ВВОДИМАЯ ПЕРОРАЛЬНО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ГРАНУЛА ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА Российский патент 2015 года по МПК A61K9/00 A61K9/16 A61K38/48 A61P1/04 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к вводимой перорально фармацевтической грануле эпидермального фактора роста (EGF), к содержащим ее капсулам, к способам их получения и использованию в лечении язвенного колита.

Предшествующий уровень техники

Язвенный колит (UC) является формой воспалительного заболевания кишечника (IBD) с предполагаемой генетической составляющей. При нем возникает аномальный ответ иммунной системы на внутрипросветные антигены, основным симптомом которого является хроническое воспаление желудочно-кишечного тракта, сопровождаемое деструкцией тканей.

Хотя не существует лечения UC, модификация питания может снижать дискомфорт индивидуума, страдающего заболеванием, и помимо этого указывают лечение лекарственными средствами, которые могут стабилизировать состояние пациента. Общеупотребительны лекарственные средства, такие как противовоспалительные лекарственные средства (т.е. 5-аминосалицилат и кортикостероиды), антибиотики и иммуномодуляторы (т.е. азатиоприн, 6-меркаптопуринам, циклоспорин и метотрексат) и иммуносупрессивные средства. Недостатком этих лекарственных средств является стимуляция неспецифической супрессии воспалительного процесса, провоцирующая желудочно-кишечные побочные эффекты, такие как тошнота, диарея, боль в животе, головная боль и снижение иммунного ответа у пациента. Эти желудочно-кишечные побочные эффекты повышают риск развития инфекций, лейкопении или изменения печени или поджелудочной железы, а также остеопороза, мышечной дистрофии и слабости при продолжительном лечении кортикостероидами.

В основном, лечение UC основано на использовании 5-аминосалициловой кислоты (5-AAS) в качестве активного ингредиента. Проблемой лечения 5-AAS является плохое всасывание активного ингредиента в ободочной кишке, приводящая к затруднению в достижении эффективных терапевтических концентраций. Таким образом, получали новые составы 5-AAS, повышающие всасывание активного ингредиента. Эти составы включают микросферы, димеры или конъюгаты 5-AAS, к сожалению, обладающие теми же желудочно-кишечными побочными эффектами.

Альтернативным лечением для восстановления повреждения тканей при UC является введение пептидов, в частности цитопротекторных факторов, в природе секретируемых в слизистой оболочке кишечника для восстановления его целостности. Этим фактором может являться трансформирующий фактор роста альфа и бета (TGF), факторы "трилистника", эпидермальный фактор роста (EGF), фактор роста кератиноцитов (KGF), интерлейкин 11 (ИЛ-11) и фактор роста.

В этой области известны перорально вводимые составы некоторых цитопротекторных факторов с регулируемым высвобождением для их высвобождения в просвете кишечника. Например, в US 2007/26082 описывают пероральную многочастичную фармацевтическую гранулу, образованную внутренним слоем матрицы, содержащим пептиды, включенные в матрицу, образованную полимером с мукоадгезивными свойствами.

EGF является фактором роста, играющим важную роль в регуляции роста, пролиферации и дифференцировки клеток посредством связывания с рецептором эпидермального фактора роста (EGFR). EGF человека является белком молекулярной массой 6045 Да с 53 аминокислотными остатками и тремя внутримолекулярными дисульфидными связями. Связывание EGF с EGFR на поверхности клетки с высокой аффинностью стимулирует характерную протеин-тирозинкиназную активность рецептора. Активность тирозинкиназы запускает каскад передачи сигнала, приводя к повышению уровней внутриклеточного кальция, повышает гликолиз и синтез белка, а также повышает экспрессию конкретных генов, включая ген EGFR, приводя к синтезу ДНК и пролиферации клеток.

Ранее EGF использовали в терапии. Например, EGF используют перорально по причине его заживляющего эффекта при гастродуоденальных повреждениях, т.к. EGF действует до деградации в кислой среде желудка. Кроме того, EGF используют для лечения UC только при введении через клизму. Показано, что это является неэффективным при лечении UC в восходящей части ободочной кишки. Кроме того, показано, что подкожное введение EGF в одиночку или в комбинации с фактором "трилистника" является эффективным в заживлении раны и лечении UC.

По причине своей пептидной природы EGF может спонтанно изменять свою структуру при продолжительном упаковывании или при контакте с биологическими жидкостями. Это изменение может ухудшать его время полувыведения и биологическую активность. Наиболее вероятными путями деградации EGF являются окисление остатков метионина, дезаминирование остатков аспарагина и образование сукцинамида в положениях остатков аспарагиновой кислоты. Кроме того, воздействие некоторых эксципиентов на EGF в условиях производства или хранения фармацевтического состава, включая температуру, время, интенсивность излучения или влажность, может вызывать утрату природных свойств третичной и четвертичной структур (нативной структуры) или фрагментацию пептидной цепи, стимулируя ответ иммунной системы на EGF.

Из того, что известно в этой области, можно сделать вывод, что все еще существует потребность в стабильных пероральных фармацевтических композициях эпидермального фактора роста, где активный ингредиент обладает контролируемым высвобождением на протяжении всей ободочной кишки после быстрого прохождения через желудок.

Сущность изобретения

Авторы изобретения обнаруживали, что фармацевтическая гранула для перорального введения, содержащая эпидермальный фактор роста и метионин или пиросульфат калия (K₂S₂O₇) в качестве антиоксиданта, обладает подходящим профилем растворения и демонстрирует хорошую стабильность активного ингредиента, защищенного от физической или протеолитической инактивации. Кроме того, это является преимуществом по причине увеличенного времени всасывания, снижения риска желудочно-кишечных побочных эффектов, сокращения лечения и лучшего приема пациентами перорально вводимых доз.

Таким образом, аспект настоящего изобретения относится к вводимой перорально фармацевтической грануле, содержащей ядро и кишечнорастворимое покрытие, где ядро содержит EGF и серосодержащий антиоксидант, выбранный из метионина и пиросульфата калия. Оба антиоксиданта являются твердыми веществами, растворимыми в воде. Оба антиоксиданта обладают ионными свойствами, при нейтральном pH метионин находится в цвиттерионной форме, это означает, что он содержит анионный центр и катионный центр в одной и той же молекуле, и пиросульфат калия является ионной солью, состоящей из катионов калия и анионов пиросульфата.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения гранулы, как определено выше, включающему: (a) нанесение покрытия на инертное ядро распылением водной суспензии, содержащей эпидермальный фактор роста, антиоксидант и фармацевтически приемлемые эксципиенты; (b) высушивание активного слоя, образованного на стадии (a); (c) нанесение покрытия на покрытое ядро со стадии (b) распылением суспензии, содержащей кишечнорастворимый полимер покрытия и фармацевтически приемлемые эксципиенты; (d) высушивание гранулы с покрытием, образованной на стадии (c), где температура на каждой стадии способа составляет до 40°C.

Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической капсуле, содержащей гранулы, как определено выше.

В конечном итоге, другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической грануле по настоящему изобретению для использования в лечении язвенного колита.

Подробное описание изобретения

В настоящей заявке, если не указано иначе, все термины следует понимать в их общепринятом значении, как известно в этой области. В настоящей заявке, другие более специфичные определения для конкретных терминов изложены ниже и предназначены для единообразного применения в описании и формуле изобретения, если иное прямо не описывает определение, представляющее более широкое определение.

Термин "молярное отношение" относится к отношению количества эпидермального фактора роста в молях к количеству антиоксиданта, необходимого для защиты активного ингредиента от деградации или инактивации, в молях.

Термин "связывающее средство" относится к материалу, придающему связывающую способность порошкообразным материалам, улучшая текучесть при производстве таблеток или гранул. Общеупотребительные в качестве связывающих средств материалы включают крахмал, желатин, сахара, альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу или поливинилпирролидон.

Термин "подщелачивающее средство" можно выбирать из соединений с щелочной реакцией, таких как соли натрия; калия; кальция; магния и алюминия и фосфорной кислоты, карбоновых кислот, лимонной кислоты; смешанных соединений алюминия/магния Al₂O₃·6MgO·CO₂·12H₂O или MgO·Al₂O₃·2SiO₂·nH₂O, где n является целым значением 2 или больше, или схожих соединений и аминокислот с щелочной реакцией. Кроме того, щелочной материал может являться антацидным материалом, таким как гидроксиды алюминия, гидроксиды кальция, гидроксиды магния или оксид магния.

Термин "глидант" относится к материалу, улучшающему текучесть смесей порошков в сухом состоянии. Общеупотребительные в качестве глиданта материалы включают стеарат магния, коллоидный диоксид кремния или тальк.

Термин "поверхностно-активное вещество" относится к материалу, снижающему поверхностное натяжение жидкости и межфазное натяжение между двумя жидкостями, позволяя им легче растекаться. Общеупотребительные в качестве поверхностно-активного вещества материалы включают лаурилсульфат натрия (LSS) или моноэтиловый эфир диэтиленгликоля.

Термин "процентная доля (%) по массе" относится к процентной доле каждого ингредиента фармацевтической композиции по отношению к общей массе гранулы.

Термин "инертное ядро" относится к микросферическим нейтральным гранулам, которые в своей композиции могут содержать одно или несколько из следующих веществ: сорбит, маннит, сахароза, крахмал, микрокристаллическая целлюлоза, лактоза, глюкоза, трегалоза, мальтит или фруктоза. Исходный размер этого инертного ядра может составлять от 200 до 1800 микрометров.

Термин "эпидермальный фактор роста человека" относится к EGF, обладающему той полипептидной последовательностью или любой его значительной частью. EGF человека также относится к любым вариантам EGF человека, таким как гамма-урогастрон. EGF можно выделять из природных источников, получать с использованием способов рекомбинантной ДНК или получать химическим синтезом. Предполагают, что биологически активные фрагменты, аналоги или созданные человеком химически синтезированные производные EGF можно использовать в настоящем изобретении вместо целой природной молекулы при условии, что такие фрагменты, аналоги или производные сохраняют биологическую активность природного EGF. Как применяют в настоящем документе, EGF включает EGF, получаемый любым из указанных выше способов, и любые его биоактивные фрагменты, аналоги или производные и родственные полипептиды.

Термин "аналог" EGF относится к любому полипептиду, обладающему, по существу, идентичной EGF аминокислотной последовательностью, в которой одну или несколько аминокислот заменяют химически схожими аминокислотами. Термин "аналог" также должен включать любой полипептид, в котором удаляют или добавляют одну или несколько аминокислот относительно полипептида EGF, но все еще сохраняющий существенную гомологию аминокислотной последовательности с EGF. Существенная гомология последовательности является любой гомологией выше 50%.

Термин "фрагмент" EGF относится к любому более короткому варианту EGF, содержащему по меньшей мере 10 аминокислотных остатков и обладающему той же биологической активностью, что и EGF. Фраза "химическое производное" относится к любому полипептиду, полученному из природного полипептида EGF, в котором одну или несколько аминокислот химически синтетически преобразовывали посредством реакции функциональных боковых групп аминокислот (т.е. его получали из родительской молекулы EGF за одну или несколько стадий).

"Фармацевтически эффективное количество" EGF относится к количеству, обеспечивающему терапевтический эффект при различных схемах введения.

Термин "кишечнорастворимое покрытие" относится к любому фармацевтически приемлемому покрытию, предотвращающему высвобождение активного ингредиента в желудке.

Термин "полимер" относится к молекуле, содержащей множество ковалентно соединенных мономеров, и включает разветвленные, дендримерные, звездообразные и линейные полимеры. Термин также включает гомополимеры и сополимеры, а также полимеры без поперечных сшивок и полимеры с количеством поперечных сшивок от незначительного до умеренного и полимеры, по существу, с поперечными сшивками.

Термины "полимер с модифицированным высвобождением" и "полимер с модифицированной системой доставки" имеют одинаковое значение и взаимозаменяемы. Оба термина следует понимать как полимеры, делающие возможной доставку лекарственного средства при заданной скорости и/или расположении в соответствии с потребностями организма и состоянием заболевания в течение определенного периода времени. Иллюстративными, но не ограничивающими примерами "полимера с модифицированным высвобождением" и "полимера с модифицированной системой доставки" являются полимеры, обеспечивающие контролируемое высвобождение, замедленное высвобождение, пролонгированное высвобождение или длительное высвобождение.

Как указано выше, аспект по настоящему изобретению относится к вводимой перорально фармацевтической грануле, содержащей ядро и кишечнорастворимое покрытие, где ядро содержит эпидермальный фактор роста и серосодержащий антиоксидант, выбранный из группы, состоящей из метионина и K₂S₂O₇.

Композиция ядра гранулы позволяет достигать эффективных концентраций на всем протяжении кишечника. Внешнее покрытие позволяет избегать гидролиза EGF в желудке и достигать EGF целевого участка в кишечнике в его нативной и активной конформации. В результате EGF является стабильным в течение процесса получения фармацевтической композиции, в течение упаковывания и после введения. Это является преимуществом, т.к., как правило, пептиды могут деградировать посредством окисления конкретных остатков пептидной цепи, особенно восприимчивых к условиям деградация при их нахождении в жидких составах, в присутствие кислорода, что связано с тем, что их, как правило, упаковывают в пластиковые контейнеры, проницаемые для кислорода.

Целевой профиль растворения означает, что менее чем 3% EGF растворяется за 2 часа при воздействии условий в желудке (т.е. HCl 0,1 N), и по меньшей мере более чем 60% EGF после 6 часов растворяется при воздействии условий в ободочной кишке (буферный этап) (см. пример 4 таблицу 3).

Таким образом, требуемого контролируемого профиля растворения EGF, поддерживающего его эффективные терапевтические концентрации на всем протяжении кишечника после его перорального введения, достигают посредством гранулы, содержащей ядро и внешнее кишечнорастворимое покрытие, где ядро содержит внутренний активный слой, содержащий эпидермальный фактор роста, и серосодержащий антиоксидант вокруг инертного ядра, выбранный из группы, состоящей из метионина и K₂S₂O₇.

В предпочтительном варианте осуществления молярное отношение между EGF и антиоксидантом, как определено выше, составляет от 1:10 до 1:670. В более предпочтительном варианте осуществления молярное отношение составляет от 1:15 до 1:100. В другом предпочтительном варианте осуществления молярное отношение составляет от 1:20 до 1:80. В другом более предпочтительном варианте осуществления молярное отношение составляет от 1:25 до 1:60. Предпочтительно, молярное отношение между EGF и метионином составляет 1:30, и молярное отношение между EGF и K₂S₂O₇ составляет 1:30. Указанное молярное отношение между активным ингредиентом и антиоксидантом вносит свой вклад в обеспечение стабильности EGF в гранулах по настоящему изобретению для сохранения его нативной конформации.

Гранулы по настоящему изобретению могут содержать дополнительные фармацевтические эксципиенты. Для получения перорально вводимой фармацевтической гранулы по изобретению эксципиенты необходимо выбирать из тех, которые не вызывают деградацию эпидермального фактора роста.

В предпочтительном варианте осуществления ядро гранулы дополнительно содержит связывающее средство, подщелачивающее средство, глидант, поверхностно-активное вещество или их смеси. Гранулы по настоящему изобретению могут быть образованы эксципиентами, помогающими образовывать активный слой вокруг инертного ядра.

В конкретном варианте осуществления связывающее средство выбрано из группы, состоящей из метилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, гидроксипропилметилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы и поливинилпирролидона. В предпочтительном варианте осуществления связывающее средство является гидроксипропилметилцеллюлозой (HPMC).

В конкретном варианте осуществления подщелачивающее средство выбрано из группы, состоящей из карбоната магния, N-метилглутамина, дифосфата натрия и фосфата кальция. В предпочтительном варианте осуществления подщелачивающее средство является дифосфатом натрия.

В конкретном варианте осуществления глидант выбран из группы, состоящей из стеарата магния, глицерилмоностеарата, коллоидного диоксида кремния, стеариновой кислоты, талька и стеарилфумарата натрия. В предпочтительном варианте осуществления глидант является тальком.

В конкретном варианте осуществления поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из лаурилсульфата натрия и моноэтилового эфира диэтиленгликоля. В предпочтительном варианте осуществления поверхностно-активное вещество является лаурилсульфатом натрия.

В предпочтительном варианте осуществления ядро гранулы по настоящему изобретению содержит 60-80% по массе инертного ядра; 0,05-1% по массе эпидермального фактора роста; 0,5-3% по массе антиоксиданта; 0,02-0,07% по массе поверхностно-активного вещества; 1,5-5% по массе связывающего средства; 0,02-0,07% по массе подщелачивающего средства; и 2-5% по массе глиданта.

В более предпочтительном варианте осуществления ядро гранулы содержит 69% по массе инертного ядра; 0,10% по массе эпидермального фактора роста; 1,3% по массе метионина; 0,05% по массе лаурилсульфата натрия; 2% по массе гидроксипропилметилцеллюлозы; 0,05% по массе дифосфата натрия; и 4% по массе талька.

В другом предпочтительном варианте осуществления ядро гранулы содержит 69% по массе инертного ядра; 0,10% по массе эпидермального фактора роста; 2% по массе K₂S₂O₇; 0,05% по массе лаурилсульфата натрия; 2% по массе гидроксипропилметилцеллюлозы; 0,05% по массе дифосфата натрия; и 4% по массе талька.

Как показано в примерах, содержание EGF в растворах активного ингредиента с одним из указанных выше эксципиентов или их комбинации сохраняется больше 90% по массе даже после 30 дней хранения при 37°C в защищенном от света месте (см. таблицу 5). EGF особенно легко окисляется воздухом в жидком растворе. Т.к. только приблизительно 10% EGF в тестируемых растворах подвергается деградации эксципиентами, указанными в примере 1, предполагают, что эксципиенты, используемые для получения гранул по настоящему изобретению, не несут ответственности за окисление EGF. (см. пример 5).

Как указано выше, гранулы по настоящему изобретению покрыты кишечнорастворимым покрытием. Пример подходящих устойчивых к желудочному соку полимеров для получения кишечнорастворимого покрытия включает метилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу (HEC), гидроксибутилцеллюлозу (HBC), гидроксипропилметилцеллюлозу (HPMC), этилцеллюлозу, гидроксиметилцеллюлозу (HMC), гидроксипропилцеллюлозу (HPC), полиоксиэтиленгликоль, касторовое масло, ацетатфталат целлюлозы, фталат HPMC, сукцинатацетат HMC, карбоксиметиламилопектин натрия, хитозан, альгиновую кислоту, каррагенаны, галактоманнаны, трагакантовую камедь, шеллак, агар-агар, гуммиарабик, гуаровую камедь и ксантановую камедь, полиакриловые кислоты, поливиниловый спирт (PVA), полиэтилен- и полипропиленоксиды или их смеси. Другие подходящие соединения включают устойчивые к желудочному соку полимеры на основе метакрилатов или их солей, таких как анионный сополимер на основе метилакрилата, метилметакрилата и метакриловой кислоты (эудражит FS30D), анионный сополимер на основе метакриловой кислоты и метилметакрилата (эудражит S100), или сополимер сложных эфиров акриловой и метакриловой кислот и четвертичных аммонийных групп (эудражит RS или эудражит RL). Предпочтительно кишечнорастворимый полимер покрытия является эудражитом FS30D.

Устойчивый к желудочному соку полимер можно дополнять пластификаторами, такими как триэтилцитрат (TEC), полиэтиленгликоль (PEG), цетиловый и стеариловый спирт; поверхностно-активными средствами, такими как лаурилсульфат натрия, полисорбат и полоксамер; пигментами, такими как диоксид титана или оксид железа (III); смазочными средствами, такими как тальк, стеарат магния или глицерилмоностеарат и их смеси.

В предпочтительном варианте осуществления кишечнорастворимое покрытие содержит поли(метакриловую кислоту/метилакрилат/метилметакрилат), триэтилцитрат, лаурилсульфат натрия, тальк или их смеси.

В предпочтительном варианте осуществления слой кишечнорастворимого покрытия составляет от 14 до 25% по массе от общей массы гранулы по настоящему изобретению.

В конкретном варианте осуществления гранулы по настоящему изобретению дополнительно содержат промежуточный слой покрытия между ядром и кишечнорастворимым покрытием. Этот промежуточный слой покрытия содержит по меньшей мере полимер с модифицированным высвобождением. Подходящие полимеры с модифицированным высвобождением для получения промежуточного слоя покрытия включают, в качестве неограничивающих примеров, акриловые полимеры, целлюлозы, шеллак, зеин, гидрогенизированное растительное масло, гидрогенизированное касторовое масло и их смеси. Примеры подходящих акриловых полимеров включают, в качестве неограничивающих примеров, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, этоксиэтилметакрилаты, цианоэтилметакрилат, сополимер аминоалкилметакрилата, поли(акриловую кислоту), поли(метакриловую кислоту), сополимер алкиламида метакриловой кислоты, поли(метилметакрилат), поли(ангидрид метакриловой кислоты), метилметакрилат, полиметакрилат, сополимер поли(метилметакрилата), полиакриламид, сополимер аминоалкилметакрилата, сополимеры глицидилметакрилата и их смеси. Примеры подходящих целлюлоз включают этилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и их смеси.

Полимеры с модифицированным высвобождением выбраны из группы, состоящей из сополимеров акриловой кислоты и метакриловой кислоты, таких как эудражит L, эудражит S, эудражит FS, эудражит RS, эудражит RL, эудражит RD и эудражит NE. Предпочтительно, полимер с модифицированным высвобождением является эудражитом NE 30D.

Полимеры с модифицированным высвобождением можно дополнять пластификаторами, такими как триэтилцитрат (TEC), полиэтиленгликоль (PEG), цетиловый и стеариловый спирт; поверхностно-активными средствами, такими как лаурилсульфат натрия, полисорбат и полоксамер; пигментами, такими как диоксид титана, оксид железа (III); смазочными средствами, такими как тальк, стеарат магния или глицерилмоностеарат и их смеси.

В конкретном варианте осуществления промежуточный слой покрытия дополнительно содержит глидант. Предпочтительно, глидант является тальком.

В предпочтительном варианте осуществления промежуточный слой покрытия составляет от 5 до 20% по массе от общей массы гранулы по настоящему изобретению. Предпочтительно, масса промежуточного слоя покрытия составляет 15%.

По причине нестабильности EGF в присутствии кислорода или высокой влажности, при воздействии высокой температуры, высокого давления или при длительном производстве фармацевтического состава, EGF получают теми общепринятыми способами, которые не вызывают деградацию, контролируя условия на всех этапах способа. Способ производства гранул по настоящему изобретению включает на первой стадии нанесение покрытия на инертное ядро распылением водной суспензии EGF, антиоксиданта и подходящего эксципиента, избегание высокой температуры и длительного подвергания водной суспензии активного ингредиента воздействию кислорода, где EGF может деградировать; и на второй стадии нанесение покрытия на активную гранулу, как определено выше, суспензией кишечнорастворимого покрытия. На обеих стадиях способа температура не должна превышать 40°C. Если EGF подвергают воздействию температур выше 40°C, пептидные связи разрушаются, и EGF теряет свою нативную структуру и, в результате, свою терапевтическую активность. В конкретном варианте осуществления температура при осуществлении способа составляет от 27 до 40°C. Предпочтительно, температура при осуществлении способа составляет от 35°C до 40°C. Более предпочтительно, температура при осуществлении способа составляет 40°C.

Таким образом, вводимые перорально фармацевтические гранулы по изобретению можно получать способом, включающим: (a) нанесение покрытия на инертное ядро распылением водной суспензии, содержащей эпидермальный фактор роста, антиоксидант и фармацевтически приемлемые эксципиенты; (b) высушивание активного слоя, образованного на стадии (a); (c) нанесение покрытия на ядро со стадии (b) распылением суспензии, содержащей кишечнорастворимый полимер покрытия и фармацевтически приемлемый эксципиент; (d) высушивание покрытой гранулы, образованной на стадии (c); где температура на каждой стадии способа составляет до 40°C.

В конкретном варианте осуществления вводимые перорально фармацевтические гранулы по изобретению, содержащие промежуточный слой покрытия, можно получать указанным выше способом, кроме того, включающим дополнительную стадию нанесения покрытия получаемого на стадии (b) ядра распылением суспензии, содержащей полимер с модифицированным высвобождением и фармацевтически приемлемый эксципиент; и высушивание образованного слоя.

В конкретном варианте осуществления для достижения меньшего влагосодержания в гранулах по настоящему изобретению стадия высушивания (d) включает высушивание получаемых на стадии (c) гранул в тарельчатой сушилке в течение 24 часов с воздухом при температуре 40°C.

В другом конкретном варианте осуществления все стадии способа, как определено выше, осуществляют в устройстве для нанесения покрытия псевдоожиженным слоем, таком как устройство типа "Вюрстер" или аналогичное, в который последовательно добавляют инертное ядро, и распыляемую водную активную суспензию и растворяющуюся в кишечнике суспензию для покрытия.

Как указано выше, другим аспектом настоящего изобретения является фармацевтическая капсула, содержащая гранулы, как определено выше. Фармацевтическую композицию можно получать любым известным в этой области способом наполнения капсул. Таким образом, способ получения фармацевтической капсулы включает: (a) получение гранулы с кишечнорастворимым покрытием с EGF и антиоксидантом, как определено выше; (b) наполнение фармацевтической капсулы гранулами со стадии (a); и, необязательно, (c) запаивание фармацевтической капсулы.

В конкретном варианте осуществления фармацевтически приемлемое количество EGF составляет от 200 до 800 мкг на капсулу. Предпочтительно, количество EGF составляет 500 мкг на капсулу.

Содержание EGF в капсулах по изобретению является стабильным. Как показано в примерах, при упаковывании этих капсул в блистеры и хранении при температурах от 2 до 8°C поддерживают содержание выше 96% по массе. Кроме того, не модифицируют органолептические свойства фармацевтической композиции и поддерживают влагосодержание капсул ниже 1%. Таким образом, EGF не деградирует ни в процессе получения гранул, ни при хранении капсул (см. пример 2, таблица 1).

Капсулы по настоящему изобретению также достигают целевого профиля растворения. Таким образом, менее 3% EGF растворяется за 2 часа при воздействии условий в желудке (т.е. HCl 0,1 N), и по меньшей мере более чем 60% EGF растворяется после 6 часов при воздействии условий в ободочной кишке (буферный этап) (см. пример 4, таблица 3). Низкий процент растворения EGF в желудке позволяет избегать деградации EGF протеолитическими ферментами. С другой стороны, быстрое растворение EGF при растворении кишечнорастворимого покрытия позволяет достигать эффективной концентрации на всем протяжении кишечника и снижать желудочно-кишечные побочные эффекты при введении неспецифических противовоспалительных лекарственных средств.

Как указано выше, также частью изобретения является фармацевтическая гранула, как определено выше, для использования в лечении язвенного колита, в частности восстановления повреждения тканей всего кишечника при UC. Этот аспект также можно сформулировать как использование вводимой перорально фармацевтической гранулы, как определено выше, для получения лекарственного средства для лечения язвенного колита или как способ лечения язвенного колита, включающий введение нуждающемуся в таком лечении млекопитающему эффективных количеств гранулы по настоящему изобретению. Таким образом, как показано в результатах примера 3 в таблице 2, после составления в форме капсул активность EGF сохраняется.

На всем протяжении описания и формулы изобретения слово "содержат" и варианты слова не предназначены для исключения других технических свойств, добавок, компонентов или этапов.

Дополнительные объекты, преимущества и признаки изобретения станут понятными специалистам в этой области после изучения описания, или их можно изучать при практическом осуществлении изобретения. Следующие примеры и чертежи предоставляют в иллюстративных целях, и они не предназначены для ограничения настоящего изобретения. Кроме того, настоящее изобретение включает все возможные комбинации конкретных и предпочтительных вариантов осуществления, описываемых в настоящем документе.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Способ производства капсул гранул эпидермального фактора роста

1.1. Способ производства гранулы с кишечнорастворимым покрытием с метионином

Композиция гранулы являлась следующей:

Ядро гранулы

Ингредиенты (%) Количество (г) Количество сухого вещества (г) Инертное ядро 69,51 700   Эпидермальный фактор роста (EGF) 0,10 845,5 1,00

Метионин 1,26   12,65 Лаурилсульфат натрия 0,05 0,5   Гидроксипропилметилцеллюлоза 1,99 20,0   Фосфат динатрия 0,05 0,5   Тальк 3,97 40,0   Общая масса ядра 76,94 774,7

Кишечнорастворимое покрытие

Ингредиенты (%) Количество (г) Количество сухого вещества (г) Полисорбат 80 0,06 0,6   Триэтилцитрат 0,12 1,2   Лаурилсульфат натрия 0,12 1,2   Тальк 4,58 46,1   Эудражит FS30D 18,20 610,9 183,3 Очищенная вода*   q.s.   Общая масса покрытия 23,08 232,4 Всего функциональных гранул 100 1007,1 "q.s" означает "в достаточном количестве", * При обработке воду удаляют

В сосуде из нержавеющей стали получали водный раствор гидроксипропилметилцеллюлозы и с непрерывным перемешиванием добавляли раствор эпидермального фактора роста и метионина. При достижении однородности смеси добавляли лаурилсульфат натрия, фосфат динатрия и тальк, продолжая перемешивать при комнатной температуре до достижения однородности суспензии.

700 г инертного ядра включали в псевдоожиженный слой и покрывали предварительно подготовленной суспензией при следующих условиях: поток воздуха: 260 м³/час, диаметр насадок: 1 мм, давление при распылении: 0,7 бар, распыление суспензии: 35 г/мин, температура воздуха: 50°C, и температура продукта: 35°C.

В сосуде из нержавеющей стали получали водную однородную дисперсию полисорбата 80, триэтилцитрата и эудражита FS30D и добавляли лаурилсульфат натрия и тальк, продолжая перемешивать при комнатной температуре до достижения однородности суспензии.

Сухие ядра подвергали воздействию кишечнорастворимого покрытия распылением полученной выше растворяющейся в кишечнике водной суспензии. Рабочие условия являлись следующими: поток воздуха: 180 м³/час, диаметр насадок: 1,2 мм, давление при распылении: 0,6 бар, распыление суспензии: 30 г/мин, температура воздуха: 55°C и температура продукта: 35°C.

Таким образом, гранулы с кишечнорастворимым покрытием затем высушивали в тарельчатой сушилке в течение 24 часов с воздухом при температуре 40°C.

1.2. Способ производства гранулы с кишечнорастворимым покрытием с K ₂ S ₂ O ₇

Композиция гранулы является следующей:

Ядро гранулы

Ингредиенты (%) Количество (г) Количество сухого вещества (г) Инертное ядро 68,72 700   Эпидермальный фактор роста 0,10   1,00 (EGF)   848,5   K₂S₂O₇ 2,12 21,55 Лаурилсульфат натрия 0,05 0,5   Гидроксипропилметилцеллюлоза 1,96 20,0   Фосфат динатрия 0,05 0,5   Тальк 3,93 40,0   Общая масса ядра 76,93 783,6

Кишечнорастворимое покрытие

Ингредиенты (%) Количество (г) Количество сухого вещества (г) Полисорбат 80 0,06 0,6   Триэтилцитрат 0,12 1,2   Лаурилсульфат натрия 0,12 1,2   Тальк 4,58 46,6   Эудражит FS30D 18,20 617,9 181,7 Очищенная вода*   q.s.   Общая масса покрытия 23,08 235,1 Всего функциональных гранул 100 1018,7 "q.s" означает "в достаточном количестве", * При обработке воду удаляют

Эти гранулы получали аналогично гранулам в предыдущем разделе (1.1.) с использованием K₂S₂O₇ в качестве антиоксиданта.

Способ производства капсул

Твердые капсулы, полученные из желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы с гранулами с кишечнорастворимым покрытием, наполняли с использованием автоматического устройства для наполнения капсул Bosch Zanassi.

Пример 2. Исследования стабильности

Физическую и химическую стабильность эпидермального фактора роста в капсулах по примеру 1, упакованных в блистеры, тестировали при температуре 5±3°C в течение периода 24 месяцев.

Анализ органолептических свойств капсул по примеру 1 не показал каких-либо изменений их внешнего вида. Влагосодержание капсул по примеру 1, тестируемых способом Карла Фишера, сохранялось ниже 1%.

Для определения содержания эпидермального фактора роста в капсулах по настоящему изобретению 100 мл фосфатно-солевого буфера (1× PBS) добавляли к содержимому 10 капсул по примеру 1, продолжая перемешивать в течение 15 минут. Полученную суспензию центрифугировали в течение 5 минут при 9000 об/мин, собирали водный раствор и количественно оценивали посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Таблица 1
Содержание эпидермального фактора роста в капсулах по примеру 1 Время тестирования (месяцы) EGF (%) Партия PFCE-1 Партия PFCE-2 Партия PFCE-3 0 98,02 97,56 98,48 3 97,63 97,87 98,34 6 97,80 97,07 97,18 9 97,29 96,06 98,37 12 97,03 97,52 97,16 18 97,54 96,87 98,18 24 97,32 96,25 97,34

Представленные выше в таблице 1 результаты демонстрируют, что эпидермальный фактор роста является стабильным в гранулах по настоящему изобретению, где эти гранулы включают в капсулы, упакованные в блистеры и хранящиеся при температуре от 2 до 8°C. Небольшая вариабельность, наблюдаемая в содержании EFG в представленной выше таблице 1, связана с экспериментальной ошибкой используемого аналитического способа.

Содержание EGF в гранулах без метионина или K₂S₂O₇ в ядре составляет менее 85%, и деградация EGF за 24 месяца составляет приблизительно 15%.

Для сравнения, как показано в таблице 1, деградация EGF за 24 месяца в гранулах по настоящему изобретению составляет приблизительно 4%, таким образом, гранулы по настоящему изобретению считают стабильными, т.к. содержание активного ингредиента составляет больше 96%.

Пример 3. Биологическая активность

Тестировали активность эпидермального фактора роста в капсулах по примеру 1, упакованных в блистеры и хранящихся при температуре 5±3°C. Этот биологический тест основан на способности рекомбинантного эпидермального фактора роста человека (EGF Hu-r) стимулировать пролиферацию линий клеток эмбрионов мыши 3T3/A3, крайне чувствительных к контактному ингибированию деления клеток.

Способ определения биологической активности

Способ определения способности EGF стимулировать пролиферацию клеток и ее продолжительность включает количественный анализ поглощения красителя кристаллический фиолетовый живыми клетками 3T3 A31.

Получение образцов EGF включает добавление 100 мл фосфатно-солевого буфера (1× PBS) к содержимому 10 капсул по примеру 1 с непрерывным перемешиванием в течение 15 минут. Полученную суспензию центрифугировали в течение 5 минут при 9000 об/мин и собирали водный раствор.

В 96-луночных планшетах высевали клетки 3T3 A31 при концентрации 1,5×10⁵ клеток/мл. Эти планшеты инкубировали при 37°C, 5% CO₂ и 95% влажности в течение 24 часов.

После завершения времени инкубации клетки дважды промывали 100 мкл 1× PBS, затем добавляли 100 мкл 1× DMEM без эмбриональной телячьей сыворотки (SFB) в среду и планшеты инкубировали при 37°C, 5% CO₂ и 95% влажности в течение других 24 часов.

После завершения времени инкубации в образцы разведения в 96-луночных планшетах добавляли 100 мкл растворов EGF в различных концентрациях и контрольный раствор 100 мкл 1× среды DMEM. Начиная с образца с максимальным разведением 100 мкл 10 нг/мл EGF, получали последовательные разведения 2× до заполнения 8 точек. Тест осуществляли в параллели. Затем планшеты инкубировали при 37°C, 5% CO₂ и 95% влажности в течение других 24 часов.

После завершения времени инкубации добавляли 50 мкл кристаллического фиолетового и планшеты инкубировали в течение 3 мин. После этого планшеты промывали водой для удаления избытка пигмента и в каждый планшет добавляли 50 мл водного раствора уксусной кислоты при 10%.

Полученные данные, относящиеся к подсчету клеток, обрабатывали посредством статистического программного обеспечения для параллельных линий Parlin V 4.2. Сравнение кривой дозы и ответ референсного образца и тестируемых образцов трансформировали в параллельные линии; затем задавали значения биологической активности в МЕ/мг для получения образцов, где МЕ представляют собой международные единицы. Потенциальное значение, заданное для каждого образца, должно составлять от 80 до 125% от ожидаемого значения, и геометрический коэффициент вариации (CGV) должен быть равен 20% или меньше.

Референсная биологическая активность эпидермального фактора роста до составления в форме капсулы составляла 2×10⁶ МЕ/мг.

Таблица 2
Биологическая активность эпидермального фактора роста Время тестирования (месяцы) Биологическая активность (МЕ/капсулу) Партия PFCE-1 Партия PFCE-2 Партия PFCE-3 0 951786 1166618 1084094 3 1113113 1145395 1140876 6 1154034 1088190 921622 9 1004658 1137833 952869 12 964330 1106933 1009456 18 1026334 1098926 1064994 24 915347 1022467 1118469

Как показано в результатах в таблице 2, биологическая активность EGF после выделения из капсул с содержанием EGF 0,5 мг составляет приблизительно 1×10⁶ МЕ/капсулу, что представляет собой 2×10⁶ МЕ/мг. Т.к. полученные значения в таблице 2 равны референсному значению, это свидетельствует о том, что EGF сохраняет свою активность после составления в форме капсулы и даже после 24 месяцев после упаковывания.

Пример 4: Профиль растворения

Целевой профиль растворения требует того, чтобы EGF не растворялся в условиях желудка, и достигалась терапевтическая концентрация на всем протяжении ободочной кишки по причине его быстрого растворения.

Тест на растворимость осуществляли на растворе 900 мл при 37°C и при 100 об/мин с использованием Pharmatest (PTWS, Germany) в качестве тестера растворимости в соответствии с условиями, описанными в Фармакопее USP30.

Условия в ванне для растворения

- Скорости мешалки: 50 об/мин

- Температура среды для растворения: 37°C±0,5°C

- Этап определения устойчивости к действию желудочного сока: 2 часа в HCl 0,1 N

- Буферный этап: pH 7,0

- Объем сосуда: 500 мл

- Забор тестового раствора:

Этап определения устойчивости к действию желудочного сока: через 1 час и 2 часа.

Буферный этап: через 10 мин, 5 часов и 6 часов с начала буферного этапа.

Условия хроматографического анализа

- Скорость потока: 2 мл/мин

- Колонка: Vydac C8, 250×4,6 (Id: 10531)

- Фазы: Фаза A: 0,1% TFA в воде и фаза B: 0,05% TFA в ACN

- Температура колонки: 34°C

- Вводимый объем: 100 мкл

- Длина волны возбуждения: 285 нм

- Длина волны испускаемого излучения: 345 нм

- Benefit: 16

- Градиент:

Время (мин) B (%) 0 20

18 32,5 18,5 100 22,5 100 23 20 27 20

Таблица 3
Профиль растворения гранул эпидермального фактора роста pH Время (часы) Растворенный EGF (%) 1,20 2 2,4 7,05 4 62,3 6 60,0 8 60,8 10 61,3

Профиль растворения, приведенный в таблице 3, демонстрирует, что гранулы по изобретению обладают требуемым профилем растворения. Таким образом, растворение EGF при воздействии условий в желудке (pH 1,20) составляет менее 3% за 2 часа, и по меньшей мере 60% EGF после 6 часов растворяется при воздействии условий в ободочной кишке (pH 7,05). Небольшая вариабельность, наблюдаемая в процентной доле растворенного EGF в приведенной выше таблице 3, связана с тем, что эти процентные доли являются средними значениями.

Пример 5. Исследования стабильности EGF в комбинации с эксципиентами

Анализ содержания EGF в растворах активного ингредиента и одного эксципиента или комбинации эксципиентов из указанных в примере 1 включает хранение этих растворов EGF в защищенном от света месте при 37°C в течение 30 дней для определения того, дестабилизируют ли указанные выше эксципиенты EGF посредством окисления.

После периода хранения вычисляли содержание восстановленного из раствора EGF посредством ВЭЖХ и сбор данных осуществляли с использованием программного обеспечения Unicorn версии 4.12 (Amersham Biosiences AB, Upsala, Switzerland).

Условия анализа ВЭЖХ

- Поток: 0,8 мл/мин

- Колонка: Vydac C18, 250×4,6

- Размер пор колонки: 5 мкм

- Фазы: Фаза A: 0,1% TFA в воде и фаза B: 0,05% TFA в CAN

- Длина волны детектирования: 226 нм

- Градиент: от 25 до 45% раствора B в 3 объемах колонки.

Таблица 4
Растворы EGF с одним или несколькими эксципиентами из примера 1 Образцы EGF (мл) Тальк (г) Na₂HPO₄ (г) HPMC (г) LSS (г) 1 6 0,172 0,004 0,22 0,004 2 6 0,172 - - - 3 6 - 0,004 - - 4 6 - - 0,22 - 5 6 - - - 0,004 6 6 0,172 0,004 - - 7 6 0,172 - 0,22 -

8 6 0,172 - - 0,004 9 6 - 0,004 0,22 - 10 6 - 0,004 - 0,004 11 6 - - 0,22 0,004 12 6 0,172 0,004 0,22 - 13 6 0,172 0,004 - 0,004 14 6 0,172 - 0,22 0,004 15 6 - 0,004 0,22 0,004 16 6 - - - -

Таблица 5
Содержание эпидермального фактора роста
в растворах из таблицы 4   EGF (%) Образцы Время тестирования (дни) 0 7 15 30 1 98,4 98,4 98,4 95,2 2 98,7 98,0 98,5 96,7 3 98,8 98,2 98,4 95,1 4 97,9 96,1 99,5 95,3 5 98,9 96,1 96,8 96,8 6 98,4 96,2 90,1 90,3 7 96,7 96,7 96,0 90,1 8 98,7 98,7 97,7 94,1 9 97,9 98,1 98,5 97,5 10 98,7 97,7 97,0 96,9

11 98,0 96,0 96,5 97,3 12 97,9 97,7 97,5 97,5 13 98,2 95,8 97,4 94,8 14 97,3 97,3 97,3 96,0 15 98,2 97,6 98,1 95,3 16 98,4 97,3 96,5 97,6

Как показано в таблице 5, содержание EGF сохраняется выше 90% по массе даже после нахождения в растворе в течение 30 дней. Т.к. в тестируемых растворах деградировало только приблизительно 10% EGF, считают, что эксципиенты, используемые для получения гранул по настоящему изобретению, не несут ответственности за окисление EGF.

Пример 6: Способ производства капсул гранул эпидермального фактора роста с промежуточным слоем покрытия

6.1. Способ производства гранулы с кишечнорастворимым покрытием с метионином

Композиция гранулы являлась следующей:

Ядро гранулы

Ингредиенты (%) Количество (мг/капсулу) Инертное ядро 63,79 346,18 Эпидермальный фактор роста (EGF) 0,09 0,50 Метионин 0,89 4,84 Лаурилсульфат натрия 0,03 0,19 Гидроксипропилметилцеллюлоза 2,02 10,99 Фосфат динатрия 0,03 0,19

Тальк 2,70 14,65 Общая масса ядра 69,55  

Промежуточный слой покрытия

Ингредиенты (%) Количество (мг/капсулу) Эудражит NE 30D 5,22 28,32 Тальк 5,22 28,32 Очищенная вода*   q.s. Общая масса промежуточного слоя покрытия 10,44  

Кишечнорастворимое покрытие

Ингредиенты (%) Количество (мг/капсулу) Полисорбат 80 0,05 0,27 Триэтилцитрат 0,11 0,60 Лаурилсульфат натрия 0,11 0,60 Тальк 3,94 21,38 Эудражит FS30D 15,79 85,69 Очищенная вода*   q.s. Общая масса кишечнорастворимого покрытия 20   Всего функциональных гранул 100   "q.s" означает "в достаточном количестве", * При обработке воду удаляют

В сосуде из нержавеющей стали получали водный раствор эпидермального фактора роста и с непрерывным перемешиванием добавляли метионин. При достижении однородности смеси добавляли лаурилсульфат натрия, гидроксипропилметилцеллюлозу, фосфат динатрия и тальк, продолжая перемешивать до полного растворения.

1431,83 г инертного ядра включали в псевдоожиженный слой HKC5 и покрывали предварительно подготовленным раствором при следующих условиях: поток воздуха: 200 м³/час, диаметр насадок: 1 мм, давление при распылении: 0,7 бар, доля распыления раствора: от 5 до 30 г/мин, температура воздуха: 35°C, и температура продукта: 25°C.

Получаемые таким образом ядра затем высушивали в псевдоожиженном слое в течение 1 часа, или пока значения по способу Карла Фишера не будут равными или менее чем 1,5% при температуре 35°C. Сухие ядра просеивали через сита 0,425 мм и 0,850 мм.

В сосуде из нержавеющей стали получали водную однородную дисперсию талька и просеянного эудражита NE 30D. Сухие ядра покрывали распылением водной дисперсии, полученной ранее в псевдоожиженном слое HKC-5. Рабочие условия являлись следующими: поток воздуха: 200 м³/час, диаметр насадок: 1,2 мм, давление при распылении: 0,7 бар, доля распыления дисперсии: от 5 до 30 г/мин, температура воздуха: 35°C, и температура продукта: 25°C.

Получаемые таким образом гранулы с промежуточным покрытием затем высушивали в псевдоожиженном слое в течение 1 часа при температуре 35°C. Сухие гранулы с промежуточным покрытием просеивали через сита 0,425 мм и 0,850 мм.

В сосуде из нержавеющей стали получали однородный водный раствор полисорбата 80, триэтилцитрата, лаурилсульфата натрия и талька, продолжая перемешивать при комнатной температуре до достижения однородности и полного растворения. Затем в полученный выше раствор добавляли просеянный эудражит FS30D.

Гранулы с промежуточным слоем покрытия подвергали воздействию кишечнорастворимого покрытия распылением полученной выше водной суспензии кишечнорастворимого покрытия в псевдоожиженном слое HKC-5. Рабочие условия являлись следующими: поток воздуха: 200 м³/час, диаметр насадок: 1,2 мм, давление при распылении: 0,7 бар, доля распыления раствора: от 5 до 30 г/мин, температура воздуха: 35°C, и температура продукта: 25°C.

Получаемые таким образом гранулы с кишечнорастворимым покрытием затем высушивали в псевдоожиженном слое в течение 1 часа, или пока значения по способу Карла Фишера не будут равными или менее чем 1,5% при температуре 35°C. Сухие гранулы с кишечнорастворимым покрытием просеивали через сита 0,425 мм и 0,850 мм.

6.2. Способ производства капсул гранул эпидермального фактора роста, содержащих промежуточный слой покрытия и метионин

Твердые капсулы, полученные из желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы, с гранулами с кишечнорастворимым покрытием из примера 6 раздела 6.1. наполняли с использованием автоматического устройства для наполнения капсул Bosch Zanassi.

Пример 7: Профиль растворения гранул эпидермального фактора роста, содержащих промежуточный слой покрытия

Тест на растворимость осуществляли, как описано в примере 4.

Растворимость EGF при воздействии условий в желудке (pH 1,20) составляет менее 3% за 2 часа, и по меньшей мере 60% EGF после 6 часов растворяется при воздействии условий в ободочной кишке (pH 7,05). Таким образом, гранулы, содержащие промежуточный слой покрытия по изобретению, обладают требуемым профилем растворения.

Ссылка из предшествующего уровня техники, цитируемая в заявке

1. US 2007/26082

Изобретение включает гранулу эпидермального фактора роста и серосодержащий антиоксидант, выбранный из группы, состоящей из метионина и K₂S₂O₇. Гранулы обладают требуемым профилем растворения. Предложен способ получения указанных гранул, капсула, содержащая эти гранулы, и применения указанной гранулы в лечении язвенного колита. 4 н. и 16 з.п. ф-лы, 7 пр., 8 табл.

1. Вводимая перорально фармацевтическая гранула, содержащая ядро и кишечнорастворимое покрытие, где ядро содержит фармацевтически эффективное количество эпидермального фактора роста и серосодержащий антиоксидант, выбранный из группы, состоящей из метионина и K₂S₂O₇.

2. Гранула по п.1, где молярное отношение между эпидермальным фактором роста и антиоксидантом составляет от 1:20 до 1:60.

3. Гранула по п.2, где ядро дополнительно содержит связывающее средство, подщелачивающее средство, глидант, поверхностно-активное вещество или их смеси.

4. Гранула по п.3, где связывающее средство является гидроксипропилметилцеллюлозой.

5. Гранула по п.3, где подщелачивающее средство является фосфатом динатрия.

6. Гранула по п.3, где глидант является тальком.

7. Гранула по п.3, где поверхностно-активное вещество является лаурилсульфатом натрия.

8. Гранула по п.1, где ядро содержит:
60-80% по массе инертного ядра;
0,05-1% по массе эпидермального фактора роста;
0,5-3% по массе антиоксиданта;
0,02-0,07% по массе поверхностно-активного вещества;
1,5-5% по массе связывающего средства;
0,02-0,07% по массе подщелачивающего средства; и
2-5% по массе глиданта.

9. Гранула по п.8, где ядро содержит:
69% по массе инертного ядра;
0,10% по массе эпидермального фактора роста;
1,3% по массе метионина;
0,05% по массе лаурилсульфата натрия;
2% по массе гидроксипропилметилцеллюлозы;
0,05% по массе фосфата динатрия; и
4% по массе талька.

10. Гранула по п.8, где ядро содержит:
69% по массе инертного ядра;
0,10% по массе эпидермального фактора роста;
2% по массе K₂S₂O₇;
0,05% по массе лаурилсульфата натрия;
2% по массе гидроксипропилметилцеллюлозы;
0,05% по массе фосфата динатрия; и
4% по массе талька.

11. Гранула по п.1, где кишечнорастворимое покрытие содержит полимер поли(метакриловой кислоты/метилакрилата/метилметакрилата), триэтилцитрат, лаурилсульфат натрия, тальк или их смеси.

12. Гранула по п.1, дополнительно содержащая промежуточный слой покрытия, содержащий по меньшей мере полимер с модифицированным высвобождением.

13. Гранула по п.12, где промежуточный слой покрытия дополнительно содержит глидант.

14. Гранула по п.12, где полимер с модифицированным высвобождением выбран из группы, состоящей из полиакрилатов, полиметакрилатов, этилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы, гидроксипропилметилцеллюлозы и их смесей.

15. Гранула по п.14, где полимером с модифицированным высвобождением является полимер сложных эфиров поли(этилакрилата/метилметакрилата).

16. Гранула по п.13, где глидант является тальком.

17. Способ получения гранулы по п.1, включающий:
(a) нанесение покрытия на инертное ядро распылением водной суспензии, содержащей эпидермальный фактор роста, антиоксидант и фармацевтически приемлемые эксципиенты;
(b) высушивание активного слоя, образованного на стадии (a);
(c) нанесение покрытия на ядро со стадии (b) распылением суспензии, содержащей кишечнорастворимый полимер для покрытия и фармацевтически приемлемый эксципиент, и
(d) высушивание покрытия гранулы, образованного на стадии (c),
где температура на каждой стадии способа составляет до 40°C.

18. Способ по п.17, кроме того, включающий дополнительную стадию нанесения покрытия, полученного на стадии (b) ядра распылением суспензии, содержащей полимер с модифицированным высвобождением и фармацевтически приемлемый эксципиент; и высушивание образованного слоя.

19. Фармацевтическая капсула, содержащая гранулы по п.1.

20. Способ лечения язвенного колита, включающий введение нуждающимся в таком лечении млекопитающим эффективных количеств гранулы по п.1.