СПОСОБ ОМОЛОЖЕНИЯ ОРГАНИЗМА ПАЦИЕНТА Российский патент 2016 года по МПК A61M5/142 A61K35/36 A61K33/14 A61P17/02 

Изобретение относится к медицине, косметологии, касается клеточных технологий и может быть использовано для омолаживающих процедур, устранения дефектов кожи, таких как рубцовые изменения, раны, ожоги и др.

О коррекции дефектов кожи с помощью фибробластов известно уже давно. Клинические исследования доказывают эффективность и безопасность применения фибробластов для коррекции возрастных изменений кожи. Собственные фибробласты человека хорошо поддаются культивированию (размножению) в лабораторных условиях без потери их свойств, при трансплантации не вызывают аллергических и других побочных реакций, хорошо сохраняются при сверхнизкой температуре в течение многих лет. При необходимости клетки можно в любое время извлечь, разморозить и использовать в лечебных целях.

Фибробласты уже не первый год используют в составе разрешенных в США и Европе тканеинженерных эквивалентов кожи («искусственной кожи»). Названия таких коммерческих продуктов на основе фибробластов как Apligraf® Organogenesis Dermagraft-TC (компания Smith & Nephew, Великобритания), AlloDerm (компания LifeCell, США) известны специалистам. В основном их применяют для лечения ожогов, трофических язв и рубцов. В России НИИ Цитологии еще в 2002 году зарегистрировал изделие медицинского назначения «Пласт кератиноцитов многослойный - аналог эпидермиса кожи для трансплантации на ожоговые поверхности стерильный».

В отношении использования фибробластов в эстетической медицине, в Европе по этой методике успешно пролечены уже десятки тысяч пациентов. В России до недавнего времени ни одна организация официального разрешения на применение данной методики не имела. Косметологические процедуры с использованием фибробластов если и проводились, то нелегально, без лицензий, людьми, не прошедшими специализированную подготовку.

В декабре 2009 года в Нью-Йорке состоялся семинар, посвященный самым многообещающим технологиям в пластической хирургии. Особый интерес вызвал доклад доктора J. Peter Rubin «Будущее стволовых клеток в эстетической и восстановительной хирургии», в котором он уделил внимание клеточной терапии с использованием фибробластов по методике Isolagen™, принадлежащей биотехнологической компании Fibrocell Science Inc. Ведущие дерматологи находят методику коррекции возрастных и других изменений кожи с помощью собственных фибробластов пациента достаточно эффективной.

Технология применения аутологичных фибробластов для коррекции дефектов кожи представляет собой метод лечения кожи, основанный на уникальном биологическом механизме, позволяющем достигнуть длительного клинического результата. При обратной пересадке культивированные фибробласты заселяют дерму, активно синтезируют весь комплекс компонентов внеклеточного матрикса, тем самым восстанавливая в коже физиологический баланс и естественные процессы обновления ее дермы. Как следствие, улучшается внешний вид кожи, повышается ее упругость и эластичность, уменьшается глубина морщин, замедляются процессы старения кожи.

Косметологические процедуры с использованием фибробластов относятся к «клеточной мезотерапии». У пациента берут небольшой (3-4 мм) фрагмент кожи, из которого в лабораторных условиях получают (культивируют) его собственные (аутологичные) фибробласты. Затем, посредством серии инъекций, проводят локальное введение живых клеток в кожу с целью восстановления ее микроструктуры и улучшения внешнего вида. Эффект носит нарастающий характер, достигает максимума через 15 месяцев после введения клеток и сохраняется не менее 2-х лет. Осложнений после трансплантации аутофибробластов за период наблюдения не выявлено.

Проведенные на базе РГМУ, Московского физико-технического института и Центра биологических методов лечения исследования образцов кожи человека до и после введения аутологичных фибробластов продемонстрировали, что после введения клеточного материала наблюдается увеличение толщины дермы, а общее содержание коллагена увеличивается в 3,5 раза. Таким образом, культивированные аутологичные фибробласты могут быть эффективно использованы в системе anti-age терапии для коррекции возрастных изменений кожи (Портал «Вечная молодость», http://vechnayamolodost.ru, по материалам пресс-службы Института стволовых клеток человека, ИСКЧ).

В 2010 году ИСКЧ вывел данную услугу на рынок эстетической медицины как SPRS-терапию. Эта услуга представлена в ведущих московских клиниках эстетической медицины и является комплексной, включая диагностику и создание Паспорта кожи® пациента, курс терапии препаратом, содержащим собственные фибробласты кожи пациента, а также хранение культуры дермальных фибробластов кожи в криобанке (создание банка собственных фибробластов кожи). По мнению Зорина В.Л., разработчика российской технологии, «в отличие от зарубежной практики, в услугу SPRS-терапия входит уникальная опция - создание Паспорта кожи® пациента. Речь идет о комплексе диагностических процедур, позволяющих применить персонифицированный подход и составить индивидуальную программу коррекции возрастных и рубцовых изменений кожи пациента» (ссылка с портала «Вечная молодость», http://vechnayamolodost.ru).

Имеется ряд известных патентов по данной проблеме.

Так, известен (RU 2428996 С2 (ЗОРИН В.Л. и др.), 10.03.2011) биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей, характеризующийся тем, что представляет собой суспензию, содержащую аутологичную культуру фибробластов в 0,9% растворе хлорида натрия в концентрации 0,6-3,0·10⁶ в 1 мл биотрансплантата, интегрированных на фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой измельченной до размера 100-200 мкм бесклеточной матрице в растворе фармацевтически приемлемого биосовместимого биодеградируемого препарата гиалуроновой кислоты. Объемное соотношение аутологичной культуры фибробластов, бесклеточной матрицы и препарата гиалуроновой кислоты составляет 4:1:1 соответственно. В качестве фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой бесклеточной матрицы используют препарат «Сайметра», представляющий собой переработанную донорскую кожу человека, лишенную клеток и структурных иммуноспецифических белков, основу которого составляет коллаген и эластин, представленный в виде инъекционной формы. Такой биотрансплантат обеспечивает значительное снижение количества инъецируемых клеток, повышение их жизнеспособности и обеспечение длительного сохранения импланта в поврежденной ткани.

Описан также биотрансплантат (RU 2281776 С1 (ЗОРИН В.Л. и др.), 20.08.2006), представляющий собой суспензию аутологичных фибробластов с эффективностью клонирования 40-60% в аутологичной сыворотке, способ получения заявленного биотрансплантата, включающий культивирование аутологичных фибробластов в определенных условиях и отбор клеток с меньшей адгезией к поверхности, а также способ коррекции дефектов мягких тканей человека (прототип изобретения) с высоким терапевтическим эффектом, отсутствием побочных эффектов и осложнений. Готовые суспензии хранят при 4°С. Биотрансплантат используют в течение 2-4 часов после получения суспензии. Добавление аутологичной сыворотки способствует лучшей сохранности клеток и большей эффективности процедуры фармакопунктуры. Клетки вводят дву-пятикратно с интервалом 1-2 недели. При возрастных изменениях кожи лица клетки вводят дву-четырехкратно с интервалом в 2 недели туннельным способом и папулами. Количество клеток на полный курс - 8-12×10⁷. Если курс состоит из двух процедур, то клетки вводят по 4-6×10⁷ аутологичных фибробластов в 2-3 мл физиологического раствора для инъекций. Если курс из четырех процедур, то вводят 2-3×10⁷ аутологичных фибробластов в 2-3 мл физиологического раствора для инъекций. Биотрансплантат вводят как вдоль, так и поперек морщин.

Для целей предлагаемого изобретения используемые культуры фибробластов могут быть получены, в частности, способом, раскрытом в упомянутом патенте, либо в патенте RU 2382077 С1 (ООО "Генная и клеточная терапия"), 20.02.2010, либо иным известным методом.

Известен способ (RU 2380106 С1 (Давыденко В.В.), 27.01.2010) получения биопсийного препарата с ягодичных областей пациента в не менее чем в 4 точках эксплантата кожи путем панчбиопсии. Из полученных образцов эксплантата кожи выращивают культуру фибробластов. Пациенту после биопсии кожи проводят курс внутрисосудистого лазерного облучения аутокрови. После этого проводят от одной до трех процедур трансплантации аутологичных культивированных фибробластов, которые выполняют с интервалом не менее двух недель. Трансплантацию фибробластов проводят из расчета 5×10⁹ клеток на 1-2 см² крупных морщин или на 5 см² мелких морщин. Расстояние между интрадермальными инъекциями в зоне мелких морщин составляет 2-2,5 мм, а в зону крупных морщин клетки вводят методом «папулы». Курс лазерного облучения состоит из 10 процедур, проводимых через сутки, и обеспечивает коррекцию возрастных изменений кожи, в том числе, за счет улучшения кровоснабжения, увеличения клеточного состава дермы и, как следствие, улучшение эластичности и внешнего вида кожи.

Также имеется ряд зарубежных патентных публикаций, раскрывающих получение и использование для косметологических и лечебных целей препаратов фибробластов, причем как аутологичных, так и аллогенных (см., например, US 5591444 A ("Isolagen", developed by Isolagen Technologies, US), 07.01.1997; GB 2426452 В (INTERCYTEX LTD, GB), 07.11.2007).

В известных способах показано использование суспензий фибробластов с содержанием не менее чем 1-2 млн клеток.

Задачей настоящего изобретения явилась разработка оригинального способа введения культивированных аутологичных фибробластов человека с использованием метода гомеопатических разведений.

Так, в данной области техники известна мезотерапия как способ введения различных лечебных средств (РУМЯНЦЕВА Е. с соавт. Мезотерапия, Опубликовано в журнале: Spa & Salon, №1, 2008, http://medi.ru/doc/094111.htm). Еще в 4 веке до н.э. Гиппократ использовал локальное внутрикожное введение игл кактуса для снятия болей в суставах. Метод редкого внутрикожного введения водорастворимых препаратов возник в XVIII в., вскоре после изобретения первого шприца с полой иглой, когда появились первые описания способов введения лекарств в болезненные зоны, базирующиеся на принципе «предпочтительнее вводить медикамент в тот участок, где его действие необходимо, а не пропитывать им весь организм». В 1950 году доктор Мишель Пистор (Франция) пришел к выводу, что введение лекарственных средств необходимо выполнять как можно ближе к пораженному участку. Ему принадлежат слова: «Действие на ткани мезодермального происхождения настолько значительно, что этому способу лечения следовало бы дать название мезотерапия». Слово «мезотерапия» имеет греческое происхождение («мезо» - средний, срединный, «терапия» - лечение).

Мезотерапия - лечебная методика, представляющая из себя местное введение малых доз лекарственных или биологически активных препаратов в поверхностные и средние слои кожи. Вводятся лечебные коктейли, вызывающие подтягивающий (лифтинговый) эффект кожи, укрепляющие сосуды, восстанавливающие обмен веществ в тканях и воздействующие на жировые клетки, разбивая и выводя их (липолитический эффект).

Одними из показаний к проведению мезотерапии являются наличие крупных и мелких морщин, дряблая кожи лица, сильно обезвоженная кожа, целлюлит, растяжки, различного вида рубцы и др.

После проведения стандартизованной подготовки пациента проведение сеанса мезотерапии осуществляется путем введения мезотерапевтических средств в кожу с помощью различных вариантов инъекционной техники или использования физиотерапевтических приборов.

Процедура проводится с помощью шприца с иглой. Благодаря точному контролю над глубиной и местом инъекции препарата врач может проводить процедуру на самых деликатных или труднодоступных областях: веках (пальпируя костный край глазницы), крыльях носа и т.п. Место инъекции полностью контролируются врачом, поэтому резко снижается вероятность повреждения кровеносных и лимфатических сосудов и, как следствие этого, уменьшается травматичность процедуры.

Выделяют следующие методики введения препаратов при мезотерапии:

1. Наппаж («настилание») - внутрикожная микроинъекция сразу под эпидермис. Используется для мезопилинга лица, шеи, кистей, декольте; улучшения микроциркуляции; введения антиоксидантов; при себорее кожи лица.

2. Микродермальная папула - внутрикожная инъекция в поверхностный слой дермы (лифтинг, интенсивное питание и увлажнение, биоревитализация, себорея волосистой части головы, акне).

3. Дермальная папула - внутрикожная инъекция в средний слой дермы. Показания: подтяжка кожи, сухая атоничная кожа, целлюлит верхних конечностей.

4. Внутрикожная (глубокая) дермальная папула - инъекция в глубокий слой дермы. Показания: целлюлит, подтяжка кожи живота, спины, бедер, голеней, коленей, ягодиц.

5. Мезоперфузия - подкожная инъекция. Показания: некоторые формы целлюлита (крупно-, среднеузловой), застойная пигментация, акне (под пустулы), постакне.

6. Линейно-ретроградная техника - внутридермальная инъекция. Игла вводится в обрабатываемую зону на всю длину, а затем при ее медленном обратном выведении осуществляется последовательный ввод микродоз препарата. Показания: растяжки, биоревитализация, контурная пластика.

7. Нагнетательная техника - введение препарата непосредственно в рубец. Показания: келоидные и гипертрофические рубцы.

Автором изобретения не обнаружено в уровне техники сведений о введении пациенту препаратов культивированных клеток с использованием гомеопатических разведений. В уровне техники встречаются лишь публикации о введении таким способом клеточных биорегуляторов, т.е. производных тех или иных клеток (гиалуроновой кислоты, коллагена и др., см, например: ВитОрган-препараты - экстракты клеточных биорегуляторов. Клеточная технология профессора К.Е. Тойрера. Механизмы фармакологического действия, http://beoria-service.com/kletochnye-bioregulyatory-vitorgan-arzneimittel-gmbh; Органотропный комплекс Neythymun, 06.12.2008, http://форум.ооои-брс.рф/index.php/topic/5318-stvolovye-kletki/; http://medmelis.ru/produce.php?def=mesotherm&page=19).

Заявленный способ омоложения организма пациента осуществляют путем мезотерапевтического введения пациенту культивированных аутологичных фибробластов, полученных известным способом (например, в Институте стволовых клеток человека, см.выше). При этом используют следующим образом полученные концентрации и режим введения.

Вначале получают первое разведение (Д1) путем соединения 1 мл клеточной суспензии фибробластов, содержащей не менее 100 клеток/мл, с 9 мл физиологического раствора (ФР), затем получают второе разведение (Д2) путем соединения 1 мл полученного раствора Д1 с 9 мл ФР. Затем получают третье разведение (Д3) путем соединения 1 мл полученного раствора Д2 с 9 мл ФР. Затем получают четвертое разведение (Д4) путем соединения 1 мл полученного раствора Д3 с 9 мл ФР.

Затем - пятое разведение (Д5) путем соединения 1 мл полученного раствора Д4 с 9 мл ФР. Затем - шестое разведение (Д6) путем соединения 1 мл полученного раствора Д5 с 9 мл ФР. Затем - седьмое разведение (Д7) путем соединения 1 мл полученного раствора Д6 с 9 мл ФР.

Осуществляют введение соответствующего раствора по 1 мл в каждую из заданных областей лица и/или тела, требующих омолаживающих процедур, 1 раз в неделю в следующем режиме: раствор Д4 вводят на 1-й неделе, Д5 - на 2-й неделе, Д6 - на третьей неделе, Д7 - на 4-й неделе курса омоложения.

При необходимости продолжения курса омоложения дополнительно получают восьмое разведение (Д8) путем соединения 1 мл полученного раствора Д7 с 9 мл ФР и вводят по 1 мл раствора Д8 1 раз в неделю в каждую из заданных областей, требующих омолаживающих процедур, но не более чем до 8-й недели (включительно) курса омоложения.

Техническим результатом данного изобретения является расширение арсенала средств для получения видимых, заметных косметологических эффектов омоложения, длительного сохранения этих эффектов, вне зависимости от возраста пациента, за счет использования разведенной суспензии культивированных аутологичных фибробластов по принципу гомеопатических разведений.

Для демонстрации этого ниже представлен ряд клинических примеров. Данная технология была испытана на 9 добровольцах. Динамика изменений кожи оценивалась визуально врачом-косметологом и с помощью аппаратных методов диагностики кожи.

Пример 1. Пациентке проведен курс омоложения из четырехкратного введения аутологичных культивированных фибробластов с интервалом в 1 неделю. Введение осуществляли в соответствии с заявленным способом. Значимый эффект разглаживания морщин на лице развился через 8 месяцев, к 12 месяцам после прохождения курса достиг максимума и сохранялся на протяжении 2 последних лет. Каких-либо осложнений, аллергических реакций не отмечено. Пациентка продолжает наблюдаться у косметолога, и достигнутый эффект в настоящее время по-прежнему сохранен.

Пример 2. Пациентке провели курс из шестикратного введения аутологичных культивированных фибробластов с интервалом в 1 неделю. Введение осуществляли в соответствии с заявленным способом. Значимый эффект разглаживания морщин на лице, шее, устранения дряблости кожи надключичной области, области декольте развился через 10 месяцев после проведенного курса, к 13 месяцам достиг максимума и сохранялся на протяжении 2 последних лет. Осложнений, аллергических реакций не отмечено. Под наблюдением у косметолога данный эффект у пациентки сохраняется.

Изобретение относится к медицине, косметологии, касается клеточных технологий и может быть использовано для омолаживающих процедур, устранения дефектов кожи, таких как рубцовые изменения, раны, ожоги. Проводят мезотерапевтическое введение пациенту культивированных аутологичных фибробластов, полученных одним из известных способов, используя следующим образом полученные концентрации и режим введения. Вначале получают первое разведение (Д1) путем соединения 1 мл клеточной суспензии фибробластов, содержащей не менее 100 клеток/мл, с 9 мл физиологического раствора (ФР). Получают второе разведение (Д2) путем соединения 1 мл полученного раствора Д1 с 9 мл ФР. Затем получают третье разведение (Д3) путем соединения 1 мл раствора Д2 с 9 мл ФР. Получают четвертое разведение (Д4) путем соединения 1 мл раствора Д3 с 9 мл ФР. Получают пятое разведение (Д5) путем соединения 1 мл раствора Д4 с 9 мл ФР. Шестое разведение (Д6) - путем соединения 1 мл раствора Д5 с 9 мл ФР. Седьмое разведение (Д7) - путем соединения 1 мл раствора Д6 с 9 мл ФР. Вводят соответствующий раствор по 1 мл в каждую из заданных областей лица и/или тела, требующих омолаживающих процедур, 1 раз в неделю в следующем режиме: раствор Д4 вводят на 1-й неделе, Д5 - на 2-й неделе, Д6 - на третьей неделе, Д7 - на 4-й неделе курса омоложения. При необходимости продолжения курса дополнительно получают восьмое разведение (Д8) путем соединения 1 мл раствора Д7 с 9 мл ФР и вводят по 1 мл раствора Д8 1 раз в неделю в каждую из заданных областей, требующих омолаживания, но не более чем до 8-й недели включительно. Способ обеспечивает укорочение времени наступления видимых, заметных косметологических эффектов омоложения, а также увеличение длительности сохранения этих эффектов, вне зависимости от возраста пациента. 1 з.п. ф-лы, 2 пр.

1. Способ омоложения организма пациента, включающий введение пациенту культивированных аутологичных фибробластов, отличающийся тем, что культивированные аутологичные фибробласты вводят пациенту в следующей концентрации и режимах: получают первое разведение (Д1) путем соединения 1 мл клеточной суспензии фибробластов, содержащей не менее 100 клеток/мл, с 9 мл физиологического раствора (ФР), затем получают второе разведение (Д2) путем соединения 1 мл полученного раствора Д1 с 9 мл ФР, затем получают третье разведение (Д3) путем соединения 1 мл полученного раствора Д2 с 9 мл ФР, затем получают четвертое разведение (Д4) путем соединения 1 мл полученного раствора Д3 с 9 мл ФР, затем - пятое разведение (Д5) путем соединения 1 мл полученного раствора Д4 с 9 мл ФР, затем - шестое разведение (Д6) путем соединения 1 мл полученного раствора Д5 с 9 мл ФР, затем - седьмое разведение (Д7) путем соединения 1 мл полученного раствора Д6 с 9 мл ФР, путем мезотерапии осуществляют введение соответствующего раствора по 1 мл в каждую из заданных областей лица и/или тела, требующих омолаживающих процедур, 1 раз в неделю в следующем режиме: раствор Д4 вводят на 1-й неделе, Д5 - на 2-й неделе, Д6 - на третьей неделе, Д7 - на 4-й неделе курса омоложения.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при необходимости продолжения курса омоложения дополнительно получают восьмое разведение (Д8) путем соединения 1 мл полученного раствора Д7 с 9 мл ФР и вводят по 1 мл раствора Д8 1 раз в неделю в каждую из заданных областей, требующих омолаживающих процедур, но не более чем до 8-й недели включительно курса омоложения.