СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТЕПЕНИ ВЫРАЖЕННОСТИ ДВС-СИНДРОМА У БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ И АТЕРОСКЛЕРОЗОМ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/52 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики тромбозов при различных патологических состояниях.

В ряде экспериментальных и клинических работ по внутрисосудистой коагуляции (Пермяков Н.К., 1979; Hardway, 1976, Nikulin A., Ymaz - Nikulin E, 1986) указано на образование эритроцитарных тромбов при различных заболеваниях. Под этим понятием подразумевают классические тромбы, состоящие из фибрина, тромбоцитов и большого количества эритроцитов. Но так как речь идет об окклюзии микроциркуляторного русла, термин "эритроцитарный тромб" подчеркивает основной компонент образования. Обычно эритроциты, входящие в его состав, находятся в гемолизированном состоянии. Эритроцитарные тромбы встречаются в различных внутренних органах и на всех участках микроциркуляторного русла.

В центре внимания современной диабетологии и кардиологии находится сосудистая патология, являющаяся основной причиной смертности этих больных. Некоторые специалисты рассматривают сахарный диабет как тромбопатическое заболевание, сопровождающееся увеличенной внутрисосудистой агрегационной способностью, приводящей к развитию тромбоза сосудов. В то же время одной из наиболее актуальных проблем кардиологии является изучение механизмов тромбогенеза и своевременная диагностика тромбообразования.

Изучение морфологических проявлений внутрисосудистой коагуляции - проблема актуальная и сложная, что связано прежде всего с отсутствием общедоступных способов идентификации фибрина. Известные методы, предложенные Вейгертом (1938), Маллори (1938), С.П. Шуениновым (1962), не отвечают потребностям целевого исследования ДВС-синдрома. Эти методы трудоемки, требуют предварительной подготовки материала для окраски, т.е. фиксации, обезвоживания через спирты восходящей концентрации, заливки в парафин, приготовления парафиновых срезов на микротоме, на что уходит не менее 5-7 дней. Только после этого возможна окраска. Кроме того, для забора материала необходимо проведение биопсии, что не всегда безразлично для больного. В 1984 году Д.Д. Зербино и Л. Л. Лукасевич был предложен способ диагностики ДВС-синдрома и предпринят поиск достоверных методов определения фибрина. Основой его послужили методы в оригинальной транскрипции Marcius-Scarlet-Blue (MSB), Picro-Mallory V. Метод Д.Д. Зербино и Л.Л. Лукасевич (1984) позволяет найти объективные морфологические критерии ДВС, показать структурные отличия микротромбов при этом синдроме от обычных тромбов, выявить среди фибриновых тромбов чисто фибриновые, тяжи фибрина, описать претромбы, дать качественную характеристику форменных элементов.

Однако, для окраски по этому методу также необходимо проведение биопсии, заливка в парафин, приготовление парафиновых срезов на микротоме, т.е. специальная подготовка материала. Кроме того, необходимы дорогие, дефицитные красители (целистиновый синий, гемалаун Майера, водный голубой).

Для диагностики ДВС-синдрома в клинической практике часто используют "манжеточную пробу", в процессе проведения которой определяют скорость, степень, время агрегации тромбоцитов, степень дезагрегации. Для этого необходимо иметь агрегометор, компьютер, дорогие реактивы, приходится дважды пунктировать вену больного. На проведение этого исследования затрачивается 90-120 мин.

Данный метод не позволяет оценить "возраст" фибрина, выявить агглютинацию.

В связи с изложенным нами впервые предложен способ оценки степени выраженности ДВС-синдрома у больных сахарным диабетом и атеросклерозом, основанный на выявлении и подсчете количества агглютинатов в мазках периферической крови. При количестве агглютинатов в мазках крови, окрашенных предлагаемым способом, больше 5 диагностируют тяжелую степень ДВС-синдрома, при их значении менее 5 - среднюю степень выраженности, при отсутствии агглютинатов, но наличии единичных эритроцитов, "петель" эритроцитов - легкую степень.

Для реализации предложенного способа использованы отечественные красители и впервые использован морфологический метод ОКГ (что соответствует названиям основных красителей: оранжевый ж; кислотный красный 2C и анилиновый синий) для прижизненной окраски мазков крови, что позволило обходиться без проведения биопсии. Время, необходимое для предложенного способа диагностики ДВС-синдрома, 30-40 минут.

Способ заключается в следующем: каплю крови наносят на обезжиренное предметное стекло, изготавливают мазок. Мазок окрашивают в течение 2 минут в растворе оранжевого желтого. Промывают в течение 1 мин в дистиллированной воде. Окрашивают в течение 10 мин в 1% растворе кислотного красного 2C на 2,5% водном растворе уксусной кислоты. Промывают в течение 1 мин в дистиллированной воде. Обрабатывают в 1% водном растворе фосфорновольфрамовой кислоты в течение 5 мин. Промывают в дистиллированной воде в течение 1 мин. Окрашивают в течение 10 мин 0,5% раствором анилинового синего на 1% водном растворе уксусной кислоты. Промывают в дистиллированной воде. Обезвоживают в спиртах, заключают в пихтовый бальзам. Изучение мазка производят под микроскопом с увеличением 400. Метод ОКГ соответствует требованиям, предъявляемым к оригинальным прописям.

В зависимости от наличия агрегатов в виде "монетных столбиков", "петель", "гирлянд" или крупных конгломератов различают 3 степени выраженности агрегации эритроцитов. Агрегаты состоят из неповрежденных эритроцитов, тесно прилежащих друг к другу, окрашивающихся при помощи метода ОКГ в оранжевый цвет. Данным методом выявляется развитие сладжа - крайней степени выраженности агрегации. Сладж может быть обратимым и необратимым. В последнем случае имеет место агглютинация эритроцитов (Чернух А.М. и др., 1975), что выявляется при помощи предложенного метода. Кроме того, данный способ дает возможность подсчитать число агглютинатов, т.е. дать количественную оценку степени выраженности ДВС-синдрома.

Предложенный метод, так же как и метод Д.Д. Зербино и Л.Л. Лукасевич, дает различную окрашиваемость фибрина в зависимости от его "возраста". Фибрин, который окрашивается в желто-оранжевый цвет, является "молодым" (0-6 ч). При более длительном существовании в организме фибрин приобретает красный цвет. Это зрелый фибрин (6-24 ч). "Старый" фибрин (более 24 ч) фиолетового цвета.

Исследования проведены на 45 больных сахарным диабетом II типа в стадии компенсации обменных процессов и 40 больных ИБС-постинфарктным кардиосклерозом. Длительность заболевания колебалась от 1 года до 20 лет. Контрольная группа состояла из 15 практически здоровых лиц того же возраста, без отягощений наследственности по сахарному диабету и ИБС.

Одновременно с предлагаемым способом прижизненной окраски мазков крови у всех больных и здоровых лиц в процессе проведения манжеточной пробы определяли агрегацию тромбоцитов методом, предложенным в 1989 г. З.А. Габбасовым и соавт., разработанным в КНЦ АН РФ.

Нами выявлены значительные нарушения в системе гемостаза у больных сахарным диабетом и атеросклерозом. При проведении манжеточной пробы у обследуемых больных в отличии от здоровых лиц не отмечается понижения агрегационной активности сосудистой стенки. Наблюдается достоверное повышение скорости и степени агрегации, увеличение времени агрегации, снижение степени дезагрегации. Описанные изменения говорят о гиперкоагуляции и тромбообразовании у данных больных.

Нами отмечена взаимосвязь между показателями процесса агрегации тромбоцитов и показателями исследования мазков крови предложенным способом: при значительных нарушениях агрегационной активности тромбоцитов одновременно выявляются выраженные изменения и в мазках крови.

Пример 1. Больной Г., 52 лет. Диагноз: Сахарный диабет II типа, средней степени тяжести в стадии компенсации обменных процессов. Длительность заболевания 2 года. Получает пероральные сахароснижающие препараты.

Показатели процесса агрегации тромбоцитов больного Г., 52 лет, приведены в табл. 1.

У больного Г. отмечается высокая функциональная активность тромбоцитов по сравнению с контрольной группой. После наложения манжетки (ишемии) повышается скорость агрегации тромбоцитов, возрастает степень агрегации, увеличивается время агрегации, замедляется дезагрегация, что свидетельствует о преимущественном выделении эндотелием стенки сосудов активаторов, а не ингибиторов тромбообразования в процессе манжеточной пробы.

Показатели состояния эритроцитов в мазке крови (окраска предлагаемым способом) больного Г. , 52 лет: плотность - 800 (контроль 600 ± 500); единичные эритроциты - 650 (контроль - 0); гирлянды - 30 (контроль - 0); "молодой фибрин" - 50 (контроль - 0); агглютинаты - 0 (контроль - 0).

Таким образом, у данного больного со средней степенью тяжести заболевания, небольшой продолжительностью заболевания отмечаются невыраженные изменения как агрегационной активности тромбоцитов, так и состояния эритроцитов в мазках крови.

Пример 2. Больная Д., 63 лет. Диагноз: сахарный диабет II типа, средней степени тяжести в стадии компенсации обменных процессов. Диабетическая микроангиопатия сосудов нижних конечностей. Больна в течение 18 лет. Предъявляет жалобы на чувство онемения стоп, парестезии, боли, судороги в нижних конечностях.

Показатели состояния эритроцитов в мазке крови (окраска предлагаемым способом) больной Д. 63 лет: плотность мазка - 920; гирлянды эритроцитов - 47; монетные столбики - 13; конгломераты - 18; агглютинаты - 5; "молодой фибрин" - 720, "зрелый" - 200, "старый" - 220.

Таким образом, у данной больной с длительностью заболевания 18 лет, поражением микроциркуляторного русла отмечаются тяжелые, выраженные изменения как со стороны агрегационной активности тромбоцитов, так и со стороны состояния эритроцитов в мазках крови.

Пример 3. Больной И., 50 лет. Диагноз: ИБС-Постинфарктный кардиосклероз. Стенокардия напряжения II ф.к. Атеросклероз коронарных сосудов аорты. В настоящее время беспокоят редкие приступы загрудинных болей.

Показатели состояния эритроцитов в мазке крови (окраска предлагаемым способом): плотность мазка эритроцитов - 1200; гирлянды эритроцитов - 40; конгломераты -10; агглютинаты - 2; "молодой фибрин" - 680; "зрелый" - 1200, "старый" - 120.

У данного больного изменения показателей как процесса агрегации тромбоцитов, так и состояния эритроцитов в мазке крови отражают среднюю степень выраженности ДВС-синдрома.

Таким образом, у обследованных больных имеются однонаправленные изменения гемостаза, выявляемые как при проведении "манжеточной пробы", так и при окрашивании мазков периферической крови предлагаемым способом.

Резюмируя полученные данные необходимо отметить, что предложенный способ диагностики ДВС-синдрома у больных сахарным диабетом и атеросклерозом дает возможность количественно оценить степень выраженности ДВС-синдрома, существенно сокращает время исследования, упрощает исследование, не требует специальной аппаратуры и дорогостоящих реактивов, является информативным, нетравматичным для больного, что позволяет применять данный способ не только в стационаре, но и в поликлинике и диагностировать ДВС-синдром в короткий срок.

Способ может быть использован в медицине для диагностики тромбозов при различных патологических состояниях. У больного берут периферическую кровь из пальца. Каплю крови наносят на обезжиренное предметное стекло, изготавливают мазок, который окрашивают с использованием следующих красителей: оранжевый желтый, кислотный красный и анилиновый синий. При изучении мазка под микроскопом с увеличением 400 определяют количество агглютинатов и при их значении больше 5 диагностируют тяжелую степень выраженности ДВС-синдрома, меньше 5 - среднюю степень, а при отсутствии агглютинатов, но наличии единичных эритроцитов, "гирлянд", "монетных столбиков", "петель" эритроцитов диагностируют легкую форму ДВС-синдрома. Способ дает возможность количественно оценить степень выраженности ДВС-синдрома, существенно сокращает время исследования, упрощает исследование, более информативен, менее травматичен, не требует специальной аппаратуры и дорогостоящих реактивов, что позволяет применять данный способ не только в стационаре, но и в поликлинике и диагностировать ДВС-синдром в короткий срок. 3 табл.

Способ диагностики степени выраженности ДВС-синдрома у больных сахарным диабетом и атеросклерозом, включающий окраску материала и его микроскопическое исследование, отличающийся тем, что на предметном стекле окрашивают мазок периферической крови больного с использованием красителей: оранжевый желтый, кислотный красный и анилиновый синий, определяют количество агглютинатов и при их значении больше 5 диагностируют тяжелую степень выраженности ДВС-синдрома, меньше 5 - среднюю степень, а при отсутствии агглютинатов, но наличии единичных эритроцитов, "гирлянд", "монетных столбиков", "петель" эритроцитов - легкую форму ДВС-синдрома.