СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И КОМПЛЕКСНОЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2016 года по МПК A61K39/00 A61K31/12 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для эффективного лечения и профилактики различных вирусных заболеваний, включая профилактику инфицирования ВИЧ, профилактику и лечение заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа, лечение острых и хронических вирусных инфекционных заболеваний, таких как острый вирусный гепатит A, B, C и другие вирусные гепатиты, герпесвирусная инфекция, грипп различных типов и острые респираторные вирусные инфекции, а также для эффективного лечения и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии и т.д.

Из уровня техники известно лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний, в том числе вирусной этиологии, на основе активированной формы сверхмалых доз антител к интерферону (RU 2192888 C1, A61K 39/395, 20.11.2002). Однако данное лекарственное средство имеет ограниченные терапевтические возможности и малопригодно для лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ, острых и хронических вирусных инфекций, включая вирусные гепатиты различных типов и герпесвирусные инфекции, а также для лечения и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии

Изобретение направлено на создание способа лечения и комплексного лекарственного средства для эффективного лечения и профилактики широкого спектра различных вирусных инфекционных заболеваний, в том профилактики инфицирования ВИЧ, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, лечения острых и хронические вирусных инфекций, включая острый вирусный гепатит A, B, C и другие вирусные гепатиты, герпесвирусную инфекцию, а также для эффективного лечения и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе лечения инфекционных заболеваний, согласно изобретению, в организм вводят одновременно и сочетано активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким рецепторам.

При этом инфекционным заболеванием является вирусные инфекционные заболевания, для лечения которых используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

При этом для профилактики инфицирования ВИЧ, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа используют активированную -потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

Кроме того, для лечения различных вирусных гепатитов используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

Предпочтительно для лечения хронического вирусного гепатита С используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

Кроме того, для лечения герпесвирусной инфекции используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной -потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

Кроме того, для лечения заболеваний, вызванных вирусом гриппа различных типов, используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольких рецепторам.

Кроме того, для лечения острых респираторных вирусных инфекций используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольких рецепторам.

Кроме того, инфекционным заболеванием могут быть бактериальные инфекционные заболевания, для лечения которых используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной -потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

В соответствие с изобретением активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

При этом в организм, предпочтительно, вводят фармацевтическую композицию в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащую активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

Причем фармацевтическую композицию, предпочтительно, используют в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащей смесь различных разведений антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании со смесью различных разведений антител к одному или нескольким рецепторам, приготовленных по гомеопатической технологии.

Как вариант, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний используют активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов (CD4 рецептору).

Как вариант, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний используют активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и активированной-потенцированной формой антител к гистамину.

Как вариант, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний используют активированную-потенцированную форму антител к альфа-интерферону человека (ИФН-α) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов.

Как вариант, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний используют активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к альфа -интерферону человека (ИФН-α), активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов и активированной-потенцированной формой антител к CD8 рецептору T-лимфоцитов (CD8 рецептору).

Как вариант, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний используют активированную-потенцированную форму антител к фактору некроза опухоли - α (ФНО-α) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т- лимфоцитов.

Кроме того, решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что комплексное лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний, согласно изобретению, выполнено в виде фармацевтической композиции, содержащей активированную -потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольких рецепторам.

При этом активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольких рецепторам используют в виде гомеопатически активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

Кроме того, фармацевтическая композиция может быть выполнена в твердой лекарственной форме и содержать эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольких рецепторам, и фармацевтически приемлемые добавки, которые могут включать лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

При этом что водные или водно-спиртовые растворы гомеопатически активированных-потенцированных форм антител к одному или нескольким цитокинам и активированных-потенцированных форм антител к одному или нескольких рецепторам могу быть получены путем многократного последовательного разведения и промежуточного внешнего воздействия из соответствующих матричных аффинно очищенных антител с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

Причем каждый из компонентов заявленного комплексного лекарственного средства возможно использовать в виде смеси различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений.

Как вариант, комплексное лекарственное средство может содержать активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов (CD4 рецептору).

Как вариант, комплексное лекарственное средство может содержать активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов и активированной-потенцированной формой антител к гистамину.

Как вариант, комплексное лекарственное средство может содержать активированную-потенцированную форму антител к альфа-интерферону человека (ИФН-α) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов.

Как вариант, комплексное лекарственное средство может содержать активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к альфа-интерферону человека (ИФН-α), активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов и активированной потенцированной формой антител к CD8 рецептору T-лимфоцитов (CD8 рецептору).

Как вариант, комплексное лекарственное средство может содержать активированную-потенцированную форму антител к фактору некроза опухоли - α (ФНО-α) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов.

Кроме того, заявленное комплексное лекарственное средство может содержать действующие компоненты в равном объемном соотношении, при этом каждый компонент может быть приготовлен в виде смеси из трех соответствующих матричных растворов, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰, и 100⁵⁰ (или 100²⁰⁰)раз, что эквивалентно сотенным разведениям C12, C30, C50 (или C200), приготовленным по гомеопатической технологии.

Заявленное комплексное лекарственное средство рекомендуется принимать, предпочтительно, по 1-3 таблетке 2-6 раз в день (предпочтительно 2-4 раза в день).

Предложенное сочетание активированных-потенцированных форм антител активированных-потенцированных форм антител к одному или нескольким цитокинам (например, к гамма-интерферону человека, к альфа-интерферону человека, к фактору некроза опухоли - α) и активированных-потенцированных форм антител к одному или нескольких рецепторам лейкоцитов (например, CD4 рецептору, CD8 рецептору) в фармацевтической композиции обеспечивает получение неожиданного синергетического терапевтического эффекта, экспериментально подтвержденного на адекватных моделях, который заключается в повышении эффективности терапевтического воздействия и снижение вирусной нагрузки как при профилактике инфицирования ВИЧ, так и при профилактике и лечении заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа, а также и при лечения острых и хронических вирусных заболеваний, включая герпес, острый вирусный гепатит A, B, C и другие вирусные гепатиты, грипп различных типов и острые респираторные вирусные инфекции, а также при лечении и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например, псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии.

Возможно применение заявленного комплексного лекарственного средства в комплексной терапии в сочетании с другими противовирусными препаратами, противобактериальными препаратами и симптоматическими средствами.

Заявленное комплексное лекарственное средство готовят, преимущественно, следующим образом.

Для приготовления активированной-потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или, преимущественно, поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы, под ред. Г.Фримеля, М., «Медицина», 1987, с.9-33; или, например, в статье Laffly Е., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридомных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемым в соответствии с изобретением веществом - антигеном или конъюгированным антигеном, например, гамма-интерфероном человека, альфа-интерфероном человека, фактором некроза опухоли - α, CD4 рецептором, CD8 рецептором. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифическую антисыворотку с высоким содержанием антител, которую и используют для получения активированной-потенцированной формы. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Предпочтительным для приготовления заявленного комплексного лекарственного средства является использование поликлональных антител, которые в качестве матричного (исходного) раствора с концентрацией, предпочтительно, 0,5÷5,0 мг/мл, применяют для последующего приготовления активированной-потенцированной формы.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водных или водно-спиртовых разведений первичного матричного раствора антител, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰ и 100⁵⁰ (или 100²⁰⁰) раз, что эквивалентно сотенным разведениям C12, C30 и C50 (или C200), приготовленным по гомеопатической технологии.

При приготовлении заявленного комплексного лекарственного средства в твердой лекарственной форме на нейтральный носитель наносится смесь указанных компонентов.

Для получения поликлональных антител к гамма-интерферону человека в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов используют адъювант и, например, цельную молекулу гамма-интерферона человека следующей последовательности:

1 MKYTSYILAF QLCIVLGSLG CYCQDPYVKE AENLKKYFNA GHSDVADNGT LFLGILKNWK

61 EESDRKIMQS QIVSFYFKLF KNFKDDQSIQ KSVETIKEDM NVKFFNSNKK KRDDFEKLTN

121 YSVTDLNVQR KAIHELIQVM AELSPAAKTG KRKRSQMLFR GRRASQ.

Возможно для получения поликлональных антител к гамма-интерферону человека в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента гамма-интерферона человека, выбранного из следующих последовательностей:

7-55:

ILAF QLCIVLGSLG CYCQDPYVKE AENLKKYFNA GHSDV;

24-166:

QDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQI VSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKA IHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFRGR RASQ;

24-166:

QDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQIVSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKAIHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFQGR RASQ;

69-123:

QS QIVSFYFKLF KNFKDDQSIQ KSVETIKEDM NVKFFNSNKK KRDDFEKLTN YSV;

100-145:

M NVKFFNSNKK KRDDFEKLTN YSVTDLNVQR KAIHELIQVM AELSP;

92-130:

SVETIKEDM NVKFFNSNKK KRDDFEKLTN YSVTDLNVQR;

123-147:

VTDLNVQR KAIHELIQVM AELSPAA; 24-166:

MQDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQI VSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKA IHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFQGR RASQ;

5-45:

SYILAF QLCIVLGSLG CYCQDPYVKE AENLK;

94-114:

ETIKEDM NVKFFNSNKK KRDD;

24-166:

MQDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQI VSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKAIHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFRGR RASQ.

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенных инъекций для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°C) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000 g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Можно добавлять к антисыворотке 20% NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранить до использования в замороженном состоянии при температуре -20°C (или без добавления NaN₃- при температуре -70°).

Выделение из антисыворотки антител к гамма-интерферону возможно следующим образом:

1. 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl добавляют 6,26 г Na₂SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°C;

2. выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3. после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;

4. фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Очистку антител производят методом аффинной хроматографии на колонке с антигеном, путем связывания антител к гамма-интерферону с антигеном (гамма-интерферон), прикрепленным к нерастворимому матриксу колонки, с последующим элюированием антител концентрированными растворами соли.

Полученный, таким образом, буферный раствор поликлональных кроличьих антитела к гамма-интерферону человека, очищенных на антигене, с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричного (исходного) раствора для последующего приготовления активированной-потенцированной формы.

Поликлональные антитела к альфа-интерферону человека получают по вышеуказанному способу, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и цельную молекулу альфа-интерферону человека одной из следующих последовательностей:

Интерферон-альфа человека (подтип 2):

MALTFALLVA LLVLSCKSSC SVGCDLPQTH SLGSRRTLML

LAQMRKISLF SCLKDRHDFG

FPQEEFGNQF QKAETIPVLH EMIQQIFNLF STKDSSAAWD

ETLLDKFYTE LYQQLNDLEA

CVIQGVGVTE TPLMKEDSIL AVRKYFQRIT LYLKEKKYSP

CAWEVVRAEI MRSFSLSTNL

QESLRSKE

Интерферон-альфа человека (подтип 1/13)

MASPFALLMV LVVLSCKSSC SLGCDLPETH SLDNRRTLML

LAQMSRISPS SCLMDRHDFG

FPQEEFDGNQ FQKAPAISVL HELIQQIFNL FTTKDSSAAW

DEDLLDKFCT ELYQQLNDLE

ACVMQEERVG ETPLMNADSI LAVKKYFRRI TLYLTEKKYS

PCAWEVVRAEIMRSLSLSTN

LQERLRRKE

Интерферон-альфа человека (подтип 17):

MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL

LAQMGRISPF SCLKDRHDFG

LPQEEFDGNQ FQKTQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW

EQSLLEKFST ELYQQLNNLE

ACVIQEVGME ETPLMNEDSI LAVRKYFQRI TLYLTEKKYS

PCAWEVVRAE IMRSLSFSTN

LQKILRRKD

Интерферон-альфа человека (подтип 4):

MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL

LAQMGRISHF SCLKDRHDFG

FPEEEFDGHQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW

EQSLLEKFST ELYQQLNDLE

ACVIQEVGVE ETPLMNEDSILAVRKYFQRI TLYLTEKKYS

PCAWEVVRAEIMRSLSFSTN

LQKRLRRKD

Интерферон-альфа человека (подтип 8):

MALTFYLLVA LVVLSYKSFS SLGCDLPQTH SLGNRRALIL

LAQMRRISPF SCLKDRHDFE

FPQEEFDDKQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTKDSSAAL

DETLLDEFYI ELDQQLNDLE

SCVMQEVGVI ESPLMYEDSI LAVRKYFQRI TLYLTEKKYS

SCAWEVVRAEIMRSFSLSIN

LQKRLKSKE

Интерферон-альфа человека (подтип 7):

MARSFSLLMV VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLRNRRALIL

LAQMGRISPF SCLKDRHEFR

FPEEEFDGHQ FQKTQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW

EQSLLEKFST ELYQQLNDLE

ACVIQEVGVE ETPLMNEDFI LAVRKYFQRI TLYLMEKKYS

PCAWEVVRAE IMRSFSFSTN

LKKGLRRKD

Интерферон-альфа человека (подтип 21):

MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL

LAQMGRISPF SCLKDRHDFG

FPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTKDSSATW

EQSLLEKFST ELNQQLNDLE

ACVIQEVGVE ETPLMNVDSILAVKKYFQRI TLYLTEKKYS

PCAWEVVRAE IMRSFSLSKI

FQERLRRKE

Интерферон-альфа человека (подтип 10):

MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL

LGQMGRISPF SCLKDRHDFR

IPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW

EQSLLEKFST ELYQQLNDLE

ACVIQEVGVE ETPLMNEDSI LAVRKYFQRI TLYLIERKYS

PCAWEVVRAE IMRSLSFSTN

LQKRLRRKD

Интерферон-альфа человека (подтип 14):

MALPFALMMA LVVLSCKSSC SLGCNLSQTH SLNNRRTLML

MAQMRRISPF SCLKDRHDFE

FPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMMQQTFNL FSTKNSSAAW

DETLLEKFYIELFQQMNDLE

ACVIQEVGVE ETPLMNEDSI LAVKKYFQRI TLYLMEKKYS

PCAWEVVRAE IMRSLSFSTN

LQKRLRRKD

Интерферон-альфа человека (подтип 5):

MALPFVLLMA LVVLNCKSIC SLGCDLPQTH SLSNRRTLMI

MAQMGRISPF SCLKDRHDFG

FPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTKDSSATW

DETLLDKFYT ELYQQLNDLE

ACMMQEVGVE DTPLMNVDSI LTVRKYFQRI TLYLTEKKYS

PCAWEVVRAE IMRSFSLSAN

LQERLRRKE

Возможно для получения поликлональных антител к альфа-интерферону человека в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента альфа-интерферону человека.

Поликлональные антитела к CD4 рецептору получают по вышеуказанному способу, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и молекулу CD4 рецептора следующей аминокислотной последовательности:

26-458:

MNRGVPFRHL LLVLQLALLP AATQGKKVVL GKKGDTVELT CTASQKKSIQ FHWKNSNQIK ILGNQGSFLT KGPSKLNDRA DSRRSLWDQG NFPLIIKNLK IEDSDTYICE VEDQKEEVQL LVFGLTANSD THLLQGQSLT LTLESPPGSS PSVQCRSPRG KNIQGGKTLS VSQLELQDSG TWTCTVLQNQ KKVEFKIDIV VLAFQKASSI VYKKEGEQVE FSFPLAFTVE KLTGSGELWW QAERASSSKS WITFDLKNKE VSVKRVTQDP KLQMGKKLPL HLTLPQALPQ YAGSGNLTLA LEAKTGKLHQ EVNLVVMRAT QLQKNLTCEV WGPTSPKLML SLKLENKEAK VSKREKAVWV LNPEAGMWQC LLSDSGQVLL ESNIKVLPTW STPVQPMALI VLGGVAGLLL FIGLGIFFCV RCRHRRRQAE RMSQIKRLLS EKKTCQCPHR FQKTCSPI.

Возможно для получения поликлональных антител к CD4 рецептору в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента CD4 рецептора, выбранного из следующих последовательностей:

412-458:

IGLGIFFCV RCRHRRRQAE RMSQIKRLLS EKKTCQCPHR FQKTCSPI;

26-60:

MNRGVPFRHL LLVLQLALLP AATQGKKVVL GKKGD;

105-119:

A DSRRSLWDQG NFPL;

115-139:

G NFPLIIKNLK IEDSDTYICE VEDQ;

Поликлональные антитела к CD8 рецептору получают по вышеуказанному способу, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и цельную молекулу CD8 рецептора следующей аминокислотной последовательности:

1 MALPVTALLL PLALLLHAAR PSQFRVSPLD RTWNLGETVE LKCQVLLSNP TSGCSWLFQP

61 RGAAASPTFL LYLSQNKPKA AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL TLSDFRRENE GYYFCSALSN

121 SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT PAPRPPTPAP TIASQPLSLR PEACRPAAGG AVHTRGLDFA

181 CDIYIWAPLA GTCGVLLLSL VITLYCNHRN RRRVCKCPRP VVKSGDKPSL SARYV.

Возможно для получения поликлональных антител к CD8 рецептору в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента CD8 рецептора, выбранного из следующих последовательностей:

11-30:

PLALLLHAAR PSQFRVSPLD;

81-100:

AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL;

121-140:

SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT;

201-210:

VITLYCNHRN;

221-235:

VVKSGDKPSL SARYV

Получение поликлональных антител к фактору некроза опухоли - альфа (ФНО-α) может быть произведено по вышеуказанному методу получения поликлональных антител к гистамину с использованием цельной молекулы фактора некроза опухоли - альфа следующей последовательности:

1 MSTESMIRDV ELAEEALPKK TGGPQGSRRC LFLSLFSFLI VAGATTLFCL LHFGVIGPQR

61 EEFPRDLSLI SPLAQAVRSS SRTPSDKPVA HVVANPQAEG QLQWLNRRAN ALLANGVELR

121 DNQLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE

181 TPEGAEAKPW YEPIYLGGVF QLEKGDRLSA EINRPDYLDF AESGQVYFGIIAL.

Возможно для получения поликлональных антител к фактору некроза опухоли - альфа (ФНО-α) использование полипептидного фрагмента фактора некроза опухоли, выбранного, например, из следующих последовательностей:

84-88:

PSDKP;

93-97:

VANPQ;

65-199:

RDLSLI SPLAQAVRSS SRTPSDKPVA HVVANPQAEG QLQWLNRRAN ALLANGVELR DNQLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE TPEGAEAKPW YEPIYLGGV;

77-93:

RSS SRTPSDKPVA HVV;

32-54:

GGPQGSRRC LFLSLFSFLI VAGA;

56-73:

IGPQR EEFPRDLSLI SPL;

123-160:

QLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA;

176-190:

PCQRE TPEGAEAKPW;

5-45:

SMIRDV ELAEEALPKK TGGPQGSRRC LFLSL;

150-184:

V LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE TPEG;

77-233:

VRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGVELR

DNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQTKV

NLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINR

PDYLDFAESGQVYFGIIAL.

Полученные таким образом буферные растворы каждого компонента поликлональных антител к цитокинам и к рецепторам с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл используют в качестве матричных (исходных) растворов для последующего приготовления активированных-потенцированных форм антител.

Активированную-потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части каждого подвергаемого разведению раствора, начиная с упомянутого матричного раствора, в 9 частях (для десятичного разведения D) или в 99 частях (для сотенного разведения C) или в 999 частях (для тысячного разведения M) нейтрального растворителя в сочетании с многократным вертикальным встряхиванием (потенцированием, или "динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В.Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения С12 одну часть матричного (исходного) раствора антител, например, к гамма-интерферону человека, с концентрацией 2,5 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают -потенцируют, получая 1-е сотенное C1 разведение. Из 1-го сотенного C1 разведения приготовляют 2-ое сотенное разведение C2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение C12. Таким образом, 12-е сотенное разведение C12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно 12 раз в разных емкостях 1-ой части исходного матричного раствора антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 2,5 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, полученный разведением матричного раствора в 100¹² раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений C30 и C50 или C200.

При использовании, например, активированной-потенцированной формы антител к гамма-интерферону человека в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений каждое разведение (например, C12, C30, C50) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до разведения на 3 разведения меньше, чем конечное (соответственно, до получения C9, C27, C47), и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части каждого компонента и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). Далее полученную смесь последовательно дважды разводят в соотношении 1 к 100, потенцируя полученный раствор после каждого разведения. При этом получают активированную-потенцированную форму антител, например, к гамма-интерферону человека в сверхмалой дозе, полученной разведением матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных разведений C12, C30, C50.

Возможно использование каждого компонента в виде смеси других различных, разведений, например, десятичных и или сотенных, (D20, C30, C100 или C12, C30, C200 и т.д.), приготовленных по гомеопатической технологии, эффективность которых определяют экспериментально.

Для получения лекарственного средства водные или водно-спиртовые растворы смешивают, преимущественно, в равном объемном соотношении и используют в жидкой лекарственной форме.

Заявленное лекарственное средство может быть использовано и в твердой лекарственной форме в виде фармацевтической композиции, которая содержит технологически необходимое (эффективное) количество нейтрального носителя - например, лактозы - насыщенного путем пропитывания до насыщения смесью, приготовленных по вышеуказанной технологии, водных или водно-спиртовых растворов активированных-потенцированных форм антител, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие, преимущественно, лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Для получения твердой оральной формы заявленного лекарственного средства производят в установке кипящего слоя (например, типа «Hiittlin Pilotlab» производства компании Huttlin GmbH) орошение до насыщения вводимых в псевдоожиженный - кипящий слой гранул нейтрального вещества - лактозы (молочного сахара) с размером частиц 50÷500 мкм, предварительно полученным водным или водно-спиртовым раствором активированной-потенцированной формы антител компонентов, преимущественно, в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг лактозы (1:5-1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°C. Расчетное количество 10÷34 масс частей высушенных гранул, насыщенных активированной-потенцированной формой антител, загружают в смеситель и смешивают с 25÷85 масс. частей от общей массы загрузки «ненасыщенной» чистой лактозы (для снижения стоимости и некоторого упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечебного воздействия). Затем в эту смесь добавляют стеарат магния в количестве 0,1÷1 масс. частей от общей массы загрузки и микрокристаллическую целлюлозу в количестве 3÷10 масс.частей от общей массы загрузки, с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг, преимущественно массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3,0-6,0 мг/табл.) активированной-потенцированной формы в сверхмалой дозе каждого компонента, приготовленной из матричного раствора, разведенного в 100¹², в 100³⁰ в 100⁵⁰ (или 100²⁰⁰) раз, что эквивалентно смеси сотенных разведений C12, C30 и C50 (или C200), приготовленных по гомеопатической технологии.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Пример 1

Исследование эффективности применения заявленного комплексного лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к альфа-интерферону человека в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50, и активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 (СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4) в соотношении компонентов 1:1, а также лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону альфа в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 (СМД AT к ИФН-α) и лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, C50 (СМД AT к CD4) в условиях гриппозной инфекции у мышей-самок линии Balb/c проводилось на базе ФГБУ «НИИ гриппа» Минздравсоцразвития России в два этапа. В первом этапе была исследована эффективность препарата СМД AT к ИФН-α и препарата СМД AT к CD4, во втором этапе была исследована эффективность применения препарата СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4. Как при тестировании препарата СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4, так и при тестировании препарата СМД AT к ИФН-α и препарата СМД AT к CD4, в качестве препарата сравнения использовали препарат озельтамивир, в качестве контроля мышам (n=20) вводили дистиллированную воду (контрольная группа).

Инфекционный процесс моделировали интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50 (доза, инфицирующая 50% клеток культуры ткани).

Препарат СМД AT к ИФН-α, препарат СМД AT к CD4 и препарат СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4 вводили мышам (n=20 в каждой группе) интрагастрально по 0,2 мл/мышь два раза в сутки (суточная доза 0,4 мл/мышь) в течение 5 суток до инфицирования и в течение 10 суток после инфицирования вирусом гриппа A/California/07/2009swl (H1N1). Дополнительно препарат СМД AT к ИФН-α, препарат СМД AT к CD4 и препарат СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4 были добавлены в поилки к животным соответствующих экспериментальных групп.Поилки находились в свободном доступе.

Препарат сравнения озельтамивир вводили мышам (n=20) интрагастрально два раза в сутки в дозе 10 мг/кг (суточная доза 20 мг/кг), начиная за 1 час до инфицирования вирусом гриппа A/California/07/2009swl (H1N1). Препарат озельтамивир вводили в течение 5 суток после инфицирования. В течение 4 суток до инфицирования и начиная с 6 суток после инфицирования мышам данной экспериментальной группы вместо озельтамивира интрагастрально вводили дистиллированную воду по 0,2 мл/мышь два раза в сутки (суточная доза 0,4 мл/мышь).

В контрольной группе мышам (n=20) интрагастрально вводили дистиллированную воду 2 раза в сутки по 0,2 мл/мышь (суточная доза 0,4 мл/мышь). На протяжении всего исследования в поилках животных данных двух экспериментальных групп была дистиллированная вода. Поилки находились в свободном доступе.

Эффективность препаратов оценивали по выживаемости животных. Результаты исследования противовирусной активности препарата СМД AT к ИФН- а и препарата СМД AT к CD4 (этап 1) отражены в таблице 1, результаты исследования противовирусной активности препарата СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4 (этап 2) отражены в таблице 2. Статистическую значимость различий между экспериментальными группами и контролем (дистиллированная вода) рассчитывали с использованием непараметрического критерия хи-квадрат.

Таблица 1. Результаты исследования противовирусной активности арата СМД AT к ИФН-α и препарата СМД AT к CD4 на модели гриппозной инфекции у мышей-самок линии Balb/c, инфицированных интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50 (10 сутки после инфицирования). № п/п Экспериментальная группа Выживаемость, % Разность между % выживаемости в группе, получавшей препарат, и % выживаемости в группе, получавшей дистиллированную воду 10ЛД50 1. СМД AT к ИФН-α 25 +5% 2. СМД AT к CD4 30 +10% 3. Озельтамивир (препарат сравнения) 80* +60% 4. Дистиллированная вода (контроль) 20 - * - p<0,05 (достоверность отличия от контроля).

Таблица 2. Результаты исследования противовирусной активности арата СМД AT к ИФН-α и препарата СМД AT к CD4 на модели гриппозной инфекции у мышей-самок линии Balb/c, инфицированных интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50 (10 сутки после инфицирования). № п/п Экспериментальная группа Выживаемость, Разность между % выживаемости в группе, получавшей препарат, и % выживаемости в группе, получавшей дистиллированную воду % 10ЛД50 1. Препарат СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4, соотношение 1:1 30* +25% 2. Озельтамивир (препарат сравнения) 70* +65% 3. Дистиллированная вода (контроль) 5 - * - p<0,05 (достоверность отличия от контроля).

Показано, что выживаемость мышей, инфицированных гриппом A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50, на этапе 1 исследования была выше, чем на этапе 2: выживаемость в группе, получавших дистиллированную воду, составила 20% и 5%, соответственно; выживаемость в группе препарата сравнения озельтамивира составила 80% и 70%, соответственно. Это свидетельствует о более выраженном летальном эффекте, индуцированном интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50, на этапе 2 исследования.

При этом, препарат СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4 на 25% по сравнению с контролем повышал выживаемость экспериментальных животных, инфицированных вирусом гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50, в то время как выживаемость в группе, получавшей препарат СМД AT к ИФН-α была всего на 5% выше выживаемости в группе контроля, а выживаемость в группе, получавшей препарат СМД AT к CD4 была всего на 10% выше выживаемости в группе контроля.

Таким образом, в результате проведенного исследования показано, что применение препарата СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4 оказывает более выраженный противовирусный эффект, чем применение препарата СМД AT к ИФН-α или препарата СМД AT к CD4, не смотря на то, что доза каждого компонента в составе препарата СМД AT к ИФН альфа+СМД AT к CD4 в два раза ниже, чем доза компонентов в составе препарата СМД AT к ИФН альфа и доза компонентов в составе препарата СМД AT к CD4, протестированных в качестве отдельных препаратов.

Пример 2.

Исследование эффективности применения заявленного комплексного лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к фактору некроза опухоли альфа в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 и активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 (СМД AT к ФНО-α+СМД AT к CD4) в соотношении 1:1, а также лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к фактору некроза опухоли альфа в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 (СМД AT к ФНО-α) и лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 (СМД AT к CD4) в условиях гриппозной инфекции у мышей-самок линии Balb/c проводилось на базе ФГБУ «НИИ гриппа» Минздравсоцразвития России в два этапа. В первом этапе была исследована эффективность препарата СМД AT к ФНО-α и препарата СМД AT к CD4, во втором этапе была исследована эффективность применения СМД AT к ФНО-α+СМД AT к CD4. В качестве препарата сравнения использовали озельтамивир, контрольной группе давали дистиллированную вода (контроль).

Инфекционный процесс моделировали интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50 (доза, инфицирующая 50% клеток культуры ткани).

Препарат СМД AT к ФНО-α, препарат СМД AT к CD4, а также препарат СМД AT к ФНО-α+СМД AT к CD4 вводили мышам (n=20 в каждой группе) интрагастрально по 0,2 мл/мышь два раза в сутки (суточная доза 0,4 мл/мышь) в течение 5 суток до инфицирования и в течение 10 суток после инфицирования. Дополнительно препарат СМД AT к ФНО-α, препарат СМД AT к CD4, а также препарат СМД AT к ФНО-α+СМД AT к CD4 были добавлены в поилки к животным соответствующих экспериментальных групп.Поилки находились в свободном доступе.

Препарат сравнения озельтамивир вводили мышам (n=20) интрагастрально два раза в сутки в дозе 10 мг/кг (суточная доза 20 мг/кг), начиная за 1 час до инфицирования. Препарат вводили в течение 5 суток после инфицирования вирусом гриппа A/California/07/2009swl (H1N1). В течение 4 суток до инфицирования и начиная с 6 суток после инфицирования мышам данной экспериментальной группы вместо озельтамивира интрагастрально вводили дистиллированную воду по 0,2 мл/мышь два раза в сутки (суточная доза 0,4 мл/мышь).

В контрольной группе мышам (n=20) интрагастрально вводили дистиллированную воду 2 раза в сутки по 0,2 мл/мышь (суточная доза 0,4 мл/мышь). На протяжении всего исследования в поилках животных данных двух экспериментальных групп была дистиллированная вода. Поилки находились в свободном доступе.

Эффективность препаратов оценивали по выживаемости животных. Результаты исследования противовирусной активности препарата СМД AT к ФНО-α и препарата СМД AT к CD4 (этап 1) приведены в таблице 3, результаты исследования противовирусной активности препарата СМД AT к ФНО-α+СМД AT к CD4 (этап 2) приведены в таблице 4. Статистическую значимость различий между экспериментальными группами и контролем (дистиллированная вода) рассчитывали с использованием непараметрического критерия хи-квадрат.

Таблица 3. Результаты исследования противовирусной активности препарата СМД AT к ФНО-α и препарата СМД AT к CD4 на модели гриппозной инфекции у мышей-самок линии Balb/c, инфицированных интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50 (10 сутки после инфицирования). № п/п Экспериментальная группа Выживаемость, % Разность между % выживаемости в группе, получавшей препарат, и % выживаемости в группе, получавшей дистиллированную воду 10ЛД50 1. СМД AT к ФНО-α 25 +5% 2. СМД AT к CD4 30 +10% 3. Озельтамивир (препарат сравнения) 80* +60% 4. Дистиллированная вода (контроль) 20 - - p<0,05 (достоверность отличия от контроля).

Таблица 4. Результаты исследования противовирусной активности препарата СМД AT к ФНО-α и препарата СМД AT к CD4 на модели гриппозной инфекции у мышей-самок линии Balb/c, инфицированных интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50 (10 сутки после инфицирования). № п/п Экспериментальная группа Выживаемость, % Разность между % выживаемости в группе, получавшей препарат, и % выживаемости в группе, получавшей дистиллированную воду 10ЛД50 1. СМД AT к ФНО-α+СМД AT к CD4, в соотношении 1:1 30* +25% 2. Озельтамивир (препарат сравнения) 70* +65% 3. Дистиллированная вода (контроль) 5 - * - p<0,05 (достоверность отличия от контроля).

Показано, что выживаемость мышей, инфицированных гриппом A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50, на этапе 1 исследования была выше, чем на этапе 2: выживаемость в группе, получавших дистиллированную воду, составила 20% и 5%, соответственно; выживаемость в группе препарата сравнения озельтамивира составила 80% и 70%, соответственно. Это свидетельствует о более выраженном летальном эффекте, индуцированном интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50, на этапе 2 исследования.

При этом, препарат СМД AT к ФНО- а+СМД AT к CD4 на 25% по сравнению с контролем повышал выживаемость экспериментальных животных, инфицированных вирусом гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50, в то время как выживаемость в группе, получавшей препарат СМД AT к ФНО-α была всего на 5% выше выживаемости в группе контроля, а выживаемость в группе, получавшей препарат СМД AT к CD4 была всего на 10% выше выживаемости в группе контроля.

Таким образом, в результате проведенного исследования показано, что применение препарата СМД AT к ФНО-α+СМД AT к CD4 оказывает более выраженный противовирусный эффект, чем применение препарата СМД AT к ФНО- а или препарата СМД AT к CD4, не смотря на то, что доза каждого компонента в составе препарата СМД AT к ФНО-α+СМД AT в два раза ниже, чем доза компонентов в препарате СМД AT к ФНО-α и в препарате СМД AT к CD4, протестированных в качестве отдельных препаратов.

Пример 3.

Оценка антиретровирусной активности заявленного комплексного лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону альфа в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50, активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону гамма в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50, активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 и активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD8 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 в соотношении 1:1:1:1 (СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8), проводилась с использованием мононуклеарных клеток периферической крови человека, зараженных in vitro штаммом ВИЧ-1-LAI. В качестве препарата сравнения использовали азидотимидин (Sigma - AZ169-100 mg, лот 107 К1578).

Мононуклеары периферической крови человека были выделены из крови здорового серонегативного донора при помощи центрифугирования в градиенте плотности фиколла-гипака. Клетки активировали в течение 3 дней с использованием 1 мкг/мл фитогемагглютина P и 5 МЕ/мл рекомбинантного интерлейкина-2 человека в среде RPMI1640 (DIFCO) с 10% фетальной телячьей сывороткой (комплемент был удален нагреванием в течение 45 минут при температуре 56°C), 1% раствором антибиотиков (PSN Gibco, содержащего 50 мкг/мл пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина и 100 мкг/мл неомицина).

Клетки заражали штаммом ВИЧ-1-LAI, внося 50 мкл инокулята штамма ВИЧ-1-LAI, что соответствует дозе 100 TCID50 (доза, инфицирующая 50% клеток культуры ткани).

Для оценки антиретровирусной активности препарат СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8 и препарат сравнения азидотимидин вносили в лунки через 15-30 минут после заражения клеток штаммом ВИЧ-1-LAI. На 7 сутки после инфицирования клеток был собран супернатант, использованный для оценки влияния препаратов на ингибирование репликации ВИЧ.

Перед внесением в лунки, содержащие 150 мкл клеточной культуры, препарат СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8 разводили средой RPMI1640 (DIFCO) в 4 раза (степень разведения 1/4) до достижения конечного объема в 50 мкл, препарат азидотимидин разводили средой RPMI1640 (DIFCO) до достижения концентрации 8 нМ.

Эффективность препаратов определяли по ингибированию репликации ВИЧ, которую оценивали по ферментативной активности обратной транскриптазы ВИЧ в супернатантах мононуклеаров периферической крови человека с использованием HIV RT RetroSys набора производства INNOVAGEN (лот 10-059С). Для вычисления % ингибирования репликации ВИЧ в качестве контроля использовали супернатант клеток, к которым не вносили препарат СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8 и препарат азидотимидин (Таблица 5).

Таблица 5. Антиретровирусная активность препарата СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8 с использованием мононуклеарных клетках периферической крови человека, зараженных in vitro штаммом ВИЧ-1-LAI Препарат Степень разведения препарата в среде RPMI1640 (DIFCO) Ингибирование ферментативной активности обратной транскриптазы ВИЧ (% от контроля) 7 сутки СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8, в соотношении 1:1:1:1 1/4 81±11 Азидотимидин (8 нМ) - 58±7

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что препарат СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8b соотношении 1:1:1:1 обладает антиретровирусной активностью.

Пример 4

Оценка антиретровирусной активности заявленного комплексного лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону альфа в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50, активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону гамма в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50, активированные -потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 и активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD8 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 (СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8), проводилась с использованием мононуклеарных клеток периферической крови человека, зараженных in vitro штаммом ВИЧ-1-LAI. В качестве препарата сравнения использовали азидотимидин.

Мононуклеары периферической крови человека были выделены из крови здоровых серонегативных доноров при помощи центрифугирования в градиенте плотности фиколла-гипака. Клетки активировали в течение 3 дней с использованием 1 мкг/мл фитогеммаглютина Р и 5 МЕ/мл рекомбинантного интерлейкина - 2 человека. Клетки заражали штаммом ВИЧ-1-LAI, внося 50 мкл инокулята штамма ВИЧ-1-LAI, что соответствует дозе 100 TCID50 (доза, инфицирующая 50% клеток культуры ткани).

Для оценки антиретровирусной активности препарат СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8 и препарат сравнения азидотимидин вносили в лунки, содержащие 100 мкл активированных мононуклеаров периферической крови человека, за 24 часа или через 15 минут после заражения клеток штаммом ВИЧ-1-LAI. Перед внесением в лунки, препарат СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8 (12,5 мкл) и препарат сравнения азидотимидин в дозе 1000 нМ смешивали со средой RPMI1640 (DIFCO) до достижения конечного объема в 50 мкл.

Супернатанты культуры клеток были собраны на 7 день после заражения. Эффективность препаратов определяли по ингибированию репликации ВИЧ, которая оценивалась по содержанию основного нуклеосапидного белка ВИЧ р24 в супернатантах клеток методом ИФА (Retrotek Elisa kit).

Показано, что препарат СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8 ингибирует репликацию ВИЧ на 94±6% при внесении в лунку за 24 часа до, и на 46±13% при внесении в лунку через 15 минут после заражения клеток штаммом ВИЧ-1-LAI, соответственно. Препарат сравнения азидотимидин в дозе 1000 нМ ингибирует репликацию ВИЧ на 99±0 и 99±1% при внесении в лунку за 24 часа до и через 15 минут после заражения клеток штаммом ВИЧ-1-LAI, соответственно.

Таким образом, в in vitro исследовании показана высокая антиретровирусная активность препарата СМД AT к ИФН-α+ИФН-γ+CD4+CD8.

Пример. 5

Оценка антиретровирусной активности заявленного комплексного лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 и активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител интерферону гамма в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 в соотношении 1:1 (СМД AT к CD4+ИФН-γ), а также лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 (СМД AT к CD4) и лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону гамма в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 10012, 10030, 10050 раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 (СМД AT к ИФН-γ), проводилась с использованием мононуклеарных клеток периферической крови человека, зараженных in vitro штаммом ВИЧ-1-LAI. В качестве препарата сравнения использовали азидотимидин (Sigma - AZ169-100 mg, лот 107 К1578).

Мононуклеары периферической крови человека были выделены из крови здорового серонегативного донора при помощи центрифугирования в градиенте плотности фиколла-гипака. Клетки активировали в течение 3 дней с использованием 1 мкг/мл фитогемагглютина Р и 5 МЕ/мл рекомбинантного интерлейкина - 2 человека в среде RPMI1640 (DIFCO) с 10% фетальной телячьей сывороткой (комплемент был удален нагреванием в течение 45 минут при температуре 56°C), 1% раствором антибиотиков (PSN Gibco, содержащего 50 мкг/мл пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина и 100 мкг/мл неомицина).

Клетки заражали штаммом ВИЧ-1-LAI, внося 50 мкл инокулята штамма ВИЧ-1-LAI, что соответствует дозе 100 TCID50 (доза, инфицирующая 50% клеток культуры ткани).

Для оценки антиретровирусной активности препараты вносили в лунки через 15-30 минут после заражения клеток штаммом ВИЧ-1-LAI. На 7 сутки после инфицирования клеток был собран супернатант, использованный для оценки влияния препаратов на ингибирование репликации ВИЧ.

Перед внесением в лунки, содержащие 150 мкл клеточной культуры, препараты разводили средой RPMI1640 (DIFCO) до достижения конечного объема в 50 мкл. Препарат СМД AT к CD4 и препарат СМД AT к ИФН-γ разводили в среде RPMI1640 (DIFCO) в 8 раз (степень разведения 1/8), а препарат СМД AT к CD4+ИФН-γ разводили в среде RPMI1640 (DIFCO) в 4 раза (степень разведения 1/4). Таким образом, количество компонентов препарата СМД AT к CD4+ИФН-γ, вносимых в экспериментальную лунку при тестировании, идентично количеству компонентов препарата СМД AT к CD4 и компонентов препарата СМД AT к ИФН-γ а тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности препарата СМД AT к CD4+ИФН-γ с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Препарат сравнения азидотимидин развели средой RPMI1640 (DIFCO) до достижения концентрации 8 нМ.

Эффективность препаратов определяли по ингибированию репликации ВИЧ, которую оценивали по ферментативной активности обратной транскриптазы ВИЧ в супернатантах мононуклеаров периферической крови человека с использованием HIV RT RetroSys набора производства INNOVAGEN (лот 10-059C). Для вычисления % ингибирования репликации ВИЧ в качестве контроля использовали супернатант клеток, к которым не вносили тестируемые препараты или азидотимидин (Таблица 6).

Таблица 6. Антиретровирусная активность препаратов с использованием мононуклеарных клетках периферической крови человека, зараженных in vitro ВИЧ-1-LAI Препарат Степень разведения препарата в среде RPMI1640 (DIFCO) Ингибирование ферментативной активности обратной транскриптазы ВИЧ (% от контроля) 7 сутки СМД AT к CD4+ИФН-γ 1/8 0±5 СМД AT к CD4 1/8 67±22 СМД AT к CD4+ИФН-γ, в соотношении 1:1 1/4 85±1 Азидотимидин (8 нМ) - 58±7

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что антиретровирусная активность препарата СМД AT к CD4+ИФН-γ превосходит антиретровирусную активность препарата СМД AT к CD4 и препарата ИФН-γ.

Пример 6.

Оценка антиретровирусной активности заявленного комплексного лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 и активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинноочищенных кроличьих антител интерферону гамма в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 в соотношении 1:1 (СМД AT к CD4+ИФН-γ), а также лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 (СМД AT к CD4) и лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону гамма в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 (СМД AT к ИФН-γ), проводилась с использованием макрофагов, полученных из мононуклеаров периферической крови человека, и зараженных in vitro штаммом ВИЧ-1-Ba-L. В качестве препарата сравнения использовали азидотимидин (Sigma - AZ169-100 mg, лот 107 К1578).

Макрофаги периферической крови человека были получены из мононуклеарных клеток периферической крови человека, которые были выделены из крови двух здоровых серонегативных доноров при помощи центрифугирования в градиенте плотности фиколла-гипака. Мононуклеарные клетки периферической крови человека выращивали 3 суток в среде RPMI1640 (DIFCO), дополненной 10% фетальной телячьей сывороткой (комплемент был удален нагреванием в течение 45 минут при температуре 56°C), 1% раствором антибиотиков (PSN Gibco, содержащего 50 мкг/мл пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина и 100 мкг/мл неомицина), 15 нг/мл ГМ-КСФ (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор). Затем клетки помещали культуральные планшеты (150000 клеток/лунка в 48-луночном планшете), выращивали в течение 7 суток совместно с 1 нг/мл ГМ-КСФ и 10 нг/мл М-КСФ (макрофагальный колониестимулирующий фактор) для того, чтобы клетки смоги полностью дифференцироваться в макрофаги.

Клетки заражали штаммом ВИЧ-1-Ba-L, внося 100 мкл инокулята штамма ВИЧ-1-Ba-L, что соответствует дозе 1000 TCID50 (доза, инфицирующая 50% клеток культуры ткани).

Для оценки антиретровирусной активности препараты вносили в лунки за 24 ч до заражения клеток штаммом ВИЧ-1-Ba-L, а также на 3, 7, 10, 14, 17 день после заражения. На 3, 7, 10, 14, 17 сутки после инфицирования клеток был собран супернатант, использованный для оценки влияния препаратов на ингибирование репликации ВИЧ.

Перед внесением в лунки, содержащие 750 мкл клеточной культуры, препараты разводили средой RPMI1640 (DIFCO) до достижения конечного объема в 250 мкл. Препарат СМД AT к CD4 и препарат СМД AT к ИФН-γ разводили в среде RPMI1640 (DIFCO) в 8 раз (степень разведения 1/8), а препарат СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ разводили в среде RPMI1640 (DIFCO) в 4 раза (степень разведения 1/4). Таким образом, количество компонентов каждого компонента в составе препарата СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ, вносимого в экспериментальную лунку при тестировании, идентично количеству компонентов в составе препарата СМД AT к CD4 и компонентов в составе препарата СМД AT к ИФН-γ, тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности препарата СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Препарат сравнения азидотимидин разводили средой RPMI1640 (DIFCO) до достижения концентрации 8 нМ.

Эффективность препаратов определяли по ингибированию репликации ВИЧ, которую оценивали по ферментативной активности обратной транскриптазы ВИЧ в супернатантах макрофагов периферической крови человека с использованием HIV RT RetroSys набора производства INNOVAGEN (лот 10-059С). Для вычисления % ингибирования репликации ВИЧ в качестве контроля использовали супернатант клеток, к которым не вносили тестируемые препарат СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ, препарат СМД AT к CD4, препарат СМД AT к ИФН-γ и препарат сравнения азидотимидин (Таблицы 7 и 8).

Таблица 7. Антиретровирусная активность препаратов с использованием макрофагов периферической крови человека (донор №1), зараженных in vitro штаммом ВИЧ-1-Ba-L Препарат Степень разведения препарата в среде RPMI1640 (DIFCO) Ингибирование ферментативной активности обратной транскриптазы ВИЧ (% от контроля) 14 сутки 17 сутки 21 сутки СМД AT к ИФН-γ 1/8 24±4 24±4 0±0 СМД AT к CD4 1/8 53±13 37±7 0±0 СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ, в соотношении 1:1 1/4 69±1 74±9 37±3 Азидотимидин (8 нМ) - 97±1 97±0 98±2

Таблица 8. Антиретровируеная активность препаратов с использованием макрофагов периферической крови человека (донор №2), зараженных in vitro штаммом ВИЧ-1-Ba-L Препарат Степень разведения препарата в среде RPMI1640 (DIFCO) Ингибирование ферментативной активности обратной транскриптазы ВИЧ (% от контроля) 14 сутки 17 сутки 21 сутки СМД AT к ИФН-γ 1/8 39±20 0±0 0±0 СМД AT к CD4 1/8 0±0 0±0 0±0 СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ, в соотношении 1:1 1/4 50±5 42±4 30±6 Азидотимидин (8 нМ) - 82±2 54±1 41±1

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что антиретровирусная активность препарата СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ превосходит антиретровирусную активность препарата СМД AT к ИФН-γ и препарата СМД AT к CD4; антиретровирусная активность препарата СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ сохраняется на протяжении всего эксперимента, в отличие от антиретровирусной активности препарата СМД AT к ИФН-γ и препарата СМД AT к CD4; препарат СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ оказывает антиретровирусную активность на модели in vitro зараженных макрофагов периферической крови человека, полученных от разных серонегативных доноров, что свидетельствует о более выраженном антиретровирусном эффекте препарата СМД AT к CD4+СМД AT к ИФН-γ, в отличие от препарата СМД AT к ИФН-γ и препарата СМД AT к CD4, антиретровирусная активность которых была выявлена на модели in vitro зараженных макрофагов периферической крови человека, полученных только от одного серонегативного донора.

Пример 7

Для исследования свойств заявленных лекарственных средств для лечения пациентов группы активного препарата №1 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT к ИФН-γ) и CD4 рецептору (AT к CD4) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С200 (СМД AT к ИФН-γ+AT к CD4); для лечения пациентов группы активного препарата №2 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT к ИФН-γ), CD4 рецептору (AT к CD4) и гистамину (AT к Н) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С200 (СМД AT к ИФН-γ+AT к CD4+AT к H); для лечения пациентов группы активного препарата №3 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к гамма интерферону человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С50 (СМД AT к ИФН-γ).

Оценку эффективности трех препаратов, содержащих СМД AT к ИФН-γ+AT к CD4, СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Н и СМД AT к ИФН-γ, в лечении хронического вирусного гепатита С (ХГС) проводили в ходе сравнительного исследования в параллельных группах с участием 18 больных (14 мужчин и 4 женщины) в возрасте от 27 до 52 лет. Диагноз ХГС подтверждали на основании профиля сывороточных маркеров - AT к HCV и HCV RNA. Все пациенты, включенные в исследование, имели 2 или 3 генотип HCV, малосимптомное медленно прогрессирующее течение ХГС с низкой активностью (менее 3-кратного повышения уровня сывороточных аминотрансфераз, или <100 ЕД/л), ни один из пациентов ранее не получал противовирусной терапии. В исследование не включались пациенты с положительным результатом серологического анализа на HIV, RW, анти-НСА, HBsAg или HBcor Ab, с циррозом печени, тяжелыми сопутствующими заболеваниями в стадии обострения, талассемией или другой гемоглобинопатией, алкогольной и/или лекарственной/наркотической зависимостью, после трансплантации органов, постоянно принимающие иммуносупрессивные препараты, беременные и кормящие ребенка грудью женщины. Пациентам первых трех групп была назначена терапия каким-либо исследуемым препаратом в дозе 1 таблетка 3 раза в день в течение 24 недель: пациентам 1 группы (n=5) - композиция СМД AT к ИФН-Y+АТ к CD4; 2 группы (n =4) - композиция СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Н; 3 группы (n=4) - СМД AT к ИФН-γ Контрольную группу (№4) составили 5 пациентов с персистирующей виремией и стойко нормальными уровнями аминотрансфераз (<20 ЕД/л), которым не назначалась какая-либо терапия. В ходе исследования проводились врачебные осмотры, контроль вирусной нагрузки и лабораторных показателей, регистрировалась сопутствующая терапия, возможные нежелательные явления. В качестве критериев эффективности лечения на 24-й неделе оценивались вирусная нагрузка HCV RNA и активность аланинаминотрансферазы (АЛТ).

Данные по вирусной нагрузке (числу копий HCV RNA), представленные таблице 9 в виде значений медианы (Me), первого и третьего квартилей (Q1, Q3), свидетельствуют о положительной ее динамике, полученной у пациентов 1-3 групп к концу 24-недельной терапии. Прием препарата СМД AT к ИФН-γ+AT к CD4 приводил к уменьшению числа копий HCV RNA у 4 из 5 человек 1 группы, при этом среднее снижение вирусной нагрузки составило 75%. Сходные показатели были получены у пациентов, которые принимали препарат СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к H в течение 24 недель: противовирусная активность регистрировалась у всех пациентов (у 4 из 4 человек группы 2), среднее снижение вирусной нагрузки составило 70%. При этом у 2 пациентов (по одному из группы 1 и группы 2) был получен полный вирусологический ответ по окончании терапии. Противовирусная активность монокомпонентного препарата СМД AT к ИФН-γ была несколько ниже, поскольку снижение числа копий HCV RNA отмечено у 3 из 4 пациентов 3 группы, среднее снижение вирусной нагрузки составило 55%. Среди участников исследования контрольной группы положительной динамики вирусной нагрузки не выявлено.

Таблица 9. Динамика вирусной нагрузки в исследуемых группах HCV RNA, копий/мл Среднее снижение вирусной нагрузки, % СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4 (Me [Q1-Q3]) Исходно 66200 [450-181400] 75 Через 24 недели лечения 12500 [50-30560] СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Н (Me [Q1-Q3]) Исходно 58900 [600-124500] 70 Через 24 недели лечения 15600 [50-45700] СМД AT к ИФН-γ (Me [Q1-Q3]) Исходно 84700 [350-172800] 55 Через 24 недели лечения 22400 [150-58500] Контрольная группа (Me [Q1-Q3]) Исходно 79500 [300-155600] - Через 24 недели лечения 87900 [450-164300]

Противовирусная активность исследуемых препаратов сочеталась с положительной динамикой уровня АЛТ, которую зарегистрировали у пациентов 1-3 групп к концу 24 недель лечения. Нормализация уровня АЛТ была отмечена у 2 пациентов группы СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4, у 1 пациента группы СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Н и также у 1 пациента группы СМД AT к ИФН-γ. У 1 пациента контрольной группы на фоне увеличения вирусной нагрузки через 24 недели наблюдения показатель АЛТ превысил верхнюю границу нормы (>20 ЕД/л).

В ходе наблюдения не было выявлено каких-либо нежелательных явлений, связанных с приемом исследуемых препаратов, что свидетельствовало о хорошей их переносимости. Отсутствие патологических отклонений со стороны анализов крови и мочи, а также биохимических показателей, включая почечные и печеночные маркеры, подтверждало безопасность лечения.

Таким образом, в результате исследования были получены данные об эффективности и безопасности препаратов СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4, СМД AT к ИФН-у+АТ к CD4+AT к Н и СМД AT к ИФН-γ, в лечении больных с ХГС.Наиболее отчетливый противовирусный эффект отмечен у препарата СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4 и СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к H, что подтверждалось положительной динамикой вирусной нагрузки, а также зарегистрированным у 2 пациентов полным вирусологическим ответом к концу 24 недель терапии. Противовирусная эффективность препаратов, содержащих СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4, СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к H и СМД AT к ИФН-γ, сочеталась со снижением активности ХГС, что выражалось в снижении и даже нормализации уровня АЛТ у части пациентов к окончанию 24-недельного курса терапии.

Пример 8.

Для исследования свойств заявленных лекарственных средств для лечения пациентов группы активного препарата №1 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (анти-IFN-γ) и CD4 рецептора (анти-CD4) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С200 (СМД анти-IFN-γ+анти-CD4); для лечения пациентов группы активного препарата №2 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (анти-IFN-γ), к CD4 рецептору (анти-CD4) и гистамину (анти-H) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С200 (СМД анти-1РК-γ+анти-CD4+анти-H). Для лечения пациентов группы сравнения были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к гамма интерферону человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, СЗО, С50 (СМД анти-IFN-γ).

Антиретровирусную активность композиций СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и СМД анти-γ+анти-CD4+анти-H оценивали в ходе открытого сравнительного клинического исследования с участием пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), которые наблюдались в Территориальном центре по профилактике и борьбе со СПИД'ом и инфекционными заболеваниями. В исследование были включены 65 мужчин и 32 женщины (всего 97 пациентов) в возрасте от 18 до 48 лет с вирусной нагрузкой ≥150 копий РНК ВИЧ-1 в 1 мл плазмы и уровнем CD4-лимфоцитов не ниже 250 клеток/мкл (или ≥0,25×10⁹/л). 34 из 97 участников исследования наблюдались по поводу бессимптомного инфекционного статуса и ранее не получали лечения по поводу ВИЧ-инфекции (наивные пациенты). 63 из 97 пациентов находились на антиретровирусной терапии (APT) в течение 1-2 лет.В исследование не включались пациенты с циррозом печени, вирусным гепатитом C, тяжелыми сопутствующими заболеваниями в стадии обострения, беременные женщины, а также лица, принимающие внутривенно наркотические средства. Исследование проводили в осеннее-зимний период, когда отмечался сезонный подъем заболеваемости гриппом и острыми респираторными инфекциями (ОРВИ).

75 пациента были рандомизированы в три группы, им была назначена терапия препаратами группы 1 и 2 или препаратом сравнения группы 3 в профилактической (в отношении гриппа/ОРВИ) дозировке - по 1 таблетке 1 раз в день в течение 6 недель, в том числе: пациентам группы 1 (n=25) была назначена композиция СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 в виде монотерапии (подгруппа 1А: наивные пациенты, n=12) или в сочетании с APT (подгруппа 1Б, п=13); пациентам группы 2 (n=23) была назначена композициям СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+aнти-H, в том числе, в виде монотерапии (подгруппа 2А: наивные пациенты, n=11) или в сочетании с APT (подгруппа 2Б, n=12); пациентам группы 3 (n=27) был назначен препарат СМД анти-IFN-γ, в том числе, в виде монотерапии (подгруппа 3А: наивные пациенты, n=11) или в сочетании с APT (подгруппа 3Б, n=16). Контрольную (четвертую) группу (n=22) составили пациенты, которые продолжали получать APT по прежней схеме без добавления какого-либо изучаемого препарата (группа APT).

Исходно и через 6 недель у всех пациентов оценивали вирусную нагрузку, уровень CD4 и CD8 лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс CD4/CD8. Для определения копий РНК ВИЧ-1 в плазме крови использовали наборы COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR Kit, version 1,5 для автоматического ПЦР-анализатора СОВ AS AMPLICOR (Roche, Швейцария). Фенотипирование циркулирующих лимфоцитов периферической крови выполняли на проточном цитофлюориметре FACSCount (Becton Dickinson, США) с использованием стандартных тест-систем FACSCount Reagent Kit, содержащих антитела к CD3, CD4, CD8, меченные флюорохромами FITC, РЕ.

В таблице 10 представлены данные по вирусной нагрузке (числу копий РНК ВИЧ) в виде значений медианы (Me), первого и третьего квартилей (Q1, Q3) у пациентов исследуемых групп в динамике наблюдения. В результате исследования установлено, что 6-недельный прием композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 приводил к снижению количества копий РНК ВИЧ-1 у 58% наивных пациентов (у 7 из 12 человек подгруппы 1А), при этом среднее снижение вирусной нагрузки составило 16,9%. Сочетанное применение композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и APT было не менее эффективным, поскольку уменьшение количества копий РНК ВИЧ-1 отмечено у 62% участников исследования (у 8 из 13 человек подгруппы 1Б), а снижение вирусной нагрузки в среднем было 18,2% от исходного уровня. Примерно сходные показатели получены при использовании композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H: противовирусная активность регистрировалась у 55% ВИЧ-инфицированных наивных пациентов (у 6 из 11 человек подгруппы 2А) и у 67% лиц, получавших комбинацию СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H и APT (у 8 из 12 человек подгруппы 2Б); среднее снижение вирусной нагрузки составило 17,3% и 18,9% соответственно. Антиретровирусная активность, отмеченная в первых двух группах, была несколько выше результатов лечения, полученных у пациентов группы сравнения. Монотерапия СМД анти-IFN-γ через 6 недель снижала количество копий РНК ВИЧ-1 у 36% наивных пациентов (у 4 из 11 человек подгруппы ЗА), при этом уменьшение вирусной нагрузки в среднем составило 9,5%. Сочетанное применение монокомпонентного препарата СМД анти-IFN-γ и APT повышало эффективность терапии, способствуя снижению вирусной нагрузки у 50% участников исследования (у 8 из 16 человек подгруппы 3Б) в среднем на 14,2%. Аналогичные показатели лечения у лиц, получавших только APT (контрольная группа 4), составили 32% (у 7 из 22 человек группы 4) и 13,3% соответственно.

Анализ показателей субпопуляций циркулирующих лимфоцитов в динамике наблюдения (Таблица 11) показал более выраженное, чем в контрольной группе, увеличение числа CD4 лимфоцитов через 6 недель терапии при использовании СМД анти-IFN-γ+анти-CD4, СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H и СМД анти-IFN-γ в виде монотерапии у наивных пациентов (подгруппы 1А, 2А и 3A) или при сочетании с APT (подгруппы 1Б, 2Б и 3Б). При этом число CD8 через 6 недель приема препаратов (моно- либо сочетанная терапия) не менялось ни в одной из изучаемых групп. Позитивная динамика со стороны CD4-лимфоцитов в ходе лечения приводила к повышению иммунорегуляторного индекса CD4/CD8, наиболее значимому в подгруппах пациентов, принимавших композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H (моно- или сочетанная терапия - группы 1 и 2) и СМД анти-IFN-γ в сочетании с APT (подгруппа 3Б).

Таблица 10 Динамика вирусной нагрузки в зависимости от схемы терапии Вирусная нагрузка, копий/мл Среднее снижение вирусной нагрузки, % СМД анти-IFN-Y+анти-CD4 (Me [Q1-Q3]) Исходно 5769 [368-62584] 16,9 Через 6 недель лечения 4575 [337-58526] APT и СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 (Me [Q1-Q3]) Исходно 5238 [385-59695] 18,2 Через 6 недель лечения 4408 [320-50197] СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-Н (Me [Q1-Q3]) Исходно 5638 [385-61742] 17,3 Через 6 недель лечения 4754 [278-57426] APT и СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H (Me [Q1-Q3]) Исходно 5189 [350-59798] 18,9 Через 6 недель лечения 46108 [269-47987] СМД анти-IFN-γ (Me [Q1-Q3]) Исходно 5813 [150-33356] 9,5 Через 6 недель лечения 5786 [150-38359] APT и СМД анти-IFN-γ (Me [Q1-Q3]) Исходно 4680 [274-9838] 14,2 Через 6 недель лечения 4652 [272-8874] APT (Me [Q1-Q3]) Исходно 5547 [385-58996] 13,3 Через 6 недель лечения 5308 [338-57709]

Таблица 11 Показатели субпопуляций циркулирующих лимфоцитов у пациентов исследуемых групп в динамике наблюдения Период наблюдения CD4, кл/мкл (М±SE) CD4/CD8 (М±SE) СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 (n=12) Исходно 516±33 0,46±0,09 Через 6 недель лечения 712±24 0,58±0,07* APT и СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 (n=13) Исходно 499±41 0,50±0,08 Через 6 недель лечения 728±29 0,60±0,06* СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H (n=11) Исходно 509±45 0,49±0,06 Через 6 недель лечения 706±27 0,58±0,08* APT и СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H (n=12) Исходно 521±37 0,48±0,09 Через 6 недель лечения 734±22 0,62±0,10* СМД анти-IFN-γ (n=11) Исходно 513±98 0,38±±,19 Через 6 недель лечения 563±26 0,44±0,12 APT и СМД анти-IFN-γ (n=16) Исходно 491±49 0,55±0,06 Через 6 недель лечения 623±45 0,67±0,05* APT (n=22) Исходно 510±29 0,44±0,06 Через 6 недель лечения 595±35 0,50±0,12 * значимые отличия по сравнению с исходным уровнем, p<0,05

Отсутствие у пациентов в ходе лечения нежелательных явлений, связанных с приемом исследуемых лекарственных средств, свидетельствовало о хорошей переносимости препаратов. Повторный контроль лабораторных показателей, в том числе, анализов крови и мочи, биохимических маркеров, подтверждало безопасность лечения.

Таким образом, проведенное исследование продемонстрировало антиретровирусную эффективность препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-Н, обусловленную, очевидно, изменением функциональной активности CD4 рецепторов, что препятствует проникновению ВИЧ в клетки, а также подавлением репликации ВИЧ внутри клетки за счет активации процессов транскрипции мРНК противовирусных белков. Установлено, что снижение вирусной нагрузки, отмеченное в результате 6-недельного приема препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H в дозе 1 таблетка в день, превышает противовирусный эффект, который регистрируется через 6 недель приема монокомпонентного препарата СМД анти-IFN-γ в той же дозе либо продолжающейся по прежней схеме APT. Сочетание какого-либо препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4, СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H или СМД анти-IFN с APT несколько усиливает противовирусную активность последней, что проявляется в уменьшении среднего значения вирусной нагрузки через 6 недель у большего процента участников исследования.

Показано влияние препаратов СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H на соотношение CD4/CD8 лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных пациентов (за счет некоторого увеличения абсолютного количества CD4-клеток), наиболее выраженное при совместном использовании с APT. Учитывая одновременное снижение вирусной нагрузки у пациентов, принимающих препараты СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H, можно полагать, что увеличение количества CD4-клеток связано с пополнением популяции этих клеток за счет здоровых (неинфицированных) клеток. Сочетание APT с препаратами СМД анти-IFN-γ+анти-CD4, СМД анти-IFN+анти-CD4+анти-Н или СМД анти-IFN более эффективно в отношении восстановления иммунорегуляторного индекса CD4/CD8, чем продолжающаяся APT по прежней схеме.

Антиретровирусная активность препаратов СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и СМД анти-1РК-γ+анти-CD4+анти-Н позволяет использовать их с профилактической и лечебной целью как у наивных ВИЧ-инфицированных пациентов, так и у лиц, получающих APT.

Пример 9.

Для экспериментального изучения заявленного технического решения были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT ГИ), к CD4 рецептору (AT CD4), к гистамину (AT Г), в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз каждого компонента, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С200, нанесенные на лактозу в виде водно-спиртовой смеси гомеопатических разведений С12, C30, С200 каждого (AT ГИ+AT CD4+AT Г). Группа плацебо получала таблетки массой 300 мг, содержащие лактозу моногидрат, целлюлозу микрокристаллическую, магния стеарат.

В продолжающееся двойное слепое плацебоконтролируемое исследование включаются пациенты в возрасте 18-60 лет обоего пола, с ОРВИ с признаками интоксикации и катаральным синдромом. В исследование включаются пациенты с температурой тела 37,8 °C и более (при условии регистрации такой температуры с момента начала заболевания), длительностью заболевания не более 48 часов до начала лечения, без тяжелых сопутствующих заболеваний. Пациентам проводится экспресс-тест на наличие антигенов вируса гриппа. Пациенты с положительными результатами теста не включаются в исследование. Все пациенты дают письменное добровольное согласие на участие в исследовании перед началом всех процедур исследования. Пациенты заполняют дневники, в которых регистрируют температуру тела дважды в день, сопутствующую терапию и пр. Пациенты получают препарат AT ГИ+AT CD4+AT Г или плацебо, в зависимости от той или иной группы лечения, по 8 таблеток в первый день и по три таблетки в день со второго по пятый дни. Пациенты могут принимать жаропонижающие препараты при необходимости. Не допускается применение противовирусных, иммуномодулирующих, антигистаминных препаратов и антибиотиков. Перед первым приемом препарата и на последнем визите пациенты сдают образцы крови и мочи для проведения лабораторных исследований с целью мониторинга безопасности проводимой терапии. Лечение продолжается 5 суток, последующее наблюдение - 2 суток. Таким образом, в среднем, каждый пациент принимает участие в исследовании в течение 7 дней.

Эффективность терапии оценивалась по срокам достижения температуры тела 37,0°C и менее, также сравнивалось число приемов антипиретиков.

На момент проведения анализа, терапию завершили 78 пациентов (40 пациентов получали AT ГИ+AT CD4+AT Г, 38 - плацебо). Доли пациентов с достижением температуры тела 37,0°C и менее представлены на рис.1. Как видно из Таблицы 1, терапия AT ГИ+AT CD4+AT Г к исходу вторых суток от начала терапии позволила достичь снижения тела у пациентов в 17,4% случаев чаще, чем в группе приема плацебо (p<0,05). При этом, число приемов жаропонижающих средств в группах к этому же моменту было статистически значимо меньше в группе приема препарата AT ГИ+AT CD4+AT Г (3,5±0,25 приема жаропонижающих с момента начала терапии AT ГИ+AT CD4+AT Г к исходу вторых суток лечения, против 3,9±0,32 в группе приема плацебо, p<0,005). Превосходство AT ГИ+AT CD4+AT Г над плацебо, начавшееся уже на утро вторых суток лечения, сохранялось на протяжении всего периода терапии.

Таблица 12.   Доли пациентов с достижением температуры тела 37,0°C и менее на боне поиема AT ГИ+AT CD4+AT Г /плацебо.    

В анализ безопасности были включены данные всех 78 пациентов, участвовавших в исследовании и завершивших лечение в установленные протоколом сроки, досрочно выбывших пациентов не было. В течение всего периода наблюдения отмечалась хорошая переносимость препарата AT ГИ+AT CD4+AT Г. Нежелательные явления, связанные с приемом препарата AT ГИ+AT CD4+AT Г, не отмечались. Исследование анализа крови в начале и конце периода лечения не выявило патологических отклонений. Общий анализ мочи в первый и заключительный день исследования также не выявил патологии ни у одного пациента.

При сравнении полученных данных с результатами проведенного в 2005 году двойного слепого плацебоконтролируемого рандомизированного исследования клинической эффективности и безопасности лечебного применения препарата, содержащего активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT ГИ) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, С200 (СМД AT к ГИ) при гриппе и других острых респираторных вирусных инфекциях (ГУ НИИ гриппа РАМН, Санкт-Петербург, 2005) было выявлено, что препарат AT ГИ+AT CD4+AT Г более эффективно по сравнению с СМД AT к ГИ снижает температуру (Таблица 12, Таблица 13 и Таблица 14).

Таблица 13. Доли пациентов с достижением температуры тела 37,0°C и менее на фоне приема препарата AT ГИ+AT CD4+AT Г/плацебо   1 сутки, утро 1 сутки, вечер 2 сутки, утро 2 сутки, вечер 3 сутки, утро 3 сутки, вечер 4 сутки, утро 4 сутки, вечер 5 сутки, утро 5 сутки, вечер 6 сутки, утро 6 сутки, вечер 7 сутки, утро AT ГИ+AT CD4+AT Г, т=40 Общее число пациентов 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 Число с нормальной температурой 19 20 24 28 27 30 31 33 36 38 40 40 40 Доля с нормальной температурой, % 47.5 50.0 60.0 70.0 67.5 75.0 77.5 82.5 90.0 95.0 100.0 100.0 100.0 Плацебо, т=38 Общее число пациентов 38 38 38 38 38 38 38 38 38 38 38 38 38 Число с нормальной температурой 18 17 19 20 23 24 27 24 29 30 33 37 38 Доля с нормальной температурой, % 47.4 44.7 50.0 52.6 60.5 63.2 71.1 63.2 76.3 78.9 86.8 97.4 100.0 AT ГИ*, n=30 Общее число пациентов 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Число с нормальной температурой 0 3 14 12 18 19 25 29 29 30 29 30 29 Доля с нормальной температурой, % 0 10.0 46.7 40.0 60.0 63.3 83.3 96.7 96.7 100 96.7 100 96.7 Плацебо*, n=30 Общее число пациентов 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Число с нормальной температурой 0 0 10 7 16 15 28 28 28 30 30 30 30 Доля с нормальной температурой, % 0 0 33.3 23.3 53.3 50.0 93.3 93.3 93.3 100 100 100 100 * По данным двойного слепого плацебоконтролируемого рандомизированного исследования клинической эффективности и безопасности лечебного применения препарата СМД AT к ГИ при гриппе и других острых респираторных вирусных инфекциях (ГУ НИИ гриппа РАМН, Санкт-Петербург, 2005).

Таблица 14. Средние значения температуры тела у пациентов в зависимости от группы лечения, °C, M±SD   1 сутки, утро 1 сутки, вечер 2 сутки, утро 2 сутки, вечер 3 сутки, утро 3 сутки, вечер 4 сутки, утро 4 сутки, вечер 5 сутки, утро 5 сутки, вечер 6 сутки, утро 6 сутки, вечер 7 сутки, утро CD4+AT Г, n=40 37.5±0.54 37.7±0.56 37.2±0.67 37.1±0.53 36.8±0.43 36.8±0.49 36.7±0.31 36.6±0.33 36.6±0.25 36.6±0.23 36.6±0.22 36.6±0.15 36.6±0.18 Плацебо, n=38 37.6±0.71 37.6±0.63 37.2±0.48 37.1±0.49 36.9±0.41 36.9±0.36 36.8±0.49 36.7±0.37 36.6±0.32 36.6±0.21 36.6±0.28 36.5±0.18 36.5±0.18 AT ГИ*, n=30 38.1±0.62 38.0±0.58 37.4±0.80 37.3±0.61 37.1±0.50 37.0±0.47 36.8±0.35 36.6±0.32 36.6±0.21 36.5±0.26 36.6±0.21 36.6±0.26 36.6±0.26 Плацебо,* n=30 38.0±0.48 38.0±0.50 37.4±0.60 37.4±0.47 37.0±0.37 37.0±0.42 36.8±0.23 36.6±0.34 36.6±0.28 36.6±5.42 36.6±0.21 36.5±0.24 36.6±0.18 * По данным двойного слепого плацебоконтролируемого рандомизированного исследования клинической эффективности и безопасности лечебного применения препарата СМД AT к ГИ при гриппе и других острых респираторных вирусных инфекциях (ГУ НИИ гриппа РАМН, Санкт-Петербург, 2005).

Пример 10.

Для экспериментального изучения заявленного технического решения были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT ГИ), к CD4 рецептору молекуле Т-лимфоцитов (AT CD4), к гистамину (AT Г), в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз каждого компонента, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С200 (AT ГИ+AT CD4+AT Г). В качестве препарата сравнения использовали препарат Тамифлю® (действующее вещество - озельтамивир, Ф.Хоффманн-Ля Рош Лтд. - Швейцария) (Осельтамивир).

В продолжающееся открытое сравнительное контролируемое клиническое исследование препарата AT ГИ+AT CD4+AT Г и препарата Тамифлю® включаются пациенты в возрасте 18-60 лет обоего пола, с гриппом A или B с признаками интоксикации и катаральным синдромом. В исследование включаются пациенты с температурой тела 37,8°C и более (при условии регистрации такой температуры с момента начала заболевания), длительностью заболевания не более 48 часов до начала лечения, без тяжелых сопутствующих заболеваний. Пациентам проводится экспресс-тест на наличие антигенов вируса гриппа. Пациенты с отрицательными результатами теста не включаются в исследование. Все пациенты дают письменное добровольное согласие на участие в исследовании перед началом всех процедур исследования. Пациенты заполняют дневники, в которых регистрируют температуру тела дважды в день, сопутствующую терапию и пр. Пациенты получают препарат AT ГИ+AT CD4+AT Г по 8 таблеток в первый день и по три таблетки в день со второго по пятый дни, или Тамифлю® по 75 мг дважды в день, согласно инструкции производителя. Пациенты могут принимать жаропонижающие препараты при необходимости. Не допускается применение противовирусных, иммуномодулирующих,

антигистаминных препаратов и антибиотиков. Перед первым приемом препарата и на последнем визите пациенты сдают образцы крови и мочи для проведения лабораторных исследований с целью мониторинга безопасности проводимой терапии. Лечение продолжается 5 суток, последующее наблюдение - 2 суток. Таким образом, в среднем, каждый пациент принимает участие в исследовании в течение 7 дней.

Эффективность терапии оценивалась по срокам достижения температуры тела 37,0°C и менее, также сравнивалось число приемов антипиретиков.

На момент проведения анализа исследование завершило 17 пациентов (6 пациентов группы препарата AT ГИ+AT CD4+AT Г и 11 пациентов группы приема Тамифлю®).

Доли пациентов с достижением температуры тела 37,0°C и менее в группах статистически не различались между собой на протяжении всего периода лечения. Уже к началу 4-х суток лечения в обеих группах было достигнуто почти полное выздоровление пациентов (Таблица 15). Уже к началу вторых суток лечения в обеих группах у трети пациентов была зарегистрирована нормализация температуры тела. Среднее число приемов жаропонижающих в группах также не имело статистически значимых различий и на начало 4-х суток терапии составило 7,6±0,84 в группе приема препарата AT ГИ+AT CD4+AT Г и 7,4±0,90 в группе приема препарата Тамифлю® соответственно.

Таблица 15.   Доли пациентов с достижением температуры тела 37,0°C
ля Л/IPUPP НЯ гЬг»НР ППИРМЯ AT ГИ+AT CD4+AT Г/Тамийлю®.    

В анализ безопасности были включены данные всех 17 пациентов, участвовавших в исследовании и завершивших лечение в установленные протоколом сроки, досрочно выбывших пациентов не было. В течение всего периода наблюдения отмечалась хорошая переносимость препарата, нежелательные явления не отмечались. Исследование анализа крови в начале и конце периода лечения не выявило патологических отклонений. Общий анализ мочи в первый и заключительный день исследования также не выявил патологии ни у одного пациента.

При сравнении полученных данных с результатами проведенного в 2005 году двойного слепого плацебоконтролируемого рандомизированного исследования клинической эффективности и безопасности лечебного применения препарата, содержащего активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT ГИ) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С200 (СМД AT ГИ) при гриппе и других острых респираторных вирусных инфекциях (ГУ НИИ гриппа РАМН, Санкт-Петербург, 2005) было выявлено, что препарат AT ГИ+AT CD4+AT Г более эффективно по сравнению с СМД AT ГИ снижает температуру (см. Таблица 15, Таблица 16 и Таблица 17).

Таблица 16. Доли пациентов с достижением температуры тела 37,0°C и CD4+AT Г/Тамифлю® менее на фоне приема препарата AT ГИ+AT   утро, день 1 вечер, день 1 утро, день 2 вечер, день 2 утро, день 3 вечер, день 3 утро, день 4 вечер, день
4 утро, день 5 вечер, день 5 утро, день 6 вечер, день 6 утро, день 7 вечер, день
7 утро, день 8 AT ГИ+AT СD4+AT Г, n=6 AT ГИ+AT С AT Г. n=6 Общее число пациентов 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 5 5 4 4 н/д Число с нормальной температурой 0 0 2 3 4 4 6 5 6 6 5 5 4 4 н/д Доля с нормальной температурой, % 0 0 33.3 50.0 66.7 66.7 100.0 83.3 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 н/д Осельтамивир, n=11 Общее число пациентов 11 11 11 11 11 11 11 10 10 10 9 7 5 4 3 Число с нормальной температурой 0 1 4 5 5 6 10 8 9 9 9 7 5 4 3 Доля с нормальной температурой, % 0 9.1 36.4 45.5 45.5 54.5 90.9 80.0 90.0 90.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 АЕ ГИ*-, n=30 Общее число пациентов 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Число с нормальной температурой 0 3 14 12 18 19 25 29 29 30 29 30 29 30 30 Доля с нормальной температурой, % 0 10.0 46.7 40.0 60.0 63.3 83.3 96.7 96.7 100 96.7 100 96.7 100 100 Плацебо*, n=30 Общее число пациентов 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Число с нормальной температурой 0 0 10 7 16 15 28 28 28 30 30 30 30 30 30 Доля с нормальной температурой, % 0 0 33.3 23.3 53.3 50.0 93.3 93.3 93.3 100 100 100 100 100 100 * По данным двойного слепого плацебоконтролируемого рандомизированного исследования клинической эффективности и безопасности лечебного применения препарата СМД AT ГИ при гриппе и других острых респираторных вирусных инфекциях (ГУ НИИ гриппа РАМН, Санкт-Петербург, 2005).

Таблица 17. Средние значения температуры тела у пациентов в зависимости от группы лечения, °C, M±SD   утро, день 1 вечер, день 1 утро, день 2 вечер, день 2 утро, день 3 вечер, день 3 утро, день 4 вечер, день 4 утро, день 5 вечер, день 5 утро, день 6 вечер, день 6 утро, день 7 вечер, день 7 утро, день 8 AT ГИ+AT CD4+AT Г, n=6 38.5±0.49 38.1±0.62 37.2±1.01 37.2±0.67 36.5±0.61 36.8±0.47 36.5±0.37 36.6±0.46 36.5±0.26 36.6±0.28 36.4±0.35 36.5±0.20 36.4±0.26 36.5±0.22 н/д Осельтамивир, n=11 38.1±0.82 37.3±0.71 37.3±0.72 36.9±0.53 36.9±0.47 36.7±0.46 36.8±0.37 36.5±0.38 36.7±0.25 36.5±0.21 36.6±0.21 36.3±0.19 36.5±0.10 36.6+±.12 36.5±0.14 АТ ГИ*
n=30 38.1±0.62 38.0±0.58 37.4±0.80 37.3±0.61 37.1±0.50 37.0±0.47 36.8±0.35 36.6±0.32 36.6±0.21 36.5±0.26 36.6±0.21 36.6±0.26 36.6±0.26 36.5±0.27 36.5±0.23 Плацебо,* n=30 38.0±0.48 38.0±0.50 37.4±0.60 37.4±0.47 37.0±0.37 37.0±0.42 36.8±0.23 36.6±0.34 36.6±0.28 36.6±5.42 36.6±0.21 36.5±0.24 36.6±0.18 36.5±0.19 36.4±0.21 * По данным двойного слепого плацебоконтролируемого рандомизированного исследования клинической эффективности и безопасности лечебного применения препарата СМД AT ГИ при гриппе и других острых респираторных вирусных инфекциях (ГУ НИИ гриппа РАМН, Санкт-Петербург, 2005).

Пример 11.

Для экспериментального изучения заявленного технического решения были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT ГИ), к CD4 рецептору молекуле Т-лимфоцитов (AT CD4), к гистамину (AT Г), в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз каждого компонента, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С200 (AT ГИ+AT CD4+AT Г). В качестве препарата сравнения используют препарат, содержащий активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к гамма интерферону человека (AT ГИ) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, V30, С200 (СМД AT ГИ). Группа плацебо получала таблетки массой 300 мг, содержащие лактозу моногидрат, целлюлозу микрокристаллическую, магния стеарат.

В продолжающемся двойном слепом плацебоконтролируемое исследовании эффективности и безопасности препарата AT ГИ+AT CD4+AT Г при ОРВИ (см. пример 1) и в продолжающемся открытом сравнительном контролируемом исследовании эффективности и безопасности препарата AT ГИ+AT CD4+AT Г при гриппе (см. пример 2) дополнительно оценивали число развившихся на фоне острого инфекционного процесса осложнений, в том числе бактериальных (бактериальная пневмония, трахеит, отит, гломерулонефрит и др.).

В тех случаях, когда система защиты совершенна, -инфекционный процесс может прерваться или, оставаясь локализованным, не сопровождаться развитием выраженных клинических симптомов, т.е. адекватность защитных реакций приводит к быстрой инактивации возбудителя, восстановлению нарушенных функций организма и выздоровлению. Иная картина возникает в организме, высоковосприимчивом к инфекционному возбудителю и не располагающим совершенным механизмом специфической и неспецифической защиты

(иммунокомпрометированные пациенты). В таких случаях репродуцировавшиеся во все возрастающем количестве возбудители и продукты их взаимодействия с эпителиальными и иммунными клетками, а также сами разрушенные клетки попадают в кровь, обусловливая развитие тяжелых форм течения болезни, формирование осложнений и возможный неблагоприятный исход.

Применение препарата AT ГИ+AT CD4+AT Г как при гриппе, так и при ОРВИ способствует значительному снижению частоты бактериальных осложнений по сравнению с плацебо (Таблица 18), и, как следствие, снижению потребности в антибактериальной терапии. Препарат AT ГИ+AT CD4+AT Г препятствует развитию вторичного иммунодефицита на этапе реконвалесценции, оказывая иммуномодулирующий эффект и повышая естественные защитные силы организма. Способность AT ГИ+AT CD4+AT Г снижать частоту развития бактериальных осложнений превышала по сравнению с препаратом СМД AT ГИ.

Таблица 18. Частота развития бактериальных осложнений Препарат Кол-во пациен т. Бактериальные осложнения Отит кол-во / % Трахеит кол-во / % Пневмония кол-во / % Всего кол-во 1% AT ГИ+АТ CD4+AT Г (ОРВИ) 40 0/0 1/2.5 0/0 1/2.5 Плацебо (ОРВИ) 38 3/7.9 7 /18.4 0/0 10 / 26.3 AT ГИ+АТ CD4+AT Г (Грипп) 6 0/0 0/0 0/0 0/0 Тамифлю® (Грипп) 11 0/0 2/18.2 1/9.1 3 / 27.2 СМД AT ГИ (Грипп и ОРВИ) * 30 1/3.3 2/6.7 0/0 3/10.0 Плацебо (Грипп и ОРВИ)* 30 4/13.3 5/16.7 0/0 9/30 * - По данным двойного слепого плацебоконтролируемого рандомизированного исследования клинической эффективности и безопасности лечебного применения препарата СМД AT ГИ при гриппе и других острых респираторных вирусных инфекциях (ГУ НИИ гриппа РАМН, Санкт-Петербург, 2005).

Пример 12.

Исследование влияния комплексного лекарственного средства, в состав которого входят активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител антител к CD4 (смесь сверхмалых доз водных гомеопатических разведений С12+С30+С50) и активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону гамма (смесь сверхмалых доз водных гомеопатических разведений С12+С30+С50) в соотношении 1:1 (далее комплексный препарат), а также компонентов, входящий в его состав (активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител антител к CD4 (смесь сверхмалых доз водных гомеопатических разведений С12+С30+С50) (далее СМД AT к CD4) и активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител антител к интерферону гамма (смесь сверхмалых дозводных гомеопатических разведений С12+С30+С50) (далее СМД AT к ИФН гамма)) in vitro на связывание стандартного лиганда [³Н]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека оценивали радиолигандным методом. В качестве контроля тестируемых препаратов была протестирована потенцированная-активированная форма дистиллированной воды (смесь гомеопатических разведений С12+С30+С50) (далее потенцированная вода).

Сигма-1 рецептор - внутриклеточный рецептор, локализованный в клетках центральной нервной системе, клетках большинства периферических тканей и иммунокомпетентных клетках. Этот рецептор посредством контроля гомеостаза внутриклеточного кальция, регулирует внутриклеточные сигнальные каскады, приводящие к активации соответствующих транскрипционных факторов и транскрипции целого семейства генов, кодирующих, в частности, факторы резистентности к инфекционным агентам и цитокины. В связи с этим способность лекарственных средств оказывать влияние на эффективность взаимодействия лигандов с сигма-1 рецептором указывает на наличие противовирусного и иммуномодулирующего компонентов в спектре их фармакологической активности, что позволяет рассматривать данные препараты в качестве эффективных лекарственных средств для лечения и профилактики различных инфекционных заболеваний.

В опыте (для измерения общего связывания) в инкубационную среду вносили 20 мкл комплексного препарата или по 10 мкл СМД AT к CD4 или СМД AT к ИФН гамма. Таким образом, количество СМД AT к CD4 и СМД AT к ИФН гамма, вносимых в экспериментальную лунку при тестировании комплексного препарата, было идентично количеству СМД AT к CD4 и СМД AT к ИФН гамма тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности комплексного препарата с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Потенцированную воду вносили в инкубационную среду в объеме 20 мкл и 10 мкл.

Затем вносили 160 мкл (~200 µg белка) гомогената мембран клеток линии Jurkat (линия лейкемических Т-лимфоцитов человека), и в последнюю очередь 20 мкл радиолиганда меченого тритием [3Н]пентазоцин (15 нМ).

Для измерения неспецифического связывания вместо препаратов или потенцированной воды в инкубационную среду вносили 20 мкл немеченого лиганда - галоперидол (10 мкМ).

Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном счетчике (Topcount, Packard) с использованием сцинтилляционной смеси (Microscint 0, Packard) после инкубации в течение 120 минут при температуре 22°C в 50 мМ Tris-HCl буфере (pH=7,4) и фильтрации на стекловолоконных фильтрах (GF/B, Packard). Специфическое связывание (в опыте или контроле) рассчитывали как разницу между общим (в опыте или контроле) и неспецифическим связыванием.

Результаты представлены в виде процента ингибирования специфического связывания в контроле (в качестве контроля использовали дистиллированную воду) (см. Таблицу 19).

Таблица 19. Влияние препаратов и потенцированной воды на связывание стандартного радиолиганда [3Н]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека Экспериментальная группа Количество, вносимое в экспериментальную лунку % от специфического связывания радиолиганда в контроле % ингибировани я связывания радиолиганда в контроле 1-е измерение 2-е измерение Среднее значение Комплексный препарат 20 мкл 50,8 49,1 49,9 50,1 СМД AT к CD4 10 мкл 74,0 76,2 75,1 24,9 СМД AT к ИФН гамма 10 мкл 158,9 149,8 154,3 -54,3 Потенцированная вода 20 мкл 98,1 75,8 86,9 13,1 Потенцированная вода 10 мкл 140,1 106,2 123,2 -23,2 Примечание: $$\frac{\%специфическогосвязываниявконтроле}{\begin{array}{l}связываниевопыте/специфическоесвязыаниев\\ контроле)*100\%\end{array}}=(специфическое$$ $$\frac{\%ингибированияспецифическогосвязываниявконтрполе}{\begin{array}{l}(специфическоесвязываниевопыте/специфическоесвязываниев\\ контроле)*100\%).\end{array}}=100\%-$$ - Результаты, отражающие ингибирование выше 50%, представляют собой значительные эффекты исследуемых соединений.
- Результаты, отражающие ингибирование от 25% до 50%, свидетельствуют об эффектах от слабого до умеренного.
- Результаты, отражающие ингибирование менее 25% считаются незначительными эффектами исследуемого соединения и находятся в пределах уровня фона.

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что:

1. Комплексный препарат более эффективно, чем отдельные его компоненты (СМД AT к CD4 и СМД AT к ИФН гамма) ингибирует связывание стандартного радиолиганда [³Н]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека.

2. СМД AT к CD4, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, ингибируют связывание стандартного радиолиганда [³Н]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека, но выраженность эффекта уступает выраженности эффекта комплексного препарата.

3. СМД AT к ИФН гамма, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, не оказывали влияния на связывание стандартного радиолиганда [³Н]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека.

4. Потенцированная вода, внесенная в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл или 20 мкл, не оказывала влияния на связывание стандартного радиолиганда [³Н]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения инфекционных заболеваний. Для этого в организм вводят активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам, выбранным из интерферона альфа, интерферона гамма и фактора некроза опухоли альфа, в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к рецептору лимфоцитов CD4, или СD8, или к их сочетанию. Это обеспечивает повышение эффективности лечения бактериальных или вирусных инфекций за счет активации гуморального и клеточного иммунитета. 2 н. и 21 з.п. ф-лы, 12 пр., 19 табл.

1. Способ лечения и профилактики инфекционных заболеваний, характеризующийся тем, что в организм вводят одновременно и сочетано активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам, выбранным из интерферона гамма, интерферона альфа, фактора некроза опухоли альфа, и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким рецепторам, выбранным из CD4, CD8.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что инфекционным заболеванием является вирусное инфекционное заболевание.

3. Способ по п.2, характеризующийся тем, что для профилактики инфицирования ВИЧ, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа, используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам, выбранным из интерферона гамма, интерферона альфа, фактора некроза опухоли альфа, и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким рецепторам, выбранным из CD4, CD8.

4. Способ по п.2, характеризующийся тем, что вирусным инфекционным заболеванием являются вирусные гепатиты.

5. Способ по п.4, характеризующийся тем, что вирусным гепатитом является хронический вирусный гепатит С.

6. Способ по п.2, характеризующийся тем, что вирусным инфекционным заболеванием является герпесвирусная инфекция.

7. Способ по п.2, характеризующийся тем, что вирусным инфекционным заболеванием является заболевание, вызванное вирусом гриппа.

8. Способ по п.2, характеризующийся тем, что вирусным инфекционным заболеванием является острая респираторная вирусная инфекция.

9. Способ по п.1, характеризующийся тем, что инфекционным заболеванием является бактериальное инфекционное заболевание.

10. Способ по п.1, характеризующийся тем, что активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам, выбранным из интерферона гамма, интерферона альфа, фактора некроза опухоли альфа, и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким рецепторам, выбранным из CD4, CD8, используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

11. Способ по п.1 или 10, характеризующийся тем, что в организм вводят фармацевтическую композицию в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащей активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам, выбранным из интерферона гамма, интерферона альфа, фактора некроза опухоли альфа, в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам, выбранным из CD4, CD8.

12. Способ по п.11, характеризующийся тем, что фармацевтическую композицию используют в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащей смесь различных разведении антител к одному или нескольким цитокинам, выбранным из интерферона гамма, интерферона альфа, фактора некроза опухоли альфа, в сочетании со смесью различных разведений антител к одному или нескольким рецепторам, выбранным из CD4, CD8.

13. Способ по п.1 или 10, характеризующийся тем, что используют активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и активированной-потенцированной формой антител к гистамину.

14. Способ по п.1 или 10, характеризующийся тем, что используют активированную-потенцированную форму антител к фактору некроза опухоли-α в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов.

15. Комплексное лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний по п.1, характеризующееся тем, что выполнено в виде фармацевтической композиции, содержащей активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам, выбранным из интерферона гамма, интерферона альфа, фактора некроза опухоли альфа, и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким рецепторам, выбранным из CD4, CD8.

16. Комплексное лекарственное средство по п.15, характеризующееся тем, что активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам, выбранным из интерферона гамма, интерферона альфа, фактора некроза опухоли альфа, и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким рецепторам, выбранным из CD4, CD8, используют в виде гомеопатически активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

17. Комплексное лекарственное средство по п.15 или 16, характеризующееся тем, что фармацевтическая композиция выполнена в твердой лекарственной форме и содержит эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким цитокинам, выбранным из интерферона гамма, интерферона альфа, фактора некроза опухоли альфа, и активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам, выбранным из CD4, CD8, и фармацевтически приемлемые добавки.

18. Комплексное лекарственное средство по п.15 или 16, характеризующееся тем, что водные или водно-спиртовые растворы гомеопатически активированных-потенцированных форм антител к одному или нескольким цитокинам, выбранным из интерферона гамма, интерферона альфа, фактора некроза опухоли альфа, и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким рецепторам, выбранным из CD4, CD8, получены путем многократного последовательного разведения и промежуточного внешнего воздействия из соответствующих матричных аффинно очищенных антител с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

19. Комплексное лекарственное средство по п.18, характеризующееся тем, что каждый из компонентов используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений.

20. Комплексное лекарственное средство по п.17, характеризующееся тем, что фармацевтически приемлемые добавки включают лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

21. Комплексное лекарственное средство по п.15 или 16, характеризующееся тем, что содержит активированную-потенцированную форму антител к интерферону гамма человека в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и активированной-потенцированной формой антител к гистамину.

22. Комплексное лекарственное средство по п.15 или 16, характеризующееся тем, что содержит активированную-потенцированную форму антител к интерферону гамма человека в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к альфа интерферону человека, активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и активированной-потенцированной формой антител к CD8 рецептору Т-лимфоцитов

23. Комплексное лекарственное средство по п.15 или 16, характеризующееся тем, что содержит активированную-потенцированную форму антител к фактору некроза опухоли-α в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов.