ВОДНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ФОЛЛИКУЛОСТИМУЛИРУЮЩИЙ ГОРМОН Российский патент 2015 года по МПК A61K38/24 A61P15/00 

2420-177620RU/045

ВОДНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ФОЛЛИКУЛОСТИМУЛИРУЮЩИЙ ГОРМОН

Область техники

Настоящее изобретение относится к стабильной водной композиции, содержащей фолликулостимулирующий гормон.

Предшествующий уровень техники

Фолликулостимулирующий гормон (в дальнейшем сокращаемый как «ФСГ») представляет собой гормон, синтезируемый и секретируемый клетками переднего гипофиза, продуцирующими гонадотропные гормоны. ФСГ обладает действием стимуляции роста незрелых фолликулов яичника и созревания клеток в яичнике. В качестве лекарственного препарата ФСГ используют в качестве средства, индуцирующего овуляцию, во вспомогательных репродуктивных технологиях (ART).

Препараты человеческого менопаузального гонадотропина (чМГ), экстрагируемого из мочи женщин в постменопаузе, обычно использовали в качестве композиций, содержащих ФСГ. Препараты чМГ содержат ФСГ и лютеинизирующий гормон (ЛГ), где соотношение активности ФСГ и ЛГ составляет около 1:1. В зарубежных странах в последнее время преимущественно используют "препараты рекомбинантного ФСГ", получаемые путем рекомбинантных методик без использования человеческой мочи в качестве исходного материала, и также в Японии, Follistim (зарегистрированный товарный знак) был одобрен в 2005. Так как в таких рекомбинантных препаратах не используют мочу в качестве исходного материала, они не содержат примесей и обладают однородным качеством.

Биоактивные белки обычно являются нестабильными в состоянии водного раствора, и такая тенденция усиливается при повышении чистоты белка. В водных растворах белки гидролизуются таким же образом, как низкомолекулярные соединения, а также вызывают химические изменения, такие как рацемизация, и дополнительно вызывают изменения структур более высокого порядка (физические изменения), так как они являются полимерными соединениями. Примеры таких физических изменений включают денатурацию, агрегацию, адсорбцию, осаждение и подобные. В процессе физических изменений считают, что денатурация возникает как пусковой сигнал, и впоследствии вызываются такие явления, как агрегация, адсорбция и осаждение. Денатурация обозначает изменение трехмерных структур (третичных и четвертичных структур), такое как разворачивание складок цепей, и так как денатурация в большинстве случаев приводит к потере физиологической активности, важно предотвращать денатурацию для улучшенной стабильности препаратов белков или пептидов.

С целью подавления химических и физических изменений в препаратах белков, посторонние белки, такие как человеческий альбумин сыворотки, обычно добавляют в качестве стабилизирующего средства. Однако, во избежание риска контаминации вирусами и подобным, в последнее время основным направлением стало применение рекомбинантных препаратов. Для рекомбинантных препаратов исследовали различные методы стабилизации в качестве замены добавления побочных белков.

Например, исследовали увеличение стабильности препаратов белков путем добавления соединений, обладающих свойством образования водородной связи с молекулой белка или усиления гидратации молекулы белка, таких как сахариды, поверхностно-активные вещества и аминокислоты (см., например, Bull. Chem. Soc. Jpn., 53, pp.2451-2455, 1980; J. Biol. Chem., 256, pp.7193-7201, 1981; Pharm. Res., 10, pp.954-962, 1993; Int. J. Pharm., 96, pp.41-49, 1993; Pharm. Res., 8, pp.1258-1263, 1991; Pharm. Res., 10, pp.649-659, 1993, и подобные). Что касается аминокислот, среди таких соединений в DE-A-2916711, например, описывают, что глицин, α- или β-аланин, пролин, глютамин и подобные обладают стабилизирующим эффектом на факторы свертывания крови, и в патенте США № 4440679 описано, что аргинин, лизин, и/или глицин обладают стабилизирующим эффектом в отношении фактора VIII, фибронектина и подобных. В DE-A-1985644 также описано, что аргинин, лизин, гистидин, фенилаланин, триптофан, тирозин, аспарагиновая кислота и/или глютаминовая кислота оказывают стабилизирующий эффект в отношении антитромбина III. Однако стабилизирующие эффекты таких аминокислот являются специфичными для целевых белков или пептидов и, следовательно, из таких данных не могут быть предсказаны аминокислоты или комбинации двух или более типов аминокислот, обладающие наиболее эффективным стабилизирующим эффектом для произвольных белков или пептидов.

Что касается ФСГ, например, в патентном документе 1 описано, что метионин стабилизирует гонадотропин в водной композиции. Кроме того, что касается эффекта стабилизации гистидина для белков, известно что, например, гистидин обладает стабилизирующим эффектом в жидких препаратах белков, связанных с факторами свертывания крови (патентный документ 2), иммуноглобулинами (патентный документ 3), эритропоэтином (патентный документ 4), и подобными. Более того в патентном документе 5 описан препарат ФСГ, содержащий глицин, метионин, неионное поверхностно-активное вещество и фосфатное буферное вещество в качестве стабилизирующих средств. Однако неизвестно насколько гистидин обладает стабилизирующим эффектом в отношении ФСГ в водной композиции. Также неизвестно, обладает ли комбинация гистидина и другой аминокислоты стабилизирующим эффектом в отношении ФСГ в водной композиции.

Ссылки на предшествующую область техники

Патентные документы

Патентный документ 1: нерассмотренная публикация Японского патента (KOKAI) № 10-203997

Патентный документ 2: нерассмотренная публикация Японского патента (KOKAI) № 2002-275090

Патентный документ 3: нерассмотренная публикация Японского патента (KOHYO) № 2007-511566

Патентный документ 4: Международная патентная публикация WO02/011753

Патентный документ 5: нерассмотренная публикация Японского патента (KOHYO) № 2009-509953

Патентный документ 6: DE-A-2916711

Патентный документ 7: патент США № 4440679

Патентный документ 8: DE-A-1985644

Непатентные документы

Непатентный документ 1: Bull. Chem. Soc. Jpn., 53, pp.2451-2455, 1980

Непатентный документ 2: J. Biol. Chem., 256, pp.7193-7201, 1981

Непатентный документ 3: Pharm. Res., 10, pp.954-962, 1993

Непатентный документ 4: Int. J. Pharm., 96, pp.41-49, 1993

Непатентный документ 5: Pharm. Res., 8, pp.1258-1263, 1991

Непатентный документ 6: Pharm. Res., 10, pp.649-659, 1993

Сущность изобретения

Цели для достижения настоящим изобретением

Целью настоящего изобретения является обеспечение водной композиции, содержащей фолликулостимулирующий гормон. В частности, целью настоящего изобретения является обеспечение средства для стабилизации фолликулостимулирующего гормона в водной композиции с использованием аминокислоты.

Средства для достижения цели

Авторы настоящего изобретения проводили различные исследования веществ, которые стабилизируют фолликулостимулирующий гормон в состоянии водного раствора, и обнаружили, что гистидин обладает крайне выраженным стабилизирующим эффектом и достигает еще большего стабилизирующего эффекта при соответствующей комбинации с другой аминокислотой, сахаридом, буферным веществом или подобными. Настоящее изобретение было осуществлено на основании вышеупомянутых открытий.

Следовательно, настоящее изобретение обеспечивает водную композицию, включающую фолликулостимулирующий гормон и гистидин в качестве стабилизирующего средства.

В соответствии с предпочтительным вариантам осуществления настоящего изобретения обеспечивают вышеупомянутую водную композицию, где концентрация гистидина составляет от 0,05 до 10,0 мг/мл; вышеупомянутую водную композицию, где концентрация гистидина составляет от 0,2 до 5,0 мг/мл; и вышеупомянутую водную композицию, где концентрация гистидина составляет от 0,25 до 2,0 мг/мл. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения также обеспечивают вышеупомянутую водную композицию, которая дополнительно включает метионин, и в соответствии с более предпочтительными вариантами осуществления изобретения обеспечивают вышеупомянутую водную композицию, где концентрация метионина составляет от 0,05 до 10,0 мг/мл; вышеупомянутую водную композицию, где концентрация метионина составляет от 0,2 до 5,0 мг/мл; и вышеупомянутую водную композицию, где концентрация метионина составляет от 0,25 до 2,0 мг/мл. Более того также обеспечивают вышеупомянутую водную композицию, которая включает генетически рекомбинантный человеческий фолликулостимулирующий гормон в качестве фолликулостимулирующего гормона.

В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления настоящего изобретения обеспечивают вышеупомянутую водную композицию, которая дополнительно включает один или более видов веществ, выбираемых из группы, состоящей из сахарида, пропиленгликоля и креатинина; и вышеупомянутую водную композицию, которая дополнительно включает один или два или более видов веществ, выбираемых из группы, состоящей из ксилита, инозитола, пропиленгликоля, сахарозы, глюконата кальция, глюконата натрия, маннита, макрогола 600 и креатинина.

В соответствии с более предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения обеспечивают вышеупомянутую водную композицию, которая дополнительно включает поверхностно-активное вещество. В соответствии с более предпочтительными вариантами осуществления настоящего изобретения обеспечивают вышеупомянутую водную композицию, где поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из ионного поверхностно-активного вещества, амфотерного поверхностно-активного вещества и неионного поверхностно-активного вещества; вышеупомянутую водную композицию, где поверхностно-активное вещество представляет собой неионное поверхностно-активное вещество; вышеупомянутую водную композицию, где поверхностно-активное вещество состоит из Tween 80 и/или Tween 20; и вышеупомянутую водную композицию, где поверхностно-активное вещество представляет собой Tween 80.

В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения обеспечивают вышеупомянутую водную композицию, которая дополнительно включает буферное вещество. В соответствии с более предпочтительными вариантами осуществления изобретения обеспечивают вышеупомянутую водную композицию, которая включает буферное вещество, выбираемое из группы, состоящей из фосфатного буферного вещества, цитратного буферного вещества, ацетатного буферного вещества и трис буферного вещества; вышеупомянутую водную композицию, которая включает фосфатное буферное вещества или цитратное буферное вещества; вышеупомянутую водную композицию, которая имеет значение pH от 6,5 до 8,0, предпочтительно от 7,0 до 7,8; вышеупомянутую водную композицию, которая включает средство, регулирующее тонус; вышеупомянутую водную композицию, где средством, регулирующим тонус, является хлорид натрия; вышеупомянутую водную композицию, которая дополнительно включает поликарбоновую кислоту, выбираемую из группы, состоящей из ЭДТА, лимонной кислоты, фитиновой кислоты, яблочной кислоты и глюконовой кислоты; вышеупомянутую водную композицию, где поликарбоновой кислотой является ЭДТА; и вышеупомянутую водную композицию, где водной средой является фосфатный буферный раствор.

В другом аспекте настоящего изобретения обеспечивают средство для стабилизации водного раствора, содержащего фолликулостимулирующий гормон в качестве активного ингредиента, которое включает гистидин; и вышеупомянутое стабилизирующее средство, которое включает гистидин и метионин.

В еще одном аспекте настоящего изобретения обеспечивают способ для стабилизации водного раствора, содержащего фолликулостимулирующий гормон в качестве активного ингредиента, который включает стадию добавления гистидина и метионина к водному раствору; и вышеупомянутый способ, который включает стадию добавления гистидина и метионина.

Эффект изобретения

В водной композиции по настоящему изобретению фолликулостимулирующий гормон стабилизирован гистидином, и, следовательно, химические и физические изменения фолликулостимулирующего гормона существенно снижены или устранены. Следовательно, композиция является применимой в качестве стабильной фармацевтической композиции, в которой устранено снижение активности гормона во время хранения и распределения.

Краткое описание чертежей

[Фиг.1] На фиг.1 показан увеличенный вид графиков ВЭЖХ, полученных для композиций, содержащих фолликулостимулирующий гормон вокруг пиков α-субъединицы и β-субъединицы. Графики были получены для композиции, полученной добавлением генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл, сахарозы в количестве 50 мг/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 10 мМ PBS, и дополнительным добавлением к смеси гистидина после их хранения при 40°С в течение 8 недель, и композиции, полученной добавлением генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 10 мМ PBS, после их хранения при 5°С или 40°С в течение 8 недель.

[Фиг.2] На фиг.2 показан увеличенный вид графиков ВЭЖХ, полученных для композиций, содержащих фолликулостимулирующий гормон, вокруг пиков α-субъединицы и β-субъединицы. Графики получали для композиции, полученной добавлением генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл, сахарозы в количестве 50 мг/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 10 мМ PBS, и дополнительным добавлением метионина к смеси, после их хранения при 40°С в течение 8 недель, и композиции, полученной добавлением генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 10 мМ PBS, после ее хранения при 5°С или 40°С в течение 8 недель.

[Фиг.3] На фиг.3 показан увеличенный вид графиков ВЭЖХ, полученных для композиций, содержащих фолликулостимулирующий гормон, вокруг пиков α-субъединицы и β-субъединицы. Графики получали для композиции, полученной добавлением генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл, сахарозы в количестве 50 мг/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 10 мМ PBS, и последующим добавлением метионина и гистидина к смеси, после хранения их при 40°С в течение 8 недель, и композиции, полученной добавлением генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 10 мМ PBS, после их хранения при 5°С или 40°С в течение 8 недель.

Варианты осуществления изобретения

В настоящем изобретении также может быть использован натуральный фолликулостимулирующий гормон, выделенный из человеческой мочи. Эффект настоящего изобретения существенно проявляется, когда используют высокоочищенный фолликулостимулирующий гормон. Соответственно, предпочтительно использовать высокоочищенный фолликулостимулирующий гормон, предпочтительно высокоочищенный фолликулостимулирующий гормон, по существу состоящий из единственного вещества. В соответствии с настоящим изобретением в качестве фолликулостимулирующего гормона предпочтительно использовать, с вышеуказанной точки зрения, человеческий фолликулостимулирующий гормон, полученный генно-рекомбинантными технологиями, и по существу свободный от посторонних белков.

Концентрация фолликулостимулирующего гормона в водной композиции по настоящему изобретению особо не ограничена. Концентрация составляет, например, от около 50 до 500 МЕ/мл, предпочтительно от около 100 до 300 МЕ/мл. Международная единица (МЕ) фолликулостимулирующего гормона описана в документе о международном стандарте ФСГ от NIBSC (National Institute for Biological Standards и Control, http://www.nibsc.ac.uk/documents/ifu/98-704.pdf), или подобном.

Концентрация гистидина в водной композиции по настоящему изобретению также особо не ограничена. Концентрация составляет, например, от около 0,05 до 10,0 мг/мл, предпочтительно от около 0,2 до 5,0 мг/мл, более предпочтительно от около 0,25 до 2,0 мг/мл. Хотя концентрация метионина в водной композиции по настоящему изобретению также особо не ограничена, концентрация составляет, например, от около 0,05 до 10,0 мг/мл, предпочтительно от около 0,2 до 5,0 мг/мл, более предпочтительно от около 0,25 до 2,0 мг/мл.

Водная композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать один вид или два или более видов веществ, выбираемых из группы, состоящей из сахарида, пропиленгликоля и креатинина. В качестве сахарида могут быть использованы моносахариды, дисахариды, сахарные спирты, альдоновые кислоты и их соли, циклитолы, макроголы и подобные. Примеры моносахаридов включают, например, глюкозу, маннозу, галактозу, фруктозу, ксилозу, треозу и подобные, примеры дисахаридов включают, например, сахарозу, мальтозу, лактозу, целлобиозу, трегалозу и подобные, и примеры сахарных спиртов включают, например, маннит, ксилит, сорбит, эритритол, глицерин и подобные. Примеры альдоновых кислот или их солей включают, например, глюконовую кислоту, галактоновую кислоту, манноновую кислоту и подобные и их соли, примеры циклитолов включают инозитол и примеры макроголов включают макрогол 200, макрогол 300, макрогол 400, макрогол 600, макрогол 1000, макрогол 1500, макрогол 1540, макрогол 4000, макрогол 6000, макрогол 10000, макрогол 20000, и подобные.

Водная композиция по настоящему изобретению может предпочтительно содержать один или более видов веществ, выбираемых из группы, состоящей из ксилита, инозитола, пропиленгликоля, сахарозы, глюконата кальция, глюконата натрия, маннита, макрогола 600 и креатинина.

Когда водная композиция по настоящему изобретению содержит сахарозу, маннит или инозитол в качестве сахарида, сахарид может использоваться в концентрации, например, от около 25 до 125 мг/мл, и может быть предпочтительно добавлен в концентрации от около 50 до 100 мг/мл. Когда ксилит содержится в качестве сахарида, ксилит может быть использован в концентрации, например, от около 1 до 100 мг/мл, и может быть предпочтительно добавлен в концентрации от около 5 до 75 мг/мл. Когда глюконат кальция или глюконат натрия содержатся в качестве сахарида, глюконат может быть использован в концентрации, например, от около 0,2 до 75 мг/мл, и может быть предпочтительно добавлен в концентрации от около 1 до 50 мг/мл. Когда макрогол 600 содержится в качестве сахарида, поверхностно-активное вещество может быть использовано в концентрации, например, от около 0,2 до 75 мг/мл, и может быть предпочтительно добавлено в концентрации от около 1 до 50 мг/мл. Когда содержится пропиленгликоль, гликоль может быть использован в концентрации, например, от около 1 до 100 мг/мл, и может быть предпочтительно добавлен в концентрации от около 5 до 75 мг/мл. Когда содержится креатинин, креатинин может быть использован в концентрации, например от около 0,1 до 50 мг/мл, и может быть предпочтительно добавлен в концентрации от около 0,5 до 30 мг/мл.

Водная композиция по настоящему изобретению может содержать один вид или два или более видов поверхностно-активных веществ. Хотя тип поверхностно-активного вещества особо не ограничен, могут быть использованы один тип или два или более типов поверхностно-активных веществ, выбираемых из группы, состоящей из ионного поверхностно-активного вещества, амфолитного поверхностно-активного вещества, и неионного поверхностно-активного вещества. Хотя концентрация поверхностно-активного вещества особо не ограничена, поверхностно-активное вещество может быть использовано в концентрации от около 0,001 до 0,1%, и может быть предпочтительно добавлено в концентрации от около 0,005 до 0,05%, на основании общего объема водной композиции.

Примеры ионных поверхностно-активных веществ включают, например, холевую кислоту, деоксихолевую кислоту и подобные, примеры амфолитных поверхностно-активных веществ включают, например, CHAPS (3-[(холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфонат), CHAPSO (3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-2-гидрокси-1-пропансульфонат), и подобные, и примеры неионных поверхностно-активных веществ включают, например, таковые из Tween (зарегистрированный товарный знак), TRITON (зарегистрированный товарный знак), PLURONIC (зарегистрированный товарный знак), Carbowax (зарегистрированный товарный знак), и подобные. Названия, упомянутые в качестве специфических примеров неионных поверхностно-активных веществ, представляют собой таковые, представляющие собой виды поверхностно-активных веществ. Например, Tween поверхностно-активные вещества включают таковые с названием продуктов Tween 20, Tween 40, Tween 60, Tween 80, и подобные. Среди них в настоящем изобретении предпочтительно используют неионные поверхностно-активные вещества. Среди неионных поверхностно-активных веществ, Tween 20 и Tween 80 являются более предпочтительными, и Tween 80 является особенно предпочтительным.

Водная композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать буферное вещество, и композиция может содержать, например, буферное вещество, выбираемое из группы, состоящей из фосфатного буферного вещества, цитратного буферного вещества, ацетатного буферного вещества, боратного буферного вещества, тартратного буферного вещества и трис буферного вещества, и предпочтительно могут содержаться цитратное буферное вещество или фосфатное буферное вещество.

Когда используют цитратное буферное вещество, вещество может использоваться в концентрации, например, от около 10 до 250 мМ, и может быть предпочтительно добавлено в концентрации от около 25 до 75 мМ. Когда используют фосфатное буферное вещество или фосфатный буферный раствор, вещество может быть использовано в концентрации, например, от около 2 до 50 мМ, и может быть предпочтительно добавлено в концентрации от около 5 до 15 мМ. Хотя pH водной композиции по настоящему изобретению особо не ограничен, может быть получена композиция, имеющая значение рН, например, 6,5-8,0, предпочтительно 7,0-7,8, и может быть отрегулирована до желаемого значения рН с помощью соответствующего регулятора рН, такого как соляная кислота и гидроксид натрия. Водную композицию по настоящему изобретению предпочтительно получают изотоничной с жидкостями тела, и она может с такой целью содержать средство, регулирующее тонус. В качестве средства, регулирующего тонус, например, могут быть использованы хлорид натрия, глицерин и подобные, и предпочтительно может использоваться хлорид натрия.

Водная композиция по настоящему изобретению может содержать поликарбоновую кислоту, выбираемую из группы, состоящей из ЭДТА, лимонной кислоты, фитовой кислоты, яблочной кислоты и глюконовой кислоты, и может предпочтительно содержать ЭДТА. Когда содержится комплексообразующее средство, такое средство может использоваться в концентрации, например, от около 0,1 до 10,0 мг/мл, и может быть предпочтительно добавлено в концентрации от около 0,2 до 5,0 мг/мл.

В качестве водной среды для водной композиции по настоящему изобретению, например, могут быть использованы вода, дистиллированная вода для инъекций, физиологический солевой раствор, фосфатный буфер, фосфатный буферный раствор и подобные, и предпочтительно может использоваться фосфатный буферный раствор.

Хотя способ для получения водной композиции по настоящему изобретению особо не ограничен, композиция может быть получена посредством, например, растворения фолликулостимулирующего гормона и гистидина в соответствующей водной среде, такой как вода, дистиллированная вода для инъекций, физиологический солевой раствор или фосфатный буферный раствор, и необязательно добавления одного или двух или более типов аминокислот, сахаридов, пропиленгликоля, креатинина, поверхностно-активных веществ, буферных веществ, регуляторов pH, средств, регулирующих тонус, и подобных, указных выше, как требуется. Композиция может быть подвергнута процессу стерилизации, такому как фильтрационная стерилизация, требуемая для получения водной композиции для инъекций. Водная композиция по настоящему изобретению может быть использована в качестве фармацевтической композиции для инъекций, для, например, лечения бесплодия и подобного.

Примеры

Настоящее изобретение будет более точно объяснено со ссылками на примеры. Однако диапазон настоящего изобретения не ограничен следующими примерами.

Пример 1

Оценка оставшегося соотношения для аминокислот

Водные композиции получали путем добавления генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл, сахарозы в количестве 50 мг/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 50 мМ цитратного буферного вещества, 10 мМ фосфатного буферного раствора (PBS), или 10 мМ фосфатного буферного вещества (PB), и дополнительного добавления аминокислот (концентрация: 0,5 мг/мл) к смеси в такой комбинации с буферными веществами, как показано в нижеприведенной таблице 1. Порции по 0,5 мл каждой водной композиции помещали в контейнер объемом 2 мл, герметизировали и хранили при 50°C в течение двух недель. Через две недели количество ФСГ измеряли иммунологическим анализом и рассчитывали его соотношение к количеству ФСГ, измеренному в начале эксперимента (оставшееся соотношение). Результаты показаны в нижеприведенной таблице 1.

Таблица 1 Исследуемый пример № Аминокислота (0,5 мг/мл) Буферное вещество Оставшееся соотношение Пример 1-1 Гистидин Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 71% Пример 1-2 PBS
(10 мМ, pH 7,4) 76% Пример 1-3 PB
(10 мМ, pH 7,4) 60% Сравнительный пример 1-1 Метионин Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 69% Сравнительный пример 1-2 PBS
(10 мМ, pH 7,4) 70% Сравнительный пример 1-3 Аспартат натрия PBS
(10 мМ, pH 7,4) 56% Сравнительный пример 1-4 Аланин ” 55% Сравнительный пример 1-5 Гидрохлорид цистеина ” 2% Сравнительный пример 1-6 Глицин ” 70% Сравнительный пример 1-7 Глютамин ” 60% Сравнительный пример 1-8 Гидрохлорид глютамовой кислоты ” 56%

Сравнительный пример 1-9 Глютамат натрия ” 54% Сравнительный пример 1-10 Окисленный глютатион ” 59% Сравнительный пример 1-11 Цистин ” 38% Сравнительный пример 1-12 Дигидрохлорид цистина ” 43% Сравнительный пример 1-13 Цистеиновая кислота ” 47% Сравнительный пример 1-14 Серин ” 54% Сравнительный пример 1-15 Тирозин ” 40% Сравнительный пример 1-16 Триптофан ” 41% Сравнительный пример 1-17 Фенилаланин ” 44% Сравнительный пример 1-18 Пролин ” 52% Сравнительный пример 1-19 Лейцин ” 58%

Пример 2

Исследование оставшегося соотношения для комбинации аминокислот

Водные композиции получали путем добавления генетически рекомбинатного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл, сахарозы в количестве 50 мг/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 10 мМ PBS, и дополнительного добавления к смеси гистидина и/или метионина, как показано в нижеприведенной таблице 2, в соответствующих концентрациях. В качестве контроля водную композицию получали путем добавления генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 10 мМ PBS. Порции по 0,5 мл каждой водной композиции помещали в контейнер объемом 2 мл, герметизировали и хранили при 40°С в течение 8 недель. В начале эксперимента и через 5 недель и 8 недель, каждую водную композицию анализировали ВЭЖХ с обращенной фазой (графики ВЭЖХ, полученные через 8 недель, показаны на фиг.1-3), и полученные значения пиковых площадей α-субъединицы и β-субъединицы корректировали на основании значений пиковых площадей субъединиц, полученных со стандартным образцом ФСГ (10 мкг/мл замороженного раствора генетически рекомбинантного ФСГ, хранящегося при -80°С, оттаянного перед применением). Затем после периодов рассчитывали оставшиеся соотношения субъединиц в водных композициях, как соотношения количеств, измеренных после периодов, к количествам, измеренным в начале эксперимента. Количества ФСГ рассчитывали путем суммирования значений общих пиковых площадей субъединиц. Результаты показаны в нижеприведенной таблице 2.

Таблица 2 Исследуемый пример № Аминокислота Оставшееся соотношение (%)   5 недель 8 недель Пример 2-1 Гистидин
(0,5 мг/мл) α-субъединица 86,3 79,8 β-субъединица 87,8 86,6 ФСГ 87,1 83,4 Сравнительный пример 2 Метионин
(0,5 мг/мл) α-субъединица 112,1 104,9 β-субъединица 87,0 70,6 ФСГ 99,2 87,2 Пример 2-2 Гистидин
(0,5 мг/мл)+
Метионин
(0,5 мг/мл) α-субъединица 112,2 110,0 β-субъединица 98,2 93,8 ФСГ 104,8 101,5

Контроль - α-субъединица 60,3 56,0 β-субъединица 44,0 39,0 ФСГ 51,7 47,1

Из полученных результатов измерений понимают, что гистидин и метионин проявляют высокий стабилизирующий эффект в отношении α-субъединицы и β-субъединицы, соответственно. Более того, препарат ФСГ, содержащий и гистидин и метионин в качестве стабилизирующих средств, был существенно более стабильным.

Пример 3

Исследование оставшегося соотношения для концентрации гистидина

Водные композиции получали путем добавления генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл, сахарозы в количестве 50 мг/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 50 мМ цитратного буферного вещества или 10 мМ PBS, и дополнительного добавления к смеси гистидина в комбинациях, показанных в нижеприведенной таблице 3, и оставшееся соотношение исследовали таким же образом, как в примере 1. Результаты показаны в нижеприведенной таблице 3.

Таблица 3 Исследуемый пример No. Концентрация гистидина Буфер Оставшееся соотношение Пример 3-1 (Сравнительный пример) 0 мг/мл PBS (10 мМ, pH 7,4) 60% Пример 3-2 0,2 мг/мл Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 71% Пример 3-3 PBS (10 мМ, pH 7,4) 68% Пример 1-1 0,5 мг/мл Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 71%

Пример 1-2   PBS (10 мМ, pH 7,4) 76% Пример 1-3 PB (10 мМ, pH 7,4) 60% Пример 3-4 1,0 мг/мл Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 74% Пример 3-5 PBS (10 мМ, pH 7,4) 73% Пример 3-6 2,0 мг/мл Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 71% Пример 3-7 PBS (10 мМ, pH 7,4) 75% Пример 3-8 3,2 мг/мл Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 74% Пример 3-9 PBS (10 мМ, pH 7,4) 70%

Пример 4

Исследование и сравнение оставшегося соотношения для сахарида

Водные композиции получали путем добавления генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл, гистидина в количестве 0,5 мг/мл и Tween 80 в количестве 0,01% к 50 мМ цитратного буферного вещества или 10 мМ PBS, и последующего добавления сахарида, пропиленгликоля или креатинина к смеси в комбинациях, показанных в нижеприведенной таблице 4, и оставшееся соотношение исследовали таким же образом, как в примере 1. Результаты показаны в нижеупомянутой таблице 4. Результаты, полученные при отсутствии добавления гистидина, также показаны как сравнительные примеры.

Таблица 4 Исследуемый пример № Сахарид (концентрация) Буфер Оставшееся соотношение Пример 1-1 Сахароза (50 мг/мл) Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 71% Пример 1-2 ” PBS
(10 мМ, pH 7,4) 76%

Пример 4-1 Сахароза (10 мг/мл) ” 70% Пример 4-2 Инозитол (50 мг/мл) Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 79% Пример 4-3 ” PBS (10 мМ, pH 7,4) 78% Пример 4-4 Инозитол (10 мг/мл) ” 70% Пример 4-5 Ксилит (50 мг/мл) Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 79% Пример 4-6 ” PBS
(10 мМ, pH 7,4) 81% Пример 4-7 Ксилит (10 мг/мл) ” 64% Пример 4-8 Глицерин (50 мг/мл) ” 37% Пример 4-9 Глюкоза (50 мг/мл) ” 56% Пример 4-10 Глюконат кальция
(1 мг/мл) Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 70% Пример 4-11 ” PBS
(10 мМ, pH 7,4) 73% Пример 4-12 Глюконат кальция (0,2 мг/мл) ” 68% Пример 4-13 Креатинин
(25 мг/мл) ” 69% Пример 4-14 Креатинин (5 мг/мл) ” 71% Пример 4-15 Сорбит (50 мг/мл) ” 67% Пример 4-16 Декстран 70
(50 мг/мл) ” 59% Пример 4-17 Фруктоза (50 мг/мл) ” 21% Пример 4-18 Пропиленгликоль
(50 мг/мл) ” 78% Пример 4-19 Макрогол 400
(50 мг/мл) ” 67% Пример 4-20 Макрогол 600
(50 мг/мл) Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 67% Пример 4-21 ” PBS
(10 мМ, pH 7,4) 72% Пример 4-22 Макрогол 600
(10 мг/мл) ” 67%

Пример 4-23 Макрогол 4000
(50 мг/мл) ” 61% Пример 4-24 Мальтоза (50 мг/мл) ” 58% Пример 4-25 Маннит (50 мг/мл) Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 80% Пример 4-26 ” PBS
(10 мМ, pH 7,4) 73% Пример 4-27 Маннит (10 мг/мл) ” 70% Пример 4-28 Лактоза (50 мг/мл) ” 54% Сравнительный пример 4-1 Сахароза (50 мг/мл) ” 60% Сравнительный пример 4-2 Инозитол (50 мг/мл) ” 56% Сравнительный пример 4-3 Ксилит (50 мг/мл) ” 63% Сравнительный пример 4-4 Глюконат кальция
(1 мг/мл) ” 76% Сравнительный пример 4-5 Глюконат кальция (0,2 мг/мл) ” 55% Сравнительный пример 4-6 Креатинин
(25 мг/мл) ” 54% Сравнительный пример 4-7 Креатинин (5 мг/мл) ” 61% Сравнительный пример 4-8 Макрогол 600
(50 мг/мл) ” 32% Сравнительный пример 4-9 Макрогол 600
(10 мг/мл) ” 71% Сравнительный пример 4-10 Маннит (50 мг/мл) ” 64%

Пример 5

Исследование и сравнение оставшегося соотношения для поверхностно-активного вещества

Водные композиции получали путем добавления генетически рекомбинантного ФСГ в количестве 150 МЕ/мл, гистидина в количестве 0,5 мг/мл и сахарозы в количестве 50 мг/мл к 50 мМ цитратного буферного вещества, 10 мМ PBS или 10 мМ PB, и последующего добавления поверхностно-активного вещества к смеси в таких комбинациях с буферными веществами, как показано в нижеприведенной таблице 5, и оставшиеся соотношения ФСГ в композициях исследовали таким же образом, как в примере 1. Результаты показаны в нижеприведенной таблице 5. Результаты, полученные путем добавления 0,5 мг/мл метионина вместо 0,5 мг/мл гистидина, также показаны как сравнительные примеры. Стабильность указана, как соотношение количества ФСГ, измеренного через 2 недели после начала эксперимента, к количеству ФСГ, измеренному в начале эксперимента. Когда не добавляли поверхностно-активное вещество, при помещении композиции во флаконы имела место адсорбция или подобное, и количество ФСГ снижалось до около 80% такового, наблюдаемого в то же время при добавлении поверхностно-активного вещества.

Таблица 5 Пример № Поверхностно-активное вещество Буферное вещество Оставшееся соотношение Пример 1-1 Tween 80 (0,01%) Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 71% Пример 1-2 PBS
(10 мМ, pH 7,4) 76% Пример 1-3 PB
(10 мМ, pH 7,4) 60% Сравнительный пример 1-1 Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 69% Сравнительный пример 1-2 PBS
(10 мМ, pH 7,4) 70% Пример 5-1 Tween 20 (0,01%) Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 77%

Пример 5-2   PBS
(10 мМ, pH 7,4) 73% Пример 5-3 PB
(10 мМ, pH 7,4) 58% Сравнительный пример 5-1 Цитрат
(50 мМ, pH 7,4) 72% Пример 5-4 нет PBS
(10 мМ, pH 7,4) 65% Пример 5-5 PB
(10 мМ, pH 7,4) 46%

Промышленная применимость

Водная композиция по настоящему изобретению является применимой в качестве стабильной фармацевтической композиции, в которой устранено уменьшение активности во время хранения и распределения.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой водную композицию для стабилизации фолликулостимулирующего гормона, включающую фолликулостимулирующий гормон и комбинацию гистидина и метионина в качестве стабилизирующего средства, где концентрация гистидина составляет от 0,05 до 10,0 мг/мл и концентрация метионина составляет от 0,05 до 10 мг/мл, сахарозу и фосфатное буферное вещество. Изобретение обеспечивает использование комбинации гистидина и метионина в качестве стабилизирующего средства для вещества белковой природы, в частности фолликулостимулирующего гормона, в водной композиции. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 5 прим., 5 табл., 3 ил.

1. Водная композиция для стабилизации фолликулостимулирующего гормона, включающая фолликулостимулирующий гормон и комбинацию гистидина и метионина в качестве стабилизирующего средства, где концентрация гистидина составляет от 0,05 до 10,0 мг/мл и концентрация метионина составляет от 0,05 до 10 мг/мл, сахарозу и фосфатное буферное вещество.

2. Водная композиция по п. 1, которая включает генетически рекомбинантный человеческий фолликулостимулирующий гормон в качестве фолликулостимулирующего гормона.

3. Водная композиция по п. 2, которая дополнительно включает один или два или более типов веществ, выбранных из группы, состоящей из сахарида, пропиленгликоля и креатинина.

4. Водная композиция по п. 3, которая дополнительно включает один или более типов веществ, выбранных из группы, состоящей из ксилита, инозита, пропиленгликоля, глюконата кальция, глюконата натрия, маннита, макрогола 600 и креатинина.

5. Водная композиция по п. 3, которая дополнительно включает поверхностно-активное вещество.

6. Водная композиция по п. 5, где поверхностно-активным веществом является Tween 80.

7. Водная композиция по п. 1, которая имеет значение pH от 6,5 до 8,0.

8. Водная композиция по п. 1, которая дополнительно включает хлорид натрия в качестве средства, регулирующего тоничность.

9. Водная композиция по п. 8, которая дополнительно включает ЭДТА в качестве поликарбоновой кислоты.

10. Средство для стабилизации водной фармацевтической композиции, содержащей фолликулостимулирующий гормон в качестве активного ингредиента, которое включает комбинацию гистидина и метионина, где концентрация гистидина составляет от 0,05 до 10,0 мг/мл и концентрация метионина составляет от 0,05 до 10 мг/мл, сахарозу, фосфатное буферное вещество и Tween 80.