СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕПРОДУКТИВНЫХ НАРУШЕНИЙ У ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА С ДИСФУНКЦИЕЙ ГИПОТАЛАМУСА Российский патент 2017 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к клинической медицине, в частности к специальности акушерство и гинекология, и касается поиска новых возможностей прогнозирования репродуктивных нарушений у женщин репродуктивного возраста с дисфункцией гипоталамуса.

В результате проведенного патентного поиска был найден способ прогнозирования развития репродуктивных нарушений /1, Патент РФ №2495431, опубликован 10.10.2013/. Сущность способа состоит в том, что у женщин исследуется цервикальное отделяемое на десятый день менструального цикла, в качестве параметров определяют уровни интерлейкина 1 бета и интерферона гамма одновременно. При содержании интерлейкина 1 бета больше 38,8±3,8 пг/мл и одновременном содержании интерферона гамма больше 8,1±0,5 пг/мл прогнозируют формирование репродуктивных нарушений.

Недостатком способа является то, что определяются интерлейкины в цервикальном канале, а не в месте будущей имплантации (в полости матки). Кроме того, исследование проводится у женщин, имеющих инфекции, передаваемые половым путем в анамнезе, что подразумевает наличие воспалительных процессов в цервикальном канале. В исследовании используются другие интерлейкины - интерлейкин 1 бета и интерферон гамма, которые специфичны для воспалительного процесса.

Известны способы диагностики осложнений беременности с помощью цитокинов в биологических жидкостях: 12, «Актуальные проблемы невынашивания беременности» /Цикл клинических лекций под редакцией д.м.н., профессора, заслуженного деятеля науки РФ Сидельниковой В.М.", М., // Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, отделение терапии и профилактики невынашивания беременности, 2001, с. 61/, /3, Патент РФ №2341799 от 20.12.2008 «Способ прогнозирования невынашивания беременности при урогенитальной инфекции»/, /4, Жуковец И.В., Целуйко С.С. Роль NF-kB и цитокинов в формировании плацентарной недостаточности у женщин с ожирением на фоне дисфункции гипоталамуса // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. - 2015. - выпуск 56. - С. 62-66/.

Недостатком этих исследований является то, что прогнозируется риск невынашивания беременности или развитие осложнений уже у беременных женщин и не представляется возможным оценка риска и коррекция на этапе прегравидарной подготовки (до наступления беременности).

Известен способ прогнозирования репродуктивной функции у девочек с гипоталамическим синдромом пубертатного периода /5, Патент РФ №2438136, опубликован 27.12.2011 г./.

Недостатком способа является то, что маркер, используемый для прогнозирования, является маркером белковообразовательной функции эндометрия и не отражает состояние про- и противовоспалительных реакций в эндометрии, исследование проводится в пубертатном периоде в менструальной крови.

Задача изобретения - обеспечение возможности прогнозирования репродуктивных нарушений у женщин репродуктивного возраста с дисфункцией гипоталамуса.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что раннее прогнозирование достигается за счет одновременного оценивания про- и противовоспалительных цитокинов (TNF-α и IL-10) в аспирате из полости матки, поскольку они являются информативными критериями прогнозирования репродуктивных нарушений.

Изобретение иллюстрируется чертежами: фиг. 1 - ROC - кривая TNF-α в аспирате из полости матки, фиг. 2 - ROC - кривая IL-1β в аспирате из полости матки, фиг. 3 - ROC - кривая IL-10 в аспирате из полости матки.

Предлагаемый способ осуществлялся следующим образом. Для прогнозирования репродуктивных нарушений проводился забор содержимого из полости матки с помощью мануальной вакуумной аспирации на 21 день менструального цикла.

Материал из полости матки получали посредством введения в полость матки через цервикальный канал катетера 2-4 мм и производили аспирацию ее содержимого посредствам шприца. После извлечения катетера из матки содержимое помещали в пробирку.

Для получения экстрактов аспират, полученный из полости матки, смешивали с физиологическим раствором в объеме 1 мл и центрифугировали при 4000 g при температуре +4°C. Супернатант отбрасывали, клеточную взвесь растирали пестиком в фарфоровой ступке и гомогенизировали до однородной массы. К полученному гомогенату добавляли физиологический раствор в объеме 1:1 и получали клеточный экстракт. Клеточный экстракт помещали в пластиковые пробирки Falcon и подвергали замораживанию при -20°C в течение суток. Затем клеточный экстракт размораживали и центрифугировали при 4000 g при температуре +4°C. Надосадочную жидкость разливали мелкими аликвотами и хранили при -20°C до проведения ИФА.

Уровень TNF-α, IL-1β и IL-10 определяли с помощью наборов «Интерлейкин 1-ИФА-БЕСТ», «альфа-TNF - ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск), «Интерлейкин 10» (BenderMed Systems, США) согласно протоколам для постановки ИФА от фирмы-производителя.

При неблагоприятном прогнозе на беременность - TNF-α>20,2 пг/мл, IL-10<4,78 пг/мл; при неблагоприятном прогнозе на вынашивание беременности - TNF-α 18,9-20,1 пг/мл, IL-10 6,05-4,79 пг/мл; при благоприятном - TNF-α 15,0-18,8 пг/мл, IL-10 6,06-11,07 пг/мл.

Этот способ позволяет заблаговременно выявить нарушения репродуктивной функции и своевременно провести коррекцию на прегравидарном этапе (на этапе подготовки к беременности). Также предложенный способ обеспечивает возможность скринингового обследования пациенток с дисфункцией гипоталамуса, а именно прогнозировать репродуктивные нарушения, своевременно проводить коррекцию на прегравидарном этапе (на этапе подготовки к беременности), что позволит предупредить репродуктивные потери, ускорить реализацию генеративной функции и уменьшить материальные затраты на терапию, направленную на сохранения беременности и лечение осложнений.

Новыми признаками заявленного способа являются:

- прогнозирование репродуктивных нарушений на этапе прегравидарной подготовки;

- оценка про- и противовоспалительных цитокинов в аспирате из полости матки;

- одновременно определяют провоспалительный (TNF-α) и противовоспалительный (IL-10) цитокин;

- в качестве биологического материала используется аспират из полости матки (из места непосредственной имплантации эмбриона);

- прогнозируют развитие репродуктивных нарушений у пациенток с дисфункцией гипоталамуса, при содержании в аспирате из полости матки: неблагоприятный прогноз на беременность - TNF-α>20,2 пг/мл, IL-10<4,78 пг/мл; неблагоприятный прогноз на вынашивание беременности - TNF-α>18,9-20,1 пг/мл, IL-10<6,06-4,79 пг/мл.

В основу предлагаемого способа положено новое знание, полученное в результате лабораторного исследования изменения содержания маркеров клеточного звена иммунитета, а именно провоспалительного (TNF-α) и противовоспалительного (IL-10) цитокина в аспирате из полости матки у женщин репродуктивного возраста с дисфункцией гипоталамуса по сравнению с женщинами, в репродуктивном возрасте не имевшими нарушений в гипоталамо-гипофизарной системе (условно здоровыми).

Автор впервые обнаружил, что у женщин репродуктивного возраста с дисфункцией гипоталамуса в аспирате из полости матки повышается уровень провоспалительного (TNF-α) цитокина и снижается уровень противовоспалительного (IL-10) цитокина.

Исследование проведено у 70 женщин репродуктивного возраста с дисфункцией гипоталамуса и 30 условно здоровых на базе гинекологических отделений ГАУЗ ГКБ и ГАУЗ АОКБ. Забор проводился на 21 день менструального цикла с целью определения состояния клеточного звена иммунитета в полости матки, а именно провоспалительных цитокинов (TNF-α и IL-1β) и противовоспалительного (IL-10) цитокина, в секреторную фазу менструального цикла (фазу имплантации).

У пациенток с дисфункцией гипоталамуса (у 53 обследуемых) в аспирате из полости матки было определено повышение провоспалительного (TNF-α) и снижение противовоспалительного (IL-10) цитокина, значимых отличий в содержании IL-1β в аспирате из полости матки не выявлено. В последующем у 34 пациенток развилось бесплодие, у 19 произошел самопроизвольный аборт. Репродуктивные нарушения у данных пациенток имеют эндокринный характер и связаны с развитием дисфункции гипоталамуса.

Для проведения сравнительного анализа эффективности диагностических показателей использовался Receiver Operator Characteristic (ROC) - анализ. ROC - анализ используется для определения оптимального значения величины порога отсечения, площади под кривой (AUC).

При проведении сравнительного анализа эффективности показателей для исследуемых пациенток в аспирате из полости матки получили площадь под кривой AUC TNF-α=0,956 (чувствительность - 96%, специфичность - 95%, рис. 1), AUC IL-1J3=0,59 (чувствительность - 92%, специфичность - 59%, рис. 2), AUC IL-10=0,97 (чувствительность - 97%, специфичность - 97%, рис. 3), что говорило об отличной клинической значимости в аспирате из полости матки TNF-α и IL-10, неудовлетворительной - IL-1β.

Примеры из практики.

Пример 1.

Пациентка А., 23 года, планирует беременность.

Жалобы на момент обследования: на отсутствие беременности в течение 1 года.

В анамнезе: менструации с 13 лет, по 4-6 дней, через 30 дней, с 16 лет - через 30-60 дней, нерегулярные. В репродуктивном возрасте не обследована, лечение не получала.

В пубертатном периоде была двукратная госпитализация в гинекологическое отделение ГАУЗ АОДКБ. Выставлен диагноз: Дисфункции гипоталамуса. Вторичная олигоменорея.

Беременности не было.

Контрацепция - барьерная. В течение последних 2 лет не предохранялась.

Объективно: ИМТ 29,4 кг/м², стрии перламутрового цвета в области бедер и ягодиц.

Клинический диагноз: Вторичная олигоменорея. Осложненный гинекологический анамнез (дисфункция гипоталамуса в пубертатном периоде). Избыточная масса тела.

Проведено обследование: содержание в аспирате из полости матки TNF-α - 24,6 пг/мл, IL-10 - 2,61 пг/мл.

Пациентке проведена патогенетическая терапия в течение 6 месяцев, во время терапии было рекомендовано предохранение от беременности. Через 8 месяцев наступила беременность с благоприятным исходом - рождением доношенного ребенка.

Пример 2.

Пациентка В., 26 лет, планирует беременность.

Жалобы на момент обследования: не предъявляет.

В анамнезе: менструации с 11 лет, по 4-5 дней, через 30 дней, с 14 лет - отмечает задержки менструации до 6 месяцев, с 18 лет отмечает регулярные менструации. В пубертатном периоде была двукратная госпитализация в гинекологическое отделение ГАУЗ АОДКБ. Выставлен диагноз: Дисфункции гипоталамуса. Вторичная аменорея.

В 22 года наступила незапланированная беременность, проведен медицинский аборт. После проведения медицинского аборта отмечает набор массы тела, появление стрий бардового цвета в области бедер.

В репродуктивном возрасте не обследована, лечение не получала.

Беременность 1 - медицинский аборт.

Контрацепция - барьерная, в течение 6 месяцев не предохранялась.

Объективно: ИМТ 30,2 кг/м², стрии перламутрового цвета в области бедер и ягодиц.

Клинический диагноз: Дисфункция гипоталамуса. Ожирение 1 степени. Осложненный гинекологический анамнез (дисфункция гипоталамуса в пубертатном периоде). Осложненный акушерский анамнез (медицинский аборт).

Проведено обследование: содержание в аспирате из полости матки TNF-α - 19,4 пг/мл, IL-10 - 5,17 пг/мл.

Пациентке назначена патогенетическая терапия в течение 6 месяцев, во время терапии было рекомендовано предохранение от беременности.

До начала терапии у пациентки наступила беременность с неблагоприятным исходом - самопроизвольный аборт при сроке 5-6 недель.

Пример 3.

Пациентка Н., 24 лет, планирует беременность.

Жалобы на момент обследования: не предъявляет.

В анамнезе: менструации с 12 лет, по 4-5 дней, через 30-90 дней, нерегулярные. В течение последних трех лет принимает комбинированные оральные контрацептивы. В пубертатном периоде была однократная госпитализация в гинекологическое отделение ГАУЗ АОДКБ. Выставлен диагноз: Дисфункции гипоталамуса. Вторичная аменорея.

В репродуктивном возрасте не обследована.

Беременности не было.

Контрацепция - в течение 3 лет принимает комбинированные оральные контрацептивы.

Объективно: ИМТ 24,9 кг/м², стрии перламутрового цвета в области бедер и ягодиц.

Клинический диагноз: Обследование. Осложненный гинекологический анамнез (дисфункция гипоталамуса в пубертатном периоде).

Пациентке рекомендована отмена комбинированных оральных контрацептивов, назначена стандартная прегравидарная подготовка согласно Приказа №572, явка через 3 месяца.

Через 3 месяца проведено обследование: содержание в аспирате из полости матки TNF-α - 16,1 пг/мл, IL-10 - 7,4 пг/мл.

Рекомендовано было планировать беременность. Беременность наступила через 3 месяца с благоприятным исходом - рождение доношенного ребенка.

Данный способ прогнозирования репродуктивных нарушений является современным, объективным, легковоспроизводимым, малотравматичным способом получения содержимого из полости матки, имеющим высокую чувствительность (TNF-α - 96%, IL-10 - 97%) и специфичность (TNF-α - 95%, IL-10 97%).

Технический результат.

При обследовании пациенток в репродуктивном возрасте с дисфункцией гипоталамуса на этапе прегравидарной подготовки (до наступления беременности) можно своевременно определить репродуктивный прогноз и провести коррекцию нарушений, что позволит предупредить репродуктивные потери, ускорить реализацию генеративной функции и уменьшить материальные затраты на терапию, направленную на сохранения беременности и лечение осложнений.

Литература

1. Патент РФ№2495431, опубликован 10.10.2013, «Способ прогнозирования развития репродуктивных нарушений».

2. "Актуальные проблемы невынашивания беременности / Цикл клинических лекций под редакцией д.м.н., профессора, заслуженного деятеля науки РФ Сидельниковой В.М.", М., // Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, отделение терапии и профилактики невынашивания беременности, 2001, с. 61).

3. Патент РФ №2341799, от 20.12.2008 «Способ прогнозирования невынашивания беременности при урогенитальной инфекции».

4. Жуковец И.В., Целуйко С.С. Роль NF-kB и цитокинов в формировании плацентарной недостаточности у женщин с ожирением на фоне дисфункции гипоталамуса // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. - 2015. - выпуск 56. - С. 62-66.

5. Способ прогнозирования репродуктивной функции у девочек с гипоталамическим синдромом пубертатного периода, №2438136, 27.12.2011 г.

Изобретение относится к клинической медицине, в частности к акушерству и гинекологии, и касается прогнозирования репродуктивных нарушений у женщин репродуктивного возраста с дисфункцией гипоталамуса. Сущность предлагаемого способа заключается в одновременном определении провоспалительного TNF-α и противовоспалительного IL-10 цитокинов в аспирате из полости матки, поскольку они являются информативными критериями прогнозирования репродуктивных нарушений, и при неблагоприятном прогнозе на беременность TNF-α>20,2 пг/мл, IL-10<4,78 пг/мл; при неблагоприятном прогнозе на вынашивание беременности TNF-α 18,9-20,1 пг/мл, IL-10 6,05-4,79 пг/мл, при благоприятном - TNF-α 15,0-18,8 пг/мл, IL-10 6,06-11,07 пг/мл. Изобретение обеспечивает раннее прогнозирование репродуктивных нарушений у женщин репродуктивного возраста с дисфункцией гипоталамуса на этапе прегравидарной подготовки (до наступления беременности), дает возможность своевременного проведения коррекции нарушений, что позволит предупредить репродуктивные потери, ускорить реализацию генеративной функции и уменьшить материальные затраты на терапию, направленную на сохранения беременности и лечение осложнений. 3 пр., 3 ил.

Способ прогнозирования развития репродуктивных нарушений у женщин репродуктивного возраста с дисфункцией гипоталамуса, включающий определение в аспирате из полости матки показателей клеточного звена иммунитета - провоспалительного и противовоспалительного цитокинов, отличающийся тем, что забор содержимого полости матки осуществляют на 21 день менструального цикла, а в качестве маркеров клеточного звена иммунитета определяют уровень провоспалительного цитокина TNF-α и противовоспалительного цитокина IL-10, при этом при TNF-α>20,2 пг/мл, IL-10<4,78 пг/мл - неблагоприятный прогноз на наступление беременности, при TNF-α 18,9-20,1 пг/мл, IL-10 6,05-4,79 пг/мл - неблагоприятный прогноз на вынашивание беременности.