СПОСОБ И КОМПОЗИЦИЯ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ АКТИВАЦИИ ТЕЛОМЕРАЗЫ Российский патент 2016 года по МПК A61K31/15 A61K38/00 A61P17/02 A61P25/28 A61P31/12 C12N9/00 

Изобретение относится к области медицины и касается способа и композиции, используемых для активации теломеразы, удлинения теломер и увеличения потенциала клеточного деления.

Общие сведения

Граница количества делений соматических клеток (предел или лимит Хейфлика), впервые обнаруженная в культуре фибробластов, была найдена в культурах всех дифференцированных клеток как человека, так и других многоклеточных организмов. Максимальное число делений различно в зависимости от типа клеток и от организма. Для большинства человеческих клеток предел Хейфлика составляет 52 деления. Граница Хейфлика связана с сокращением размера теломер, участков ДНК на концах хромосом. Теломеры содержат уплотненную ДНК и стабилизируют хромосомы. При каждом делении клетки теломерные участки укорачиваются, потому что ДНК-полимераза не способна реплицировать концы молекулы ДНК. Когда после определенного числа делений теломеры исчезают совсем, клетка замирает в определенной стадии клеточного цикла или запускает программу апоптоза - явления разрушения клетки, проявляющегося в уменьшении размера клетки и минимизации количества вещества, попадающего в межклеточное пространство после ее разрушения. Существует механизм, компенсирующий укорочение теломер.

Теломераза - фермент, добавляющий повторяющиеся последовательности ДНК (TTAGGG у позвоночных) к 3′-концу цепи ДНК на участках теломер. В результате деятельности теломеразы длина теломерных участков хромосом клетки увеличивается или сохраняется на постоянном уровне, компенсируя, таким образом, концевую недорепликацию и позволяя клетке делиться неограниченно долго. Теломераза человека состоит из двух субъединиц - теломеразной обратной транскриптазы (TERT) и теломеразной РНК (hTR или TERC). TERT сворачивается и захватывает TERC, которая не транслируется, оставаясь РНК. TERT имеет форму рукавицы, что позволяет ему закрепляться на хромосоме и добавлять в нее одноцепочечные теломерные участки.

РНК-компонент теломеразы экспрессируется на постоянном уровне практически во всех клетках, и для индуцирования теломеразной активности необходима экспрессия белкового компонента, теломеразной обратной транскриптазы, называемой каталитическим компонентом теломеразы. Активация TERT приводит к отключению механизма гибели клетки в результате разрушения хромосом или апоптоза. Кроме того, индуцированная экспрессия гена каталитического компонента теломеразы делает клеточную культуру иммортальной (бессмертной), то есть способной делиться неограниченно долго, отменяя тем самым для культуры предел Хейфлика. Теломераза экспрессируется в стволовых, половых и некоторых других типах клеток организма, которым необходимо постоянно делиться для функционирования определенных тканей (например, клетки эпителия кишечника). Обычные соматические клетки организма лишены теломеразной активности. Клетки 85% раковых опухолей обладают теломеразной активностью, поэтому считается, что активация теломеразы является одним из событий на пути клетки к злокачественному перерождению.

В опухолях, в клетках которых TERT не активируется, используется другой механизм сохранения теломер, называемый ALT (альтернативное удлинение теломер, alternative lengthening of telomeres). Детали этого механизма неизвестны. В Госпитале для больных детей (Вестмид, Австралия) идентифицировали две клеточные линии нейробластомы с интенсивной и длительной пролиферацией при отсутствии компенсации укорочения теломер; их теломеры, имея длину от 31 до 37 т.п.о., уменьшились до размера 50-80 п.о. [Roger Reddelb. Long-term proliferation of human cancer cells in the absence of telomere length maintenance, Abstracts. Brussel-2014].

В Школе биологических наук и Исследовательском центре иммунологии и рака (Эдинбургский университет), Центре клеточной биологии (Монреальский университет) получены данные о том, что элонгация теломеры свыше определенных пределов значительно снижает выживание клеток после воздействия гамма-излучением. Чувствительность к радиации носит дозозависимый характер и повышается при длине теломер >17 т.п.о. [Harrington, Lea. An optimal telomere length protects human tumor cells from ionizing radiation. Abstracts. Brussel-2014].

Генетические дефекты, приводящие к снижению уровня теломеразной РНК, вызывают укорочение теломер и различные заболевания. В Калифорнийском университете получены данные о новой протективной роли теломеразной РНК в нормальных клетках человека - снижение уровня hTR защищает клетки CD4+ Τ от апоптоза. Предполагают, что hTR влияет на иммунную систему, обеспечивая кратковременное выживание дифференцированных Т-клеток [Blackburn, Elizabeth. Regulation of human Immune system CD4+ Τ cell apoptosis specifically by the RNA component of telomerase. Abstracts. Brussel - 2014].

Предполагают, что телангиэктазивные нарушения как, например, прогерия, Атаксия-телангиэктазия, синдром Блума, анемия Фанкони, синдром Наймегена и другие, связаны с сокращением теломер. Гены, мутации в которых приводит к этим заболеваниям, задействованы в восстановлении ДНК. Их участие в управлении длиной теломер активно исследуется. Поскольку на настоящий момент неизвестно, насколько разрушение теломер влияет на процесс старения, основные исследования направлены на процессы сохранения целостности ДНК, в особенности ее теломерных участков. Предполагают, что лечение теломеразой может использоваться не только для борьбы с раком, но и со старением человеческого организма и, таким образом, для увеличения продолжительности жизни.

В Испанском Национальном центре онкологических исследований в Мадриде разработали основанную на использовании теломеразы стратегию генной терапии, которая способствует активации теломеразы у взрослых организмов и обнаруживает эффективность по отношению к различным связанным с возрастом патологиям на модели мышей (Bernardes de Jesus et al., EMBO Molecular Medicine, 2012; Blasco, Maria A. Role of telomeres in disease and longevity. Abstracts. Brussel - 2014).

В 1998 исследователи из Юго-Западного Медицинского Центра Техасского университета в Далласе встроили ген теломеразы в клетки кожи, зрительного и сосудистого эпителия человека, где фермент в обычных условиях "не работает". В таких генетически модифицированных клетках теломераза находилась "в рабочем состоянии" - пришивала к концевым участкам ДНК нуклеотидные последовательности, поэтому длина теломер от деления к делению не менялась. Таким способом ученым удалось увеличить жизнь обычных клеток человека в полтора раза.

Теломераза также участвует в регуляции активности 70 генов, которые участвуют, либо предположительно участвуют в образовании и развитии раковых опухолей. Кроме того, теломераза активирует гликолиз, что позволяет раковым клеткам использовать сахара для поддержания заданной скорости роста и деления (эти скорости сравнимы со скоростями роста клеток в зародыше).

Теломеразная теория старения связывает возрастное снижение пролиферативного потенциала тканей с критическим укорочением теломер в процессе клеточного деления.

В более широком аспекте теломеразная теория определяет процессы старения организма, например старения кожных покровов, тканей, органов и т.п., как опосредованные отсутствием активности теломеразы, укорочением теломер, снижением репликативной способности клеток.

Универсальность и важность фермента теломеразы для всего человеческого организма определяет многообразие процессов, обусловленных ее активностью.

К таким процессам можно отнести инфекционные: бактериальные, грибковые и вирусные заболевания. Так, например, в медицинской школе университета Пенсильвании получены данные о том, что острая инфекция вирусом herpes simplex типа 1 (HSV-1) индуцирует значительные изменения структуры и активности теломер, включая диссоциацию фактора связывания с теломерными повторами ДНК (шелтерин) и потере повторов ДНК. Фактор репликации ICP8 вируса HSV-1 связывается с субтеломерным участком ДНК, расположенным проксимально к теломерным повторам, и инициирует репликацию вируса. Эти исследования свидетельствуют о важной роли теломеры в подавлении вирусной инфекции в ядре клетки [Lieberman, Paul. Telomere Response to Viral Infection. Abstracts].

К таким процессам относятся репаративные процессы: заживление ран и ожогов, негативные последствия лучевой и химиотерапии, восстановление организма после нагрузок различной природы.

В 2000-х годах новые аспекты теории старения были выявлены в ходе исследований пептидов тимуса и эпифиза. Так, введение пептидов Lys-Glu и Ala-Glu-Asp-Gly животным способствовало как уменьшению частоты развития опухолей, так и увеличению средней продолжительности жизни.

С использованием ДНК-микрочиповой технологии выполнено исследование влияния синтетических пептидов эпифиза Ala-Glu-Asp-Gly (эпиталон) и тимуса Lys-Glu (вилон), Glu-Trp (тимоген) на экспрессию генов сердца и головного мозга мышей. В экспериментах использовали клоны, входящие в библиотеку кДНК Национального института старения США. В этих экспериментах были получены данные по изменению экспрессии различных генов под влиянием пептидов. Важным выводом явилось то, что каждый пептид специфически регулирует конкретные гены. В эксперименте было также установлено, что дипептид Lys-Glu, обладающий иммуномодулирующей активностью, регулирует экспрессию гена интерлейкина-2 в лимфоцитах крови.

Найдены предполагаемые сайты связывания для пептидов Lys-Glu и Ala-Glu-Asp-Gly в промоторных участках генов плазминогена (PI), тканевого и урокиназного активаторов плазминогена (t-PA и u-PA), а также ингибитора активатора плазминогена-1 (PAI-1). Сайтами связывания для дипептида Lys-Glu в промоторных участках всех исследуемых генов являются GCAG и CGTC, а для тетрапептида Ala-Glu-Asp-Gly в генах PI и t-PA - АТТТС и TAAAG, в гене u-PA - СТТТА и АТТТС, в гене РАИ - АТТТС и CTTTG. Высказано предположение, что регуляторные пептиды Lys-Glu и Ala-Glu-Asp-Gly стимулируют экспрессию генов PI, t-PA, u-PA и супрессию гена РАН, что и приводит к усилению или нормализации фибринолиза при самых различных заболеваниях [Кузник Б.И., Хавинсон В.Х., Тарновская С.И. Эпигенетические механизмы действия дипептида lys-glu и тетрапептида ALA-GLU-ASP-GLY на фибринолитическую активность крови. Тромбоз, гемостаз и реология. 2013].

Пептиды тимуса и эпифиза показали себя эффективными и в коррекции функций иммунной системы.

Так, введение пептидов тимуса тимэктомированным животным восстанавливало число Т-лимфоцитов в крови, селезенке и лимфатических узлах. При введении пептидов тимуса мышам с удаленной вилочковой железой сроки отторжения аллотрансплантата у них уменьшались и достигали показателей, характерных для контрольных животных. Введение пептидов тимуса морским свинкам с индуцированным радиацией иммунодефицитом вызывало увеличение в крови и тимусе числа Т-лимфоцитов. Одновременно при этом наблюдали активацию процессов пролиферации и дифференциации тимоцитов и восстановления гистоархитектоники тимуса.

У морских свинок, инфицированных псевдотуберкулезом, введение пептидов тимуса в течение 6-15 сут приводило к функциональной активности лимфоцитов и нейтрофилов, уменьшало диссеминацию возбудителя в печени и мезентериальном лимфоузле в 5 раз, а в селезенке - в 10 раз и ускоряло выработку специфических агглютининов.

Введение пептидов тимуса в концентрациях от 10 нг/л до 100 мкг/л животным приводило к увеличению уровня внутриклеточного Са²⁺ в тимоцитах и макрофагах, что является одним из механизмов активации клеток. Установлено, что после инкубации в течение 5 часов пептиды тимуса стимулировали синтез мРНК IL-2 в лимфоцитах селезенки мышей. В опытах in vitro пептиды тимуса значительно повышали экспрессию рецепторов на Т- и В-лимфоцитах больных с вторичными иммунодефицитами, а также стимулировали продукцию IL-1α, IL-1β, IL-8 и TNF-α.

Прототипом текущего изобретения является документ 009442 В1, авторы которого предлагают способ увеличения активности теломеразы в клетке или ткани, включающий идентифицирование клетки или ткани, в которых увеличение активности теломеразы является желательным, и контактирование указанной клетки или ткани с композицией, содержащей природные и синтетические производные астрагала. Путем увеличения активности теломеразы в клетках или ткани пациента происходит лечение дегенеративных заболеваний, ВИЧ-инфекции, а также хронических и острых состояний, выбранных из группы, включающей рану, ожог, ссадину, надрез, имплантацию, повреждение, вызванное инфекционным агентом, хроническую венозную язву, диабетическую язву, компрессионную язву, рану от сдавления, язву слизистой оболочки и келоидное образование.

Недостатком прототипа является использование одной точки приложения (одного механизма) активации репарации клетки без учета эффекта, достигаемого на уровне целостного организма, который включает множество путей активации защитных систем или механизмов адаптации. При этом активация данных путей позволит не только повысить репаративную активность клетки, но и реализовать этот эффект на системном уровне в виде эффекта адаптации.

Авторы текущего изобретения определили техническую задачу как создание средства, более эффективного по сравнению с прототипом для профилактики и/или лечения состояний, для которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления реализуемое за счет включения дополнительных адаптационных механизмов.

Решением поставленной задачи является применение для профилактики и/или лечения состояний, для которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления композиции, содержащей в качестве активных компонентов соединение общей формулы (I),

где каждый R1, R2, R5, R7, R10, R11 независимо представляют собой Н, -СН3, -С2Н5;

R3, R6, R9, R12, R13 независимо представляют собой Н, -ОН, -ОСН3, -ОСН2СН3, -NH2;

R4 представляет собой Н, -СН3, -С2Н5, или R4 образует совместно с 8 атомом углерода конденсированное циклопропильное или циклобутильное кольцо;

R8 представляет собой

= = = независимо представляет собой одинарную или двойную связь между атомами C1 и С2, С6 и С7, С8 и С9, выделенное из корней растений рода Астрагал, известного своей способностью к увеличению пролиферации фибробластов и заживлению ран [Sevimli-Gür, Canan. In vitro growth stimulatory and in vivo wound healing studies on cycloartane-type saponins of Astragalus genus], или его синтетический аналог, или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один ди-, три-, тетра- или пентапептид тимуса и/или по меньшей мере один ди-, три-, тетра- или пентапептид эпифиза.

Авторы установили, что использование сочетаний заявляемых компонентов показывает неожиданно высокий эффект при активизации теломеразы и повышении защитных функций организма, таких как увеличение функциональной активности иммунокомпетентных клеток, в том числе моноцитов и лимфоцитов, нормализации иммунных показателей.

Наличие этих компонентов в составе композиции, а также средства, включающего данную композицию, определяет их эффективность в профилактике и/или лечении состояний, для которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, по сравнению с известными средствами того же назначения, что можно определить как технический результат настоящего изобретения.

Представленные выше данные помогают понять ключевую роль теломеразы в функционировании человеческого организма и определить области применения заявляемой композиции, основываясь на процессах, обусловленных ее активностью.

К таким процессам относится геропротекция (замедление процессов старения), например, кожных покровов, тканей, органов: сердечно-сосудистой системы, мужской или женской репродуктивной системы и т.п., происходящая за счет активации теломеразы, удлинения теломер, увеличения репликативной способности клеток и сопровождающего их иммуномодулирующего воздействия средства.

К таким процессам, на основании вышеуказанных данных, можно отнести инфекционные: бактериальные (дизентерия, менингит, стрептококковая, стафилококковая инфекции и др.), грибковые (хромомикоз, кандидоз и др.) и вирусные заболевания (герпес, цитомегаловирус, гепатиты, ВИЧ и др.), заболевания, ассоциированные с возрастом (сердечно-сосудистые, неврологические, эндокринные, заболевания глаз, репродуктивной системы, болезнь Альцгеймера и др.), лечение и уменьшение риска возникновения которых также напрямую связано с активностью теломеразы и состоянием иммунной системы.

Областью применения заявляемой композиции является и ускорение адаптации организма после интенсивных спортивных нагрузок или после экстремальных стрессорных нагрузок.

Областью применения заявляемой композиции является и снижение и/или предотвращение побочных эффектов при проведении курсов лучевой и химиотерапии за счет иммуномодулирующего действия средства.

Областью применения заявляемой композиции является и репарация органов и тканей, примером которой может быть заживление ран и ожогов.

Заявляемое средство применяется и для улучшения течения процессов клеточного метаболизма, стимуляции процессов регенерации в случае их угнетения, происходящих за счет его влияния на реакции клеточного, гуморального иммунитета.

Техническим результатом заявляемого изобретения также является синергичное действие и усиление эффекта в отношении иммунной системы за счет применения заявляемого средства; синергичное действие по нормализации функций сердечно-сосудистой и эндокринной системы (нормализация показателей артериального давления и углеводного обмена), также антиоксидантное действие средства.

Наличие теломеразы во всех клетках нашего организма, универсальность полезности ее активации, особенно в совокупности с сопровождающим ее иммуномодулирующим действием, оказываемым заявляемым средством, позволяют специалисту в данном уровне техники определить правомерность распространения назначения заявляемого средства на все заболевания и/или процессы, указанные выше.

Заявляемая композиция характеризуется тем, что в качестве соединения формулы (I) используются природные или синтетические астрагалозиды - тритерпеновые тетрациклические сапонины, относящимися к группе циклоартана.

В частном случае в качестве соединения формулы (I) может быть выбран (3β, 6α, 9β, 16β, 20R, 24S)-20,24-эпокси-9,19-циклоланостан-3,6,16,25-тетрол (циклоастрагенол):

Заявляемая композиция характеризуется тем, что в качестве короткого пептида тимуса может быть выбран, например, Lys-Glu, а в качестве короткого пептида эпифиза, может быть выбран, например, Asp-Glu-Gly, и/или Lys-Asp-Glu, и/или Ala-Asp-Glu-Leu.

Заявляемая композиция характеризуется также тем, что содержание каждого активного компонента, входящего в ее состав, может составлять 0,01-30 мас. %.

Заявляемая композиция характеризуется также тем, что в зависимости от заданной цели она дополнительно может содержать один или несколько компонентов, выбранных из группы: а. ресвератрола, b. ретинола ацетата, с. аскорбиновой кислоты, d. токоферола ацетата, е. ликопина, f. флавина и флавоноидов, g. танинов, h. антоцианов, i. супероксиддисмутазы, j. ферроксидазы, k. активатора антиоксидантных ферментов, l. рапамицина, m. гиалуроновой кислоты, n. пребиотиков, о. витамина D, р. омега-3 полиненасыщенных жирных кислот, q. тиоктовой кислоты, r. расторопши пятнистой, s. экстракта масла рейши, t. диметилресвератрола, u. экстракта дельфиниума, v. экстракта гиностеммы пентофиллум.

Заявляемая композиция характеризуется также тем, что она может входить в состав средства для лечения и/или профилактики заболеваний и/или профилактики процессов, для лечения и/или профилактики которых является полезным активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления.

Заявляемое средство характеризуется тем, что в зависимости от поставленной задачи оно может быть выполнено в виде капсулы или таблетки для приема внутрь, крема для наружного применения, лосьона для наружного применения, спрея, назального спрея, раствора для интраназального введения, раствора для инъекций или лиофилизата для приготовления раствора для инъекций.

Заявляемая композиция характеризуется также тем, что содержит приемлемый носитель. Приемлемый носитель может представлять собой как неорганическое вещество, так и органическое. Так, например, в качестве носителей для таблеток и твердых желатиновых капсул могут быть использованы лактоза, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновая кислота или ее соли. Подходящие носители для мягких желатиновых капсул представляют собой, например, растительные масла, воски, жиры и полутвердые и жидкие полиолы. Подходящие носители для приготовления растворов для инъекций представляют собой, например, воду, спирты, полиолы, глицерин и растительные масла. Подходящие носители для местных препаратов представляют собой глицериды, полусинтетические и синтетические глицериды, гидрированные масла, жидкие воски, жидкие парафины, жидкие жирные спирты, полиэтиленгликоли и производные целлюлозы.

Заявляемая композиция характеризуется также тем, что она может быть выполнена в виде биологически активной добавки.

Заявляемая композиция характеризуется также тем, что она может быть выполнена в виде косметического крема или косметического геля.

В более конкретных примерах композиция, выполненная в виде капсулы или таблетки для приема внутрь, крема для наружного применения, лосьона для наружного применения, ректальных свечей, спрея, назального спрея, спрея подъязычного, раствора для интраназального введения, раствора для инъекций или лиофилизата для приготовления раствора для инъекций раствора для парентерального питания может содержать 0,5 мг; 1 мг; 2 мг; 4 мг; 8 мг циклоастрагенола; 75 мкг; 150 мкг пептида тимуса, 75 мкг; 150 мкг пептида эпифиза.

Для профилактики процессов, связанных со старением (замедление наступления процессов старения, профилактика старения кожи, профилактика старения мужской или женской репродуктивной системы) и/или возраст-ассоциированными заболеваниями (сердечно-сосудистыми заболеваниями, неврологическими заболеваниями, заболеваниями эндокринной системы, заболеваниями глаз, заболеваниями репродуктивной системы, болезнью Альцгеймера), для снижения и/или предотвращение побочных явлений при проведении курсов лучевой и химиотерапии, улучшения состояния иммунной системы, ускоренной адаптации организма после интенсивных спортивных и/или экстремальных стрессорных нагрузок средство применяется в дозах от 0,65 мг до 16,6 мг 1-2 раза в день.

Для лечения процессов, связанных со старением (старения мужской или женской репродуктивной системы), лечения возраст-ассоциированных заболеваний (сердечно-сосудистых, неврологических, эндокринной системы, заболеваний глаз, репродуктивной системы, болезни Альцгеймера), лечения бактериальных, грибковых и вирусных заболеваний, хронических вирусных заболеваний, для заживления ран и ожогов, для улучшения состояния иммунной системы, ускорения адаптации организма после интенсивных физических и/или экстремальных стрессорных нагрузок, снижения и/или предотвращение побочных явлений при проведении курсов лучевой и химиотерапии средство применяется в дозах от 1,3 мг до 33,2 мг 1-2 раза в день.

В процессе профилактики процессов, связанных со старением (замедление наступления процессов старения, профилактика старения кожи, профилактика старения мужской или женской репродуктивной системы) и/или возраст-ассоциированными заболеваниями (сердечно-сосудистыми заболеваниями, неврологическими заболеваниями, заболеваниями эндокринной системы, заболеваниями глаз, заболеваниями репродуктивной системы, болезнью Альцгеймера), для снижения и/или предотвращение побочных явлений при проведении курсов лучевой и химиотерапии, улучшения состояния иммунной системы, ускоренной адаптации организма после интенсивных спортивных и/или экстремальных стрессорных нагрузок средство применяется в сроках от 3 до 12 месяцев, 3-месячными курсами с интервалом в 2 недели.

В процессе лечения процессов, связанных со старением (старения мужской или женской репродуктивной системы), лечения возраст-ассоциированных заболеваний (сердечно-сосудистых, неврологических, эндокринной системы, заболеваний глаз, репродуктивной системы, болезни Альцгеймера), лечения бактериальных, грибковых и вирусных заболеваний, хронических вирусных заболеваний, для заживления ран и ожогов, для улучшения состояния иммунной системы, ускорения адаптации организма после интенсивных физических и/или экстремальных стрессорных нагрузок, снижения и/или предотвращение побочных явлений при проведении курсов лучевой и химиотерапии средство применяется в сроках не менее 12 недель.

Преимущества заявляемой композиции и универсальность ее применения отражена в сопроводительных примерах. Представленные примеры не являются ограничивающими и иллюстрируют лишь некоторые аспекты заявляемого изобретения.

Пример №1

Приготовление средства в виде капсул, содержащего в качестве активных компонентов циклоастрагенол в сочетании с пептидными комплексами «Тимовиаль®» и «Эпивиаль®», включающих в свой состав Lys-Glu и Asp-Glu-Gly, Lys-Asp-Glu, Ala-Asp-Glu-Leu соответственно

1. Подготовка активных компонентов и вспомогательных веществ

Пептидные комплексы измельчить и просеять через сито 0,5 мм.

Магния стеарат, тальк и натриевую соль крахмала гликолята (или кроскармеллозу натрия) просеять через сито 0,25 мм.

2. Отвешивание сырья

3. Приготовление премикса

Смешать 60,0 г МКЦ 102, 0,083 г Эпивиаля, 0,083 г Тимовиаля и 0,5 г циклоастрагенола. Тщательно перемешать (около 1 минуты при 1000 об/мин в миксере).

4. Приготовление капсульной массы

Смешать в миксере премикс (п. 3), оставшуюся часть МКЦ 102-103,35 г и 161,7 г лактозы 80, включают чоппер и перемешивают при 1000 об/мин 1,5-2 минуты. В миксер вносят 1,32 г магния стеарата, 1,32 г талька и 1,65 г натриевой соли крахмала гликолята (или кроскармеллоза натрия) и перемешивают еще 30 секунд.

5. Фасовка в капсулы

В дозатор капсулятора (капсульной машины) загружают полученную смесь (п. 4) в бункер капсулы и фасуют согласно инструкции по эксплуатации машины.

Средства, включающие в свой состав иные природные и синтетические производные астрагала и иные пептиды согласно текущему изобретению, могут быть приготовлены аналогичным образом с использованием подходящих носителей и выбором подходящей формы: капсулы или таблетки для приема внутрь, крема для наружного применения, лосьона для наружного применения, ректальных свечей, спрея, назального спрея, спрея подъязычного, раствора для интраназального введения, раствора для инъекций или лиофилизата для приготовления раствора для инъекций.

Эффективность заявляемых композиций подтверждена ниже.

В экспериментах были использованы белые нелинейные самцы мышей.

В экспериментах был использован циклоастрагенол, дипептид тимуса Lys-Glu и трипептид эпифиза Asp-Glu-Gly.

Влияние композиции на активацию теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления.

Пример №1

Определение активности теломеразы у мышей

Пептиды сосудов здесь и далее представляют собой H-Lys-Asp-Glu-OH, H-Asp-Glu-Pro-OH, H-Asp-Glu-Arg-OH.

Пример №2

Определение длины теломер у TERC +/- мышей

Пример №3

Выявление побочных явлений в ходе исследований у мышей (количество случаев)

В экспериментах было использовано соединение А, дипептид тимуса Lys-Glu и трипептид эпифиза Lys-Asp-Glu: соединение А

Пример №1

Влияние композиции на продолжительность жизни мышей в гермокамере

Пример №2

Влияние композиции на амнезию у мышей, вызванную электросудоржным током

В экспериментах был использован циклоастрагенол, дипептид тимуса Lys-Glu и трипептид эпифиза Asp-Glu-Gly.

Пример №3

Изменение неврологического дефицита (в баллах, М±m) у крыс после двусторонней перевязки общих сонных артерий (модель имешического инсульта) под влиянием композиции

Пример №4

Влияние композиции на амнезию у мышей, вызванную скополамином

В экспериментах было использовано соединение В, дипептид тимуса Lys-Glu и трипептид эпифиза Lys-Asp-Glu: соединение В

Пример №5

Влияние композиции на амнезию у мышей, вызванную острой нормабарической гипоксией с гиперкапнией

В экспериментах был использован циклоастрагенол, дипептид тимуса Lys-Glu и трипептид эпифиза Asp-Glu-Gly.

Пример №6

Исследование влияния композиции на репродуктивную функцию

Пример №7

Результаты исследования реакции животных после введения композиции на обонятельный (пищевой) раздражитель

Пример №8

Данные о продолжительности жизни животных, принимающих композицию

Пример №9

Влияние композиции согласно изобретению на нарушенную экспериментальной болезнью Альцгеймера память у крыс

Для эксперимента брали белых крыс-самцов с болезнью Альцгеймера.

В экспериментах был использован дипептид тимуса Lys-Glu и тетрапептид эпифиза Ala-Asp-Glu-Leu.

Представленные эксперименты являются примерами подтверждения эффективности заявляемой композиции при состояниях/заболеваниях различной этиологии. Представленные эксперименты показывают также эквивалентность действия природных и синтетических производных астрагала. Представленные примеры не являются ограничивающими и иллюстрируют лишь некоторые аспекты заявляемого изобретения как в части пептидов тимуса и эпифиза, которые могут быть использованы, так и в части активности и назначения композиции по изобретению.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа активации теломеразы, удлинения теломер и увеличения потенциала клеточного деления, включающего введение композиции, содержащей соединение, такое как циклоастрагенол, и, по меньшей мере, один пептид тимуса, выбранный из группы дипептида, трипептида, тетрапептида или пентапептида, и/или пептид эпифиза, выбранный из группы дипептида, трипептида, тетрапептида или пентапептида. Группа изобретений также касается композиции, предназначенной для активации теломеразы, удлинения теломер и увеличения потенциала клеточного деления; применения указанной композиции для производства средства, предназначенного для профилактики и/или лечения состояний, для которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления. Группа изобретений обеспечивает активацию теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления. 3 н. и 27 з.п. ф-лы, 9 пр.

1. Способ активации теломеразы, удлинения теломер и увеличения потенциала клеточного деления, включающий введение композиции, содержащей соединение общей формулы (I),

где каждый R1, R2, R5, R7, R10, R11 независимо представляют собой Н, -СН3, -С2Н5;
R3, R6, R9, R12, R13 независимо представляют собой Н, -ОН, -ОСН3, -ОСН2СН3, -NH2;
R4 представляет собой Н, -СН3, -С2Н5 или R4 образует совместно с 8 атомом углерода конденсированное циклопропильное или циклобутильное кольцо;

R8 представляет собой
независимо представляет собой одинарную или двойную связь между атомами С1 и С2, С6 и С7, С8 и С9,
или его приемлемую соль и по меньшей мере один пептид тимуса, выбранный из группы дипептида, трипептида, тетрапептида или пентапептида, и/или пептида эпифиза, выбранный из группы дипептида, трипептида, тетрапептида или пентапептида.

2. Композиция, предназначенная для активации теломеразы, удлинения теломер и увеличения потенциала клеточного деления, включающая соединение общей формулы (I),

где каждый R1, R2, R5, R7, R10, R11 независимо представляют собой Н, -СН3, -С2Н5;
R3, R6, R9, R12, R13 независимо представляет собой Н, -ОН, -ОСН3, -ОСН2СН3, -NH2;
R4 представляет собой Н, -СН3, -С2Н5 или R4 образует совместно с 8 атомом углерода конденсированное циклопропильное или циклобутильное кольцо;

R8 представляет собой
независимо представляет собой одинарную или двойную связь между атомами С1 и С2, С6 и С7, С8 и С9,
или его приемлемую соль и по меньшей мере один пептид тимуса, выбранный из группы дипептида, трипептида, тетрапептида или пентапептида, и/или пептида эпифиза, выбранный из группы дипептида, трипептида, тетрапептида или пентапептида.

3. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что пептидом тимуса является Lys-Glu.

4. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что пептидом эпифиза является пептид, который выбирается из группы: Asp-Glu-Gly, Lys-Asp-Glu, Ala-Asp-Glu-Leu.

5. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что содержание циклоастрагенола составляет 0,01-30 мас.%.

6. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что содержание пептида тимуса составляет 0,01-30 мас.%.

7. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что содержание пептида эпифиза составляет 0,01-30 мас.%.

8. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что она дополнительно содержит один или несколько компонентов, выбранных из группы: а. ресвератрола, b. ретинола ацетата, с. аскорбиновой кислоты, d. токоферола ацетата, е. ликопина, f. флавина и флавоноидов, g. танинов, h. антоцианов, i. супероксиддисмутазы, j. ферроксидазы, k. активатора антиоксидантных ферментов, l. рапамицина, m. гиалуроновой кислоты, n. пребиотиков, о. витамина D, р. омега-3 полиненасыщенных жирных кислот, q. тиоктовой кислоты, r. расторопши пятнистой, s. экстракта масла рейши, t. диметилресвератрола, u. экстракта дельфиниума, v. экстракта гиностеммы пентофиллум.

9. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что она выполнена в виде косметического крема или косметического геля.

10. Применение композиции по любому из пп. 2-9 для производства средства, предназначенного для профилактики и/или лечения состояний, для которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления.

11. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что средство выполнено в виде капсулы или таблетки для приема внутрь, крема для наружного применения, лосьона для наружного применения, ректальных свечей, спрея, назального спрея, спрея подъязычного, раствора для интраназального введения, раствора для инъекций или лиофилизата для приготовления раствора для инъекций, раствора для парантерального питания.

12. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что состояниями, для лечения и/или профилактики которых является полезным активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, являются состояния, связанные со старением, и/или возраст-ассоциированные заболевания.

13. Применение по п. 12, характеризующееся тем, что профилактикой состояний, связанных со старением, является замедление наступления процессов старения.

14. Применение по п. 12, характеризующееся тем, что профилактикой состояний, связанных со старением, является профилактика старения кожи.

15. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что лечением состояния, для лечения которого является полезным активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, является заживление ран и/или ожогов.

16. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что профилактикой и/или лечением состояний, для профилактики и/или лечения которых является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, является профилактика и/или лечение старения мужской или женской репродуктивной системы.

17. Применение по п. 12, характеризующееся тем, что возраст-ассоциированные заболевания являются возраст-ассоциированными сердечно-сосудистыми заболеваниями, неврологическими заболеваниями, заболеваниями эндокринной системы, заболеваниями глаз, заболеваниями репродуктивной системы, болезнью Альцгеймера.

18. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что состояние, для лечения которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, представляет собой вирусное заболевание.

19. Применение по п. 18, характеризующееся тем, что состояние, для лечения которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, представляет собой хроническое вирусное заболевание.

20. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что состояние, для лечения которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, представляет собой бактериальное заболевание.

21. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что состояние, для лечения которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, представляет собой грибковое заболевание.

22. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что состоянием, для профилактики и/или лечения которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, является снижение и/или предотвращение побочных явлений при проведении курсов лучевой и химиотерапии.

23. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что состоянием, для профилактики и/или лечения которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, является улучшение состояния иммунной системы.

24. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что состоянием, для профилактики и/или лечения которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, является ускоренная адаптация организма после интенсивных спортивных нагрузок.

25. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что состоянием, для профилактики и/или лечения которого является полезной активация теломеразы, удлинение теломер и увеличение потенциала клеточного деления, является ускоренная адаптация организма после экстремальных стрессорных нагрузок.

26. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что профилактическая доза средства составляет 0,65 мг - 16,6 мг.

27. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что профилактический курс средства составляет 3-12 месяцев.

28. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что для профилактический курс средства включает два или более 3-х месячных курса с интервалом в 2 недели.

29. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что лечебная доза средства составляет 1,3 мг - 33,2 мг.

30. Применение по п. 10, характеризующееся тем, что лечебный курс средства составляет не менее 12 недель.