СПОСОБ ОЦЕНКИ АГРЕГАТНОГО СОСТОЯНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ В АУТОЛОГИЧНОЙ СЫВОРОТКЕ КРОВИ Российский патент 2016 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к исследованию реологических свойств крови, и может быть использовано для оценки агрегатного состояния эритроцитов в среде, не содержащей фибриноген.

Известно, что агрегация эритроцитов (образование «монетных столбиков») изучается в аутологичной плазме крови. При этом основным агрегантом, вызывающим агрегацию эритроцитов в плазме крови, является фибриноген (Rampling M.W., Meiselman H.J., Neu В., Baskurt O.K. Influence of cell specific factors on red blood cell aggregation. Biorheology. 2004. Vol. 41.P. 91-112).

Однако в последние годы показано, что белок а₂-макроглобулин, содержащийся как в плазме, так и сыворотке крови, также является сильным агрегантом (Kirschkamp Т., Schmid-Schönbein H., Weinberger A., Smeets R. Effects offibrinogen and a₂-macroglobulin and their apheretic elimination on general blood rheology and rheological characteristics of red blood cell aggregates. Therapeutic. Apheresis and Dialysis. 2008. Vol. 12. P. 360-367).

В качестве прототипа выбран фотометрический способ оценки агрегации эритроцитов в аутологичной плазме (Schmid-Schönbein H., von Gosen J., Heinich L., Klose H.J., Volger E. 1973. A counter - rotating "rheoscope chamber" for study of the microrheology of blood cell aggregation by microscopic observation and microphotometry. Microvasc. Res. 1973. Vol. 6. P. 366-376), включающий выделение эритроцитов из крови, смешивание с аутологичной плазмой, помещение в кювету реоскопа и регистрацию записи агрегатограммы.

Однако этот способ требует специального и дорогого оборудования (реоскопа). Кроме того, с помощью фотометрического метода можно определить только степень агрегации эритроцитов в виде «монетных столбиков». Практически неизученным остается прижизненная морфология агрегатного состояния эритроцитов при большом увеличении микроскопа.

Задачей предлагаемого изобретения является создание несложного быстро реализуемого способа оценки агрегатного состояния эритроцитов в среде, не содержащей фибриноген.

Поставленная задача решается за счет того, что сыворотку крови смешивают с промытыми эритроцитами в соотношении 2:1, каплю смеси помещают на предметное стекло, перемешивают, опускают в нее объектив (×100) светового микроскопа и после достижения фокуса (×1000) наблюдают через окуляр микроскопа. Для микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов производят микрофотосъемку.

Способ осуществляется следующим образом. Кровь забирают в вакуумные пробирки, содержащие 3.13% цитрат натрия (соотношение 9:1). Пробирки центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Плазму и клетки белой крови убирают, после чего эритроциты трижды промывают физиологическим раствором. Сыворотку крови получают после помещения крови в вакуумные пробирки, не содержащие антикоагулянт. Сыворотку смешивают с эритроцитами в соотношении 2:1, каплю смеси помещают на предметное стекло, перемешивают, опускают в нее объектив (×100) светового микроскопа и после достижения фокуса (×1000) производят микрофотосъемку.

Пример 1. Сыворотку крови здоровых людей смешивали с эритроцитами в соотношении 2:1, каплю смеси помещали на предметное стекло, перемешивали, опускали в нее объектив ×100, фокусировали и производили микрофотосъемку. На рис. 1 видно образование «монетных столбиков» из нормальных эритроцитов в аутологичной сыворотке.

Пример 2. Сыворотку крови больных сахарным диабетом смешивали с эритроцитами в соотношении 2:1, помещали на предметное стекло, перемешивали, опускали в каплю смеси объектив ×100, фокусировали и производили микрофотосъемку. На рис. 2 видно, что агрегация эритроцитов в аутологичной сыворотке повышена. Наблюдается образование глыбчатых структур агрегатов.

Приведенные примеры показывают возможности применения способа оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке.

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови. Сущность способа оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови заключается в выделении эритроцитов из крови, их промывании, смешивании сыворотки с эритроцитами и микроскопической оценке их агрегатного состояния с помощью световой микроскопии. Для этого в каплю смеси сыворотки с эритроцитами опускают объектив ×100 и после достижения фокуса (×1000) производят микрофотосъемку. Способ позволяет вести прижизненную оценку агрегатного состояния эритроцитов при большом увеличении светового микроскопа в среде, не содержащей фибриноген. 2 ил.

Способ оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови, включающий выделение эритроцитов из крови, их промывание, смешивании сыворотки крови с эритроцитами, отличающийся тем, что сыворотку смешивают с эритроцитами в соотношении 2:1, помещают на предметное стекло, перемешивают, опускают в каплю смеси объектив х100, производят микрофотосъемку.