СОСТАВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЙ КОЖИ Российский патент 2015 года по МПК A61K35/74 A61K38/43 A61P17/00 

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к составу для лечения повреждений кожи, и может быть использовано в медицине, косметологии и ветеринарии.

Известно нанесение на кожные покровы активных соединений, имеющих как неорганическое, так и органическое происхождение, в составе различных мазей [Марченко Л.Г., Русак А.В., Смехова И.Е. Технология мягких лекарственных форм. (2004) СпецЛит, СПб.].

Первоначально биологические активные компоненты входили в состав мазей в виде неочищенных форм, совместно с характерными для источника происхождения примесями. Развитие науки, в частности химических и аптечных технологий, а также изменение вследствие этого парадигм медицины (превалирование использования в лекарственных формах очищенных индивидуальных веществ с доказанными эффектами), привело к тому, что предварительная очистка активного компонента для введения в состав мази стала желательным или даже обязательным этапом производства лекарства [Синев Д.Н., Марченко Л.Г., Синева Т.Д. Справочное пособие по аптечной технологии лекарств (2001). Изд. СПХФА, Невский Диалект, СПб.].

Очевидно, что введение в состав мази очищенного препарата активного белка или полипептида является наиболее общим и простым способом нанесения белка или полипептида на кожные покровы. Вместе с тем, широко используются способы нанесения растворов, содержащих активные компоненты, путем использования различных тампонов, повязок, губок, пропитанных этими растворами. Так известен [Патент RU 2400250 С1] способ получения лечебной композиции для нанесения ее на текстильный материал, заключающийся в том, что происходит приготовление полимерной основы путем введения биополимера при постоянном перемешивании в дистиллированную воду, выдерживание в течение 12-24 часов при температуре 22-30°С, введение лекарственных препаратов, перемешивание смеси в течение 45-90 минут на тихоходной мешалке. Предложено готовить полимерную основу с содержанием в биополимере не менее 90% частиц размером 20-250 нм, затем готовить контрольный образец композиции, измерять его вязкость, проводить ^ϒ-стерилизацию по стандартной схеме, после чего повторно измерять вязкость, и при падении вязкости не более чем на 15%, по сравнению с первоначальной, использовать эту композицию для нанесения на текстильный материал. При нанесении композиции на текстильный материал с целлюлозными волокнами, содержание последних должно составлять не менее 60%. Композиция обеспечивает эффективность лечения за счет пролонгированной адресной доставки лекарственного препарата к поврежденным областям. К недостаткам этого метода по нашему мнению можно отнести необходимость глубокой очистки активного препарата, перед использованием.

Также известен [Патент RU 2444375 С2; Заявка РСТ: US 20071017 2007/081586 Публикация заявки РСТ: WO 20080502 2008/051758] способ изготовления повязки, имеющей в своем составе, по меньшей мере, один белок, предусматривающий стадии нанесения, по меньшей мере, одного белка на повязку при помощи традиционных средств; и дополнительное воздействие на повязку, имеющую в своем составе белок, давлением, варьирующим от приблизительно 2500 до приблизительно 39500 фунтов на квадратный дюйм в течение времени от приблизительно 2 до приблизительно 6 секунд. Повязка проявляет улучшенные гемостатические свойства, свойства герметизации тканей и приклеивания. Способ также предполагает применение раствора очищенного белкового препарата, что усложняет его реализацию.

Вместе с тем известно, что компоненты бактериальных клеток различных штаммов способны оказывать терапевтическое действие за счет стимулирования местного иммунного ответа в покровных тканях. Так, известна [Патент RU 2169554 С1] мазь для лечения пиодермии, включающая лекарственное средство и мазевую основу, комплексный препарат, выделенный из цитоплазмы золотистого стафилококка и состоящий из нуклеиновых кислот (30-34%), белка (40-45%), полисахаридов (13-17%) и липидов (5-6%). Средство содержит, г: комплексный препарат, выделенный из цитоплазмы золотистого стафилококка, 0,1-0,6; ланолин 45,0; оливковое масло 15,0; глицерин 10,0; борная кислота 2,0; дистиллированная вода до 100,0. Мазь обеспечивает активное проникновение препарата в кожу, что усиливает лечебное действие и сокращает сроки лечения.

Известно применение в медицинских и косметологических целях препарата рекомбинантного пероксиредоксина 6 человека, также обладающего выраженным ранозаживляющим эффектом [Patent US 8,003,345 В2]. Кроме того, доказана эффективность применения препарата этого белка при широком спектре повреждений кожи: термические ожоги, химические ожоги, механические нарушения целостности кожного покрова. Недостатком предложенного решения является необходимость значительной очистки препарата белка.

Для производства биологически активной формы пероксиредоксина 6 человека известно применение рекомбинантной ДНК и плазмидного штамма-продуцента Е. coli [Патент RU 2250262]. К недостатку этого решения можно отнести использование плазмидного бактериального штамма, исключающее прямое использование микробной биомассы при приготовлении лекарственной формы.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому составу является коммерческий лекарственный препарат «Постеризан®» производства фирмы «Др. Каде Фармацевтическая Фабрика ГмбХ» (Германия). Препарат показан при лечении таких патологий, как геморрой, перианальный дерматит, анопапиллит, дерматиты новорожденных, анальные трещины и послеоперационные осложнения в аноректальной области. К несомненным достоинствам препарата относятся возможности применения у новорожденных, беременных и кормящих женщин. В РФ препарат недавно прошел очередную перерегистрацию (Номер рег. удост. Пат. №012331/01 от 07.11.2011)

[сайт Росминздрава http://grls.rosminzdrav.ru/Grls_View.aspx?idReg=26642&t=801a5121-fd66-4c43-9791-e46b5fb50bad дата обращения 15.05.2012]. Препарат представляет собой мазь для ректального и наружного применения белого с желтоватым оттенком цвета, с характерным запахом фенола. Активным компонентом выступают инактивированные клетки непатогенного штамма бактерии Е. coli. в количестве 330 млн микробных клеток на 1 г мази. В состав мази входит вспомогательные вещества: ланолин, вазелин, фенол (консервант). Препарат обладает выраженным ранозаживляющим эффектом. К недостатку известного состава можно отнести необходимость предварительной обработки клеток штамма, а также недостаточную эффективность лечения препаратом.

Изобретение решает задачу расширения ассортимента лекарственных средств для лечения повреждений кожи и повышения эффективности препарата.

Поставленная задача решается за счет того, что состав для лечения повреждений кожи, включающий лекарственное средство и мазевую основу, в качестве лекарственного средства содержит суспензию микробных клеток непатогенного бесплазмидного штамма Е. coli, производящих рекомбинантный пероксиредоксин 6 человека, идентичный по аминокислотной последовательности природному белку, а мазевая основа содержит вазелин, ланолин, физиологический раствор и фенол в качестве консерванта при следующем соотношении компонентов, г:

физиологический раствор, в котором ресуспендируют не менее 330 млн. микробных клеток штамма-продуцента - 150-200 мг,

фенол - 5 мг,

смесь 5 частей вазелина аптечного и 2 частей ланолина до 1 г.

Сущность изобретения заключается в том, что заявляемый состав содержит белок пероксиредоксина 6 человека в клетках бесплазмидного штамма-продуцента непатогенной бактерии Е. coli (регистрационный номер ВКМ В-1178). Заявляемый состав оказывает улучшенное по сравнению с аналогом лечебное воздействие в отношении повреждений кожи. Терапевтический эффект определяется совместным действием как рекомбинантного белка, так и компонентов клеток штамма-продуцента.

Изобретение иллюстрируют примеры.

Пример 1.

Получение бактериальной культуральной суспензии клеток Е. coli непатогенного бесплазмидного штамма-продуцента рекомбинантного пероксиредоксина 6 человека (регистрационный номер ВКМ В-1178).

Для получения бактериальной культуральной суспензии клеток штамма-продуцента в микробиологическую колбу объемом 750 мл, содержащую 200 мл среды Лурия-Бертани (состава г; пептон 10, дрожжевой экстракт 5, хлорид натрия 10, вода дистиллированная до 1 л) вносят 2 мл ночной культуры штамма, полученной по стандартному методу. Инкубацию производят с качанием 250 об/мин при 37°С в течение 7-12 часов до достижения оптической плотности 1,6 при ОД₆₀₀. Данные характеристики микробной культуры соответствуют для этого штамма нахождению примерно 3,3×10¹⁰ бактериальных клеток в 20 мл среды культивирования.

Пример 2.

Приготовление мази, содержащей в качестве активного компонента микробные клетки штамма-продуцента пероксиредоксина 6 человека и вспомогательные вещества: ланолин, вазелин, фенол (консервант).

Для приготовления мазевой основы производят совместное плавление 5 частей вазелина аптечного и 2 частей ланолина аптечного в фарфоровом или стеклянном стакане на водяной бане при температуре 65°С. Смешивание компонентов осуществляют в ходе плавления при помощи керамического шпателя или стеклянной палочки. Визуально однородную смесь охлаждают до 40-42°С.

Клетки бактерий, полученные по Примеру 1, собирают центрифугированием при 4000 оборотов в минуту. Полученный осадок ресуспендируют в физиологическом растворе с таким расчетом, чтобы в 150-200 мг конечной суспензии находилось не менее чем 330 млн клеток.

Полученную суспензию клеток в физиологическом растворе подвергают обработке ультразвуком на ультразвуковом дезинтеграторе по стандартному методу при мощности 200-300 Вт. Обработку производят трехкратно в течение 30 с с перерывами по 30 с.

Обработанную суспензию клеток объединяют с мазевой основой и необходимым количеством консерванта (фенола) в соответствии с заявляемой прописью состава. Так для получения 100 г мази в керамическом или стеклянном сосуде к 15-20 г обработанной ультразвуком суспензии добавляют 500 мг фенола и готовую мазевую основу при 40-42°С до конечного веса 100 г. В процессе добавления мазевой основы описанного состава мазь интенсивно перемешивают керамическим шпателем до образования однородной пластичной массы. Образец готовой мази заявляемого состава имеет однородную структуру, белый или белый с желтоватым оттенком цвет и характерный запах фенола.

Пример 3.

Демонстрация лечебного действия мази заявляемого состава в экспериментах на животных.

Под наблюдение взяты три группы животных по 5 самцов крыс линии Вистар в каждой. После обработки поверхности кожи раствором 3% перекиси водорода на пораженные участки кожи (модель резаной раны) накладывают салфетку, пропитанную для группы I лабораторных животных мазевой основой (физрастор, ланолин, вазелин; фенол - консервант), для группы II - коммерчески доступным препаратом «Постеризан^®», для группы III - мазью заявляемого состава, содержащей 150-200 мг физиологического раствора, в котором ресуспендируют не менее 330 млн микробных клеток штамма-продуцента пероксиредоксина 6 человека. Салфетки помещают на область раны с последующим наложением асептической повязки. Перевязки проводят ежедневно. Визуальный осмотр раневой поверхности и оценку степени заживления проводят ежедневно при смене повязок. Полученные результаты лечения повреждений кожи представлены в таблице.

Таблица Номер группы (количество животных) Состав мази для обработки резаной раны Начало эпителизации поврежденных участков Полное заживление пораженной поверхности кожи I (5 шт) Мазевая основа (физрастор, ланолин, вазелин; фенол - консервант) 5 сутки Более 14 дней II (5 шт) Коммерчески доступный препарат «Постеризан^®» 3 сутки 8 дней III (5 шт) Мазь заявляемого состава 2 сутки 6 дней

Таким образом, лечебный эффект мази заявляемого состава достигается за счет ее специфического воздействия на защитные свойства кожи. Предложенная мазевая основа способствует активному проникновению препарата в кожу, что усиливает и ускоряет его лечебное действие. Мазь предлагаемого состава, содержащая микробные клетки непатогенного бесплазмидного штамма Е. coli, производящие рекомбинантный пероксиредоксин 6 человека, идентичный по аминокислотной последовательности природному белку, не оказывает побочных воздействий на организм подопытного животного.

Изобретение относится к медицине и касается состава для лечения повреждений кожи, включающего лекарственное средство и мазевую основу. В качестве лекарственного средства содержится суспензия микробных клеток непатогенного бесплазмидного штамма Е. coli, производящих рекомбинантный пероксиредоксин 6 человека, идентичный по аминокислотной последовательности природному белку. Мазевая основа содержит вазелин, ланолин, физиологический раствор и фенол в качестве консерванта. Изобретение обеспечивает активное проникновение компонентов лекарственного средства в кожу, что усиливает лечебное действие и сокращает сроки лечения. 3 пр., 1 табл.

Состав для лечения повреждений кожи, включающий лекарственное средство и мазевую основу, отличающийся тем, что в качестве лекарственного средства он содержит суспензию микробных клеток непатогенного бесплазмидного штамма Е. coli, производящих рекомбинантный пероксиредоксин 6 человека, идентичный по аминокислотной последовательности природному белку, а мазевая основа содержит вазелин, ланолин, физиологический раствор и фенол в качестве консерванта при следующем соотношении компонентов, г:
физиологический раствор, в котором ресуспендируют не менее 330 млн микробных клеток штамма-продуцента - 150-200 мг,
фенол - 5 мг,
смесь 5 частей вазелина аптечного и 2 частей ланолина до 1 г.