ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ АТЕРОСКЛЕРОЗА БЕЛКОВО-ПЕПТИДНОГО КОМПЛЕКСА (ДАЛЕЕ-БПК), ПОЛУЧЕННОГО ИЗ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ ТКАНИ ИЛИ ИЗ БЫСТРОЗАМОРОЖЕННОГО ЭМБРИОНАЛЬНОГО МОЗГА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КОПЫТНЫХ ЖИВОТНЫХ, ВЛИЯЮЩЕГО НА ОБРАТНЫЙ ТРАНСПОРТ ХОЛЕСТЕРИНА ИЗ СОСУДИСТОЙ СТЕНКИ И ПРОФИЛЬ АКТИВАЦИИ МОНОЦИТОВ У ПАЦИЕНТОВ С ВЫРАЖЕННЫМ АТЕРОСКЛЕРОЗОМ МАГИСТРАЛЬНЫХ СОСУДОВ ИЛИ С ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬЮ К СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ПАЦИЕНТОВ С АТЕРОСКЛЕРОЗОМ АРТЕРИАЛЬНЫХ СОСУДОВ И С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ, ВЫЗВАННЫМИ АТЕРОСКЛЕРОЗОМ МАГИСТРАЛЬНЫХ И ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ СОСУДОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА, СЕРДЦА, СОСУДОВ НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ И АОРТЫ (ДВА ВАРИАНТА) Российский патент 2016 года по МПК A61K38/17 A61K35/30 A61K35/60 A61P9/10 

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической фармакологии, кардиологии, терапии, сосудистой неврологии, сосудистой хирургии, и может быть использовано для лечения и профилактики атеросклероза магистральных сосудов (головного мозга, сердца, нижних конечностей) и аорты, с помощью фармацевтического препарата, включающего белково-полипептидный комплекс, полученный из эмбриональной ткани головного мозга копытных сельскохозяйственных животных.

Сердечно-сосудистые заболевания стоят на первом месте в качестве причины смерти в России, США и Европе, где вклад данной нозологической формы в структуру смертности составляет более 56%, что не может не отразиться на средней продолжительности жизни в России - 58,9 лет (для мужчин), в то время как в Японии этот показатель значительно выше - 87 лет[1].

Подавляющая часть сердечно-сосудистых заболеваний является следствием атеросклероза магистральных сосудов и аорты. Еще в 1947 году Н.Н. Аничковым было продемонстрировано, что накопление холестерина в интиме артерий является одним из первых проявлений атеросклероза. Транспорт холестерина в организме осуществляется липопротеидами. Источником липидов в интиме сосудов являются липопротеиды низкой плотности (далее - ЛНП). Многими исследователями (Soran H., 2011; Orsó Ε., 2011) было показано, что почти любая модификация (окисление, дегликозилирование, вортексирование, протеолиз, липолиз и др.) нативных ЛНП приводит к их усиленному захвату, как субэндотелиальными, так и другими видами клеток [2].

Термин атеросклероз происходит от 2 греческих слов: athere (кашица) и sclerosis (затвердение). Атеросклероз - заболевание, поражающее стенки сосудов, главным образом, артерий мышечного и мышечно-эластического типа, в основе которого лежат нарушения жирового и белкового обмена, и, прежде всего, обмена холестерина, проявляющееся имбибицией сосудистой стенки белками и липидами с развитием вокруг этих отложений реактивных изменений и стремительного разрастания соединительной ткани.

В целом, проявления и различные осложнения атеросклероза по праву считаются самыми частыми причинами не только инвалидности, но и смертности во многих странах мира. Атеросклероз чаще всего диагностируется у людей старше 45-55 лет, ведущих малоподвижный образ жизни, злоупотребляющих алкоголем и курением. Нельзя не отметить тот факт, что работники умственного труда страдают атеросклерозом чаще работников физического труда, причем городские жители больше подвержены этому заболеванию, чем сельские [3].

Развитие клеточной биологии и биомедицины позволяет проводить значительное число исследований влияния различных веществ на организм человека в моделях in vitro и ex vivo. Современные методы исследований показали возможность определения многих особенностей патобиохимических каскадов работы регуляторных систем клеток человека в метаболизме триглицеридов, ЛНП, холестерина и позволяют выявлять некоторые индивидуальные особенности отдельных пациентов [4-6].

На сегодняшний момент, для лечения атеросклероза используют препараты следующих групп, с преимущественным воздействием на отдельные этапы обмена холестерина:

1. Средства, снижающие всасывание холестерина и желчных кислот из кишечника ("секвестранты" желчных кислот):

- холестирамин (квестран, колестипол);

- хьюаровая смола (гуарем).

2. Средства, влияющие на транспорт холестерина:

- никотиновая кислота.

3. Ингибиторы синтеза холестерина в печени:

- ловастатин (мевакор, мевинакор, правастатин, синвастин, флувастатин);

фибраты (клофибрат, безафибрат, фенофибрат, гемфиброзил, ципрофибрат).

4. Средства, влияющие на катаболизм и выведение холестерина: - липостабил.

5. Разные гиполипидемические препараты (пробукол, полиненасыщенные жирные кислоты, комбинированные средства).

Все указанные гиполипидемические препараты назначают при атеросклерозе церебральных и коронарных сосудов, при гиперлипопротеидемии у больных со стенокардией, после инфаркта миокарда, инсульта, больным с сахарным диабетом [7].

Одной из важных задач современной фармакологии является разработка новых лекарственных препаратов, влияющих на метаболизм триглицеридов, холестерина и липопротеидов непосредственно в самой атеросклеротической бляшке, у больных с уже выявленным заболеванием на всех его стадиях или у пациентов с предрасположенностью к сердечно-сосудистым заболеваниям. Однако снижение холестерина в крови не всегда сопровождается снижением холестерина в сосудистой стенке. Поэтому особенно важным является разработка новых препаратов, непосредственно влияющих на отток холестерина из сосудистой стенки и на снижение уровня атерогенного потенциала сыворотки крови у больных атеросклерозом.

Сыворотка крови больных атеросклерозом, в отличие от сыворотки крови здоровых лиц, обладает атерогенными свойствами. «Атерогенный потенциал» или «атерогенность» - это способность сыворотки крови или ее компонентов вызывать накопление эфиров холестерина в клетках интимы аорты человека. Именно накопление внутриклеточного холестерина и его отток определяют, произойдет ли ретенция (удержание) холестерина в сосудистой стенке, поэтому стимуляция оттока холестерина не менее важна для устранения риска развития атеросклероза, чем предотвращение накопления внутриклеточного холестерина. Отток холестерина - это проявление регрессии атеросклероза на клеточном уровне. Основные точки воздействия на этот процесс:

- активация внутриклеточного метаболизма липидов с удалением накопленных липидов из клеток;

- подавление захвата модифицированных ЛНП клетками;

- подавление процессов модификации нативных ЛНП;

- устранение модифицированных ЛНП из кровотока. Интегральной оценкой эффективности различных антиатеросклеротических воздействий являются снижение скорости накопления внутриклеточных липидов и уменьшение внутриклеточного пула эфиров холестерина.

В настоящее время не существует лекарственных средств, в полной мере обладающих прямым антиатеросклеротическим действием. Известно, что регулярный прием различных препаратов может сказываться на процессах накопления холестерина в клетках артериальной стенки. Ряд лекарственных препаратов различных химических групп может способствовать снижению атерогенного потенциала сыворотки крови больных атеросклерозом.

Наиболее перспективными препаратами всей группы противоатеросклеротических средств являются:

- ингибиторы сквален-синтазы и сквален-2,3-эпоксидазы, подавляющие биосинтез холестерина и не затрагивающие синтез производных геранилпирофосфата, в том числе долихолов и коэнзима Q10;

- ингибиторы биосинтеза изопреноидов;

- ингибиторы образования частиц холестерина, такие как специфические ингибиторы микросомального транспортного белка, однако эти препараты могут вызывать повышение пула частиц холестерина в гепатоцитах и способствовать развитию ожирения печени или неалкогольного гепатита;

- ингибиторы ацилхолестерин-ацилтрансферазы - препарат авасимиб;

- ингибиторы интестинальной абсорбции липидов - маргарины типа ситостанол/ситостерол, как конкурентные ингибиторы абробции холестерина в интестинальной стенке;

- ингибиторы абсорбции холестерина - препарат эзетимиб, который воздействует на комплекс Niemann-Pick С1-подобногопротеина-1 с аннексином, 2-кавеолином и транспортером стеролов, но не влияет на уровень содержания витамина Ε и не оказывает побочных действий на желудочно-кишечный тракт;

- ингибиторы транспорта пузырных желчных кислот - препараты блоктрующие белок-транспортер пузырных желчных кислот (ΙΒΑΤ - Indicible Bile Acids Transporter), который обеспечивает поступление желчи в портальную вену печени, с индукцией фермента синтеза желчных кислот из холестерина - 7-гидроксилазы;

- фибраты (глитазоны) - агонисты рецепторов пролиферации пероксисом (PPAR - Peroxisome Proliferation Agonist Receptor) с увеличением экспрессии рецепторов инсулина в мышцах и повышением, таким образом, чувствительность к инсулину;

- агонисты Х-рецепторов печени (LXR - Liver X Receptor) - С3-жирные кислоты понижают уровень триглицеридов, не влияя на уровень ЛВП, поскольку ингибируют транспортер холестерина АВС-А1, снижают вероятность смерти от неожиданной остановки сердца;

- ингибиторы транспортного белка эфира холестерина (СЕТР) (Cholesterol Ether Transporter Protein) - этанол - ингибирует СЕТР и увеличивает уровень ЛВП, что снижает риск развития атеросклероза,

- ингибиторы окисленных форм холестерина - антиокисидант пробукол - блокирует активность макрофагов через рецепторы холестерина;

- ферменты липопротеинов высокой плотности - 20-30 белков, факторы риска развития коронарного синдрома, такие как гидролазатромбоцитактивируемый фактор (фосфолипаза А2) - является антиатеросклеротическим фактором в составе ЛВП и проатеросклеротическим фактором в составе ЛНП;

- белки и пептиды ЛВП - коррелируют с некоторыми патологическими фенотипами, такими, как амилоидоз, нефропатия и атеросклероз [8].

Известны способы лечения атеросклероза, заключающиеся в курсовом назначении таких лекарственных препаратов, как линетол, никотиновая кислота, гормоны щитовидной железы, эстрогены, эссенциальные фосфолипиды [9]. Указанные лекарственные препараты способствуют нормализации обмена жиров в организме и снижению уровня холестерина в крови.

Общий недостаток способов лечения атеросклероза с использованием упомянутых лекарственных средств состоит в относительно малом снижении концентрации холестерина в сыворотке крови. Так, ежедневный прием 12-24 г холестирамина приводит к уменьшению холестерина в сыворотке крови на 25%. При длительном введении никотиновой кислоты по 3 г ежедневно отмечено снижение холестерина в сыворотке крови на 10% и триглицеридов на 20%. Применение D-тироксина в суточной дозе от 4 до 8 мг уменьшает концентрацию липопротеидов низкой плотности на 20% без существенного изменения концентрации липопротеидов очень низкой плотности. В качестве антиатеросклеротических средств, в настоящее время так же находят применение препараты полиненасыщенных фосфолипидов соевых бобов - "Липостабил" (Германия) и "Эссенциале" (Югославия). Способы их получения не описаны в научно-технической литературе, однако имеются косвенные указания на то, что в состав этих препаратов входят соли дезоксихолевой кислоты, присутствие которых оказывает отрицательное влияние на клеточные процессы [10].

Известен способ профилактики и лечения атеросклероза путем назначения препаратов каротиноидов в суточной дозе 5-10 мг/кг массы тела зависящей, однако, от характера назначения препарата, которая обеспечивает эффективный уровень концентрации каротиноидов в сыворотке крови. Для повышения точности дозировки можно принимать во внимание тот уровень каротиноида, который обеспечивается в данном конкретном случае в сыворотке крови пациента при назначении ему той или иной дозы препарата. В частности, уровень ликопина в сыворотке крови должен быть не менее 700-800 нМ.

Поддержание эффективной концентрации каротиноида в сыворотке крови должно осуществляться с учетом того обстоятельства, что каротиноиды умеренно быстро метаболизируются и выводятся из организма человека и животных. Например, при однократном пероральном введении ликопина кроликам максимальная его концентрация в сыворотке крови наблюдается через 8 ч и возвращается к первоначальному уровню через 24 часа.

Препаратами каротиноидов могут служить индивидуальные каротиноиды, выделенные из различных источников, или суммарные фракции каротиноидов, например, каротиноид кроцетин.

Каротиноиды различной степени чистоты могут быть использованы в виде порошков или в виде масляных растворов, или дисперсий, что повышает их всасывание в желудочно-кишечном тракте.

Как лекарственные формы, могут быть использованы, например, порошки, таблетки, свечи, масляные растворы или эмульсии.

Характер введения каротиноидов не имеет решающего значения, но наиболее удобно назначать их перорально или ректально.

Допустимы и иные пути введения (внутримышечно, внутривенно), но они, видимо, не имеют особых преимуществ и практического значения в лечебной практике, хотя в некоторых случаях могут быть использованы, например, в экспериментальных работах.

Периодичность приема каротиноидов сама по себе не особенно важна. Главное должна выдерживаться рекомендованная суточная доза препарата и должен поддерживаться эффективный уровень концентрации препарата в сыворотке крови.

Было установлено при этом, что при кормлении кроликов в течение 28 дней пищей, обогащенной 1% холестерина, эластичность эндотелиальных сосудов сохраняется, если одновременно в пищу вводили 0,6 г бета-каротина на 1 кг корма, но при этом влияния бета-каротина на устойчивость липопротеидов низкой плотности к окислению не было отмечено.

Назначение гиперчувствительным крысам от 125 до 500 мг бета-каротина на 1 кг корма вместе с богатой холестерином пищей в течение 44 дней приводило к дозозависимому снижению в сыворотке крови уровня холестерина и триглицеридов.

У морских свинок, получавших с кормом 0,2% холестерина и 15-30 мг бета-каротина в день в течение 12 недель, не было найдено достоверных различий в уровне холестерина и триглицеридов в сыворотке крови, но при дозе бета-каротина 50 мг/100 г корма в течение 12 недель отмечено значительное снижение размеров склеротических бляшек в аорте.

При исследовании влияния бета-каротина на уровень липопротеидов в сыворотке крови курильщиков, относимых к группе риска, не было обнаружено заметного эффекта после приема в течение 14 недель бета-каротина в количестве 20 мг/день, хотя при этом уровень бета-каротина в сыворотке крови повысился в 15 раз [11].

Таким образом, есть серьезные основания полагать, что каротиноиды, из которых наиболее подробно исследовался бета-каротин, являются эффективным антиатеросклеротическим средством, ибо они устраняют в большинстве случаев основные биохимические нарушения, провоцируемые атеросклерозом.

Недостаток известных способов профилактики и лечения атеросклероза с применением препаратов каротиноидов состоит в недостаточной воспроизводимости результатов, о чем, в частности, свидетельствует не вполне согласующиеся между собою приведенные выше литературные данные. Одной из основных трудностей сравнения эффективности лечения экспериментального атеросклероза является использование исследователями разных принципов дозировок препаратов каротиноидов, выражающихся, в большинстве случаев, отношением дозы препарата к единице веса корма, а в остальных случаях в виде некоторых произвольных фиксированных величин назначаемых доз. Отмечаемая иногда неэффективность применения каротиноидов может объясняться, по предположению заявителя, слишком низкой дозой препарата.

Известны также способы получения и применения полипептидных препаратов, нормализующих функции кровенсных сосудов, применявшихся у больных с атеросклерозом сосудов головного мозга.

В частности, из SU №1227198, 1986 год, известен комплекс полипептидов, выделенный из кровеносных сосудов животных, снижающий содержание холестерина в крови. Комплекс получают экстрагированием измельченных кровеносных сосудов животных 3%-ным водным раствором уксусной кислоты, последующим центрифугированием, обработки надсадочной жидкости при от -3°C до -5°C, растворением осадка, фильтрованием, лиофилизацией.

Недостатком комплекса, ограничивающего его применение, является извлечение при этом большого количества веществ не пептидной природы, являющиеся примесью и не являющиеся биологически активными веществами.

Из RU №2301072, 2007 год, известен способ получения лекарственного средства, полученного на основе биологически активного вещества, полученного из органов животных (из кровеносных сосудов). Полученный пептидный комплекс содержит низкомолекулярные фракции, содержащие от 70 до 90% пептидов с молекулярной массой от 72 до 678 Да, с концентрацией в водном растворе пептидов 2,5-2,9 мг/мл. Было исследовано применение препарата для лечения больных атеросклерозом сосудов головного мозга. Установлено, что применение препарата способствует улучшению общего самочувствия. Общий холестерин до лечения 8,4±0,6 ммоль/л, после лечения - 6,2±0,2 ммоль/л; содержание липопротеидов до лечения 1,3±0,07 ммоль/л, после лечения - 0,86±0,8 ммоль/л.

В этих патентных источниках нет данных по влиянию этих пептидных препаратов на метаболические процессы непосредственно в атеросклеротической бляшке и субэпиндемальном слое сосуда.

Итак, одним из основных факторов риска, имеющих значение при развитии этих заболеваний, является высокий уровень липидов в плазме крови, в частности, высокий уровень холестерина. Предпринималось множество попыток использовать агент, снижающий уровень холестерина, для предотвращения и лечения этих заболеваний, и было найдено много соединений, в большей или меньшей степени обладающих этим эффектом. Например, одно такое соединение, которое хорошо известно и успешно применяется, представляет правастатин, который является агентом, регулирующим липиды и ингибитором 3-гидрокси-3-метил-глутарил-карермент А редуктазы (в настоящем документе упоминается как «ингибитор ГМГ-КоА редуктазы»), и, как предполагают, он действует на этапе биосинтеза холестерина определяющий его скорость. Сообщалось о том, что у кроликов, получающих правастатин можно предотвратить коронарный артериосклероз и ксантому, однако его эффективность остается недостаточной (Biochimica at Biophysica Acta, 960, 294-302 (1988)). Эксперименты по контролю коронарного артериосклероза и ксантомы проводили, используя комбинацию двух агентов регулирующих липиды, правастатина и холестирамина, который хорошо известен как агент для снижения уровней липопротеинов, однако эффективность этой комбинации также остается недостаточной (Atherosclerosis, 83, 69-80, 1 (1990)).

В патентной заявке Японии №7-41423 предполагается, что специфический класс агентов, улучшающих резистентность к инсулину, например, троглитазон, может быть эффективным при лечении и профилактике артериосклероза, в частности атеросклероза, но и в этом случае эффективность подобных соединений не вполне удовлетворительна.

В настоящее время для лечения и профилактики атеросклероза применяют немедикаментозные средства, устраняющие или уменьшающие факторы риска, и медикаментозные средства, например различные гиполипидемические средства (холестирамин, полиспонин, линетол, гепарин, кондроитин сульфат и др.) {Машковский М.Д. Лекарственные средства, ч, 1 и 2, М. Медицина, 1987, т. 2, с. 89, 92, 73, 156).

Ни одно из существующих гиполипидемических средств не является универсальным, и почти все оказывают побочные действия. Изыскание новых антисклеротических средств ведется среди различных классов химических соединений:

- производные мочевины и тиомочевины (патенты США №№4397868, 4387105, 4623662);

- производные аминобензойной кислоты (заявка Европейского Патентного Ведомства №0170361, акцептованные заявки Япония 59-24135, 63-26729);

- бензотиазины (заявка Европейского Патентного Ведомства №0174458);

- производные индола (заявка Великобритании №2190587);

- производные гексагидронафталина (патент США №4444784).

Одним из распространенных препаратов, применяемым для лечения атеросклероза, является клофибрат (мисклерон, липомид, атромид), изобутират (Машковский М.Д. Лекарственные средства, ч. 1 и 2. М. Медицина 1987, ч. 2, с. 90).

Он снижает содержание в крови липопротеидов, богатых холестерином и триглицеридами. Применяют его при атеросклерозе с повышенным содержанием в крови этих веществ.

Однако лечение клофибратом является недостаточно эффективным, не предупреждает ишемическую болезнь сердца, вызывает ряд побочных явлений. Он способен вызывать внутрипеченочный холестаз, сопровождающийся образованием камней в желчном пузыре и желчных путях.

Из RU №2243767, приоритет 10.01.2005, известен другой способ лечения атеросклероза. Способ осуществляют на фоне медикаментозной терапии препаратами группы статинов, теветена, полиоксидония и проведения сеансов плазмафереза с удалением 800 мл плазмы 2 раза в неделю №5 путем дополнительного введения больному имунофана 0,005%-1.0 внутримышечно через день №10 и флуимуцила 300 мг внутривенно ежедневно №5-10, общий курс лечения 2 месяца. Способ обеспечивает модуляцию функциональной активности лейкоцитов в том числе опосредованно через изменение цитокинового профиля и, как следствие, дезинтеграцию белково-липидных комплексов, участвующих в образовании атеросклеротической бляшки.

Известно, что подавляющая часть сердечно-сосудистых заболеваний является следствием атеросклероза магистральных сосудов и аорты (Pranavchand R., 2013). Еще в 1947 году Н.Н. Аничковым было продемонстрировано, что накопление холестерина в интиме артерий является одним из первых проявлений атеросклероза (Аничков Н.Н., 1947; Cianciola N.L., 2011). Транспорт холестерина в организме осуществляется липопротеидами. Источником липидов в интиме сосудов являются липопротеиды низкой плотности (далее - ЛНП) (Vikovic I., 2006; Alaupovic, 1971 P.; Coocson F.В., 1971). Многими исследователями (Soran H., 2011; Orso Ε., 2011) было показано, что почти любая модификация (окисление, дегликозилирование, вортексирование, протеолиз, липолиз и др.) нативных ЛНП приводит к их усиленному захвату, как субэндотелиальными, так и другими видами клеток.

Развитие клеточной биологии и биомедицины позволяет проводить значительное число исследований влияния различных веществ на организм человека в моделях in vitro и ex vivo. Современные методы исследований показали возможность определения многих особенностей патобиохимических каскадов работы регуляторных систем клеток человека в метаболизме триглицеридов, ЛНП, холестерина и позволяют выявлять некоторые индивидуальные особенности отдельных пациентов.

Одной из важных задач современной фармакологии является разработка новых лекарственных препаратов, влияющих на метаболизм триглицеридов, холестерина и липопротеидов у пациентов с предрасположенностью к сердечно-сосудистым заболеваниям или с уже выявленным заболеванием на всех его стадиях.

За последние годы разработаны клеточные модели (клеточный культуральный тест), позволяющие оценивать отток холестерина из сосудистой стенки, как интегральный показатель обратного транспорта холестерина. Обнаружено, что снижение холестерина в крови не всегда сопровождается снижением холестерина в сосудистой стенке. Модель в варианте in vitro используется для оценки эффективности гиполипидемических препаратов различных классов фармакологических веществ на уровень снижения атерогенного потенциала сыворотки крови больных атеросклерозом.

Сыворотка крови здоровых лиц, в отличие от сыворотки крови больных атеросклерозом, не обладает атерогенными свойствами.

Отток холестерина, являющийся составной частью механизма обратного транспорта холестерина в организме - это обратная сторона накопления холестерина в артериальных клетках. Именно накопление внутриклеточного холестерина и его отток определяют, произойдет ли ретенция (удержание) холестерина в сосудистой стенке. Стимуляция оттока холестерина не менее важна для устранения риска развития атеросклероза, чем предотвращение накопления внутриклеточного холестерина. На клеточном уровне отток холестерина - это проявление регрессии атеросклероза. Существует ряд возможностей для воздействия на этот процесс, а именно: устранение модифицированных ЛНП из кровотока, подавление процессов модификации нативных ЛНП, активация внутриклеточного метаболизма липидов, подавление захвата модифицированных ЛНП клетками, удаление накопленных липидов из клеток. Интегральной оценкой эффективности различных антиатеросклеротических воздействий являются снижение скорости накопления внутриклеточных липидов и уменьшение внутриклеточного пула эфиров холестерина.

В настоящее время не существует лекарственных средств, в полной мере обладающих прямым антиатеросклеротическим действием. Известно, что регулярный прием различных препаратов может сказываться на процессах накопления холестерина в клетках артериальной стенки. Ряд лекарственных препаратов различных химических групп может способствовать снижению атерогенного потенциала сыворотки крови больных атеросклерозом.

Клеточный культуральный тест представляется наиболее оптимальным и адекватным способом моделирования ранних процессов атерогенеза на клеточном уровне. Применение модели "ex vivo" для оценки антиатерогенного потенциала лекарств сделало возможным проведение серийных испытаний, необходимых для потокового скрининга лекарственных средств.

Технической задачей заявленного изобретения является повышение эффективности лечения и профилактики атеросклероза артериальных сосудов, заболеваний, вызванных атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, и создание такого способа лечения и профилактики с использованием клеточного препарата, который обеспечивает отток холестерина из сосудистой стенки.

Поставленная техническая задача и получаемый технический результат достигаются заявленной группой изобретений, в которую входит применение белково-полипептидного комплекса или белково-пептидно-полинуклеотидного комплекса для лечения и профилактики атеросклероза и способ профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты.

Итак, одним из объектов заявленного изобретения является применение белково-пептидного комплекса (далее - ВПК), полученного из эмбриональной нервной ткани сельскохозяйственных копытных животных, или из быстрозамороженного эмбрионального мозга сельскохозяйственных копытных животных сроком гестации от середины первой трети до середины последней трети беременности, включающих отрицательно заряженные, нейтральные белки и полипептиды, с молекулярными массами от 0,5 до 200 кДа или в сочетании их с полинуклеотидами в виде Na-солей ДНК, выделенных из молок осетровых или лососевых рыб, в виде белково-пептидно-полинуклеотидного комплекса для профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, вводимых в терапевтически эффективных суточных и курсовых дозах парентерально или интраназально, и регулирующих метаболизм холестерина, эфиров холестерина, триглицеридов, фосфолипидов в субэндотелиальных соединительнотканных и гладкомышечных клетках артериальных сосудов.

Белково-полипептидный комплекс (далее - БПК), и белково-пептидно-полинуклеотидный комплекс (далее - БППК), применение которого является одним из объектов изобретения, получают способами, известными из патента RU №2445106, 20.03.2012; RU №2428196, RU №2460736; RU №2477637; RU №2485133; RU №2485132.

Поставленная техническая задача и получаемый технический результат достигаются также способом профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, включающий введение пациентам фармацевтического препарата, включающего белково-пептидный комплекс (далее - ВПК) в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем парентерально или интраназально в терапевтически достаточных суточных и курсовых дозах, в качестве лекарственного препарата, регулирующего метаболизм холестерина, эфиров холестерина, триглицеридов, фосфолипидов в субэндотелиальных соединительнотканных и гладкомышечных клетках артериальных сосудов, при этом, препарат содержит белково-пептидный комплекс, полученный из гомогената, полученного из эмбриональной ткани головного мозга копытных сельскохозяйственных животных, и содержащего отрицательно заряженные, нейтральные белки и полипетиды с молекулярной массой от 5 до 200 кДа, и с содержанием фракции со средней молекулярной массой в пределах от 10 до 120 кДа не менее 80%, общей концентрацией белка 0,05-4,2 мг/мл, с максимумом поглощения ультрафиолетового спектра раствора при длине волны 280±5 нм, наличием пика при длине волны 274-284 нм в УФ-видимой области спектра, наличием специфических полос в интервале значений pI от 4,2 до 8,4 при изоэлектрофокусировке в 5%-ном полиакриламидном геле.

Поставленная техническая задача и получаемый технический результат достигаются также способом профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, включающий введение пациентам терапевтического препарата, включающего белково-пептидный комплекс (далее - БПК) в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем парентерально или интраназально в терапевтически достаточных суточных и курсовых дозах, в качестве фармацевтического препарата, регулирующего метаболизм холестерина, эфиров холестерина, триглицеридов, фосфолипидов в субэндотелиальных соединительнотканных и гладкомышечных клетках артериальных сосудов, при этом, препарат содержит белково-пептидный комплекс, полученный из гомогената из быстрозамороженной эмбриональной нервной ткани сельскохозяйственных копытных животных сроком гестации от середины первой до середины последней трети беременности, включающий тканеспецифические отрицательно заряженные, нейтральные белки и полипептиды, относящиеся к факторам роста, дифференцировки, сигнальным молекулам, определяющим биологическую и фармакологическую активность, с молекулярными массами от 0,5 до 200 кДа, причем не менее 70% от общей массы белка имеет молекулярную массу от 20 до 160 кДа, общей концентрацией белка 0,05-4,2 мг/мл, имеющих характерный специфический набор полос при денатурирующем гель-электрофорезе («SDS Page») в 5%-ном полиакриламидном геле по сравнению со стандартным набором маркерных белков с диапазоном молекулярных масс от 1 до 250 кДА, значением изоэлектрической точки от 4,2 до 8,4 и максимумом поглощения при длине волны (215±5) нм при снятии ультрафиолетового спектра в области длин волн от 200 до 500 нм.

Используемый для лечения и профилактики пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты терапевтический препарат, содержащий белково-пептидный комплекс (упомянутые выше) и фармацевтически приемлемый носитель, дополнительно может содержать гидролизованные полинуклеотиды в виде Na-солей ДНК, полученные из молок осетровых или лососевых рыб, представляющие собой средне- и низкомолекулярную полинуклеотидную фракцию в виде натриевой соли дезоксирабонуклеиновой кислоты, проявляющие комплексную с белково-полипептидной фракцией специфическую иммунорегулирующую активность в, по меньшей мере, равноценной концентрации с белково-полипептидным комплексом, и фармацевтически приемлемый разбавитель, причем средне- и низкомолекулярная полинуклеотидные фракции в виде натриевой соли дезоксирабонуклеиновой кислоты характеризуются молекулярной массой от 12 до 660 кДа (18-1000 пар оснований), имеющие максимальный УФ-спектр поглощения при длине волны (260±2) нм и минимальный - при (230±2) нм в области длин волн от 190 до 325 нм с соотношением В_260/280 от 1,6 до 2,0, наличием характерных специфических полос в 1,85-ном агарозном геле при окрашивании бромистым этидием, в сравнении со стандартным набором маркеровс диапазоном молекулярных масс от 75 до 7000 пар оснований и синее окрашивание при постановке качественной реакции на рибозу, а также примесью белка, при определении его концентрации по Лоури не выше 0,18%.

В качестве гидролизованных полинуклеотидов совместно с белково-пептидным комплексом в заявленном изобретении, относящегося к лечению и профилактике пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, могут быть использованы также (в фармацевтическом препарате) гидролизованные полинуклеотиды в виде Na-солей ДНК, полученные из молок осетровых или лососевых рыб, с длиной цепочек полинуклеотидов от примерно 1000 до примерно 7000 молекул в качестве иммуномодулирующего и стабилизирующего белки и полипептиды компонента в равноценной или необходимо достаточной терапевтической суточной и курсовой дозе. Концентрация их в данном белково-полипептидно-полинуклеотидном комплексе (далее - БППК) примерно 0,1-3,0 мг/мл (миллиграмм на миллилитр) с общей концентрацией белка в фармацевтическом препарате 0,05-4,2 мг/мл.

Концентрация Na-солей ДНК в белково-пептидно-полинуклеотидном комплексе составляет, примерно, 0,05-3,0 мг/мл с общей концентрацией белка в фармацевтическом препарате 0,05-4,2 мг/мл.

В качестве фармацевтически приемлемого носителя используют разбавитель, включающий буферный раствор и, возможно, вспомогательные вещества (ПАВ, обратимые ингибиторы протеаз и ДНК-аз).

Ниже указаны необходимо-возможные терапевтически эффективные дозы фармацевтического препарата, содержащего белково-полипептидные комплексы (далее - ВПК), указанные выше, или фармацевтический препарат, содержащий ВПК и гидролизованные полинуклеотиды в виде Na-солей полинуклеотидов (ДНК), полученные из молок осетровых или лососевых рыб (далее - фармацевтический препарат БППК).

Согласно заявленному способу осуществляют, в частности, следующие схемы (конкретные) лечения:

- в частности, за одну процедуру пациенту подкожно или внутримышечно вводят фармацевтический препарат, содержащий от 0,05 до 1,0 мг ВПК в 1,0-5,0 мл фармацевтически приемлемом носителе-разбавителе в виде 8-20 инъекций, один-два раза в сутки курсом 8-14 дней; или

- в частности, за одну процедуру пациенту подкожно или внутримышечно вводят фармацевтический препарат, содержащий от 0,05 до 1,0 мг БППК в 1,0-5,0 мл фармацевтически приемлемом носителе-разбавителе в виде 8-20 инъекций, один-два раза в сутки курсом 8-14 дней, где соотношение ВПК и полинуклеотидов из молок рыб может быть 0,1-2: 0,5-2 соответственно; или

- в частности, за одну процедуру внутривенно капельно или медленно болюсно вводят препарат, содержащий от 0,025 до 0,7 мг ВПК в 5,0-500,0 мл фармацевтически приемлемом разбавителе, один-два раза в сутки курсом 5-12 дней; или

- в частности, за одну процедуру внутривенно капельно или медленно болюсно вводят препарат, содержащий от 0,025 до 0,7 мг БППК в 5,0-500,0 мл фармацевтически приемлемом разбавителе, один-два раза в сутки курсом 5-12 дней; или

В соответствии с заявленным изобретением может осуществляться курсовое лечение, вводя пациенту подкожно ВПК 1 раз в 4 месяца в дозе 0,05-0,1 мг в 1,0-5,0 мл фармацевтически приемлемом носителе (разбавителе); далее вводят по 1 ампуле (соответствующей одной инъекции) 10 дней, и осуществляют два курса по 14 дней путем интраназального введения по две капли в каждый носовой проход утром с интервалом между курсами 2,0-2,5 недели.

В заявленном изобретении дозировка лекарственного средства, выраженная в «мг» в основном касается подкожных инъекций. И, в частности, курсовая доза для инъекционного курса составляет 10-14 инъекций с повтором через 7-10 дней. Количественное выражение «мкг» в основном относится к дозировкам для интраназального спрея, например, один впрыск -100 мкл или «мкг» (если плотность используемого раствора считать за единицу). Слизистая носа, как правило, не в состоянии принять более 2-3 впрысков в каждый носовой проход, поэтому максимальная доза при интраназальном введении по объему составляет не более 400 мкл или 400 мкг используемого раствора (в частности, 0,01%-ного раствора).

Кроме того, согласно заявленному способу осуществляют, в частности, следующие схемы (конкретные) лечения:

- в частности, за одну процедуру интраназально вводят препарат, содержащий от 0,001 до 0,1 мг БПК в 0,05-1,2 фармацевтически приемлемом растворителе- разбавителе в виде 2-3 впрыска или от 2 до 4 капель в каждый носовой ход, один-два раза в сутки курсом 10-14 дней; или

- в частности, за одну процедуру интраназально пациенту вводят препарат, содержащий от 0,001 до 0,1 мг БППК в 0,05-1,2 мл фармацевтически приемлемом разбавителе в виде 2-3 впрыска или от 2 до 4 капель в каждый носовой ход, один-два раза в сутки курсом 10-14 дней.

В заявленном способе лекарственные препараты, содержащие ВПК или БППК комплекс, вводят совместно с другими антиатеросклеротическими веществами; выбранными из следующих групп:

- «секвестранты» желчных кислот; ингибиторы синтеза холестерина в печени (статинами);

- вещества, влияющие на всасывание, катаболизм и клиренс холестерина;

- гиполипидемические препараты,

в терапевтически эффективных и необходимых дозах.

В заявленном способе системное курсовое введение препаратов на основе БПК или БППК осуществляют 4-12 курсов в год, с перерывом между курсами 10-56 дней, в зависимости от выраженности атеросклеротического процесса, его локализации, наличия осложнений и их последствий.

Целесообразно, при профилактическом лечении атеросклероза, то есть для профилактики возникновения атеросклерозов сосудов, системное курсовое введение лекарственных препаратов на основе ВПК или БППК, которое осуществлялось бы от 2 до 8 курсов в год, с перерывом между курсами 1-4 месяцев, в зависимости от совокупности факторов риска и генетической предрасположенности пациента.

Предпочтительно, в соответствии с заявленным способом в случае профилактического лечения, то есть для предотвращения возникновения атеросклероза сосудов, чтобы системное курсовое введение ВПК или БППК было бы от 2 до 6 курсов в год, с перерывом между курсами 2-6 месяцев, в зависимости от совокупности факторов риска и генетической предрасположенности пациента, и осуществлялось бы с совместным применением других антиатеросклеротических веществ, выбранными из группы, включающей:

- «секвестранты» желчных кислот;

- ингибиторы синтеза холестерина в печени (статины),

- вещества, влияющие на всасывание, катаболизм и клиренс холестерина;

- гиполипидемические препараты, в терапевтически эффективных необходимых дозах.

В качестве фармацевтически приемлемого носителя лекарственного препарата на основе белково-пептидного комплекса (ВПК) или белково-пептидного-полинуклеотидного комплекса (БППК) используют традиционно применяемые фармацевтически приемлемые носители и разбавители, например, солевой (физиологический) раствор или фосфатно-буферный раствор и, возможно, различные вспомогательные добавки (вещества), в частности, эмульгаторы, суспендирующие вещества, консерванты, растворители с высокой точкой кипения, дистиллированная вода.

Используемое в заявленном изобретении понятие «терапевтически эффективное количество» («терапевтически эффективные необходимые дозы») означает количество вещества, эффективного для профилактики и лечения атеросклероза.

При получении фармацевтического или лекарственного препарата, содержащего ВПК и БППК, например, смешивают фосфатно-буферный солевой раствор (1,5 M NaCl, 0,1 M Na-фосфат), добавляют дистиллированную воду, добавляют гидролизованные полинуклеотиды (в виде Na-солей ДНК, полученных из молок осетровых или лососевых рыб) и далее добавляют белково-пептидный комплекс. Тщательно все смешивают. Объем препарата доводят до 100 мл дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Раствор стерилизуют.

Согласно заявленному способу фармацевтический или лекарственный препарат на основе ВПК или БППК (в сочетании с физиологически приемлемым носителем, в частности, разбавителем) дополнительно может содержать различные другие известные антиатеросклеротические вещества, выбранные из группы, включающие «секвестранты» желчных кислот [холестирамин (квестран, колестипол, хьюаровая смола (изарем)]; ингибиторы синтеза холестерина в печени [статины, например, ловастатин (мевакор, мевинакор, правастатин, синвастатин, физвостатин)], фибраты (клофибрат, безафибрат, фенофибрат, гемфиброзин, ципрофибрат); добавки, влияющие на всасывание, катаболизм и клиренс холестерина (никотиновая кислота, липостабил), гиполипидемические препараты (пробукол, полиненасыщенные жирные кислоты, комбинированные средства), используемые в терапевтически эффективных дозах.

Способы получения используемого белково-пептидного комплекса (ВПК), используемого в заявленном способе лечения и профилактики атеросклероза, описаны, в частности, в RU 2445106, 20.03.2012; RU 2485132, 20.06.2013.

Используемые в заявленном способе (в одном из вариантов его осуществления) полинуклеотиды (в виде Na-солей полинуклеотидов) получают способами, аналогичными способам, описанным, например, в известном уровне техники, в частности, в патентах RU 2072855, 10.02.1997; RU 2034554, 10.05.1995; RU 915446; RU 2078581), т.е. по известным методикам, включающим гомогенизацию сырья в буферном растворе, центрифугирование, фильтрацию, ультрафильтрацию, депротеинизацию и т.д. молекулярную массу получаемой натриевой соли ДНК можно регулировать разными способами, например, варьируя количество добавленной ЭДТА (этилендиаминотетрауксусная кислота).

В частности, используют гидролизованные полинуклеотиды в виде Na-солей ДНК, которые получают из молок осетровых и лососевых рыб различными известными способами, например, в RU №2485132 20.06.2013.

Для исследования влияния оригинального БПК или БППК с условным наименованием Целлекс (далее - Целлекс, как модификатора и активатора биологических реакций) на уровень снижения атерогенного потенциала сыворотки крови больных атеросклерозом, согласно известной методике [5] получали первичную культуру субэндотелиальных клеток аорты человека из различных участков интимы грудного отдела аорт мужчин и женщин в возрасте 40-65 лет в течение 1,5-3 часов после внезапной смерти, различавшихся по степени атеросклеротического поражения, обрабатывали коллагеназой и культивировали клетки. Использовали 7-10-дневную первичную культуру клеток - смешанную клеточную популяцию, состоящую, преимущественно, из типичных и модифицированных гладкомышечных клеток.

Первичную культуру клеток, выделенных из непораженных атеросклерозом участков интимы аорты, использовали для воспроизведения процессов атерогенеза на клеточном уровне и оценки антиатерогенных свойств исследуемых веществ. Антиатерогенным действием называли эффекты, препятствующие основным проявлениям атерогенеза на клеточном уровне, и, прежде всего, накоплению внутриклеточного холестерина.

Первичную культуру клеток, выделенных из пораженных атеросклерозом участков интимы аорты, использовали для оценки антиатеросклеротических свойств Целлекса. Антиатеросклеротическим действием называли эффекты, проявляющиеся в уменьшении содержания внутриклеточного холестерина по сравнению с исходным уровнем.

В клинических исследованиях при серийных измерениях атерогенных свойств сыворотки крови (ее способности вызывать накопление внутриклеточного холестерина) использовали культуру моноцитов-макрофагов крови здоровых добровольцев, которую культивировали до их созревания в макрофаги [14].

Исследуемые сыворотки крови пациентов в культуры клеток добавлялись в конечной концентрации 40% (при использовании первичной культуры субэндотелиальных клеток непораженной интимы аорты человека) или 10% (при использовании культуры моноцитов-макрофагов крови человека). В качестве контроля использовали клетки, которые продолжали культивировать в среде 199, содержащей антибиотики и 10% эмбриональную телячью сыворотку, которая содержит необходимые факторы роста клеток, но не влияет на содержание внутриклеточных липидов.

Определение содержания внутриклеточного холестерина, внутриклеточных липидов, и клеточного белка осуществлялись по стандартным фармакопейным методикам.

Расчет атерогенного эффекта (оценка атерогенности сыворотки крови)

После определения содержания общего холестерина и белка вычисляли соотношение холестерин/белок в каждой пробе. Удельное содержание общего холестерина в клетках, выделенных из непораженных участков интимы аорты, колебалось в пределах 20-50 мкг/мг клеточного белка. Удельное содержание общего холестерина в моноцитах-макрофагах крови человека колебалось в пределах 8-20 мкг/мг клеточного белка. Среднее удельное содержание холестерина в контрольных клетках данной серии принималось за 100%, размах варьирования не превышал 8%. Атерогенный эффект исследуемых сывороток определяли по содержанию холестерина в опытных культурах и выражали в процентах от содержания внутриклеточного холестерина в контроле.

Сыворотка крови пациента, вызывавшая статистически достоверное накопление внутриклеточного холестерина, рассматривалась как атерогенная.

Оценка оттока холестерина (антиатеросклеротического эффекта) в модели in vitro и ex vivo

Содержание внутриклеточного холестерина в контрольных клетках, инкубированных без добавления препарата Целлекс, принимали за 100%. Эффект на отток холестерина (антиатеросклеротический эффект) исследуемых веществ определяли как их способность статистически достоверно снижать исходно высокое содержание внутриклеточного холестерина. Для модели ex vivo у добровольцев брали кровь непосредственно перед приемом препарата Целлекс, а также через соответствующие интервалы времени после его интраназального приема (через 2, 4 и 6 часов при скрининговых исследованиях и при оценке краткосрочного действия, а также через 4, 8, 12 и 24 часа при оценке длительности эффекта).

Определение синтеза коллагена

Клетки, выделенные из нормальных или пораженных атеросклерозом участков интимы аорты человека, инкубировали в течение 24 ч в присутствии 5 мкКи/мл [3Н]-пролина. По окончании инкубации включение меченого пролина в обработанную коллагеназой фракцию культуральной среды определяли по методу Peterkofsky и Diegelmann.

В Таблице 2 приведены данные комплексной оценки влияния препарата Целлекс на атеросклеротические показатели культивируемых клеток по сравнению с известным лекарственным средством верапамил, относящегося к классу антагонистов кальция. Известно, что верапамил обладает антиатеросклеротическим действием, вызывая регрессию атеросклероза у больных с документированными атеросклеротическими поражениями сосудов. В первичной культуре интимальных клеток аорты человека верапамил дозозависимо снижал содержание общего холестерина, то есть способствовал обратному транспорту холестерина. В отсутствие верапамила отток холестерина из клеток не наблюдался. При этом свободный (неэтерифицированный) холестерин не изменялся. Это свидетельствует о том, что снижение содержания холестерина в клетках происходит исключительно за счет эфиров холестерина. Наряду со снижением общего холестерина, наблюдалось уменьшение содержания двух других важнейших классов внутриклеточных липидов - фосфолипидов и триглицеридов. Таким образом, обратный транспорт холестерина из атеросклеротических клеток сопровождается снижением внутриклеточного содержания других важнейших классов липидов, что должно способствовать освобождению клеток атеросклеротического поражения от избыточного жира. Такая регрессия клеточного липидоза может объяснять механизм антиатеросклеротического действия верапамила.

Целлекс, как и Верапамил вызывал дозовисимое существенное подавление пролиферативной активности культивируемых атеросклеротических клеток (Таблица 2), снижая уровни общего и свободного холестерина, а так же концентрации триглицеридов и эфирицированного холестерина в отличие от Верапамила. Кроме того, Целлекс, как и Верапамил подавлял синтез коллагена в первичной культуре клеток, выделенных из атеросклеротического поражения (Таблица 2).

Таким образом, Целлекс, как и Верапамил не только способствует оттоку холестерина из атеросклеротических клеток, но обладает и другими антиатеросклеротическими эффектами на уровне клеток сосудистой стенки, подавляя пролиферативную и синтетическую активность, то есть уменьшает или подавляет все основные проявления атеросклероза на клеточном уровне - липоидоз, пролиферацию и фиброз.

Однако Целлекс, в отличие от Верапамила не является блокатором кальциевых каналов, не влияет на артериальное давление, сердечный ритм и при сопоставимом антиатерогенном эффекте (у Целлекса он несколько выше) является препаратом выбора для длительного многокурсового применения.

Ниже представлены примеры, иллюстрирующие изобретение, но не ограничивающие его.

Пример 1.

Пациент 54 лет, поступил в сосудистое неврологическое отделение с жалобами на нарушение речи, диффузную головную боль, онемение левой половины тела, мышечную слабость в левом предплечье и кисти. Начало заболевания острое, связывает с приемом горячей ванны.

В анамнезе: нарушение мозгового кровообращения по ишемическому типу 8 мес назад, госпитализация в неврологическое отделение с похожей симптоматикой, где после ультразвукового исследования был верифицирован интравазальный стеноз до 52% (атеросклеротическая бляшка?) правой внутренней сонной артерии на расстоянии 2 см от ее отхождения от общей сонной артерии. На фоне проводимой дезагрегантной, нейропротективной и антиоксиданой терапии отмечался полный регресс неврологического дефицита в течение 21 суток. Больной выписан под наблюдения невролога по месту жительства. Заядлый курильщик с 17 лет, выкуривает до 2 пачек сигарет в день. Хр. бронхит курильщика.

Сопутствующие заболевания: артериальная гипертензия мягкого течения, адаптирован к цифрам АД - 140/90 мм рт.ст., регулярно принимает энап - 2,5 мг ×2р./сут, курсами по 1,5 мес - тромбо-асс 100 мг н/ночь. Остеохондроз поясничного отдела позвоночника с регулярными обострениями 2-3 раза в год в виде люмбалгии и ишиаса слева. На МРТ диагностированы парамедианные грыжи межпозвонковых дисков L₄-L₅ и L₅-S₁, 8 и 12 мм соответственно с латерализацией влево. Состояние больного при поступлении ближе к ср. тяжести, в сознании, ориентирован правильно, контакт затруднен в связи с выраженными речевыми нарушениями, обращенную речь понимает, выполняет простые инструкции. В соматическом статусе - Дыхание 18 в мине слегка жесткое с единичными проводными бронхиальными влажными хрипами; невыраженная тахикардия до 96 уд./мин, артериальная гипертензия - 155/95 мм рт.ст.

В неврологическом статусе: общемозговой и менингеальной симптоматики нет. ЧМН - легкий центральный парез VII, XII ч.н. слева, снижение левого глоточного рефлекса, выраженная дизартрия. Левосторонний гемипарез со снижением мышечного тонуса и объемом движений до 3-х баллов в левой кисти. Анизорефлексия S≥D, с-м Бабинского слева. Левосторонняя гемигипестезия. Координаторных и тазовых нарушений не выявлено.

Диагноз: Повторный ишемический инсульт в бассейне правой средней мозговой артерии. Дисциркуляторная энцефалопатия 2-3 ст. сосудистого генеза. Атеросклероз сосудов головного мозга с интравазальным стенозом правой внутренней сонной артерии. Артериальная гипертензия мягкого течения, декомпенсация. Хронический бронхит.

При ультразвуковом исследовании магистральных и интракраниальных сосудов головного мозга определяется интравазальный стеноз до 62% (атеросклеротическая бляшка) правой внутренней сонной артерии на расстоянии 1,8 см от ее отхождения от общей правой сонной артерии. На МРТ в сосудистом режиме подтверждается выраженное утолщение сосудистой стенки правой внутренней сонной артерии со стенозом до 60%; на серии томограмм, в правой теменно-височной области отмечается наличие подкоркового ишемического очага размером 2,4×1,8×3,2 см с выраженным перифокальным отеком, компрессией правого бокового желудочка со смещением срединных структур до 4,0 см. Липидограмма при поступлении: Холестерин крови общий - 8,2 ммоль/л; ЛПВП - 1,3 ммоль/л; ЛПНП - 4,9 ммоль/л; Триглицериды - 1,82 ммоль/л; Коэффициет атерогенности - 5,3. На фоне проводимой стандартизированной дезагрегантной, нейропротективной и антиоксиданой терапии больному с конца первых суток был назначен препарат Целлекс, подкожно по 1 мл - 0,1 мг 1 раз в сутки в течение 10 дней и повтором курса с 21 суток. Уже с третьих суток отмечался выраженный регресс очагового неврологического дефицита, нарастание объема движений в левой кисти до 4,5 баллов к 10 суткам, а восстановление речи к 14 суткам.

Липидограмма при выписке: Холестерин крови общий - 6,2 ммоль/л; ЛПВП - 1,4 ммоль/л; ЛПНП - 3,7 ммоль/л; Триглицериды - 1,6 ммоль/л; Коэффициет атерогенности - 3,4. Больной выписан под наблюдение неврологом по месту жительства на 25 сутки с рекомендациями продолжения курса Целлекса подкожно, приемом дезагреганта тромбо-асс 100 мг н/ночь, эднита 5 мг ×2 раза в сутки, Липостабил по 2 капс. ×3 р./день, 3 мес; прекращение табакокурения, консультации сосудистого хирурга, наблюдения неврологом по месту жительства, контроль липидограммы, МРТ с сосудистым режимом ч/з 6 мес.

После выписки больной продолжил курс целлекса, по завершению которого принимал препарат интраназально по 2 кап. в каждый носовой ход утром, 14 дней с повтором курса ч/з 3 недели; тромбо-асс и эднит - принимал постоянно в рекомендованных дозах, ч/з 3,5 недели после выписки вышел на работу.

Консультация сосудистого хирурга: предложено стентирование правой внутренней сонной артерии, от которого пациент отказался.

Контрольная липидограмма ч/з 6 мес.: Холестерин крови общий - 4,8 ммоль/л; ЛПВП - 1,46 ммоль/л; ЛПНП - 3,2 ммоль/л; Триглицериды - 1,38 ммоль/л; Коэффициет атерогенности - 2,3. На серии МРТ в правой теменно-височной области отмечается образование ликворной кисты размером 1,8×0,9×2,2 см, перифокального отека, компрессии бокового желудочка и смещения срединных структур нет; в сосудистом режиме регистрируется уплотнение сосудистой стенки правой внутренней сонной артерии с уменьшением стеноза до 52%. Больной социально адаптирован, спустя 6 мес после выписки из стационара снизил дозу сигарет до 0,5 пачки в сутки. Продолжил назначенную терапию с постоянным приемом препаратов тромбо-асс и эднит в рекомендованных дозах и курсовое лечение целлексом 1 раз в 4 месяца подкожно по 1 ампуле (которая содержит 0,1 мг/мл препарата в 1 мл носителя (разбавителя, например, буферного раствора) 10 дней и 2 курса по 14 дней интраназально по 2 кап. в каждый носовой ход утром с интервалам между курсами 2-2,5 недели. Контрольная липидограмма ч/з 12 мес после выписки: Холестерин крови общий - 4,2 ммоль/л; ЛПВП - 1,46 ммоль/л; ЛПНП - 2,7 ммоль/л; Триглицериды - 1,42 ммоль/л; Коэффициет атерогенности - 1,9.

На серии МРТ в правой теменно-височной области остается ликворная киста без изменений размеров и компрессии на близлежащие структуры; в сосудистом режиме регистрируется уплотнение сосудистой стенки правой внутренней сонной артерии с регрессом стенозирования до 44%.

Таким образом, регулярный прием препарата целлекс курсовыми дозами, сочетающими инъекционный и интраназальный способы введения препарата, показало выраженную антиатерогенную активность препарата с уменьшением выраженности стеноза, уплотнением атеросклеротической бляшки за счет активации непосредственно в ней и субэпиндимальном слое артерии липидного метаболизма.

Пример 2. Влияние препарата на развитие эксплантатов стенки аорты крыс.

Эксперименты проведены на фрагментах сосудистой стенки аорты крыс линии «Wistar» с массой тела 200-250 г. Среда для культивирования эксплантатов состояла из 35% раствора Игла, 25% фетальной деактивированной сыворотки теленка, 35% раствора Хенкса, 5% куриного эмбрионального экстракта, в среду добавляли глюкозу (0,6%), инсулин (0,5 ед./мл), пенициллин (100 ед./мл), глютамин (2 мМ). Участок сосудистой стенки аорты фрагментировали глазными ножницами на эксплантаты азмером 1-1,5×0,5-1,0×0,5-1,5 см, которые по 10-15 шт. помещали в среду культивирования на коллагеновой подложке в чашках Петри в термостате при температуре 36,7°C, в течение 2 суток. В экспериментальную среду добавляли ВПК и БППК в концентрациях 10, 50, 100, 200 и 400 мг/мл. Критерием биологической активности служил индекс площади (ИП) - соотношение площади всего эксплантата вместе с зоной роста к исходящей площади фрагмента сосудистой стенки. Значения ИП выражали в процентах, контрольное значение ИП принималось за 100%.

Результаты исследования: через 1 сутки культивирования происходило распластывание эксплантатов на коллагеновой подложке и начиналось выселение пролиферирующих и мигрирующих клеток по периферии эксплантата. На 3-й сутки культивирования наблюдалось достоверное дозозависимое повышение ИП эксплантатов на 20%, 30%, 65%, 45%, 20% по сравнению с контрольными значениями, при концентрации БПК 10, 50, 100, 200 и 400 мг/мл, соответственно и на 25%, 45%, 90%, 70%, 40% по сравнению с контрольными значениями, при концентрации БППК 10, 50, 100, 200 и 400нг/мл, соответственно. При исследовании роста эксплантатов сосудистой стенки аорты на сроках культивирования до 7 дней стимулирующее действие БПК и БППК в тех же концентрациях имели аналогичные соотношения по сравнению с контролем.

Таким образом, в отношении ткани сосудистой стенки аорты препараты оказывали тканеспецифическое действие, проявляющееся в стимуляции роста эксплантатов.

Пример 3. Эффективность применения препарата у больных с атеросклерозом сосудов головного мозга.

Изучение клинической эффективности применения препарата Целлекс проводили с участием 30 пациентов, страдающих атеросклерозом сосудов головного мозга в возрасте от 62 до 78 лет. У больных отмечались различные клинические проявления цереброваскулярных расстройств соответствующих нозологии резидуальной энцефалопатии сосудистого генеза II-III ст., проявляющиеся в виде нарушений памяти, концентрации внимания, аффективной лабильности, снижении интеллекта. Больные этой группы, дополнительно к общепринятому лечению, получали препарат Целлекс в дозе 0,1 мг подкожно однократно ежедневно в течение 14 дней. Контрольную группу составили больные с аналогичным диагнозом, получавшие традиционною стандартизированную терапию (ноотропы, антиоксиданты, дезагреганты). Контрольная группа включала 12 пациентов, получавших только общепринятое лечение.

В динамике оценивали жалобы больных, проводили общеклиническое и биохимическое исследование крови и мочи, тестирование по международным клиническим шкалам (шкале общих функциональных нарушений, шкале деменции Матисса, шкале деменции (CDR), шкале краткого исследования психического статуса (MMSE)). Эффективность влияния препарата на интегративную функцию мозга изучали с использованием психофизиологических тестов, характеризующих особенности памяти и мышления у больных с цереброваскулярными расстройствами: «Кратковременная зрительная память на числа» (КПЗ), «Долговременная память на числа» (ДП) и «Установление закономерностей».

Установлено что применение препарата Целлекс у больных с атеросклерозом сосудов головного мозга способствовало улучшению общего самочувствия, уменьшению эмоциональной лабильности, стабилизации настроения, уменьшению тревожности. Больные отмечали улучшение памяти, концентрации внимания.

Среди лабораторных показателей наиболее информативными были данные биохимического исследования крови - липидограммы (см. Таблицы). Применение препарата способствовало достоверному снижению уровня общего холестерина в крови по сравнению с этим показателем, как до лечения, так и после лечения с применением общепринятых средств. Отмечалась также отчетливая тенденция к снижению содержания липопротеидов очень низкой плотности, являющихся наиболее атерогенными. Это косвенно свидетельствует о нормализующем влиянии препарата на метаболизм в клетках сосудистой стенки.

У больных контрольной группы, получавших общепринятую терапию, достоверных изменений показателей психофизиологических тестов и значительных изменений общего количества баллов по применявшимся клиническим шкалам выявлено не было.

У пациентов основной группы, получавших лечение с применением препарата Целлекс, были выявлены достоверные изменения показателей тестов и клинических шкал по сравнению с показателями до лечения и с показателями у больных контрольной группы (см. Таблицы). Это проявлялось в положительной динамике изменения когнитивных функций, характеризующих объем и точность зрительной информации (КЗП на числа), точность запоминания, хранения и оперативного воспроизведения информации (оперативная память, ОП) и логическое мышление (способность к умозаключению). Кроме того, у пациентов основной группы было выявлено достоверное повышение устойчивости и концентрации внимания, скорости переработки информации, нормализация основных корковых процессов, достоверное улучшение кратковременной и даже тенденция к улучшению долговременной памяти, достоверное улучшение показателей, характеризующих логическое мышление, снижение времени сенсомоторной реакции. Изменения психофизиологических показателей характеризуют усиление процесса возбуждения в коре головного мозга у больных с цереброваскулярными расстройствами, что свидетельствует об улучшении кровоснабжения подверженных ишемии участков головного мозга и о благоприятном действии препарата на функцию кровеносных сосудов. При изучении клинической эффективности применения препарата Целлекс побочного действия и осложнений не выявлено.

Таким образом, результаты проведенного клинического исследования свидетельствуют о лечебной эффективности применения препарата в терапевтически эффективной дозе 0,1 мг подкожно однократно ежедневно в течение 14 дней и целесообразности его применения в комплексном лечении атеросклероза артерий.

Пример 4. Влияние препарата Целлекс на атерогенные свойства сыворотки крови

Влияние Целлекса на отток холестерина, выявленный на модели in vitro, был подтвержден на модели ex vivo.

В Таблице 5 приведены данные, полученные на модели ех vivo [5]. Добровольцы однократно принимали БПК - Целлек с в виде интраназального спрея в комплексе с полинуклеотидами в виде Na соли ДНК - БППК по 400 мкг 0,1% раствора (в расчете на общий белок и ДНК) - по 2 впрыска по 200 мкг, в каждый носовой вход, утром, препаратом сравнения был верапамил в дозе 40 мг, контрольная группа интраназально получала 50 мМ глициново-фосфатный буферный раствор той же pH (7,8) в том же режиме. Кровь брали до приема препаратов и контроля (время «0») и через 1 час, 2 часа, 4 часа и 8 часов после приема. Из образцов крови готовили сыворотку, и образцы сыворотки добавляли в первичную культуру атеросклеротических клеток. Можно видеть, что значимое снижение содержания внутриклеточного холестерина наблюдалось в случае добавления в культуру сыворотки, приготовленной из крови, взятой уже через 1 час после однократного приема и через 2 часа - Верапамила (Таблица 3). Таким же эффектом обладали сыворотки, взятые через 4, 8 и 12 часов после приема препаратов. Следовательно, начиная с 1-го часа после однократного приема заявленного препарата и со 2-го часа - Верапамила, сыворотка крови приобретает антиатеросклеротические свойства, проявляющиеся в способствовании обратному оттоку холестерина из атеросклеротических клеток. Антиатеросклеротические свойства сыворотки сохраняются, по крайней мере, в течение 12 часов после приема Верапамила и до 18 часов после приема заявленного препарата.

Таким образом, модификаторы биологического действия -белково-полипептидные фракции эмбриональной мозговой ткани сельскохозяйственных животных сами по себе и вместе с полинуклеотидами ДНК из молок лососевых способствовали оттоку холестерина из атеросклеротических клеток на клеточной модели in vitro, вызывая значимое снижение содержания внутриклеточного холестерина в культивируемых клетках атеросклеротического поражения аорты человека (Таблица 5) интенсивнее, чем исследованные антагонисты кальция. Помимо этого, Целлекс и вариант Целлекса с полинуклеотидами наряду с антагонистами кальция подавляли пролиферативную активность атеросклеротических клеток сосудистой стенки.

Ниже приведены еще некоторые примеры осуществления способа профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов с заболеваниям, вызываемыми атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты.

Данные примеры иллюстрируют, но не ограничивают объем притязаний, заявленный в способе по изобретению.

Как свидетельствуют все представленные данные, заявленный способ лечения и профилактики обеспечивает больший отток холестерина из атеросклеротических клеток, т.е. обладает повышенной эффективностью при лечении и профилактике атеросклероза и является промышленно применимым.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 6.

Больному атеросклерозом, у которого методом ультразвукового сканирования магистральных сосудов установлено наличие атеросклеротического процесса, имеющему стабильное течение заболевания, назначают: за одну процедуру подкожно или внутримышечно вводят от 0,05 мг до 1,0 мг препарата БПК в 1,0-5,0 мл фармацевтически приемлемого разбавителя в виде 8-20 инъекций, один-два раза в сутки курсом 8-14 дней.

Дополнительно ежедневно назначают препарат из группы статинов (аторвастатин 10 мг в сутки или симвастатин 20 мг в сутки) или другие антисклеротические вещества, указанные в описании выше, например, выбранные из группы, включающие «секвестранты», гиполипидемические препараты.

Лечение считается успешным, если при контрольном исследовании (например, ультразвуковое сканирование магистральных сосудов) объем атеросклеротического поражения уменьшается на 30-50% от исходного и более. В случае недостаточного эффекта целесообразно проведение повторного курса лечения.

Пример 7.

Больной Ч., 54 года. Диагноз: Гипертоническая болезнь II стадии, 2 степень повышения АД, риск 3. Атеросклероз обеих общих сонных и правой бедренной артерий. H 0. При обследовании 30.05.03 методом ультразвукового сканирования магистральных сосудов на аппарате Hewlett Packard Sonos 4500 были выявлены 3 атеросклеротических бляшки: в правой сонной артерии, область бифуркации (1,20×0,170 см в продольной проекции), левой общей сонной артерии (1,48×0,161 см в продольной проекции) и правой бедренной артерии в области бифуркации (2,34×0,245×0,201 см в продольной проекции), последняя определяется с 2001 года и является стабильной, электронно плотной бляшкой.

После курса лечения, включающего: за одну процедуру подкожно или внутримышечно вводят от 0,05 до 1,0 мг белково-пептидно-полинуклеотидного комплекса (далее - БППК) в 1,0-5,0 мл фармацевтически приемлемого растворителя в виде 8-20 инъекций, один-два раза в сутки курсом 8-14 дней при соотношении БПК и полинуклеотидов из молок рыб, 0,1-2: 0,5-2, соответственно, было выявлено существенное уменьшение атеросклеротических бляшек обеих сонных артерий, где определялись остаточные изменения в виде утолщения интимы без сужения просвета сосудов: в правой сонной, в области бифуркации (0,884×0,135 см в продольной проекции), в левой общей сонной артерии (0,648×0,132 см в продольной проекции). В правой бедренной артерии, в области бифуркации существенных изменений размеров бляшки не произошло (2,67×0,172×0,275 см в продольной проекции). Общая эффективность лечения по результатам ультразвукового сканирования магистральных сосудов составила около 17%.

Пример 8.

Больной П., 57 лет. Диагноз: Гипертоническая болезнь II стадии, 3 степени повышения АД, риск 3. Облитерирующий атеросклероз обеих общих сонных артерий с сужением обоих сосудов до 50%. H I.

При обследовании 22.05.03 методом ультразвукового сканирования магистральных сосудов на аппарате Hewlett Packard Sonos 4500 выявлено атеросклеротическое поражение с 44% (справа) и 55% (слева) стенозом внутренних сонных артерий: в левой внутренней сонной артерии, в области бифуркации (толщиной 0,193 см), в левой общей сонной артерии (0,403×0,604 см в поперечной проекции), в правой внутренней сонной артерии, в области бифуркации (0,369×0,875 см в поперечной проекции) и правой общей сонной артерии (1,23×0,201 см в продольной проекции).

После курса лечения, включающего: за одну процедуру внутривенно капельно или медленно болюсно вводят от 0,025 до 0,7 мг препарата БПК в 5,0-500,0 мл фармацевтически приемлемого разбавителя, один-два раза в сутки курсом 5-12 дней.

При проведении этого курса лечения выявлено: 4 области атеросклеротического поражения сонных артерий с максимальным уровнем стеноза до 45% (слева) и заметным уменьшением объема атеросклеротического поражения правой общей сонной артерии со стенозом 30%, то есть уменьшение степени стеноза составило 14% справа и 10% слева от размера просвета сосуда; в левой внутренней сонной артерии, в области бифуркации (толщиной 0,207 см - без динамики), в левой общей сонной артерии (0,403×0,763 см - без динамики), в правой внутренней сонной артерии, в области бифуркации (0,193×0,745 см - значительно (на 55%) меньше исходных размеров), в правой общей сонной артерии (1,21×0,191 см в продольной проекции).

Проведен второй курс лечения, включающий: за одну процедуру внутривенно капельно или медленно болюсно вводят от 0,025 до 0,7 мг препарата БППК в 5,0-500,0 мл фармацевтически приемлемого разбавителя, один-два раза в сутки курсом 5-12 дней, или за одну процедуру интраназально вводят от 0,001 до 0,1 мг терапевтического препарата БПК в 0,05-1,2 мл фармацевтически приемлемого разбавителя в виде 2-3 впрыска или от 2 до 4 капель в каждый носовой ход, один-два раза в сутки курсом 10-14 дней.

Терапевтический препарат БПК или БППК вводят совместно с другими антиатеросклеротическими веществами, выбранными из группы, включающей «секвестранты» желчных кислот; ингибиторы синтеза холестерина в печени (статины); добавки, влияющие на всасывание, катаболизм и клиренс холестерина; гиполипидемические препараты; в терапевтически эффективных дозах.

Результаты: в левой внутренней сонной артерии, в области бифуркации (толщиной 0,202 см - без динамики), в левой общей сонной артерии (0,159×0,717 см - уменьшение более чем на "50%), в правой внутренней сонной артерии, в области бифуркации (0,190×0,483 см - значительно, почти на 72%, меньше исходных размеров), в правой общей сонной артерии (0,833×0,176 см в продольной проекции - уменьшение на 45%).

Аналогичным образом наблюдалась положительная динамика улучшения состояния пациентов, показывающая эффективность способа лечения атеросклероза при осуществлении указанных различных курсовых схем лечения с использованием указанного препарата.

Литература:

1. American Heart Association. Heart disease and stroke statistics - 2013. Dallas, American Heart Association.

2. Marcovina S.M., Crea F., Davignon J. et al. 2007. Biochemical and bioimaging markers for risk assessment and diagnosis in major cardiovascular diseases: a road to integration of complementary diagnostic tools. J. Int. Med. 26: 214-234.

3. Вихерт A.M., Жмуркин В.П., Журавлева А.И., Ильинский Б.В., Мясников Л.А., Рабкин И.Х., Рахальский Ю.Е., Штернберг Э.Я. Атеросклероз. Ж. «Ordo Deus», 2010, http://www.ordodeus.ru/Ordo Deus12 Ateroskleroz.html

4. Андреева Ε.Р., Михайлова И.Α., Пугач И.M., Орехов А.Н. 1999. Клеточный состав атеросклеротических поражений аорты человека. Ангиол. Сосуд. Хир. 5: 6-26.

5. А.Н. Орехов, И.А. Собенин, В.А.Орехова, А.А. Мельниченко, В.А. Мясоедова, Н.М. Мухамедова, Д.Д. Свиридов, В.П. Карагодин 2011. Клеточные модели для поиска веществ, способствующих обратному транспорту холестерина. Ж.Физиотерапия Т. 12, 19.10.11.

6. Никифоров НГ, Грачев АН, Лебедева АО, Орехов АН, Собенин ИА. Тест-система для изучения влияния фармакологических агентов на активацию моноцитов крови человека. Ж. Современный мир, природа и человек 2011 2 (1): 108-110.

7. Д.А. Харкевич 2010. Фармакология: учебник. - 10-е изд., испр., перераб. и доп. - 752 с.

8. Материалы с медицинского сайта Surgeryzone© 2011-2013. Лекарственные препараты, снижающие уровень холестерина. http://surgervzone.net/informaciva-po-kardiologii/lekarstvennye-preparaty-snizhayushhie-uroven-xolesterina

9. Лопухин Ю.М. и др. Холестериноз, - Москва, Медицина, 1983, с. 279.

10. Gainer J.L. et al. - Expereientia, 1992, v. 31, №5, p. 548-549.

11. RU 2095059, 10.11.1997.

12. RU 2445106, 20.03.1912.

13. RU 2485132, 20.06.2013.

14. Мухамедова H.M., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П., Мельниченко А.А., Мясоедова В.А., Орехова В.Α., Собенин И.А., Орехов А.Н. Исследование влияния белков, потенциально вовлеченных в отток холестерина, на экспорт холестерина из макрофагов. Ж. Проблемы и перспективы современной науки 2011 3 (1): 68-73.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использована для лечения атеросклероза магистральных сосудов и аорты с помощью фармацевтического средства, включающего белково-пептидный терапевтический препарат (БПК). БПК получен из эмбриональной нервной ткани или из быстрозамороженного эмбрионального мозга сельскохозяйственных копытных животных. БПК включает отрицательно заряженные нейтральные белки и полипептиды с молекулярными массами от 0,5 до 200 кДа или в сочетании его с полинуклеотидами в виде Na-солей ДНК, выделенных из молок осетровых или лососевых рыб. БПК вводится в терапевтически эффективных суточных и курсовых дозах парентерально или интраназально. Группа изобретений также относится к применению БПК с общей концентрацией белка 0,05-4,2 мг/мл, определяющей его биологическую активность, с молекулярными массами от 0,5 до 200 кДа, причем не менее 70% от общей массы белка имеет молекулярную массу от 20 до 160 кДа, имеющих характерный специфический набор полос при денатурирующем гель-электрофорезе в 5%-ном полиакриламидном геле, значением изоэлектрической точки от 4,2 до 8,4 и максимумом поглощения при длине волны 215±5 нм при снятии ультрафиолетового спектра в области длин волн от 200 до 500 нм. Использование данной группы изобретений позволяет использовать БПК для профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом, обеспечивая влияние на обратный транспорт холестерина из сосудистой стенки и профиль активации моноцитов у пациентов и регулируя метаболизм холестерина, эфиров холестерина, триглицеридов, фосфолипидов в субэндотелиальных соединительно-тканных и гладкомышечных клетках артериальных сосудов. 3 н. и 26 з.п. ф-лы, 5 табл., 8 пр.

1. Применение для лечения и профилактики атеросклероза белково-пептидного комплекса (далее - БПК), полученного из эмбриональной нервной ткани или из быстрозамороженного эмбрионального мозга сельскохозяйственных копытных животных, влияющего на обратный транспорт холестерина из сосудистой стенки и профиль активации моноцитов у пациентов с выраженным атеросклерозом магистральных сосудов или с предрасположенностью к сердечно-сосудистым заболеваниям, включающего отрицательно заряженные нейтральные белки и полипептиды с молекулярными массами от 0,5 до 200 кДа или в сочетании его с полинуклеотидами в виде Na-солей ДНК, выделенных из молок осетровых или лососевых рыб, в виде белково-пептидно-полинуклеотидного комплекса для профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, вводимых в терапевтически эффективных суточных и курсовых дозах парентерально или интраназально и регулирующих метаболизм холестерина, эфиров холестерина, триглицеридов, фосфолипидов в субэндотелиальных соединительно-тканных и гладкомышечных клетках артериальных сосудов.

2. Способ профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, включающий введение пациенту фармацевтического препарата, содержащего белково-пептидный комплекс (далее - БПК) в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем парентерально или интраназально в терапевтически достаточных суточных и курсовых дозах в качестве терапевтического препарата, регулирующего метаболизм холестерина, эфиров холестерина, триглицеридов, фосфолипидов в субэндотелиальных соединительно-тканных и гладкомышечных клетках артериальных сосудов, при этом в качестве белково-пептидного комплекса используют белково-пептидный комплекс (БПК) по п. 1 с общей концентрацией белка 0,05-4,2 мг/мл, получаемый из гомогената, полученного из эмбриональной нервной ткани сельскохозяйственных копытных животных, включающий тканеспецифические отрицательно заряженные слабокислые нейтральные белки и полипептиды, относящиеся к факторам роста, дифференцировки, сигнальным молекулам, определяющим его биологическую активность, с молекулярными массами от 0,5 до 200 кДа, причем не менее 70% от общей массы белка имеет молекулярную массу от 20 до 160 кДа, имеющих характерный специфический набор полос при денатурирующем гель-электрофорезе в 5%-ном полиакриламидном геле, значением изоэлектрической точки от 4,2 до 8,4 и максимумом поглощения при длине волны (215±5) нм при снятии ультрафиолетового спектра в области длин волн от 200 до 500 нм.

3. Способ профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, включающий введение пациенту лекарственного препарата, содержащего белково-пептидный комплекс (далее - БПК) в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем парентерально или интраназально в терапевтически достаточных суточных и курсовых дозах в качестве терапевтического препарата, регулирующего метаболизм холестерина, эфиров холестерина, триглицеридов, фосфолипидов в субэндотелиальных соединительно-тканных и гладкомышечных клетках артериальных сосудов, при этом в качестве белково-пептидного комплекса используют белково-пептидный комплекс, полученный из гомогената, полученного из быстрозамороженной эмбриональной ткани мозга копытных сельскохозяйственных животных и содержащего отрицательно заряженные и нейтральные белки и полипептиды с молекулярной массой от 5 до 200 кДа и с содержанием фракции со средней молекулярной массой в пределах от 10 до 120 кДа не менее 80%, общей концентрацией белка 0,05-4,2 мг/мл, с максимумом поглощения ультрафиолетового спектра раствора при длине волны 280±5 нм, наличием пика при длине волны 274-284 нм в УФ-видимой области спектра, наличием специфических полос в интервале значений pl от 4,2 до 8,4 при изоэлектрофокусировке в 5%-ном полиакриламидном геле.

4. Способ профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, по п. 2, включающий введение пациенту терапевтического препарата, содержащего белково-пептидный комплекс, отличающийся тем, что терапевтический препарат дополнительно содержит в качестве активного иммуномоделирующего и стабилизирующего действующего компонента полинуклеотиды в виде натриевой соли дезоксирабонуклеиновой кислоты (Na-соли ДНК), полученные из молок осетровых и лососевых рыб, характеризующейся молекулярной массой от 12 до 660 кДа (18-1000 пар оснований) в равноценной или необходимой терапевтически достаточной суточной и курсовой дозе, с общей концентрацией их в терапевтическом препарате белково-пептидно-полинуклеотидного комплекса (далее - БППК) примерно от 0,05 до 3,0 мг/мл.

5. Способ профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, по п. 3, включающий введение пациенту терапевтического препарата, содержащего белково-пептидный комплекс, отличающийся тем, что терапевтический препарат дополнительно содержит в качестве активного иммуномоделирующего и стабилизирующего действующего компонента полинуклеотиды в виде натриевой соли дезоксирабонуклеиновой кислоты (Na-соли ДНК), полученные из молок осетровых и лососевых рыб, характеризующейся молекулярной массой от 12 до 660 кДа (18-1000 пар оснований) в равноценной или необходимой терапевтически достаточной суточной и курсовой дозе, с общей концентрацией их в терапевтическом препарате белково-пептидно-полинуклеотидного комплекса (далее - БППК) примерно от 0,05 до 3,0 мг/мл.

6. Способ профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, по п. 2, отличающийся тем, что дополнительно лекарственный препарат содержит иммуномодулирующий и стабилизирующий компонент в равноценной или необходимо достаточной терапевтической суточной и курсовой дозе, представляющий собой гидролизованные полинуклеотиды в виде Na-солей ДНК, полученные из молок осетровых или лососевых рыб, причем длина цепочек полинуклеотидов варьируется от ~1000 до ~7000 молекул, а концентрация их в препарате составляет примерно от 0,05 до 3,0 миллиграмм на миллилитр (мг/мл).

7. Способ профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, по п. 3, отличающийся тем, что дополнительно лекарственный препарат содержит иммуномодулирующий и стабилизирующий компонент в равноценной или необходимо достаточной терапевтической суточной и курсовой дозе, представляющий собой гидролизованные полинуклеотиды в виде Na-солей ДНК, полученные из молок осетровых или лососевых рыб, причем длина цепочек полинуклеотидов варьируется от ~1000 до ~7000 молекул, а концентрация их в препарате составляет примерно от 0,05 до 3,0 миллиграмм на миллилитр (мг/мл).

8. Способ профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, по п. 2, отличающийся тем, что в качестве фармацевтически приемлемого носителя препарат содержит фармацевтически приемлемый разбавитель, включающий солевой или буферно-солевой раствор и, возможно, вспомогательные вещества.

9. Способ профилактики и лечения пациентов с атеросклерозом артериальных сосудов и с заболеваниями, вызванными атеросклерозом магистральных и периферических сосудов головного мозга, сердца, сосудов нижних конечностей и аорты, по п. 3, отличающийся тем, что в качестве фармацевтически приемлемого носителя препарат содержит фармацевтически приемлемый разбавитель, включающий солевой или буферно-солевой раствор и, возможно, вспомогательные вещества.

10. Способ по п. 2, отличающийся тем, что за одну процедуру подкожно или внутримышечно вводят от 0,05 до 1,0 мг препарата БПК в 1,0-5,0 мл фармацевтически приемлемого разбавителя в виде курсовой дозы в виде 10-14 инъекций с повтором курса через 7-10 дней.

11. Способ по п. 3, отличающийся тем, что за одну процедуру подкожно или внутримышечно вводят от 0,05 до 1,0 мг препарата БПК в 1,0-5,0 мл фармацевтически приемлемого разбавителя в виде курсовой дозы в виде 10-14 инъекций с повтором курса через 7-10 дней.

12. Способ по п. 4, отличающийся тем, что за одну процедуру подкожно или внутримышечно вводят от 0,05 до 1,0 мг белково-пептидно-полинуклеотидного комплекса (далее - БППК) в 1,0-5,0 мл фармацевтически приемлемого растворителя в виде 8-20 инъекций, один-два раза в сутки курсом 8-14 дней при соотношении БПК и полинуклеотидов из молок рыб 0,1-2 : 0,5-2 соответственно.

13. Способ по п. 5, отличающийся тем, что за одну процедуру подкожно или внутримышечно вводят от 0,05 до 1,0 мг белково-пептидно-полинуклеотидного комплекса (далее - БППК) в 1,0-5,0 мл фармацевтически приемлемого растворителя в виде 8-20 инъекций, один-два раза в сутки курсом 8-14 дней при соотношении БПК и полинуклеотидов из молок рыб 0,1-2 : 0,5-2 соответственно.

14. Способ по п. 2, отличающийся тем, что за одну процедуру внутривенно капельно или медленно болюсно вводят от 0,025 до 0,7 мг препарата БПК в 5,0-500,0 мл фармацевтически приемлемого разбавителя, один-два раза в сутки курсом 5-12 дней.

15. Способ по п. 3, отличающийся тем, что за одну процедуру внутривенно капельно или медленно болюсно вводят от 0,025 до 0,7 мг препарата БПК в 5,0-500,0 мл фармацевтически приемлемого разбавителя, один-два раза в сутки курсом 5-12 дней.

16. Способ по п. 4, отличающийся тем, что за одну процедуру внутривенно капельно или медленно болюсно вводят от 0,025 до 0,7 мг препарата БППК в 5,0-500,0 мл фармацевтически приемлемого разбавителя, один-два раза в сутки курсом 5-12 дней.

17. Способ по п. 5, отличающийся тем, что за одну процедуру внутривенно капельно или медленно болюсно вводят от 0,025 до 0,7 мг препарата БППК в 5,0-500,0 мл фармацевтически приемлемого разбавителя, один-два раза в сутки курсом 5-12 дней.

18. Способ по п. 2, отличающийся тем, что за одну процедуру интраназально вводят от 0,001 до 0,1 мг терапевтического препарата БПК в 0,05-1,2 мл фармацевтически приемлемого разбавителя в виде 2-3 впрыска или от 2 до 4 капель в каждый носовой ход, один-два раза в сутки курсом 10-14 дней.

19. Способ по п. 5, отличающийся тем, что за одну процедуру интраназально вводят от 0,001 до 0,1 мг препарата БППК в 0,05-1,2 мл фармацевтически приемлемого носителя в виде 2-3 впрыска или от 2 до 4 капель в каждый носовой ход, один-два раза в сутки курсом 10-14 дней.

20. Способ по п. 2, отличающийся тем, что осуществляют курсовое лечение, вводя подкожно БПК 1 раз в 4 месяца в дозе 0,05-0,1 мг в 1,0-5,0 мл носителя (разбавителя) по соответствующей одной инъекции 10 дней и осуществляют два курса по 14 дней, осуществляя интраназальное введение по 2 капли в каждый носовой проход утром с интервалом между курсами 2,0-2,5 недели.

21. Способ по п. 3, отличающийся тем, что осуществляют курсовое лечение, вводя подкожно БПК 1 раз в 4 месяца в дозе 0,05-0,1 мг в 1,0-5,0 мл носителя (разбавителя) по соответствующей одной инъекции 10 дней и осуществляют два курса по 14 дней, осуществляя интраназальное введение по 2 капли в каждый носовой проход утром с интервалом между курсами 2,0-2,5 недели.

22. Способ по п. 4, отличающийся тем, что терапевтический препарат БПК или БППК вводят совместно с другими антиатеросклеротическими веществами, выбранными из группы, включающей «секвестранты» желчных кислот; ингибиторы синтеза холестерина в печени (статины); добавки, влияющие на всасывание, катаболизм и клиренс холестерина; гиполипидемические препараты, в терапевтически эффективных дозах.

23. Способ по п. 5, отличающийся тем, что терапевтический препарат БПК или БППК вводят совместно с другими антиатеросклеротическими веществами, выбранными из группы, включающей «секвестранты» желчных кислот; ингибиторы синтеза холестерина в печени (статины); добавки, влияющие на всасывание, катаболизм и клиренс холестерина; гиполипидемические препараты, в терапевтически эффективных дозах.

24. Способ по п. 4, отличающийся тем, что системное курсовое введение терапевтических препаратов БПК или БППК осуществляют 4-12 курсов в год с перерывом между курсами 10-56 дней в зависимости от выраженности атеросклеротического процесса, его локализации, наличия осложнений и их последствий.

25. Способ по п. 5, отличающийся тем, что системное курсовое введение терапевтических препаратов БПК или БППК осуществляют 4-12 курсов в год с перерывом между курсами 10-56 дней в зависимости от выраженности атеросклеротического процесса, его локализации, наличия осложнений и их последствий.

26. Способ по п. 4, отличающийся тем, что при профилактике возникновения атеросклероза сосудов системное курсовое введение препаратов БПК или БППК осуществляют от 2 до 6 курсов в год с перерывом между курсами 2-6 мес в зависимости от совокупности факторов риска и генетической предрасположенности пациента.

27. Способ по п. 5, отличающийся тем, что при профилактике возникновения атеросклероза сосудов системное курсовое введение препаратов БПК или БППК осуществляют от 2 до 6 курсов в год с перерывом между курсами 2-6 мес в зависимости от совокупности факторов риска и генетической предрасположенности пациента.

28. Способ по п. 2, отличающийся тем, что при профилактике возникновения атеросклероза сосудов осуществляют системное курсовое введение препаратов БПК или БППК от 2 до 6 курсов в год с перерывом между курсами 2-6 мес в зависимости от совокупности факторов риска и генетической предрасположенности пациента совместно с другими антиатеросклеротическими веществами, выбранными из группы, включающей «секвестранты» желчных кислот; ингибиторы синтеза холестерина в печени (статины); добавки, влияющие на всасывание, катаболизм и клиренс холестерина; гиполипидемические препараты, в терапевтически эффективно-необходимых дозах.

29. Способ по п. 3, отличающийся тем, что при профилактике возникновения атеросклероза сосудов осуществляют системное курсовое введение препаратов БПК или БППК от 2 до 6 курсов в год с перерывом между курсами 2-6 мес в зависимости от совокупности факторов риска и генетической предрасположенности пациента совместно с другими антиатеросклеротическими веществами, выбранными из группы, включающей «секвестранты» желчных кислот; ингибиторы синтеза холестерина в печени (статины); добавки, влияющие на всасывание, катаболизм и клиренс холестерина; гиполипидемические препараты, в терапевтически эффективно-необходимых дозах.