СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА И ЕГО ОБОЛОЧЕК У ДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ С ВНУТРИУТРОБНОЙ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНО-ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИЕЙ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии.

Внутриутробная инфекция у плодов и новорожденных часто характеризуется развитием воспалительных процессов в головном мозге и его оболочках (серозного менингита, менигоэнцефалита и т.д. [3, 4, 7], в патогенезе которых важная роль отводится прямому и опосредованному токсическому влиянию возбудителей инфекции [1, 2, 6]. При диагностике воспаления на уровне оболочек головного мозга и его ликворной системы у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией часто используется серологический, биохимический анализ спинномозговой жидкости и нейросонография [3, 4]. Известен способ диагностики поражения головного мозга различной степени тяжести у новорожденных, основанный на определении маркеров эндотоксикоза в надосадочной части биологической жидкости их носоглоточного аспирата [6].

Недостатком известного способа [6] является:

1. Не позволяет осуществлять раннюю диагностику воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией с помощью определения концентрации серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата при их рождении.

Целью предлагаемого способа является обеспечение ранней диагностики воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией.

Способ содержит следующие приемы:

1. К стерильному шприцу присоединяют мягкий катетер.

2. Мягкий катетер осторожно вводят в полость носа и носоглоточного пространства новорожденному сразу после рождения.

3. Шприцем медленно насасывают 2,5-3 мл биологической жидкости, содержащейся в носовых ходах и носоглотке у новорожденного.

4. Полученные 2,5-3 мл биологической жидкости носоглоточного аспирата центрифугируют на центрифуге при 1500 об/мин в течение 10 минут для получения ее надосадочной части.

5. Для определения серомукоида берется 0,2 мл биологической жидкости аспирата и добавляется 0,2 мл 0,95% водного раствора хлористого натрия и 0,2 мл 0,45 молярной сульфосалициловой кислоты. В течение 30 минут смесь центрифугируют при 1500 об/мин. Затем к 0,3 мл надосадочной жидкости добавляется 0,6 мл 0,85% водного раствора хлористого натрия и 4 мл 0,1% водного раствора танина, перемешивается и кипятится в течение 30 минут в ледяной бане и выливается в 10-миллиметровую кювету фотоэлектрокалориметра (ФЭК). Определяется показатель экстинкции при 590 нм (красный фильтр). Эталоном сравнения служит дистиллированная вода [5].

6. Внутриутробная цитомегаловирусная инфекция диагностируется при обнаружении титра антител IgM к цитомегаловирусу (ЦМВ) 1:200 в пуповинной крови у новорожденных, четырехкратного роста титров антител IgG к ЦМВ у новорожденных по сравнению с таковым у их матерей, например, 1:200-1:800 с помощью тест- систем фирмы "ВЕКТОР-БЕСТ" (Россия), а также полимеразной цепной реакции (ПЦР)- маркеров дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК)-ЦМВ в пуповинной крови.

7. Внутриутробная герпетическая вирусная инфекция диагностируется при обнаружении титра антител IgM к вирусу простого герпеса 1 типа (ВГТГ-1 типа) 1:200 в пуповинной крови у новорожденных, четырехкратного роста титра антител IgG к ВПГ-1 типа у новорожденных по сравнению с таковым у их матерей, например, 1:200-1:800, а также ПЦР- маркеров ДНК-вируса простого герпеса в пуповинной крови.

8. Проводят раннюю диагностику воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией: при концентрации серомукоида, равной 0,135-0,195 единиц оптической плотности (ед. опт. плот.), не диагностируются воспалительные заболевания головного мозга и его оболочек; при концентрации серомукоида, равной 0,196-0,256 ед. опт. плот., диагностируют воспалительные заболевания головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией.

Для проведения ранней диагностики воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией по уровню эндотоксемии нами исследовалась концентрация серомукоида в носоглоточном аспирате у 21 новорожденного без воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек при внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекции (первая опытная группа). Вторую опытную группу составили 21 новорожденный с воспалительными заболеваниями головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией.

Контролем являлась группа из 32 здоровых новорожденных от матерей с физиологически протекающей беременностью.

Показатели концентрации серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата у здоровых доношенных новорожденных (контрольная группа), у доношенных новорожденных без воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек при внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекции (первая опытная группа), у доношенных новорожденных с воспалительными заболеваниями головного мозга и его оболочек при внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекции (вторая опытная группа), представлены в таблице.

Из таблицы видно, что у доношенных новорожденных без воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек при внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекции, по сравнению с доношенными новорожденными контрольной группы, возрастает концентрация серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата до 0,165±0,003 (0,135-0,195) ед. опт. плот. (p<0,001).

При сравнении содержания серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата у доношенных новорожденных первой и второй опытных групп установлено его увеличение при воспалительных заболеваниях головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией до 0,226±0,004 (0,196-0,256) ед. опт. плот. (p<0,001) (см. табл.).

Примечание: р - уровень значимости различий между показателями в контрольной, первой и второй опытных группах; p₁ - уровень значимости различий между показателями первой и второй опытных групп.

Учитывая статистическую значимость показателей концентрации серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата у доношенных новорожденных с воспалительными заболеваниями головного мозга и его оболочек при внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекции, мы предлагаем использовать эти показатели как критерии ранней диагностики.

При концентрации серомукоида в надосадочной части биологической жидкости аспирата 0,135-0,195 ед. опт. плот. не диагностируют воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией, а при концентрации серомукоида 0,196-0,256 ед. опт. плот. диагностируют воспалительные заболевания головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией.

Для иллюстрации эффективности предлагаемого способа ранней диагностики воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией приводим следующие примеры.

Пример 1.

Новорожденный А. Родился от первой беременности. Мать регулярно наблюдалась в женской консультации, где находилась на учете с 6 недель. Течение первого, второго и третьего триместров беременности без особенностей. Серологически в сыворотке крови у матери не определялись маркеры хронической цитомегаловирусно-герпетической инфекции, что подтверждалось отсутствием антител IgG к цитомегаловирусу (ЦМВ) и вирусу простого герпеса 1 типа (ВПГ-1 типа). Роды первые, в срок, через естественные родовые пути. Околоплодные воды были светлыми.

Клинический диагноз матери: Роды первые в срок. Амниотомия. Эпизиотомия.

Родился мальчик с массой 3360 г, длиной - 53 см, окружностью головы - 34 см и груди 32 см. В родильном зале оценка по Апгар 9/10 баллов. При серологическом анализе в сыворотке пуповинной крови у новорожденного отсутствовали антитела IgG к ЦМВ и ВПГ-1 типа, а также не обнаруживались ПЦР- маркеры ЦМВ и ВПГ-1 типа.

В пуповинной крови у новорожденного количество лейкоцитов равнялось 8,5×10⁹/л. В лейкоцитарной формуле эозинофилы составляли 1%, палочкоядерные нейтрофилы - 1%, сегментоядерные нейтрофилы - 57%, лимфоциты - 37% и моноциты - 4%. Концентрация серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата, полученного сразу после рождения ребенка, составляла 0,092 ед. опт. плот.

Состояние ребенка при рождении было удовлетворительным. Кожа лица и туловища была розового цвета. Большой родничок 1,4×1,6 см, не напряжен. Крик у ребенка был громкий, а мышечный тонус и сухожильные рефлексы нормальные. Физиологические рефлексы были четко выражены. Тоны сердца ясные, ритмичные до 145 ударов в 1 минуту. Частота дыхания 48 в 1 минуту. Дыхание в легких пуэрильное, проводилось по всем полям. Наружные половые органы развиты правильно по мужскому типу.

В раннем неонатальном периоде развития ребенка не отмечалось осложнений. Пуповина отпала через 3,0 суток. Ребенок выписан из отделения на 7 сутки в удовлетворительном состоянии.

Клинический диагноз: Здоровый новорожденный.

Пример 2.

Новорожденная С. Родилась от первой беременности. Мать в женской консультации наблюдалась регулярно с 4 недель гестации. В первые 8 недель гестации у матери отмечались признаки раннего гестоза (тошнота, рвота до 4 раз в день). В 20 недель серологически диагностировалась реактивация хронической цитомегаловирусно-герпетической инфекции. При серологическом анализе у матери определялись антитела IgM к ЦМВ и ВПГ-1 типа 1:100-1:200, а также четырехкратный рост антител IgG к ЦМВ и ВПГ-1 типа в парных сыворотках крови (при поступлении в стационар и через 14 дней). С 25 недели регистрировались симптомы хронической плацентарной недостаточности, по поводу которой она лечилась в стационаре. Роды первые, в срок, через естественные родовые пути. Околоплодные воды светлые.

Клинический диагноз матери: Роды первые в срок. Реактивация хронической цитомегаловирусно-герпетической инфекции. Хроническая плацентарная недостаточность. Хроническая внутриутробная гипоксия плода. Эпизиотомия. Эпизиорафия.

Родилась девочка с массой 3150 г, длиной - 53 см, окружностью головы - 34 см и груди 33 см. В родильном зале оценка по Апгар 5/7 баллов. При серологическом исследовании сыворотки крови из вены пуповины у новорожденной диагностировалась внутриутробная цитомегаловирусно-герпетическая инфекция. ПЦР- маркеры на ЦМВ и ВПГ-1 типа - положительные. При рождении у нее общее количество лейкоцитов составляло 7,5×10⁹/л. В лейкоцитарной формуле эозинофилов было 0%, палочкоядерных нейтрофилов - 2%, сегментоядерных нейтрофилов - 58%, лимфоцитов - 28% и моноцитов - 12%. Концентрация серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата составляла 0,157 ед. опт. плот.

Состояние новорожденной было средней степени тяжести. Обращал на себя внимание цианоз носогубного треугольника, снижение активности и мышечного тонуса. Сухожильные рефлексы у ребенка были ослаблены. Физиологические рефлексы неотчетливые. Тоны сердца приглушенные, ритмичные до 146 ударов в 1 минуту. Частота дыхания 50 в 1 минуту. В легких выявлялись ограниченные участки ослабленного дыхания. Через 6 часов - состояние новорожденной тяжелое. У ребенка появилось стонущее дыхание, акроцианоз. Тоны сердца приглушенные до 150 в 1 минуту. Частота дыхания 52 в 1 минуту. Аускультативно дыхание в легких пуэрильное. Периодически регистрировалось повышение напряженности большого родничка. Обнаруживалось снижение двигательной активности и чередование избирательного повышения тонуса в сгибательных мышцах, переходящее в судороги. Отмечались выраженный симптом Грефе, нистагм и асимметрия мышечного тонуса.

Диагноз новорожденного: Внутриутробная цитомегаловирусно-герпетическая инфекция. Церебральная ишемия средней степени тяжести. Гипертензионно-гидроцефальный синдром.

Пример 3.

Новорожденный Р. Родился от второй беременности. Мать наблюдалась в женской консультации регулярно с 6 недель. До 10 недель беременность протекала с симптомами легкого гестоза (тошнота, рвота до 4 раз в сутки). В 25 недель отмечалась реактивация хронической цитомегаловирусно-герпетической инфекции. Серологически у матери определялись антитела IgM к ЦМВ и ВПГ-1 типа, а также четырехкратный рост антител IgG к ЦМВ и ВПГ-1 типа в парных сыворотках крови (при поступлении в стационар и через 14 дней). В 24 недели диагностировалась внутриутробная гипоксия и хроническая плацентарная недостаточность, по поводу которой лечилась в стационаре. Роды вторые в срок, через естественные родовые пути. Околоплодные воды зеленые.

Клинический диагноз матери: Роды вторые, в срок. Реактивация хронической цитомегаловирусно-герпетической инфекции. Хроническая плацентарная недостаточность. Хроническая внутриутробная гипоксия плода. Эпизиотомия. Эпизиорафия.

Родился мальчик с массой 3520 г, длиной - 53 см, окружностью головы - 34 см и груди 33 см. В родильном зале оценка по Апгар 5/7 баллов. Группа крови А(II), резус - положительный. Состояние новорожденного при рождении средней степени тяжести. Кожа лица, конечностей и туловища были чистые. Отмечались цианоз носогубного треугольника, снижение мышечного тонуса и сухожильных рефлексов. Физиологические рефлексы были нечетко выраженными. Тоны сердца приглушенные, ритмичные до 147 ударов в 1 минуту. Частота дыхания 48 в 1 минуту. Дыхание в легких пуэрильное.

При серологическом исследовании сыворотки крови из вены пуповины у новорожденного выявлялись маркеры внутриутробной цитомегаловирусной и герпесвирусной инфекции (антитела IgM к ЦМВ и ВПГ-1 типа, а также антитела IgG к ЦМВ и ВПГ-1 типа). ПЦР- маркеры ЦМВ и ВПГ-1 типа - положительные. Общее количество лейкоцитов равнялось 9,0×10⁹/л. В лейкоцитарной формуле палочкоядерные нейтрофилы составляли - 2%, сегментоядерные нейтрофилы - 48%, лимфоциты - 39%, моноциты - 11%. Концентрация серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата, полученного сразу после рождения ребенка, составляла 0,221 ед. опт. плот.

При осмотре ребенка через 6 часов наблюдалась отрицательная динамика. Состояние новорожденного тяжелое. Отмечалась болезненная реакция на осмотр, выраженная гиперестезия и полуфлексорная поза. Ребенок сосал вяло. Кожа бледно-розовая с иктеричным оттенком. Экхимозы на первой и третьей фалангах правой кисти. Наблюдалось снижение двигательной активности и мышечного тонуса. Сухожильные рефлексы были оживлены. Регистрировалось ослабление рефлекса автоматической ходьбы и ползания по Бауэру, а также отсутствие рефлекса Таланта. Наблюдалось угнетение рефлексов Бабкина и Робинсона. Определялась ригидность мышц затылка. Пальпаторно не определялось напряжение большого родничка. Тоны сердца были громкие, ритмичные. Частота сердечных сокращений 145 ударов в 1 минуту. Тоны сердца были приглушенные, ритмичные до 150 ударов в 1 минуту, Дыхание пуэрильное, проводилось по всем полям. Частота дыхательных движений составляла 47 в 1 минуту. Печень определялась у края реберной дуги. Селезенка не пальпировалась. Отведение в тазобедренных суставах полное. При проведении в асептических условиях с диагностической целью люмбальной пункции отмечалось выделение мутного ликвора под умеренным давлением (цитоз - 154/3, нейтрофилы 124, лимфоциты- 30, белок - 0,66 г/л, реакция Панди++). По эпидемиологическим показаниям ребенок переведен в Амурскую областную клиническую больницу в отделение патологии новорожденных.

Клинический диагноз новорожденного: Внутриутробный менингит цитомегаловирусно-герпетической этиологии.

Технический результат предлагаемого изобретения заключается в следующем:

1. Предлагаемый нами способ ранней диагностики воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией основан на определении в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата серомукоида: при концентрации серомукоида, равной 0,135-0,195 ед. опт. плот., не диагностируют воспалительное заболевание головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией, а при концентрации серомукоида, равной 0,196-0,256 ед. опт. плот., диагностируют воспалительные заболевания головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией.

Способ апробирован в акушерском стационаре Амурской областной клинической больницы при обследовании 42 новорожденных и позволяет осуществлять в 92,9% случаев раннюю диагностику воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией за 6 часов до развития клинической картины инфекционного заболевания.

Используемые информационные источники

1. Баканов М.И., Алатырцев В.В., Подкопаев В.Н. Креатинкиназа-ВВ и нейронспецифическая енолаза в цереброспинальной жидкости у новорожденных детей с перинатальными поражениями центральной нервной системы//Педиатрия. - 1999. - №2. - С. 4-8.

2. Барашнев Ю.И., Бессонова Ю.В. Индикаторы перинатальных повреждений головного мозга плода и новорожденного // Акуш. и гин. - 1997. - №2. - С. 28-33.

3. Нагибина Н.С., Ширинская О.Г. Нейросонография при внутриутробных инфекциях у новорожденных//Эпидемиология и инфекционные болезни. - 1997. - №1. - С. 30-32.

4. Орловская И.В. Диагностика внутриутробной герпес-вирусной инфекции новорожденных с церебральными изменениями: Автореф. дис…канд. мед. наук. Москва, 1995. - 23 с.

5. Самсонов В.П., Луценко М.Т., Новик Е.В. Диагностика различных степеней эндотоксикоза при абсцессах легких: методические рекомендации МЗ РСФСР, Институт физиологии и патологии дыхания СО АМН СССР. - Благовещенск, 1988. - 10 с.

6. Способ ранней диагностики церебральной ишемии различной степени тяжести у новорожденных: пат. 2372620, Рос. федерация: МПК G01N 33/68 / И.Н. Гориков, В.П. Самсонов, Л.Г. Нахамчен, И.В. Довжикова; заявитель и патентообладатель ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН. - №2008137878/15; завл. 10.11.2009; опубл. 27.12. 2008, бюл. №34.

7. Федорова М.В., Серов В.Н., Стрижаков А.Н., Тареева Т.Г. Внутриутробные инфекции // Вестник Рос. ассоциации акушеров-гинекологов. - 1997. - №2. - С. 89-99.

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии. Предлагаемый способ включает определение концентрации серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата. При значениях концентрации серомукоида 0,135-0,195 единиц оптической плотности отмечают отсутствие воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией. При концентрации серомукоида 0,196-0,256 единиц оптической плотности диагностируют воспалительные заболевания головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией. Применение изобретения обеспечивает раннюю диагностику воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией. 1 табл., 3 пр.

Способ ранней диагностики воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией путем определения концентрации серомукоида в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата, при значениях которого 0,135-0,195 единиц оптической плотности отмечают отсутствие воспалительных заболеваний головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией, а при концентрации серомукоида 0,196-0,256 единиц оптической плотности диагностируют воспалительные заболевания головного мозга и его оболочек у доношенных новорожденных с внутриутробной цитомегаловирусно-герпетической инфекцией.