Изобретение относится к созданию фармацевтической композиции с широким спектром фармакологической активности, а именно обладающей противогипоксической, нейропротекторной и антиамнестической активностью, а также способной повышать физическую работоспособность.
Одной из актуальных проблем современной медицины является разработка эффективных средств защиты центральной нервной системы за счет активизации различных метаболических процессов мозга. Актуальность разработки новых лекарственных средств, обладающих выраженной нейропротекторной активностью, определяется, в частности, высокой смертностью при инсульте.
Известен оригинальный отечественный лекарственный препарат семакс (гептапептид метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин), обладающий высокой нейропротекторной активностью (И.П. Ашмарин и соавт., 2005; А.Г. Чучалин и соавт. /ред./, 2008).
Известно лекарственное средство цитиколин натрия (ноотроп с холиностимулирующими свойствами, в составе которого содержится 40,5% метаболически защищенного холина; обеспечивает синтез ацетилхолина и фосфатидилхолина в мембране нейронов, улучшает синаптическую передачу, пластичность, функционирование рецепторов, мозговой кровоток и усиливает метаболические процессы в мозге, активирует ретикулярную формацию ствола мозга), которое обладает аналогичной активностью (А.А. Скоромец, В.В. Ковальчук, 2007; А.Г. Чучалин и соавт. /ред./, 2008; Onishchenko et al., 2008).
В настоящее время семакс и цитиколин натрия широко применяют в неврологии при острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения и связанных с ней заболеваниях, в том числе, при мозговом инсульте и его последствиях (Е.И. Гусев, В.И. Скворцова, 2001; А.Г. Чучалин и соавт. /ред./, 2008; Di Perri et al., 1991; Parnetti et al., 2001). Однако в клинике семакс и цитиколин натрия не всегда эффективны (Е.И. Гусев, В.И. Скворцова, 2001; Parnetti et al., 2001; Mandat et al., 2003).
Известна фармацевтическая композиция, обладающая нейропротекторной, противогипоксической, антиамнестической активностью и повышающая физическую работоспособность, содержащая семакс и холина альфосцерата в весовом соотношении от 1:50 до 1:8000 (патент РФ 2425670 от 2010 г).
Однако холина альфосцерат нельзя использовать перорально, и он вызывает тошноту и допанминэргические реакции (Инструкция по применению Холина альфосцерат; код ATX N07AX02, владелец регистрационного удостоверения №ЛП-001431 - Компания ДЕКО, ООО).
В связи с изложенным задачей изобретения является расширение арсенала средств, обладающих противогипоксической, нейропротекторной и антиамнестической активностью и повышающих физическую работоспособность с учетом устранения побочных проявлений и повышения биодоступности.
Поставленная цель достигается созданием фармацевтической композиции, которая содержит в качестве активных компонентов семакс и цитиколина натрия при следующем содержании компонентов, мг:
Цитоколин натрия усиливает эндогенный синтез фосфотидилхолина, может применяться при беременности, низкая токсичность. Известны случаи, когда при малом количестве холина и/или увеличении потребности ацетилхолина, фосфолипиды нейронных мембран расщеплялись как источник холина, используемый для производства ацетилхолина. В этих обстоятельствах цитиколин, как источник холина, способен защитить нейроны от «самопожирания».
Эндогенный и экзогенный цитиколин используется:
- для синтеза протеинов (через бетаин и метионин).
- для синтеза ацетилхолина (через холин),
- для синтеза нуклеиновых кислот (через цитидин фосфат).
Бионакопление цитиколина составляет до 92%.
Противогипоксическое действие композиции семакса и цитиколин натрия на модели острой нормобарической гипоксической гипоксии с гиперкапнией (в гермокамере) исследовали на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-25 г по известной методике, описанной в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000).
Острую нормобарическую гипоксическую гипоксию с гиперкапнией воспроизводили путем помещения мышей (поодиночке) в гермокамеру: животных сажали в стеклянные банки одинакового объема (250 см3), которые герметично закрывали. По мере потребления кислорода концентрация его в воздухе сосуда и в организме снижалась, а количество углекислого газа наоборот возрастало. В результате у животных развивалась острая гипоксическая гипоксия с гиперкапнией. Регистрировали с помощью секундомера продолжительность жизни мышей (до остановки дыхания) в гермокамере в минутах (с точностью до 0,1 минуты /мин/) и по ее увеличению судили об эффективности испытанных фармакологических веществ. Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили внутрибрюшинно (в/б) (композицию, содержащую семакс и цитиколин натрия, - за 3 часа (ч), один семакс - за 3 ч, цитиколин натрия - за 3 ч) до помещения животных в гермокамеру.
Острую гемическую гипоксию воспроизводили путем подкожного (п/к) введения мышам метгемоглобинообразователя натрия нитрита (NaNO2) в дозе 300 мг/кг. Как известно, NaNO2 переводит оксигемоглобин в метгемоглобин, вызывает метгемоглобинемию и 100% гибель животных в указанной дозе. Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили в/б (композицию, содержащую семакс и цитиколин натрия, - за 3 ч, один семакс - за 3 ч, один цитиколин натрия - за 3 ч) до введения NaNO2. Регистрировали с помощью секундомера продолжительность жизни мышей (до остановки дыхания) в минутах (с точностью до 0,1 мин) при острой гемической гипоксии.
Острую гистотоксическую гипоксию моделировали путем п/к введения мышам натрия нитропруссида в дозе 20 мг/кг. Он способен полностью ингибировать (за счет группы CN-) цитохромоксидазу и в указанной дозе вызвать 100% гибель мышей. Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили в/б (композицию, содержащую семакс и цитиколин натрия, - за 3 ч, один семакс - за 3 ч, один цитиколин натрия - за 3 ч) до введения натрия нитропруссида. Регистрировали с помощью секундомера продолжительность жизни мышей (до остановки дыхания) в минутах (с точностью до 0,1 мин) в условиях гистотоксической гипоксии.
Острую гипобарическую гипоксию моделировали у мышей в проточно-вытяжной барокамере; животных поднимали со скоростью 50 м/с до «высоты» 11000 м (Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств/ Под редакцией Л.Д. Лукьяновой, 1990). Регистрировали выживаемость и продолжительность жизни животных. Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили в/б (композицию, содержащую семакс и цитиколин натрия, - за 3 ч, один семакс - за 3 ч, один цитиколин натрия - за 3 ч) до помещения животных в барокамеру.
Нейропротекторное действие композиции семакса и цитиколин натрия оценивали на животных с экспериментальной ишемией головного мозга - на модели ишемического инсульта. Исследования выполнены на белых нелинейных крысах-самцах массой 220-280 г, содержащихся в виварных условиях, у которых моделировали ишемический инсульт.
Ишемию головного мозга у крыс воспроизводили путем одномоментной перевязки (под эфирным наркозом) обеих общих сонных артерий. У ложнооперированных животных (контрольная группа №1) операция была ограничена этапом доступа к общим сонным артериям. В контрольной группе №2 крысы получали только изотонический раствор натрия хлорида. В подопытных группах животным вводили в/б различные вещества (семакс и цитиколин натрия по отдельности и композицию их содержащую) 1 раз в сутки в течение 7 суток; в первые сутки - через 1 и 3 ч после операции. Животных после операции наблюдали в течение 2 недель с учетом выживаемости крыс. Неврологический дефицит у животных определяли (слепым методом) по шкале McGraw et al. (1976) (в баллах) каждый час в течение 24 ч, а затем 1 раз в сутки. Тяжесть состояния определяли по сумме соответствующих баллов. У ложнооперированных животных неврологический дефицит отсутствовал.
Влияние композиции семакса и цитиколин натрия на процессы обучения и памяти исследовали на белых нелинейных мышах-самцах (массой 20-24 г), используя условную реакцию пассивного избегания (УРПИ) электрокожного раздражения (Я. Буреш и соавт., 1991; К.М. Дюмаев и соавт., 1995). В настоящее время тест УРПИ является базисной моделью для оценки влияния веществ на формирование и воспроизведение памятного следа в норме и в условиях его нарушения (амнезия), а также наиболее информативным из применяемых сегодня методов оценки эффективности веществ с ноотропной активностью («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», 2000). Выработку УРПИ у мышей производили на основе электрокожного подкрепления по методу Cumin et al. (1982) с учетом рекомендаций Mondadori et al. (1990). Установка для мышей представляла собой экспериментальную камеру черного цвета размером 30×40×30 см с электродным полом и белой пластиковой платформой (7,5×7,5×0,5 см), которую располагали на полу в центре камеры. Мышей (поодиночке) помещали на пластиковую платформу. Обычно животные спускаются (или спрыгивают) с платформы на электродный пол, где они получают «наказание» - удар электрическим током (в это время на пол камеры подавали постоянный электрический ток силой 0,5 мА). Электрический ток включали только тогда, когда мышь касалась пола всеми четырьмя конечностями. Обычной реакцией животных было возвращение на безопасную платформу. После 5 мин обучения у мышей вырабатывалась УРПИ - они оставались на платформе. Тестирование на сохранность УРПИ проводили через 24 ч после амнезирующего воздействия. При этом если животное покидало платформу в течение 1 мин, у него отмечали ретроградную амнезию навыка пассивного избегания.
В качестве амнезирующего воздействия использовали электросудорожный шок (ЭСШ; параметры электрического тока: 50 Гц, 50 мА, 0,3 с), который наносили мышам с помощью электродов в виде клипс, фиксируемых на ушных раковинах (транспиннеально), сразу после обучения УРПИ («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», 2000). У животных контрольной группы вызывали псевдоэлектросудорожный шок: накладывали пиннеальные электроды для нанесения ЭСШ без подачи электрического тока. Семакс (один), цитиколин натрия (один), композицию их содержащую и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили в/б в период генерализованных судорог, вызванных ЭСШ, то есть непосредственно после ЭСШ. Тестирование мышей на сохранение УРПИ производили через 24 ч после ЭСШ.
Антиамнестическое действие семакса и цитиколин натрия на модели амнезии, вызванной скополамином, исследовали на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-24 г с применением выработки у животных УРПИ (описанной выше). Для воспроизведения модели скополаминовой амнезии м-холиноблокатор вводили мышам в/б в дозе 1 мг/кг сразу после обучения УРПИ («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», 2000). Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили в/б (композицию, содержащую семакс и цитиколин натрия, - за 3 ч, один семакс - за 3 ч, один цитиколин натрия - за 3 ч) вводили однократно в/б до обучения мышей. Тестирование мышей на сохранение УРПИ производили через 24 ч после введения скополамина.
Антиамнестическое действие семакса и цитиколин натрия на модели амнезии, вызванной плаванием мышей в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения, исследовали на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-24 г с применением выработки у животных УРПИ (описанной выше). Животных (поодиночке) помещали в заполненный водой пластиковый ящик размером 17×9×19 см с вращающимся ребристым колесом. Плавание мышей в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения (ПМХВ) применяли сразу после обучения УРПИ. Сохранность УРПИ проверяли через 24 ч после окончания ПМХВ. В качестве ложного ПМХВ использовали помещение животных в мокрые холодные опилки. Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили в/б (композицию, содержащую семакс и цитиколин натрия, - за 3 ч, один семакс - за 3 ч, один цитиколин натрия - за 3 ч) вводили однократно в/б до обучения мышей.
Антиамнестическое действие семакса и цитиколин натрия на модели амнезии, вызванной острой нормобарической гипоксической гипоксией с гиперкапнией (в гермокамере), исследовали на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-24 г с применением выработки у животных УРПИ (описанной выше). Описанную выше модель острой нормобарической гипоксической гипоксии с гиперкапнией также использовали для вызывания у животных ретроградной амнезии навыка пассивного избегания. Для этого мышей сразу после обучения УРПИ помещали (поодиночке) в гермокамеру на 16-18 мин в зависимости от выраженности симптомов кислородной недостаточности и массы (чем больше масса, тем обычно меньше время их пребывания в гермокамере). В контрольной группе животных подвергали ложной гипоксии - сажали мышей в стеклянные банки одинакового объема, которые не закрывали. Проверку сохранения УРПИ проводили через 24 ч после окончания воздействия гипоксии с гиперкапнией. Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили в/б (композицию, содержащую семакс и цитиколин натрия, - за 3 ч, один семакс - за 3 ч, один цитиколин натрия - за 3 ч) однократно до обучения мышей.
Исследование влияния композиции семакса и цитиколин натрия на физическую работоспособность мышей. Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-22 г. Физическую работоспособность мышей оценивали по тесту бега в шестидорожечном третбане (Н.Н. Самойлов и соавт., 2002). На каждую беговую дорожку ленты транспортера помещали одно животное. Скорость движения ленты составляла 32 м/мин. Мыши бегали до полного утомления, критерием которого было отсутствие реакции на раздражение электрическим током при нахождении на «электрическом столе». Учитывали продолжительность бега животных в минутах, с точностью до 0,1 мин. Семакс (один), цитиколин натрия (один), композицию, их содержащую, и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили внутрибрюшинно (композицию - за 3 ч, семакс - за 3 ч, цитиколин натрия - за 3 ч) до бега в третбане.
Для расшифровки механизма действия композиции семакса и цитиколин натрия проводили электрофизиологические исследования на переживающих поперечных срезах гиппокампа крыс (В.Г. Мотин и соавт., 2000; N.V. Kalashnicova et al., 2005). Суммарную электрическую активность регистрировали в пирамидном слое поля СА1 с помощью одноканальных стеклянных микроэлектродов, заполненных 0,15 М раствором натрия хлорида. Орто- и антидромную электрическую стимуляцию осуществляли посредством платиновых биполярных электродов (прямоугольные импульсы длительностью 0,1 мс, амплитудой 3-8 В, одиночные или парные), которые помещали в области коллатералей Шаффера и альвеуса соответственно. Регистрировали одиночные или парные орто- и антидромные популяционные ответы. Исследовали влияние семакса и цитиколин натрия, а также их композиции в разных концентрациях на эти ответы. Это позволило, в частности, оценить их действие на синаптическую передачу в системе коллатерали Шаффера - пирамиды поля СА1.
Полярографическое исследование дыхания изолированных митохондрий клеток головного мозга крыс. Митохондрии выделяли из ткани головного мозга белых нелинейных крыс-самцов (массой 210-260 г) с помощью дифференциального центрифугирования по методике Brustovetsky, Dubinsky (2000). Определение содержания белка в изолированных митохондриях проводили по методу Брэдфорд (1976). Потребление кислорода изолированными митохондриями регистрировали полярографически с помощью стандартного электрода Кларка в 1 мл среды инкубации (маннит - 215 мМ, сахароза - 75 мМ, MgCl2 - 2 мМ, KH2PO4 - 10 мМ, бычий сывороточный альбумин - 0,1%, ЭГТА - 1 мМ, HEPES - 20 мМ, pH 7,4) при постоянном перемешивании. Скорость потребления кислорода (O2) выражали в наномолях (нМ) O2 за 1 мин в расчете на 1 мг белка митохондрий. Исследовали влияние семакса и цитиколин натрия, а также их композиции в разных концентрациях на дыхание изолированных митохондрий клеток головного мозга крыс. Числовые данные обработаны методами вариационной статистики.
Противогипоксическое действие композиции семакса и цитиколин натрия на 4 моделях острой гипоксии. На модели острой нормобарической гипоксической гипоксии с гиперкапнией (в гермокамере) было обнаружено, что семакс в количестве 0,025 и 0,2 мг существенно не изменял продолжительность жизни мышей в гермокамере, а в количестве 0,05 и 0,3 мг значимо (p<0,01) увеличивал этот показатель на 23% и 24% соответственно. Цитиколин натрия в количестве 100, 200, 400 и 800 мг существенно не изменял продолжительность жизни животных.
Однако композиции, содержащие семакс и цитиколин натрия, значимо увеличивали продолжительность жизни животных в гермокамере: композиция семакса 0,025 мг и цитиколин натрия 200 мг, а также композиция семакса 0,05 мг и цитиколин натрия 100 мг - на 29% (p<0,01), композиция семакса 0,2 мг и цитиколин натрия 200 мг - на 27% (p<0,01), композиция семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 200 мг - на 31% (p<0,01), композиция семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 100 мг - на 30% (p<0,01), композиция семакса 0,05 мг и цитиколин натрия 400 мг - на 20% (p<0,05), композиция семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 400 мг/кг - на 21% (p<0,05), композиция семакса 0,05 мг и цитиколин натрия 800 мг - на 68% (p<0,01), композиция семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 800 мг - на 73% (p<0,001).
При этом по выраженности действия композиции семакса 0,025 мг и цитиколин натрия 200 мг, семакса 0,2 мг и цитиколин натрия 200 мг, семакса 0,05 мг и цитиколин натрия 800 мг, а также семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 800 мг значимо (p<0,05) превосходила семакс (в 1,2-3,0 раза) и цитиколин натрия (в 1,2-1,5 раза) по отдельности. Композиции семакса 0,05 мг и цитиколин натрия 100 мг, а также семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 100 мг значимо (p<0,05) превосходили только цитиколин натрия (в 1,2 раза). Композиции семакса 0,05 мг и цитиколин натрия 400 мг, а также семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 400 мг по выраженности действия достоверно не превосходили семакс и цитиколин натрия по отдельности.
На модели острой гемической гипоксии было обнаружено, что семакс в количестве 0,025, 0,05 и 0,3 мг, цитиколин натрия в количестве 800 мг, а также композиция семакса 0,025 мг и цитиколин натрия 800 мг существенно не изменяли продолжительность жизни мышей.
Однако композиции, содержащие семакс и цитиколин натрия, значимо (p<0,05) увеличивали продолжительность жизни животных: композиция семакса 0,05 мг и цитиколин натрия 800 мг - на 25% и композиция семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 800 мг - на 27%.
На модели острой гистотоксической гипоксии было выявлено, что семакс в количестве 0,025, 0,05 и 0,3 мг, цитиколин натрия в количестве 800 мг, а также композиция семакса 0,025 мг и цитиколин натрия 800 мг существенно не изменяли продолжительность жизни мышей. Однако композиции, содержащие семакс и цитиколин натрия, значимо (p<0,05) увеличивали продолжительность жизни животных: композиция семакса 0,05 мг и цитиколин натрия 800 мг - на 23% и композиция семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 800 мг - на 25%. При этом только композиция семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 800 мг по выраженности действия значимо (p<0,05) превосходила семакс в 1,2 раза.
На модели острой гипобарической гипоксии было установлено, что семакс в количестве 0,025 существенно не изменял продолжительность жизни мышей в гермокамере, а в количестве 0,05 и 0,3 мг значимо (p<0,01) увеличивал этот показатель на 55% и 58% соответственно. Цитиколин натрия в количестве 800 мг значимо (p<0,05) увеличивал этот показатель на 35%. Однако композиции, содержащие семакс и цитиколин натрия, значимо увеличивали продолжительность жизни животных: композиция семакса 0,025 мг и цитиколин натрия 800 мг - на 87% (p<0,01), композиция семакса 0,05 мг и цитиколин натрия 800 мг - на 103% (p<0,001) и композиция семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 800 мг - на 113% (p<0,001).
При этом по выраженности действия указанные композиции значимо (p<0,05) превосходили семакс (в 1,3-1,8 раза) и цитиколин натрия (в 1,4-2,1 раза) по отдельности.
Следует отметить, что композиция семакса 0,3 мг и цитиколин натрия 800 мг значимо (p<0,05) увеличивала выживаемость мышей с 0% (контроль) до 33%.
Итак, на разных моделях острой гипоксии композиция семакса и цитиколин натрия способна оказывать противогипоксическое действие, превосходя каждый из ингредиентов, особенно в гермо- и барокамере.
Нейропротекторное действие композиции семакса и цитиколин натрия на модели ишемического инсульта.
В результате исследования нейропротекторного действия композиции семакса и цитиколин натрия и других веществ было выявлено, что у крыс контрольной группы №2 неврологический дефицит был наиболее выражен (8,9±0,1 балла) через 2 и 3 суток после двусторонней перевязки общих сонных артерий; при этом в контроле погибло 24% (18 крыс из 75) животных.
Было обнаружено, что семакс (один) в количестве 0,5 мг/сут и цитиколин натрия (один) в количестве 100 мг/сут одинаково уменьшали летальность крыс с 24% (контроль) до 14% (p>0,05). Цитиколин натрия (один) в дозе 50 мг/сут уменьшал летальность крыс до 18% (p>0,05), а в дозах 200 и 400 мг/сут - до 6% и 3% соответственно (p<0,05). Следовательно, для цитиколин натрия характерна близкая к линейной зависимость эффекта от дозы. Композиция, содержащая семакс 0,5 мг/сут и цитиколин натрия 50 мг/сут, уменьшала летальность крыс до 8% (p<0,05). Композиции, содержащие семакс 0,5 мг/сут и цитиколин натрия в дозах 100, 200 и 400 мг/сут, значимо (p<0,05) увеличивали количество выживших крыс до 100% (то есть крысы не погибали). При этом в отношении летальности композиция, содержащая семакс 0,5 мг/сут и цитиколин натрия 100 мг/сут, значимо (p<0,05) превосходила и семакс (на 14%), и цитиколин натрия (на 14%). Композиции, содержащие семакс 0,5 мг/сут и цитиколин натрия в дозах 200 и 400 мг/сут, в отношении летальности значимо (p<0,05) превосходили только семакс (на 14%). Кроме того, достоверно уменьшался неврологический дефицит, причем по выраженности действия на неврологический дефицит композиции, содержащие семакс 0,5 мг/сут и цитиколин натрия в дозах 100, 200 и 400 мг/сут, значимо (p<0,05) превосходили как семакс (в 1,1-1,2 раза), так и цитиколин натрия (в 1,1-1,2 раза). Композиция, содержащая семакс 0,5 мг/сут и цитиколин натрия 50 мг/сут, по данному показателю значимо (p<0,05) превосходила только цитиколин натрия (в 1,1-1,2 раза).
Итак, на модели ишемического инсульта композиция, содержащая семакс и цитиколин натрия, оказывает выраженное нейропротекторное действие, как правило, превосходя по выраженности действия каждый из ингредиентов.
Антиамнестическое действие композиции семакса и цитиколин натрия на разных моделях амнезии.
Установлено, что ЭСШ вызывал у большинства мышей ретроградную амнезию навыка пассивного избегания: у 82% животных (p<0,001) через 24 ч наблюдалась амнезия УРПИ. Семакс в количестве 0,2 мг и цитиколин натрия в количестве 200 мг существенно не изменяли амнестическое действие, а цитиколин натрия в количестве 400 мг значимо (p<0,05) ослаблял амнестический эффект в 1,6 раза.
Композиция, содержащая семакс 0,2 мг и цитиколин натрия 200 мг, значимо (p<0,05) ослабляла амнестический эффект в 2,3 раза, а композиция, содержащая семакс 0,2 мг и цитиколин натрия 400 мг, - в 3,3 раза (p<0,001). При этом по выраженности действия композиции значимо (p<0,05) превосходили и семакс (в 2,1-3,0 раза), и цитиколин натрия (в 1,8-2,1 раза) по отдельности.
Установлено, что скополамин вызывал у большей части мышей ретроградную амнезию навыка пассивного избегания: у 72% животных (p<0,001) через 24 ч наблюдалась амнезия УРПИ. Семакс в количестве 0,025 мг и цитиколин натрия в количестве 100 и 200 мг существенно не влияли на амнезию УРПИ, а цитиколин натрия в количестве 400 мг значимо (p<0,01) ослаблял амнестический эффект в 2,1 раза.
Композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 100 мг, значимо ослабляла амнестический эффект в 2 раза (p<0,05), а композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 200 мг - в 2,9 раза (p<0,001). Композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 400 мг, полностью предотвращала развитие амнезии УРПИ. При этом по выраженности действия композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 100 мг, а также композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 200 мг, значимо (p<0,05) превосходили и семакс (в 1,9-2,7 раза), и цитиколин натрия (в 1,8-2,0 раза). Композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 400 мг, значимо (p<0,05) превосходила только семакс (в 4 раза).
Было обнаружено, что через 24 ч после 16-18-минутного пребывания мышей в гермокамере у большей части из них наблюдалась ретроградная амнезия: у 64% животных (p<0,001). Семакс в количестве 0,025 мг и цитиколин натрия в количестве 200 мг существенно не влияли на амнезию УРПИ, а цитиколин натрия в количестве 400 мг значимо (p<0,05) ослаблял амнестический эффект в 1,8 раза.
Композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 200 мг, значимо (p<0,05) оказывала отчетливое антиамнестическое действие, уменьшая выраженность амнезии в 2 раза. Композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 400 мг, полностью предотвращала развитие амнезии УРПИ. При этом по выраженности действия композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 200 мг, значимо (p<0,05) превосходила и семакс, и цитиколин натрия (в 1,8 раза). Композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 400 мг, значимо (p<0,05) превосходила только семакс (в 3,5 раза).
Установлено, что ПМХВ вызывало у большей части мышей ретроградную амнезию навыка пассивного избегания: у 62% животных (p<0,001) через 24 ч наблюдалась амнезия УРПИ. Семакс в количестве 0,025 мг и цитиколин натрия в количестве 200 мг существенно не влияли на амнезию УРПИ, а цитиколин натрия в количестве 400 мг значимо (p<0,05) ослаблял амнестический эффект в 1,9 раза.
Композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 200 мг, значимо (p<0,05) ослабляла амнестический эффект в 2,7 раза. Композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 400 мг полностью предотвращала развитие амнезии УРПИ. При этом по выраженности действия композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 200 мг, значимо (p<0,05) превосходила и семакс, и цитиколин натрия (в 2,2 раза). Композиция, содержащая семакс 0,025 мг и цитиколин натрия 400 мг значимо (p<0,05) превосходила только семакс (в 2,9 раза).
Итак, на разных моделях амнезии композиция семакса и цитиколин натрия оказывает выраженное антиамнестического действие, превосходя каждый из ингредиентов.
Влияние композиции семакса и цитиколин натрия на физическую работоспособность мышей.
Было обнаружено, что семакс в количестве 0,01 мг и цитиколин натрия в количестве 0,5 мг существенно не изменяли физическую работоспособность мышей по тесту бега в третбане. Однако композиция, содержащая семакс и цитиколин натрия, значимо (p<0,05) повышала физическую работоспособность мышей на 26%. При этом по выраженности действия композиция значимо (p<0,05) превосходила и семакс (на 29%), и цитиколин натрия (на 23%).
Также было обнаружено, что семакс в количестве 0,3 мг и цитиколин натрия в количестве 1,10, 200 и 800 мг, а также их композиции, существенно не изменяли физическую работоспособность мышей.
Было выявлено, что семакс в количестве 0,05 мг значимо (p<0,001) снижал физическую работоспособность мышей на 29%. Цитиколин натрия в количестве 100 мг также значимо (p<0,01) снижал этот показатель на 30%. Хотя их композиция и недостоверно повышала физическую работоспособность по сравнению с контролем (на 9%), однако она значимо стимулировала физическую работоспособность по сравнению с каждым из ингредиентов: с семаксом - на 38% (p<0,001) и с цитиколин натрия - на 39% (p<0,01), то есть негативное влияние каждого из препаратов нивелировалось.
Итак, композиция семакса в количестве 0,01 мг и цитиколин натрия в количестве 0,5 мг в отличие от своих ингредиентов способна повышать физическую работоспособность мышей по тесту бега в третбане.
Полярографическое исследование влияния композиции семакса и цитиколин натрия на дыхание изолированных митохондрий клеток головного мозга крыс.
Полярографическое исследование дыхания в препаратах изолированных митохондрий клеток головного мозга крыс показало, что исходная скорость потребления кислорода митохондриями составляет в среднем 5,3±0,1 нМ O2/мин·мг белка митохондрий (n=110).
На срезах гиппокампа крыс было показано, что семакс (в концентрациях 10, 100 и 500 мкМ) угнетает ортодромные популяционные ответы в поле СА1, что свидетельствует об его способности угнетать синаптическую передачу в системе коллатерали Шаффера - пирамидные нейроны поля СА1 гиппокампа.
Популяционные ответы после аппликаций цитиколин натрия в различных концентрациях достоверно не изменяли свою величину от пика до пика, но изменяли свою форму, то есть появлялся дополнительный эпилептиформный компонент, который увеличивался в зависимости от концентрации (500 мкМ - 5 мМ).
Цитиколин натрия значимо не усиливал действие семакса (в концентрациях 100 и 500 мкМ). Семакс также не влиял на эпилептиформный компонент, появляющийся после аппликаций цитиколин натрия.
Результаты экспериментов доказывают, что предлагаемая фармацевтическая композиция, содержащая семакс и цитиколин натрия, взаимно усиливает эффект действия каждого из них.
Заявленная композиция может найти применение при создании новых лекарственных средств, обладающих нейропротекторной активностью в сочетании с противогипоксической и антиамнестической активностью и способностью повышать физическую работоспособность и используемые для лечения различной патологии центральной нервной системы.
Проведенные исследования показали следующее:
Резюме: цитиколин в сравнении с холина альфосцератом более безопасен, имеет больший коэффициент бионакопления. Кроме того, цитиколин имеет больший спектр форм применения (сироп, таблетки, капсулы, инъекционный раствор), тогда как холина применяется в виде инъекционного раствора.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой фармацевтическую композицию, обладающую нейропротекторной, противогипоксической, антиамнестической активностью и способностью повышать физическую работоспособность, включающую семакс и цитиколин натрия. Изобретение обеспечивает расширение арсенала средств, обладающих противогипоксической, нейропротекторной, антиамнестической активностью и повышающих физическую работоспособность, обеспечивает устранение побочных проявлений и повышение биодоступности, а также взаимное усиление эффекта действия каждого из компонентов. 1 табл.
Фармацевтическая композиция, обладающая нейропротекторной, противогипоксической, антиамнестической активностью и повышающая физическую работоспособность, характеризующаяся тем, что она включает семакс и цитиколин натрия при следующем содержании компонентов, мг:
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОТИВОГИПОКСИЧЕСКОЙ, НЕЙРОПРОТЕКТОРНОЙ И АНТИАМНЕСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ И ПОВЫШАЮЩАЯ ФИЗИЧЕСКУЮ РАБОТОСПОСОБНОСТЬ | 2010 |
|
RU2425670C1 |
| Мироненко Т.В | |||
| и др | |||
| "КОМПЛЕКСНАЯ КОРРЕКЦИЯ МОТОРНЫХ И НЕЙРО-ВЕГЕТАТИВНЫХ РАССТРОЙСТВ У ПАЦИЕНТОВ С ПОСТТРАВМАТИЧЕСКИМ ПАРКИНСОНИЗМОМ", Современные проблемы науки и образования, N3, 2015, дата публикации13.09.2013 | |||
| И.Б | |||
| Доценко "Минимальная мозговая дисфункция и эмоционально-поведенческие расстройства у детей и принципы их | |||
