ПРОИЗВОДНЫЕ КОМПЛЕКСА МЕТАЛЛ-САЛЕН И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2014 года по МПК C07F15/02 C12N9/50 A61K31/295 A61K38/00 A61K38/43 A61K47/48 

Область техники, к которой относится настоящее изобретение

Настоящее изобретение относится к производным комплекса металл-сален и к способу получения производных комплекса металл-сален.

Известный уровень техники

Комплекс железо-сален, который известен как металлический катализатор, известен как комплекс металл-сален. Заявителем было установлено, что сам по себе комплекс железо-сален обладает магнитными свойствами и, кроме того, обладает противоопухолевым действием; и было сделано предположение, что указанный комплекс железо-сален можно направить к пораженному сайту мишени, и фармакологические эффекты указанного комплекса железо-сален можно сконцентрировать локально путем введения комплекса железо-сален человеку или животному и последующего создания внешнего магнитного поля вокруг организма человека/животного.

Кроме того, заявитель выяснил, что молекулы лекарственных средств можно направлять к пораженному участку тканей с помощью магнитного поля, осуществляя связь комплекса железо-сален с молекулами лекарственных средств. Указанный комплекс железо-сален раскрыт в японской выложенной заявке на патент (Kokai) Публикация № 2009-173631, в японской выложенной заявке на патент (Kokai) Публикация № 2009-196913, в японской выложенной заявке на патент (Kokai) Публикация № 2009-196914, в японской выложенной заявке на патент (Kokai) Публикация № 2009-256232, в японской выложенной заявке на патент (Kokai) Публикация № 2009-256233, и в японской выложенной заявке на патент (Kokai) Публикация № 2009-274962.

Кроме того, в японской выложенной заявке на патент (Kokai) Публикация № 2009-287949, заявитель предлагает способ определения антител или антигенов, позволяющий отделить связанный антиген или антитело от свободного ангигена или антитела, используя магнитное поле, путем соединения антигена и антитела с указанным комплексом железо-сален, используя реакцию биотин-авидин.

Список ссылок

Патентная литература

[Патентная литература 1] Японская выложенная заявка на патент (Kokai) Публикация № 2009-173631,

[Патентная литература 2] Японская выложенная заявка на патент (Kokai) Публикация № 2009-196913,

[Патентная литература 3] Японская выложенная заявка на патент (Kokai) Публикация № 2009-196914,

[Патентная литература 4] Японская выложенная заявка на патент (Kokai) Публикация № 2009-256232,

[Патентная литература 5] Японская выложенная заявка на патент (Kokai) Публикация № 2009-256233,

[Патентная литература 6] Японская выложенная заявка на патент (Kokai) Публикация № 2009-274962.

[Патентная литература 7] Японская выложенная заявка на патент (Kokai) Публикация № 2009-287949

Сущность изобретения

Однако описанная выше обычная технология не позволяет обеспечить достаточное связывание между комплексом металл-сален и, например, молекулой лекарственного средства, антигеном и антителом, и характеризуется проблемой выхода и стабильности производного комплекса металл-сален. Таким образом, целью настоящего изобретения является создание производного комплекса металл-сален, характризующегося превосходным выходом и стабильностью, и создание способа получения такого производного комплекса металл-сален.

Для достижения вышеуказанной цели настоящее изобретение характеризуется тем, что оно является: производным комплекса металл-сален, полученным в результате обеспечения связывания функциональной молекулы, состоящей из по меньшей мере одного фермента, антитела, антигена, пептида, аминокислоты, олигонуклеотида, белка, нуклеиновой кислоты и молекулы лекарственного средства, с комплексом металл-сален через по меньшей мере одну дисульфидную связь, эфирную связь, сложноэфирную связь и амидную связь; и способом получения такого производного комплекса металл-сален. Связывание комплекса металл-сален и функциональной молекулы предпочтительно происходит через сшивающий агент, предназначенный для создания сшивки между ними.

Говоря более конкретно, настоящее изобретение характеризуется тем, что оно представляет собой производное комплекса металл-сален, представленное формулой A-B-C (где A: представляет собой комплекс металл-сален; B: представляет собой зону связи, включающую по меньшей мере одну дисульфидную связь, эфирную связь, сложноэфирную связь и амидную связь; C: представляет собой функциональную молекулу, состоящую из по меньшей мере одного фермента, антитела, антигена, пептида, аминокислоты, олигонуклеотида, белка, нуклеиновой кислоты и молекулы лекарственного средства).

Предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения состоит в том, что зона связывания (B) включает молекулу сшивающего агента для создания сшивки между комплексом металл-сален (A) и функциональной молекулой (C), причем комплекс металл-сален (A) и указанная молекула сшивающего агента связаны вместе дисульфидной связью, эфирной связью, сложноэфирной связью или амидной связью, и указанная молекула сшивающего агента и указанная функциональная молекула (C) связаны вместе дисульфидной связью, эфирной связью, сложноэфирной связью или амидной связью.

Указанный комплекс металл-сален (A) конкретно не ограничен и, например, представлен следующей формулой (I).

По меньшей мере один из a-h представляет собой "-B-C" и остальное представляет собой водород или произвольный заместитель. Указанный заместитель может быть любым заместителем, способным образовывать зону связи с указанной молекулой сшивающего агента и/или указанной функциональной молекулой, и может быть, например, по меньшей мере одной из гидроксильных групп, карбоксильных групп и SH групп. Например, мономер, как представлено формулой (I), или полимер, включая димер, где 'часть' атома металла взаимосвязана с каждым из них непосредственно или через другой атом (такой как фермент).

M представляет собой атом металла, такого как Fe, Cr, Mn, Co, Ni, Mo, Ru, Rh, Pd, W, Re, Os, Ir, Pt, Nd, Sm, Eu или Gd.

Зона дисульфидной связи (B) возникает в результате образования связи между SH группой, введенной в качестве заместителя в указанный комплекс металл-сален (A), и SH группой указанной функциональной молекулы (C) или возникает в результате образования связи между SH группой указанного комплекса металл-сален (A) или указанной функциональной молекулы (C) и SH группой молекулы сшивающего агента.

Зона эфирной связи (B) возникает в результате образования связи между гидроксильной группой, введенной в качестве заместителя в указанный комплекс металл-сален (A), и гидроксильной группой указанной функциональной молекулы (C), или возникает в результате образования связи между гидроксильной группой указанного комплекса металл-сален (A) или указанной функциональной молекулы (C) и гидроксильной группой молекулы сшивающего агента.

Зона сложноэфирной связи (B) возникает в результате образования связи между гидроксильной группой или карбоксильной группой, введенной в качестве заместителя в указанный комплекс металл-сален (A), и карбоксильной группой и гидроксильной группой указанной функциональной молекулы (C) или возникает в результате образования связи между гидроксильной группой или карбоксильной группой указанного комплекса металл-сален (A) или указанной функциональной молекулы (C) и карбоксильной группой или гидроксильной группой указанной функциональной молекулы (C).

Зона амидной связи (B) возникает в результате образования связи между амидной группой или карбоксильной группой, введенной в качестве заместителя в указанный комплекс металл-сален (A), и карбоксильной группой или амидной группой указанной функциональной молекулы (C), или возникает в результате образования связи между карбоксильной группой или амидной группой указанного комплекса металл-сален (A) или указанной функциональной молекулы (C) и амидной группой и карбоксильной группой указанной функциональной молекулы (C).

Положительные эффекты изобретения

Производные комплекса металл-сален, которые характеризуются хорошим выходом и стабильностью, и состоят из комбинации функциональной молекулы, такой как молекула лекарственного средства, и комплекса металл-сален, можно получить в соответствии с настоящим изобретением, как раскрыто выше.

Предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения

Зона дисульфидной связи (B) включает, например, молекулу сшивающего агента следующей формулы (II).

Указанный комплекс металл-сален (A) связывается с "∙О-" в (II) и дисульфидная группа (-S-S-), которая связывается с указанной функциональной молекулой (C), связывается с по меньшей мере одним из i и j.

Другой пример связывающего агента в зоне дисульфидной связи (B) имеет следующее строение (III).

Указанный комплекс металл-сален (A) связывается "∙C(О)-" в (III), и дисульфидная группа, которая связывается с указанной функциональной молекулой (C), связывается с по меньшей мере одним из i и j.

Другой связывающий агент в зоне дисульфидной связи (B) имеет следующее строение (IV).

Указанный комплекс металл-сален (A) связывается с "∙СН₂-" в (IV), и дисульфидная группа, которая связывается с указанной функциональной молекулой (C), связывается с по меньшей мере одним из i и j.

В предпочтительном варианте, где указанная функциональная молекула (C), такая как фермент, непосредственно связана с указанным комплексом металл-сален, причем указанный комплекс металл-сален и молекула агента, способствующего конденсации, могут быть дегидратированы и конденсированы с образованием их активного сложного эфира (промежуточное соединение), и аминогруппу указанной функциональной молекулы (3) можно заставить взаимодействовать с полученным активным эфиром, тем самым замещая молекулу агента, способствующего конденсации активного эфира, образуя амидную связь, и связывая указанный комплекс металл-сален с компонентом мишени через амидную связь. Этот процесс представлен в следующей схеме реакции.

В вышеописанных обстоятельствах, N,N'-дициклогексилкарбодиимид (DCC) представляет собой молекулу дегидратирующего конденсирующего агента и N-гидроксисукцинимид (HONSu) представляет собой молекулу агента, способствующего конденсации.

Вышеуказанную молекулу агента, способствующего конденсации (HONSu), можно использовать в качестве молекулы сшивающего агента для связывания указанного комплекса металл-сален (A) с указанной функциональной молекулой (C). Указанный комплекс металл-сален и молекулу агента, способствующего конденсации, конденсируют и SH группа молекулы агента, способствующего конденсации, и SH группа указанной функциональной молекулы взаимодействуют друг с другом, в результате чего происходит образование дисульфидной связи и связывание указанного комплекса металл-сален и указанной функциональной молекулы вместе через дисульфидную связь.

Указанный комплекс металл-сален содержит функциональную группу для конденсации с функциональной группой молекулы сшивающего агента, в по меньшей мере одной из вышеуказанных a-h боковых цепей, так что он может быть конденсирован с молекулой сшивающего агента. Например, указанный комплекс металл-сален содержит функциональную группу (карбоксильную группу или гидроксильную группу) для дегидратации и конденсации с гидроксильной группой молекулы сшивающего агента, в по меньшей мере одной из вышеуказанных a-h боковых цепей так, чтобы указанный комплекс металл-сален мог быть конденсирован с указанной молекулой сшивающего агента (молекулой агента, способствующего конденсации: HONSu)).

Примеры указанных молекул сшивающего агента (молекул агента, способствующего конденсации) включают следующие:

Карбодиимидные конденсирующие агенты:

диизопропилкарбодиимид (DIPC);

1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид(EDC=WSCI);

гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (WSCI•HCl); и

дициклогексилкарбодиимид (DCC)

Фторфосфатные конденсирующие агенты:

О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуронийгексафторфосфат;

O-бензотриазол-1-ил-N,N,N',N'-тетраметилуронийгексафторфосфат;

бензотриазол-1-илокситрис-пирролидинофосфонийгексафторфосфат; и

бензотриазол-1-илтрис(диметиламино)фосфонийгексафторфосфат (BOP).

Другие:

дифенилфосфорилазид (DPPA).

Примеры вышеуказанных агентов, способствующих конденсации, включают следующие.

N-гидрокси поливалентные имиды карбоновой кислоты:

N-гидроксисукцинимид (HONSu); и

имид N-гидрокси-5-норборнен-2,3-дикарбоновой кислоты (HONB).

N-гидрокситриазолы:

1-гидроксибензотриазол(HOBt).

Другие:

3-гидрокси-4-оксо-3,4-дигидро-1,2,3-бензотриазин (HO Obt);

2-гидроксиимино-2-этилцианоацетат, эфир;

p-нитрофенол (HONp); и

пентафторфенол (HOPfp).

Соотношение указанного комплекса металл-сален, агента, способствующего конденсации и конденсирующего агента может быть, например, следующим:

комплекс металл-сален: агент, способствующий конденсации и конденсирующий агент: = 1:1 до 2:1 до 2.

Факт образования связи между компонентом мишени и указанным комплексом металл-сален можно подтвердить, используя масс-спектрометрию. Образование амидной связи и дисульфидной связи можно подтвердить, используя масс-спектрометрию и ИК спектроскопию.

Примеры

Примеры получения комплексов металл-сален

Комплекс металл-сален, включающий аминогруппу в качестве заместителя, получают, как раскрыто далее.

Смесь 4-нитрофенола (25 г, 0,18 моль), гексаметилентетрамина (25 г, 0,18 моль) и полифосфорной кислоты (200 мл) перемешивают в течение 1 часа при 100°C. Затем полученную смесь вводят в 500 мл этилацетата и 1 л воды и перемешивают до полного растворения. После того, как дополнительно добавляют к раствору 400 мл этилацетата, полученный раствор разделяется на две фазы, и водную фазу удаляют, а оставшееся соединение дважды промывают основным растворителем и сушат над безводным MgSO₄, получая 17 г соединения 2 (57% выход).

Соединение 2 (17 г, 0,10 моль), уксусный ангидрид (200 мл) и серную кислоту (минимально: примерно 15 мл) перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивают в течение 0,5 часа в ледяной воде (2 л) для осуществления гидролиза. Полученный раствор фильтруют и сушат на воздухе, получая порошок белого цвета. Полученный порошок перекристаллизовывают из раствора, содержащего этилацетат, получая 24 г соединения 3 (выход 76%) в форме кристаллов белого цвета.

Смесь угля (2,4 г) с нанесенным 10% палладием, соединения 3 (24 г, 77 ммоль) и метанола (500 мл) восстанавливают в течение ночи в восстанавливающей атмосфере водорода (1,5 атм). После завершения процесса восстановления полученный продукт фильтруют, получая соединение 4 (21 г) в виде масла коричневого цвета.

Соединение 4 (21 г, 75 ммоль) и ди(трет-бутил)дикарбонат (18 г, 82 ммоль) перемешивают в течение ночи в безводном дихлорметане (DCM) (200 мл) в атмосфере азота. Полученный раствор оставляют выпариваться в вакууме, и затем растворяют в метаноле (100 мл). Затем добавляют гидроксид натрия (15 г, 374 ммоль) и воду (50 мл), и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем раствор охлаждают, фильтруют, промывают водой и сушат в вакууме, получая в результате соединение коричневого цвета. Полученное соединение дважды обрабатывают с помощью флеш-хроматографии, используя силикагель, получая 10 г соединения 6 (выход 58%).

Соединение 6 (10 г, 42 ммоль) вводят в 400 мл безводного этанола, полученную смесь кипятят с обратным холодильником и добавляют несколько капель этилендиамина (1,3 г, 21 ммоль) при перемешивании в течение 0,5 часа в 20 мл безводного этанола. Полученный смешанный раствор помещают в контейнер со льдом, где он охлаждается и перемешивается в течение 15 минут. Затем смесь промывают 200 мл этанола, фильтруют и сушат в вакууме, получая 8,5 г (выход 82%) соединения 7.

Примеры образования связи между комплексом железо-сален и белком (дисульфидной связи)

СТАДИЯ 1:

Соединение 7A

Соединение 8

Соединение 8 получают по способу Manfred T. Reetz, Martin Rentzsch, Andreas Pletsch, Matthias Maywald, Peter Maiwald, Jerome j.-P. Peyralans, Andrea Maichele, Yu Fu, Ning Jiao, Frank Hollmann, Regis Mondiere и Andreas Taglieber, 'Direct evolution of enantioselective hybrid catalysis: a novel concept in asymmetric catalysis,' Tetrahedron 63 (2007) 6404-6414.

СТАДИЯ 2:

Соединение 7A (134 мг, 0,338 ммоль), соединение 8 (122 мг, 0,721 ммоль), молекулу сшивающего агента, диизопропилкарбодиимид (170 мкмоль), агент дегидратации с конденсацией и NaHCO₃ (75 мг; 0,89 ммоль) переносят в раствор, в котором 0,1 M N,N-4-диметиламинопиридин растворен в ТГФ (в тетрагидрофуране) (20 мл), и полученный раствор перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Полученный раствор смешивают с раствором, в котором этилацетат и гексан смешаны в соотношении 1:1, и полученный раствор обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем (20 г), получая в результате соединение 9 (желтого цвета, 115 г, выход 62%).

Соединение 9

СТАДИЯ 3:

Соединение 9 (17 мг, 31 мкмоль) и FeCl₃ (11 мг) помещают в метанол (4 мл) и перемешивают в течение 16 часов на воздухе при комнатной температуре, получая в результате соединение коричневого цвета. Затем полученное соединение сушат в вакууме. Полученное соединение разбавляют 400 мл дихлорметана, дважды промывают насыщенным солевым раствором, сушат над безводным Na₂S0₄ и затем сушат в вакууме, получая в результате соединение 10 (18 мг, выход 90%).

Соединение 10

СТАДИЯ 4

Соединение 10, белок, полученный от Sigma-Aldrich (папаин-лиофилизат, 10 мг), и L-цистеин (10 мг) помещают в воду (H₂O, 1 мл) и перемешивают в течение 30 минут. Затем полученный раствор перемешивают с фосфатным буфером (300 мкл, 1 M) при pH=7,01. Через шесть часов после перемешивания получают соединение 11 и соединение 12 (папаин связывается с SH группами в них обоих).

Соединение 11

Соединение 12

Комплекс железо-сален, включающий карбоксильную группу, получают в соответствии с вышеуказанными стадиями, используя 3-гидроксибензойную кислоту в качестве исходного материала. Затем осуществляют реакцию взаимодействия полученного комплекса железо-сален, N'-дициклогексилкарбодиимида (DCC) и гидроксисукцинимида (HONSu), получая активный сложный эфир; и когда белок (папаин-лиофилизат), который представляет собой мишеневое вещество, подвергают взаимодействию с активным эфиром, указанный белок замещает гидроксисукцинимид и связывается с указанным комплексом железо-сален амидной связью. Образование амидной связи подтверждено с помощью ИК-спектроскопии.

Изобретение относится к производному комплекса металл-сален. Комплекс представлен как А-В-С, где А: комплекс металл-сален; В: зона связи, включающая по меньшей мере одну дисульфидную связь; и С: функциональная молекула, состоящая из по меньшей мере одного из ферментов, антител, антигенов, пептидов, аминокислот, олигонуклеотидов, белков, нуклеиновых кислот и молекул лекарственного средства. Зона связи (В) включает молекулу сшивающего агента для образования сшивки между указанным комплексом металл-сален (А) и указанной функциональной молекулой (С). Указанный комплекс металл-сален (А) и указанная молекула сшивающего агента связаны вместе через по меньшей мере одну дисульфидную связь; и указанная молекула сшивающего агента и указанная функциональная молекула (С) связаны вместе через по меньшей мере одну дисульфидную связь. Зона дисульфидной связи (В) возникает в результате образования связи между SH группой, введенной в качестве заместителя в указанный комплекс металл-сален (А), и SH группой указанной функциональной молекулы (С), или возникает в результате образования связи между SH группой указанного комплекса металл-сален (А) или указанной функциональной молекулы (С) и SH группой молекулы сшивающего агента. Также предложен способ получения производного комплекса металл-сален. Изобретение позволяет получить производное комплекса металл-сален, характеризующееся превосходным выходом и стабильностью. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 пр.

1. Производное комплекса металл-сален, представленное как А-В-С (А: комплекс металл-сален; В: зона связи, включающая по меньшей мере одну дисульфидную связь; и С: функциональная молекула, состоящая из по меньшей мере одного из ферментов, антител, антигенов, пептидов, аминокислот, олигонуклеотидов, белков, нуклеиновых кислот и молекул лекарственного средства),
причем зона связи (В) включает молекулу сшивающего агента для образования сшивки между указанным комплексом металл-сален (А) и указанной функциональной молекулой (С); причем указанный комплекс металл-сален (А) и указанная молекула сшивающего агента связаны вместе через по меньшей мере одну дисульфидную связь; и указанная молекула сшивающего агента и указанная функциональная молекула (С) связаны вместе через по меньшей мере одну дисульфидную связь; и
где зона дисульфидной связи (В) возникает в результате образования связи между SH группой, введенной в качестве заместителя в указанный комплекс металл-сален (А), и SH группой указанной функциональной молекулы (С), или возникает в результате образования связи между SH группой указанного комплекса металл-сален (А) или указанной функциональной молекулы (С) и SH группой молекулы сшивающего агента.

2. Производное комплекса металл-сален по п.1, в котором указанный комплекс металл-сален (А) представлен следующей формулой (I), где по меньшей мере один из a-h представляет собой "-В-С," остальное представляет собой водород или произвольный заместитель, и М представляет собой атом металла

3. Способ получения производного комплекса металл-сален путем предоставления возможности функциональной молекуле, состоящей из по меньшей мере одного из ферментов, антител, антигенов, пептидов, аминокислот, олигонуклеотидов, белков, нуклеиновых кислот и молекул лекарственного средства, связываться с комплексом металл-сален через по меньшей мере одну из дисульфидных связей,
где указанный комплекс металл-сален и молекулу агента, способствующего конденсации, дегидратируют и конденсируют для создания их активного сложного эфира, и осуществляют реакцию указанной функциональной молекулы и указанного активного сложного эфира, тем самым замещая молекулу агента, способствующего конденсации активного сложного эфира и связывая указанный комплекс металл-сален с функциональной молекулой и
где молекула агента, способствующего конденсации, представляет собой N-гидроксисукцинимид.