого пузыря, раневой полости и т.п.

4. Интоксикация при инфекционных процессах - обусловлена воздействием бактериальных токсинов и отравлением продуктами распада тканей, поврежденных возбудителем инфекции.

Известный способ не позволяет подразделить интоксикацию по вышеприведенным причинам возникновения.

Задачей предлагаемой группы изобретений является

- повышение точности диагностики эндогенной интоксикации организма, ее степени и этиологии, позволяющей при минимальном количестве исследуемого материала достаточно быстро и достоверно проводить диагностику.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе диагностики эндогенной интоксикации организма, включающем исследование сыворотки (плазмы) крови, сыворотку (плазму) крови исследуют методом клиновидной дегидратации, при этом каплю сыворотки (плазмы) крови высушивают на горизонтально расположенном стекле при комнатной температуре в течение 18-24 часов, затем анализируют структурный макропортрет дегидратированной капли с помощью светового микроскопа и при наличии совокупности характерных особенностей в виде штриховых, параллельных, концентрических, многолучевых, закругленных и круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, морщин, линий Валнера и языков Арнольда диагностируют эндогенную интоксикацию.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе оценки степени тяжести эндогенной интоксикации организма путем исследования сыворотки (плазмы) крови, сыворотку (плазму) крови исследуют методом клиновидной дегидратации, при этом каплю сыворотки (плазму) крови высушивают на горизонтально расположенном стекле при комнатной температуре в течение 18-24 часов, затем анализируют структурный макропортрет дегидратированной капли с помощью светового микроскопа и степень тяжести эндогенной интоксикации определяют по наличию совокупности характерных особенностей в структурном макропортрете по десятибалльной шкале и по размеру площади, занимаемой указанными особенностями, при этом первую стадию эндогенной интоксикации определяют при наличии совокупности характерных особенностей в виде штриховых, концентрических, многолучевых, закругленных, круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, составляющих 3,79±0,83 баллов и занимающих не более 1/30 общей площади капли, вторую стадию устанавливают по наличию совокупности характерных особенностей в виде штриховых, параллельных, концентрических, многолучевых, закругленных, круглых трещин, трещин в виде рыбьей чешуи, в виде черной сети, составляющих 5,84±0,52 баллов и занимающих не более 1/20 общей площади дегидратированной капли, третью стадию определяют при наличии совокупности характерных особенностей в виде штриховых, параллельных, концентрических, многолучевых, закругленных, круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, составляющих 7,4±0,48 баллов и занимающих не более 1/10 общей площади капли, и четвертую стадию определяют по совокупности характерных особенностей, превышающих 8 баллов, и появлении в структурном макропортрете дегидратированной капли морщин, линий Валнера и языков Арнольда.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе определения этиологии эндогенной интоксикации организма, включающем исследование сыворотки крови методом клиновидной дегидратации и последующего анализа ее структурного макропортета, воспалительный характер эндогенной интоксикации определяют при наличии закругленных, круглых трещин в центральной зоне дегидратированной капли, при наличии трещин в виде черной сети в центральной зоне капли определяют некротический характер эндогенной интоксикации, нарушения липидного обмена определяют по выявлению трещин в виде рыбьей чешуи в промежуточной зоне капли, при наличии многолучевых трещин в центральной зоне капли определяют эндогенную интоксикацию, вызванную почечной недостаточностью, штриховые трещины присутствуют при всех типах эндогенной интоксикации.

Предлагаемая группа изобретений отвечает критериям изобретения «новизна» и «изобретательский уровень», так как в процессе проведения предварительных патентно-информационных исследований не выявлены источники патентной и научно-технической информации, которые бы порочили новизну изобретений. Проведенные ПИИ не выявили технических решений с существенными признаками предлагаемых способов.

Известен метод клиновидной дегидратации, который был разработан в Московском НИИ геронтологии (Шатохина С.Н., Шабалин В.Н. // Урология и нефрология - 1998 г. - №1. - С.19-23). В настоящее время он применяется для диагностики различных состояний, однако возможность его использования для диагностики эндогенной интоксикации, ее стадий и этиологии ранее известна не была и показана авторами данной заявки впервые.

Некоторые аномальные особенности описаны авторами метода клиновидной дегидратации для структурного макропортрета сыворотки крови при различных заболеваниях без связи их наличия с интоксикацией (В.Н.Шабалин, С.Н.Шатохина. Морфология биологических жидкостей человека. - М.: Хризостом, 2001. - 304 с.). Как маркеры интоксикации были выделены только «бляшки» и «морщины», то есть линии Валнера - структуры, известные из физики полимеров. Авторы метода считают появление языков Арнольда в фации плазмы крови связанным с наличием воспалительного процесса в организме. Но, по современным представлениям, любому воспалительному процессу всегда сопутствует эндогенная интоксикация. Кроме того, согласно нашим предыдущим исследованиям, языки Арнольда появлялись в краевой зоне высохшей капли сыворотки крови кардиологических больных, которым проводили восстановление сердечного ритма высокотоксичным алкалоидом-хинидином (Зубеева Г.Н., Мотылев И.М., Потехина Ю.П., Белова Л.М. Кристаллографический скрининг-метод в диагностике и лечении больных с мерцательной аритмией // Тезисы научно-практического симпозиума «Принципы и способы лабораторного обеспечения внебольничной помощи и актуальные проблемы лабораторной медицины», Москва, Клиническая лабораторная диагностика, 2001, №10, С.10; Зубеева Г.Н., Мотылев И.М., Зубеев П.С., Белова Л.М., Потехина Ю.П. Кристаллографические параметры плазмы крови у больных ИБС, осложненной мерцательной аритмией/Материалы ежегодной конференции ДиаМА «Актуальные проблемы деятельности диагностических центров в современных условиях», Иркутск, 19-21 сентября 2001 г., С.35; Зубеева Г.Н., Мотылев И.М., Белова Л.М., Потехина Ю.П. Кристаллографическое исследование плазмы крови у больных с мерцательной аритмией / Тезисы V Международного славянского конгресса по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца. VII Всероссийская конференция по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца, Санкт- Петербург, Вестник аритмологии, 2002, № 25, С.21). И, если перед началом лечения данные патологические особенности в фации сыворотки крови отсутствовали, то к концу второй недели применения препарата они появлялись в 100% случаев.

Авторами предлагаемой группы изобретений впервые был установлен новый вид трещин - трещины в виде рыбьей чешуи и трещины в виде черной сети. Впервые было доказано, что при наличии совокупности характерных особенностей в виде штриховых, параллельных, концентрических, многолучевых, закругленных и круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, морщин, линий Валнера и языков Арнольда диагностируют эндогенную интоксикацию.

Впервые было доказано, что количество патологических особенностей в структурном макропортрете дегидратированной капли сыворотки (плазмы) крови зависят от степени эндогенной интоксикации организма. Было выявлено, что особенности типа морщин, линий Валнера и языков Арнольда соответствуют четвертой, терминальной стадии эндогенной интоксикации, поскольку их появление свидетельствует уже о системном нарушении структуры полимера (Гуль В.Е. Структура и прочность полимеров. М., Химия, 1987, С.328).

Наличие других патологических особенностей (штриховых, концентрических, многолучевых, параллельных, закругленных и круглых трещин, а также трещин в виде рыбьей чешуи и черной сети) в фации сыворотки (плазмы) крови характерно для менее тяжелых состояний. Кроме того, авторы предлагаемой группы изобретений при оценке степени тяжести эндогенной интоксикации ввели такой существенный признак, как площадь, занимаемая характерными особенностями в структурном макропортрете дегидратированной капли. Впервые было доказано, что наличие аномальных особенностей фации сыворотки крови (которые за исключением морщин, линий Валнера и языков Арнольда являются патологическими модификациями трещин фации) связано с изменением конформации белков плазмы крови и их последующей структурной модификацией, вызванной воздействием различных субстратов эндогенной интоксикации. Данное положение подтверждается результатами корреляционного анализа и не противоречит современным научным представлениям.

Впервые было доказано, что характер патологических особенностей, появляющихся в структурном макропортрете высохшей капли сыворотки (плазмы) крови, определяется этиологией эндогенной интоксикации.

Предлагаемая группа изобретений обеспечивает при использовании следующий положительный эффект.

В ходе разработки предлагаемой группы изобретений экспериментальным путем была доказана необходимость и достаточность для определения наличия эндогенной интоксикации организма следующего диагностического критерия: наличие характерных патологических особенностей в дегидратированной капле сыворотки (плазмы) крови (при исследовании методом клиновидной дегидратации). К особенностям относят штриховые, параллельные, концентрические, многолучевые, закругленные, круглые трещины, трещины типа черная сеть, рыбья чешуя, а также морщины, линии Валнера и языки Арнольда.

Были исследованы и проанализированы образцы сыворотки крови от 56 трупов, доставленных в Нижегородское Областное Бюро СМЭ для проведения вскрытия. Из них 22 скончались от отравления наркотическими и сильнодействующими веществами, 17 - от различных заболеваний (ни алкоголя, ни наркотических веществ обнаружено не было), 11 трупов, у которых наличие наркотических веществ выявлено не было, но имело место достаточно высокое содержание этилового алкоголя (1,57-3,09‰ в крови и 1,07-3,55‰ в моче), а также 4 случая отравления неизвестным веществом, два случая отравления метиловым спиртом и угарным газом.

Также были исследованы и проанализированы образцы плазмы крови от 75 больных до и после лечения. Контрольной группой служили 11 практически здоровых человек. Параллельно с исследованием плазмы крови методом клиновидной дегидратации проводили изучение степени эндогенной интоксикации по методу Малаховой, показатели липидного обмена, АПТВ, С-реактивный белок, фибриноген, СОЭ, лейкоциты, интенсивность свободно-радикальных процессов (методом индуцированной хемилюминесценции - I max, S, tg2ά, а также уровень диеновых, триеновых конъюгатов и оснований Шиффа) и содержание окислительно-модифицированных белков плазмы крови.

В первой части исследовали кровь от трупов лиц с давностью наступления смерти 24-48 часов до момента вскрытия. Картины высохшей капли сыворотки крови получали методом клиновидной дегидратации. Параллельно проводили определение наличия интоксикации гистохимическим методом. Во всех изученных случаях наличие или отсутствие наркотиков, этилового алкоголя в организме подтверждалось данными судебно-химического исследования. Причину смерти устанавливал судебно-медицинский эксперт. Описание картины высохшей капли представляли в виде таблицы. Каплю подразделяли на три зоны, в каждой из них оценивали количество, расположение, форму и размер особенностей.

Для статистического анализа полученных результатов была сформирована электронная база данных, в которую вносили качественные и количественные признаки. Взаимосвязь параметров картины высохшей капли биологической жидкости с наличием интоксикации по данным гистологического анализа оценивали методом корреляционного анализа. Зависимость считалась статистически достоверной при коэффициенте корреляции больше 0,5.

Статистически достоверная взаимосвязь (коэффициент корреляции = 0,81) была обнаружена между наличием характерных особенностей в высохшей капли сыворотки крови и наличием интоксикации.

Во второй части проведенных исследований были изучены образцы плазмы крови практически здоровых людей и больных со следующими заболеваниями (табл.2).

Описание картин высохших капель плазмы осуществляли способом, описанным выше. Взаимосвязь параметров картины высохшей капли биологической жидкости с наличием интоксикации путем определения интегрального содержания ВН и СММ (методом Малаховой) оценивали методом корреляционного анализа. Зависимость считалась статистически достоверной при коэффициенте корреляции больше 0,5.

В высохших каплях плазмы крови контрольной группы наличия особенностей выявлено не было.

Статистически достоверная взаимосвязь (коэффициент корреляции=0,89) была обнаружена между общим количеством характерных особенностей в высохшей капле сыворотки крови со стадией эндогенной интоксикации, определяемой по методу Малаховой. При нарастании уровня интоксикации увеличивается и общее число патологических особенностей в высохшей капле плазмы крови (фиг.1) что соответствует росту концентрации веществ низкой и средней молекулярной массы в плазме крови (фиг.2).

Все вышеперечисленные аномальные особенности (за исключением морщин, линий Валнера и языков Арнольда) являются патологическими модификациями трещин высохшей капли плазмы крови. Ранее было доказано (Белова Л.М. Кристаллооптический анализ биологически активных продуктов пчелиной семьи // Диссертация на соискание степени к.б.н., Н.Новгород, 2002, 177 С.), что форма трещин в фации любого белоксодержащего раствора определяется структурной конформацией его молекулы. Следовательно, структуры типа штриховых, многолучевых, параллельных, концентрических, закругленных, круглых трещин, трещин в виде черной сети и рыбьей чешуи связаны с изменением конформации белков плазмы крови и их последующей структурной модификацией, вызванной воздействием различных субстратов эндогенной интоксикации.

Во всех изученных случаях при выявлении патологических особенностей в высохшей капле плазмы крови (75 человек с патологией) имеет место усиление свободно-радикальных процессов. Корреляционным анализом выявлена взаимосвязь между уровнями интенсивности эндогенной интоксикации, свободно-радикальных процессов, уровнем модифицированных белков и наличием аномальных особенностей.

При исследовании высохших капель плазмы крови больных людей выявлено, что при первой степени интоксикации (29 человек) количество особенностей незначительно - 3,79±0,83 (по десятибалльной шкале), причем не выявляются параллельные трещины, морщины, линии Валнера, языки Арнольда. При второй степени (32 человека) количество особенностей возрастает (до 5,84±0,52), отсутствуют морщины, линии Валнера, языки Арнольда. При третьей степени интоксикации (10 человек) общее количество особенностей еще более увеличивается (7,4±0,48), морщины, линии Валнера, языки Арнольда также не обнаруживаются. При четвертой стадии интоксикации (4 человека) общее количество особенностей максимально - более 8 по десятибалльной шкале, причем появляются особенности типа морщин, линий Валнера и языков Арнольда. Типы особенностей (за исключением параллельных трещин, морщин, линий Валнера, языков Арнольда) не зависят от стадии эндогенной интоксикации (табл.2). Обнаружена взаимосвязь формы особенностей с различными патологическими состояниями.

Нарушение липидного обмена у больных при ишемической болезни сердца проявляется в наличии особенностей в виде рыбьей чешуи в промежуточной зоне. В 85,7% случаев наличие этого типа патологических особенностей приходится на фации больных ИБС (фиг.3). Выявлена обратная корреляционная взаимосвязь между наличием этого типа особенностей в структурном макропортрете плазмы крови и уровнем триглицеридов и содержанием холестерина в липопротеидах низкой плотности.

Патологические особенности в виде черной сети в центральной зоне высохшей капли плазмы крови возникают при воздействии на белки плазмы крови токсичных веществ, образующихся при деструкции тканевых и клеточных структур организма. Эти особенности были выявлены при сахарном диабете, инфаркте миокарда и термической травме (фиг.4). В 60% случаев изученных заболеваний сахарным диабетом выявляется эта патологическая особенность.

Для воспалительных заболеваний, в частности ОРВИ, характерно наличие в центральной зоне высохшей капли плазмы крови закругленных и круглых трещин (80%) (фиг.5). Выявлена положительная корреляционная взаимосвязь между наличием круглых и закругленных трещин и содержанием лейкоцитов в плазме крови и отрицательная - с уровнем γ-глобулинов. Появление же такого типа особенностей при ишемической болезни сердца вероятно связано с полиэтиологическим характером данного заболевания (Danesh J., Appleby P., Peto R. Association of fibrinogen, C-reactive protein, albumin, or leukocyte count with coronary heart disease. Meta-analyses of prospective studies. JAMA 1998; 279: 1477-1482).

В отличие от вышеперечисленных особенностей морщины, линии Валнера и языки Арнольда появляются только при терминальной - четвертой стадии эндогенной интоксикации. Наличие этих образований свидетельствует о деструктивных процессах в материале полимера (Гуль В.Е. Структура и прочность полимеров. М., Химия, 1987, С.328), к которым, как известно, относятся и белки.

Предлагаемые способы просты в исполнении, не требуют дорогостоящего оборудования и реактивов, большого количества исследуемого материала (сыворотки или плазмы крови), что дает возможность в дальнейшем проводить другие виды общепринятых лабораторных исследований. Все это позволяет в течение небольшого отрезка времени объективно подтвердить заподозренное наличие интоксикации организма, определить степень тяжести и этиологию эндогенной интоксикации, помогая врачу скорректировать проводимое лечение или эксперту ответить на вопросы правоохранительных органов о возможной причине смерти.

Группа изобретений поясняется следующими графическими материалами.

С фиг.1 по фиг.5 - диаграммы.

На фиг.3-5 обозначено: - полемическая болезнь сердца (ИБС); - хронически обостряющаяся болезнь легких; - сахарный диабет; - ишемическая болезнь сердца, осложненная инфарктом миокарда; - вегетососудистая дистония; - термическая травма; - ОРВИ; - ИБС, осложненная хронически обостряющейся болезнью легких; - гипертоническая болезнь.

Фиг.1. Общее количество патологических особенностей в высохшей капле плазмы при различных стадиях эндоинтоксикации.

Фиг.2. Содержание веществ низкой и средней молекулярной массы в плазме крови при различных стадиях эндоинтоксикации.

Фиг.3. Распределение патологических особенностей типа «рыбья чешуя» высохшей капли плазмы крови по диагнозам.

Фиг.4. Распределение патологических особенностей типа «черная сеть» высохшей капли плазмы крови по диагнозам.

Фиг.5. Распределение патологических особенностей типа круглые трещины высохшей капли плазмы крови по диагнозам.

С фиг.6 по фиг.15 - изображения части высохшей капли сыворотки (плазмы) крови при различных патологиях (ув.×50).

На фиг.6-15 обозначено: 1 - штриховые трещины; 2 - параллельные трещины; 3 - языки Арнольда; 4 - концентрические трещины; 5 - линии Валнера; 6 - закругленные трещины, 7 - круглые трещины; 8 - трещины в виде черной сети; 9 - трещины в виде рыбьей чешуи; 10 - многолучевые трещины.

На фиг.6 показано изображение части высохшей капли сыворотки крови трупа гр-на А., умершего от рака поджелудочной железы с метастазами. Наблюдаются штриховые трещины, параллельные трещины, языки Арнольда.

На фиг.7 показано изображение части высохшей капли сыворотки крови трупа гр-на С., умершего от отравления морфином. Наблюдаются штриховые трещины, концентрические трещины.

На фиг.8 показано изображение части высохшей капли сыворотки крови трупа гр-на Ж., умершего от отравления морфином. Наблюдаются штриховые трещины, линии Валнера, языки Арнольда.

На фиг.9 показано изображение части высохшей капли плазмы крови гр-на О., 1968 г.р., практически здорового. Патологические особенности в высохшей капле плазмы отсутствуют.

На фиг.10 показано изображение картины капли плазмы крови больного ишемической болезнью сердца с первой стадией эндогенной интоксикации (определенной по методике Малаховой). Общее количество особенностей - 2. Наблюдаются штриховые трещины.

На фиг.11 показано изображение картины высохшей капли сыворотки крови больного ишемической болезнью сердца, осложненной хронически обостряющейся болезнью легких, вторая стадия эндогенной интоксикации (определенной по методике Малаховой). Общее количество особенностей - 6. Наблюдаются штриховые трещины, закругленные трещины, круглые трещины.

На фиг.12 показано изображение картины высохшей капли плазмы крови больной ишемической болезнью сердца, третья стадия эндогенной интоксикации (определенной по методике Малаховой). Общее количество особенностей - 8. Наблюдаются штриховые трещины, закругленные трещины, круглые трещины.

На фиг.13 показано изображение картины высохшей капли плазмы крови больной сахарным диабетом, первая стадия эндогенной интоксикации (определенной по методике Малаховой). Общее количество особенностей - 4. Наблюдаются штриховые трещины, трещины в виде черной сети.

На фиг.14 показано изображение картины высохшей капли плазмы крови больного ишемической болезнью сердца, первая стадия интоксикации (определенная по методике Малаховой). Общее количество особенностей - 4. Наблюдаются штриховые трещины, трещины в виде рыбьей чешуи.

На фиг.15 показано изображение картины высохшей капли плазмы крови больного почечной недостаточностью, четвертая стадия эндогенной интоксикации (определенная по методике Малаховой). Общее количество особенностей - 9. Наблюдаются штриховые трещины, многолучевые трещины, языки Арнольда.

Предлагаемые способы осуществляют следующим образом.

Кровь центрифугируют в течение 10 минут при 1000 об/мин. Затем на предметное стекло, специальным образом обработанное, расположенное строго горизонтально, наносят каплю исследуемой жидкости объемом 0,01 мл (10 мкл). При этом диаметр капли составляет около 5 мм. Делают 6 повторов для проверки достоверности и взаимной идентичности высохшей капли. Высушивание проводят при температуре 20-25°С и относительной влажности 65-70% вдали от нагревательных приборов и прямых солнечных лучей при минимальной подвижности окружающего воздуха. В процессе высыхания капля должна быть неподвижной. Продолжительность периода высыхания составляет 18-24 часов. Вид и структуру дегидратированной капли оценивают с помощью микроскопа в отраженном свете при увеличении 10×8. К особенностям относятся штриховые, параллельные, концентрические, многолучевые, закругленные, круглые трещины, трещины в виде рыбьей чешуи и черной сети, а также морщины, языки Арнольда и линии Валнера. Штриховые трещины отличаются от обычных более темным (черным) цветом и большей шириной, а также тем, что оканчиваются по краям треугольными расширениями с несколькими ответвлениями. Остальные трещины -особенности также характеризуются более темным (черным) цветом, большей шириной и аномальной формой. Языки Арнольда представляют собой множественные скопления треугольной формы на более темном фоне. Линии Валнера - характерные, соединяющиеся друг с другом морщины и складчатости. При обнаружении вышеуказанных особенностей в высохшей капле сыворотки (плазмы) крови диагностируют наличие эндогенной интоксикации организма.

Степень тяжести эндогенной интоксикации организма определяют по наличию совокупности характерных особенностей в структурном макропортрете по десятибалльной шкале и по размеру площади, занимаемой указанными особенностями, при этом первую стадию эндогенной интоксикации определяют при наличии совокупности характерных особенностей в виде штриховых, концентрических, многолучевых, закругленных, круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, составляющих 3,79±0,83 баллов и занимающих не более 1/30 общей площади капли, вторую стадию устанавливают по наличию совокупности характерных особенностей в виде штриховых, параллельных, концентрических, многолучевых, закругленных, круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, составляющих 5,84±0,52 баллов и занимающих не более 1/20 общей площади дегидратированной капли, третью стадию определяют при наличии совокупности характерных особенностей в виде штриховых, параллельных, концентрических, многолучевых, закругленных, круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, составляющих 7,4±0,48 баллов и занимающих не более 1/10 общей площади капли, и четвертую стадию определяют по совокупности характерных особенностей, превышающих 8 баллов, и появлении в структурном макропортрете дегидратированной капли морщин линий Валнера и языков Арнольда.

Для определения этиологии эндогенной интоксикации организма - воспалительный характер эндогенной интоксикации определяют при наличии закругленных, круглых трещин в центральной зоне дегидратированной капли, при наличии трещин в виде черной сети в центральной зоне капли определяют некротический характер эндогенной интоксикации, нарушения липидного обмена определяют по выявлению трещин в виде рыбьей чешуи в промежуточной зоне капли, при наличии многолучевых трещин в центральной зоне капли определяют эндогенную интоксикацию, вызванную почечной недостаточностью, штриховые трещины присутствуют при всех типах эндогенной интоксикации.

Примеры конкретного исполнения.

Пример 1. В Нижегородское бюро СМЭ доставлен труп гр-на А., акт от 09.04.07 г. Известно, что гр-н Е. скоропостижно умер дома. При исследовании предлагаемым способом было установлено, что в высохшей капле сыворотке крови имеет место большое количество особенностей: штриховых и параллельных трещин, а также языков Арнольда (фиг.6). Общее количество особенностей составило 9,33 баллов. Был поставлен диагноз - эндогенная интоксикация, 4-я стадия.

По заключению судебно-медицинского эксперта смерть наступила от рака поджелудочной железы с обширными метастазами в ткань печени и т.д. Гистохимическим методом выявлено наличие значительной интоксикации организма.

Пример 2. В Нижегородское Бюро СМЭ доставлен труп гр-на С., акт от 12.08.06 г. При наружном осмотре трупа обнаружены следы инъекций. При исследовании предлагаемым способом было установлено, что общее число особенностей в высохшей капле сыворотки крови весьма велико - 7,83 баллов по десятибалльной системе. Выявлены штриховые и концентрические трещины. Определена эндогенная интоксикации, 3-я стадия (фиг.7).

Судебно-химическим исследованием в моче трупа гр-на С. обнаружен морфин. По заключению судебно-медицинского эксперта смерть наступила от отравления морфином. Гистохимическим методом выявлено наличие интоксикации организма.

Пример 3. В Нижегородское Бюро СМЭ доставлен труп гр-на Ж., акт от 22.11.06 г. При наружном осмотре трупа обнаружены следы инъекций. При исследовании предлагаемым способом было установлено, что общее число особенностей в высохшей капле сыворотки крови весьма велико - 9,67 баллов. Обнаружены штриховые и концентрические трещины, линии Валнера и языки Арнольда (фиг.8). Выявлена эндогенная интоксикация, 4-я стадия.

Судебно-химическим исследованием в моче трупа гр-на Ж. обнаружен морфин. По заключению судебно-медицинского эксперта смерть наступила от отравления морфином. Гистохимическим методом выявлено наличие значительной интоксикации организма.

Пример 4. Гражданин О., 1968 г.р., не имеет хронических заболеваний в стадии обострения, не курит, не употребляет наркотические и сильнодействующие вещества, не злоупотребляет спиртным, бывший спортсмен. При морфологическом исследовании плазмы крови предлагаемым способом патологических особенностей в высохшей капле не обнаружено (фиг.9). Проведенные анализы отклонения от физиологической нормы не выявили.

Пример 5. Больная Г., 1925 г.р., проходила плановое лечение в 4 (кардиологическом) отделении клинической городской больницы № 5 г.Нижнего Новгорода. Больная страдает ишемической болезнью сердца, гипертонической болезнью 2 степени, клинико-функциональный класс 2, хронических заболеваний в стадии обострения не имеет. Жалоб при поступлении нет. При исследовании предлагаемой группой изобретений было установлено, что общее число особенностей в высохшей капле плазмы крови оценивается на 3,33 балла по десятибалльной системе. Обнаружены штриховые трещины в краевой и промежуточной зоне (фиг.10). Определена 1-я стадия эндогенной интоксикации. Диагноз подтвержден анализом концентрации веществ низкой и средней массы, проведенным по методике Малаховой.

Пример 6. Больной К., 1949 г.р., проходил плановое лечение в 4 (кардиологическом) отделении клинической городской больницы № 5 г.Нижнего Новгорода. Больной страдает ишемической болезнью сердца, в анамнезе артериальная гипертензия 1 стадия, сердечной недостаточностью 2 степени, клинико-функциональный класс 3, тахикардия. Курит на протяжении 30 лет по 5 сигарет в день. Обострение ХОБЛ - 1 раз в год. При исследовании плазмы крови предлагаемой группой изобретений было установлено, что общее число особенностей оценивается на 6,00 баллов по десятибалльной системе. Обнаружены штриховые трещины в краевой зоне капли, закругленные и круглые трещины в промежуточной и центральной зонах (фиг.11). Выявлена 2-я стадия эндогенной интоксикации организма инфекционного генеза. При определении степени эндогенной интоксикации по методу Малаховой также выявлена 2-я фаза.

Пример 7. Больная В., 1948 г.р., проходила лечение в 4-м (кардиологическом) отделении клинической городской больницы №5 г.Нижнего Новгорода. Больная страдает ишемической болезнью сердца, в анамнезе артериальная гипертензия 2-я стадия, стенокардия 3-я стадия. При поступлении больная жаловалась на утомляемость, головные боли, приступы загрудинных болей. При исследовании предлагаемой группой изобретений было установлено, что общее количество особенностей в высохшей капле плазмы крови оценивается на 7,50 баллов по десятибалльной шкале. Обнаружены штриховые трещины в краевой зоне капли, закругленные и круглые трещины в промежуточной и центральной зонах (фиг.12). Определена 3-я стадия эндогенной интоксикации инфекционного генеза. Поставленный диагноз подтвержден исследованием совокупной концентрации веществ низкой и средней молекулярной массы.

Пример 8. Больная В., 1946 г.р., находилась на лечении в Медицинском центре озонотерапии. Женщина страдает сахарным диабетом второго типа вторично инсулинозависимым. В анамнезе артериальная гипертензия 2-й стадии, узловой зоб. Больная ежедневно получает инсулин и антропид. При исследовании плазмы крови предлагаемой группой изобретений было установлено, что общее количество особенностей оценивается на 4,50 балла по десятибалльной шкале. Обнаружены штриховые трещины в краевой зоне и особенности в виде черной сети в центральной (фиг.13). Выявлена 1-я степень эндогенной интоксикации, резорбционный тип, вызванный наличием некротических процессов в организме. При определении степени эндогенной интоксикации по методу Малаховой также выявлена 1-я фаза.

Пример 9. Больной К., 1949 г.р., находился на плановом лечении в 4-м (кардиологическом) отделении городской клинической больницы №5. Больной страдает ишемической болезнью сердца, стенокардией 1-2 стадии, недостаток кровообращения 2-й стадии, переходящая блокада левой ножки пучка Гиса. При биохимическом исследовании выявлено нарушение липидного обмена. При исследовании плазмы крови методом клиновидной дегидратации было установлено, что общее количество особенностей в высохшей капле плазмы крови оценивается на 4,33 балла по десятибалльной шкале (фиг.14). В промежуточной зоне высохшей капли обнаружены особенности в виде рыбьей чешуи. Поставлен диагноз: 1-я стадия эндогенной интоксикации, обменный тип, вызванный нарушением липидного обмена. Выявлена первая стадия интоксикации (определенная по методике Малаховой).

Пример 10. Больная Д., 1946 г.р., проходила плановое обследование в Диагностическом областном центре г.Нижнего Новгорода. Больная страдает хронической почечной недостаточностью, ранее была проведена операция по пересадке ей донорской почки. Концентрация мочевины в крови - 20,8 ммоль/л (норма - до 8,3 ммоль/л), креатинина - 184 мкмоль/л (норма - до 97 мкмоль/л). При исследовании плазмы крови предлагаемой группой изобретений было установлено, что общее количество особенностей оценивается на 8,67 баллов по десятибалльной шкале (фиг.15). В краевой зоне выявлены штриховые трещины, языки Арнольда. В центральной зоне обнаружены многолучевые трещины. Диагноз: 4-я стадия эндогенной интоксикации, ретенционный тип, вызванный почечной недостаточностью. По методике Малаховой также выявлена четвертая стадия интоксикации.

Результаты показали, что с помощью вышеуказанной группы изобретений можно в короткие сроки объективно подтвердить заподозренную интоксикацию, определить степень ее выраженности, ее этиологию, таким образом, давая возможность врачу определить методику ведения данного больного или эксперту ответить на вопросы правоохранительных органов о возможной причине смерти.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к диагностике. Для выявления эндогенной интоксикации организма исследуют сыворотку или плазму крови методом клиновидной дегидратации и при наличии особенностей из ряда: штриховых, параллельных, концентрических, многолучевых, закругленных и круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, морщин, линий Валнера и языков Арнольда диагностируют эндогенную интоксикацию. Для оценки степени тяжести эндогенной интоксикации организма определяют наличие совокупности характерных особенностей по десятибалльной шкале и по размеру площади, занимаемой указанными особенностями. Воспалительный характер эндогенной интоксикации определяют при наличии закругленных, круглых трещин в центральной зоне дегидратированной капли. При наличии трещин в виде черной сети в ее центральной зоне определяют некротический характер эндогенной интоксикации. Нарушения липидного обмена определяют по выявлению трещин в виде рыбьей чешуи в промежуточной зоне. При наличии многолучевых трещин в центральной зоне определяют эндогенную интоксикацию, вызванную почечной недостаточностью. Способ повышает точность диагностики эндогенной интоксикации организма. 3 н.п. ф-лы, 15 ил., 2 табл.

1. Способ выявления эндогенной интоксикации организма, включающий исследование сыворотки или плазмы крови, отличающийся тем, что сыворотку или плазму крови исследуют методом клиновидной дегидратации, при этом каплю сыворотки или плазмы крови высушивают на горизонтально расположенном стекле при комнатной температуре в течение 18-24 ч, затем анализируют структурный макропортрет дегидратированной капли с помощью светового микроскопа и при наличии особенностей из ряда: штриховых, параллельных, концентрических, многолучевых, закругленных и круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, морщин, линий Валнера и языков Арнольда диагностируют эндогенную интоксикацию.

2. Способ оценки степени тяжести эндогенной интоксикации организма путем исследования сыворотки или плазмы крови, отличающийся тем, что по п.1 выявляют эндогенную интоксикацию и степень ее тяжести определяют по наличию совокупности характерных особенностей в структурном макропортрете по десятибалльной шкале и по размеру площади, занимаемой указанными особенностями, при этом первую стадию эндогенной интоксикации определяют при наличии совокупности характерных особенностей в виде штриховых, концентрических, многолучевых, закругленных, круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, составляющих 3,79±0,83 баллов и занимающих не более 1/30 общей площади капли, вторую стадию устанавливают по наличию совокупности характерных особенностей в виде штриховых, параллельных, концентрических, многолучевых, закругленных, круглых трещин, трещин в виде рыбьей чешуи, в виде черной сети, составляющих 5,84±0,52 баллов и занимающих не более 1/20 общей площади дегидратированной капли, третью стадию определяют при наличии совокупности характерных особенностей в виде штриховых, параллельных, концентрических, многолучевых, закругленных, круглых трещин, трещин в виде черной сети, в виде рыбьей чешуи, составляющих 7,4±0,48 баллов и занимающих не более 1/10 общей площади капли, и четвертую стадию определяют по совокупности характерных особенностей, превышающих 8 баллов, и появлении в структурном макропортрете дегидратированной капли морщин, линий Валнера и языков Арнольда.

3. Способ определения этиологии эндогенной интоксикации организма, включающий исследование сыворотки или плазмы крови, отличающийся тем, что по п.1 выявляют эндогенную интоксикацию с наличием штриховых трещин и воспалительный характер эндогенной интоксикации определяют при наличии закругленных, круглых трещин в центральной зоне дегидратированной капли, при наличии трещин в виде черной сети в ее центральной зоне определяют некротический характер эндогенной интоксикации, нарушения липидного обмена определяют по выявлению трещин в виде рыбьей чешуи в промежуточной зоне, при наличии многолучевых трещин в центральной зоне определяют эндогенную интоксикацию, вызванную почечной недостаточностью.