КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ТРАВЫ Российский патент 2018 года по МПК A61K36/882 A61K36/23 A61K36/286 A61K36/481 A61K36/537 A61K36/65 A61K36/69 A61K36/736 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к применению компонентов средства традиционной китайской медицины (ТКМ) для активации АТФ-чувствительных калиевых каналов (К_АТФ каналов).

Все документы, цитированные в данном тексте («цитированные здесь документы»), и все документы, цитированные или на которые сделана ссылка в цитированных здесь документах, включены посредством ссылки во всей их полноте для всех целей.

Утверждения, что любой из различных документов и т.д., цитированных в данном тексте, является прототипом к настоящему изобретению, нет.

ВВЕДЕНИЕ

MLC 601 (NeuroAid) демонстрирует многообещающие результаты в постинсультной реабилитации пациентов (Chen et al., 2009). Он сочетает в себе 9 трав и 5 компонентов животного происхождения. Также теперь доступна упрощенная формула MLC601 под названием MLC901 (NurAid II, Neuroaid II или Neuroaid2), основанная на своих 9 растительных компонентах. В ряде стран и в Азии и на Ближнем Востоке при помощи MLC-601 в настоящее время проводится лечение пациентов, перенесших инсульт. В Азии продолжается многоцентровое, рандомизированное, двойное слепое плацебо-контролируемое исследование по изучению эффективности средства MLC601 китайской медицины в послеинсультной реабилитации (CHIMES) (Venketasubramanian et al., 2009). Безопасное воздействие MLC601 на гемостаз, гематологию и биохимию было установлено как у обычных субъектов, так и пациентов, перенесших инсульт (Gan et al., 2008; Young et al., 2010). Его очевидная эффективность в повышении скорости мозгового кровотока (Shahripour et al., 2011) и реабилитации после инсульта, даже через несколько месяцев после инсульта (Chen et al., 2009), являются сильными аргументами для проведения фундаментальных исследований для лучшего понимания на животных моделях, а также на клеточном и молекулярном уровнях, как MLC901 работает. Ранее авторами было продемонстрировано на грызунах, что и MLC601 и MLC901 повышают выживаемость, защищают мозг от фокального ишемического повреждения и резко снижают функциональные дефициты, вызванные инсультом (Heurteaux et al., 2010). Кроме того, на модели глобальной ишемии, имитирующей остановку сердца, было показано, что MLC901 предотвращает и некроз, и апоптоз нейронов гиппокампа и улучшает восстановление как двигательной, так и когнитивной функций (Quintard et al., 2011).

Среди многих возможных механизмов благоприятного воздействия MLC601 или MLC901 против ишемии авторами было установлено, что эти средства стимулируют экспрессию BDNF [мозговой нейротрофический фактор], усиливают нейрогенез, способствуют пролиферации клеток и стимулируют рост аксонов. Кроме того, Akt сигнальный путь, который, как известно, участвует в выживаемости клеток, по-видимому, имеет решающее значение в защитном эффекте MLC901, и средство ТКМ предотвращает ненормально увеличенную оксидацию липидов, вырабатываемую при ишемии (Quintard et al., 2011).

Для поддержания функции головной мозг требует постоянного поступления кислорода и глюкозы. Нейроны являются чрезвычайно уязвимыми к гипоксическому повреждению. В клинических состояниях, таких как церебральная ишемия, в течение нескольких минут тяжелой гипоксии происходит безвозвратная потеря нервных функций. Ионный гомеостаз (Na⁺, K⁺, Ca²⁺, Cl^-) ткани головного мозга сильно нарушается и нейроны деполяризуются последующую кислородную депривацию, что ведет к набуханию, кальциевой перегрузке, а затем к гибели нейронов ((Dirnagl et al., 1999; Lee et al., 2000, Obrenovitch, 2008). Поэтому в ишемических состояниях внутриклеточный уровень АТФ существенно падает, поскольку отношение АДФ/АТФ резко увеличивается, К_АТФ каналы активируются, в результате чего происходит гиперполяризация мембраны (Amoroso et al., 1990; Ashcroft and Ashcroft, 1990; Mourre et al., 1989). Такая гиперполяризация предупреждает на короткий период массовое высвобождение эксайтотоксичного глутамата. Устойчивая активация К_АТФ каналов была предложена в качестве одного из возможных путей как нейропротективное действие против ишемии головного мозга и действительно было показано, что К_АТФ открыватели обладают нейропротективным действием (Blondeau et al., 2000; Heurteaux et al., 1993; Heurteaux et al., 1995; Lauritzen et al., 1997, Liss and Roeper, 2001).

Представленная здесь работа создана для исследования терапевтической эффективности MLC901 на клеточной модели кислородно-глюкозной депривации, которая специфически имитирует быстрое обеднение кислородом и глюкозой, наблюдаемое при ишемии in vivo. Гибель нейронов, индуцированная кислородно-глюкозной депривацией, ингибируется глибенкламидом, ингибитором К_АТФ каналов. Активация этих каналов дает возможность клеткам выживать. Среди интересных кандидатов на нейропротекцию против ишемии в данной работе продемонстрирован очень интересный активирующий эффект на К_АТФ каналы.

АТФ-чувствительные калиевые каналы представляют собой тип калиевого канала, который ингибируется АТФ и активируется АДФ, когда уровень АДФ снижается. Поскольку К_АТФ каналы имеют широкие и важные физиологические функции, они становятся мишенью для лекарств. Открыватели К_АТФ каналов (также известные как открыватели калиевых каналов (ОКК) [KSOs или PSOs]) представляют структурно-различающуюся группу соединений, которые действуют как активаторы (агонисты) активности К_АТФ каналов. Примеры открывателей калиевых каналов [PSOs] включают пинацидил, кромакалим и диазоксид.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к применению компонентов Neuroaid2 для активации К_АТФ каналов и в лечении различных заболеваний и расстройств. Компоненты Neuroaid2 выбирают из группы, в состав которой входят: Salviae Miltiorrhizae, Prunus Persica; Polygalae; acori tatarinowii; Astragali; Paeoniae Rubra; Chuanxiong; Carthamus tinctorius; и angelicae sinensis, и выбранные компоненты Neuroaid2 содержат по меньшей мере Astragali, Chuanxiong и angelicae sinensis.

Варианты осуществления настоящего изобретения включают применение компонентов Neuroaid2 для активации АТФ-чувствительных калиевых каналов. Применения компонентов Neuroaid2 включают in vivo, in vitro и ex vivo применения. Предполагается, что с помощью активации К_АТФ каналов можно эффективно лечить различные заболевания и состояния.

Примеры применения компонентов Neuroaid2 и заболевания/состояния, которые можно лечить с помощью компонентов Neuroaid2: включают ожирение, недержание (предпочтительно недержания мочи), гипертония, предупреждение ишемического или реперфузионного повреждения; лечение гиперинсулинемии или гиперинсулинизма; лечение гипогликемии; предупреждение перехода от предиабета к диабету; лечение сахарного диабета II типа; коррекция дефектов секреции инсулина и чувствительности к инсулину, способствующих предиабету и диабету II типа; сохранение функции поджелудочной железы у диабетиков I типа; лечение гиперлипидемии; предупреждение увеличения веса у людей, которые предрасположены к ожирению; лечение метаболического синдрома (или синдрома X); лечение синдрома поликистоза яичников; лечение увеличение веса, дислипидемии, или нарушения толерантности к глюкозе у лиц, получавших антипсихотические препараты; предупреждение увеличения веса, дислипидемии, или нарушения толерантности к глюкозе у лиц, получавших антипсихотические препараты; лечение любого заболевания, когда гиперлипидемия, гиперинсулинемия, гиперинсулинизм, гиперлипидемия, гиперфагия или ожирение являются факторами, способствующими тяжести или прогрессированию заболевания, включая, но не ограничиваясь этим, синдром Прадера-Вилли, синдром Фрелиха, синдром Коэна, синдром Саммита (Summit Syndrome), синдром Альстрема, синдром Берьесона, синдром Барде-Бидля, гиперлипопротеинемию типа I, II, III и IV; нейродегенерацию; инсульт; ишемию; эпилепсию; боль; гиперактивный мочевой пузырь; синдром раздраженного кишечника; выпадение волос; облысение; алопецию; мужскую эректильную дисфункцию; женские сексуальные расстройства; преждевременные роды; доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ); дисменорею; заболевания коронарной артерии; стенокардию; гиперактивность дыхательных путей; расстройства пищевого поведения; использование в качестве противоопухолевого агента (например, для лечения рака головного мозга); заболевания скелетных мышц, такие как врожденная миотония и гипокалиемический паралич; использование в качестве сосудорасширяющего средства; астму; остановку нормального сердцебиения для выполнения кардиологических, аортальных, нервно-сосудистых и кардиопульмональных операций по трансплантации органов и других соответствующих операций; импотенцию; лечение аритмии; диабет (например, сахарный диабет I типа или II типа); инсулинорезистентность; лечение чувствительной кожи человека; сердечную недостаточность; периферические сосудистые расстройства; инсулиному; врожденный гиперинсулинизм; ретинальную ишемию; сокращение потребления жиросодержащих продуктов; гипогликемию; депрессию или связанные с депрессией расстройства настроения; заболевания/состояния, на которые благоприятное действие оказывает нейропротекция (см. обсуждение ниже); и нейрокондиционирование (neuroconditioning). Другие области применения и заболевания/состояния, которые можно лечить успешно, включают заболевания/состояния, перечисленные в WO 2007/106049, WO 2010/053456 и WO 2010/110755.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

Фигура 1. Нейропротективное действие MLC901 на гибель нейронов, вызванную кислородо-глюкозной депривацией (КГД), и ингибирование глибенкламидом.

Кортикальные нейроны в культуре лечили с помощью КГД в течение 2 часов. MLC901 (1 мкг/мл) применили за два часа до КГД (пред-КГД), во время КГД (КГД) или через два часа после КГД (пост-КГД). Глибенкламид применили после КГД за 30 мин до применения MLC901. Гистограммы показывают выживание нормальных клеток после лечения MLC901 и глибенкламидом. Глибенкламид (10 μM) применяли в отдельности или за 30 мин до MLC901. В обоих парадигмах глибенкламид ингибировал индуцированную MLC901 защиту против повреждения от КГД (n=12 чашек на экспериментальную группу, *** P<0,001 против группы, получающей носитель, и ^## P<0,001 против группы с MLC901).

Фигура 2. Влияние MLC901 на эндогенные К_АТФ токи в INS-R9 клетках. Следы тока, зарегистрированные в контрольных состояниях и в присутствии только MLC901 (1 μг/мл), MLC901 (1 μг/мл) + пинацидил (10 μM) или MLC901 (1 μг/мл) + пинацидил (10 μM) + глибенкламид + (10 μM).

Фигура 3. Влияние MLC901 на К_АТФ каналы (Kir 6.1/SUR2), экспрессированные в ооцитах Xenopus.

(А) Типичные следы тока зарегистрированы в контрольных состояниях (90 K, n=6), в присутствии только азида (3 мМ) или азида + пинацидил (10 μM) или азида + пинацидил + глибенкламид (10 μM) (n=6 на каждое состояние). (В) Типичные следы тока зарегистрированы в контрольных состояниях (90 K, n=6) и в присутствии только азида (3 мм), азида + MLC901 (1 μг/мл) или азида + MLC901 (1 μг/мл) + глибенкламид (10 μM) (n=6 на каждое состояние). (С) Цельноклеточные вольт-амперные характеристики получены при линейном изменении напряжения в диапазоне от -160 до +80 мВ в контрольных состояниях (90 K), и в присутствии только азида (3 мМ), азида + MLC901 (1 μг/мл) или азида + MLC901 (1 μг/мл) + глибенкламид (10 μM) (n=6 на каждое состояние). (D) Соответствующие гистограммы показывают амплитуду тока при -120 мВ для всех тестируемых состояний (n=6; ** P<0,01 и *** P<0,001).

Фигура 4: Влияние NA4 (1 μг/мл) на К_АТФ токи в ооцитах Xenopus (n=4).

Токи были зарегистрированы в симметричном контрольном состоянии калия. Активность К_АТФ каналов оценивали путем внутриклеточного АТФ истощения с помощью 3 мМ азида натрия.

Протокол перфузии: ток сначала был зарегистрирован в контрольном состоянии (симметричный раствор калия) (90 K+). Затем активность канала увеличили на 6 минут перфузии 3 мМ азида натрия, которую поддерживали в течение всего эксперимента. MLC901 или другие продукты серии перфузировали через 6 минут после перфузии с азидом натрия. Во всех экспериментах было определено ингибирование зарегистрированных токов глибенкламидом (glib) (10 μM).

Фигура 5: Влияние NA4 (1 μг/мл) на КАТФ токи в ооцитах (n=4).

Токи были зарегистрированы в симметричном контрольном состоянии калия. Активность К_АТФ каналов оценивали путем внутриклеточного истощения АТФ с помощью 3 мМ азида натрия.

Протокол перфузии: ток сначала был зарегистрирован в контрольном состоянии (симметричный раствор калия). Затем активность канала увеличили на 6 минут перфузией 3 мМ азида натрия, которую поддерживали в течение всего эксперимента. MLC901 или другие продукты серии перфузировали через 6 минут после перфузии с азидом натрия. Во всех экспериментах было определено ингибирование зарегистрированных токов глибенкламидом (glib) (10 μM).

Фигура 6:

2 образца, NeuroAid2 (наш контрольный образец с 9 растениями) и «NA3» (chuanxiong, sinensis, astragalus [астрагал] (корень астрагала)) активизируют канал.

ГЛОССАРИЙ ТЕРМИНОВ

Этот раздел предназначен в качестве руководства по толкованию или объему слов и фраз, приведенных ниже (а также их соответствующих грамматических вариантов). Дальнейшее руководство по интерпретации или объему определенных слов и фраз, как используются здесь (а также их соответствующих грамматических вариантов), могут быть дополнительно найдены в других разделах данной спецификации.

Для удобства и для общего представления об изобретении данное описание следует рассматривать как включающее в себя один или по меньшей мере один и в единственном числе также включает множественное число, если из контекста явно не следует иное. Так, например, термин «агент» включает ссылку на один агент, а также на несколько агентов (в том числе смеси агентов). Кроме того, следует отметить, что термин «или» обычно используется в его значении, включающем «и/или», если содержание явно не диктует иное.

Как здесь применяется, термин «примерно» используется в отношении числовых значений, например, от числового значения, предпочтительно , более предпочтительно , еще более предпочтительно и наиболее предпочтительно или . Где необходимо, слово «примерно» может быть опущено из формулы изобретения.

Термин «пациент с мозговым инсультом» используется авторами в отношении пациента, перенесшего ишемический или геморрагический мозговой инсульт. Мозговой инсульт - это внезапное и перманентное отмирание клеток мозга, которое происходит, когда приток крови блокируется и кислород не может доставляться в мозг, ишемический инсульт главным образом проявляется, когда приток крови не обеспечивается из-за закупоривания (именуемый «тромбозом» артерии) или из-за отрыва тромба, находящегося в артерии (именуемый «эмболическим инсультом»). Геморрагический инсульт происходит в результате разрыва стенки артерии и выхода крови в окружающую часть мозга. Геморрагический инсульт, как ишемический инсульт, вызывает отмирание ткани, лишая мозг притока крови и кислорода, и приводит к ряду неврологических нарушений (нарушение моторики, речи), а также к функциональным нарушениям.

Как применяется в данном описании, термин «содержащий» означает «включающий». Так, например, композиция, «содержащая» компоненты Neuroaid2, может состоять исключительно из компонентов Neuroaid2 или она может включать один или несколько дополнительных компонентов (например, дополнительный активный агент, фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент и т.д.). Таким образом, следует понимать, что термин «содержащий» включает в свой объем варианты осуществления, когда присутствуют один или несколько дополнительных неуказанных элементов, а также более ограничительные термины «состоящий в основном из» и «состоящий из или в состав которого входят» (то есть, когда присутствуют только указанные элементы). Термин «включающий» следует интерпретировать аналогичным образом, чтобы охватить «включающий, но не ограничивающийся этим…", и более ограничительные термины «состоящий в основном из» и «состоящий из».

Термин «экстракция», используемый здесь, включает ссылку на метод разделения, в котором растительный материал (например, измельченные части растения, независимо от того, свежие или сушеные) вводят в контакт с жидким растворителем, чтобы передать один или несколько компонентов из растительного материала в растворитель.

Термин «in vivo», используемый здесь, включает ссылку на использование целого, живого организма. Это контрастирует с термином «in vitro», когда целый, живой организм не используется. Термин «in vitro» следует понимать как включающий, в частности, применения «ex vivo», когда могут использоваться клетки, ткани и т.д., которые не являются частью целого, живого организма (например, клетки или ткани из клеточной или тканевой культуры, биопсии, мертвые организмы и т.д.). Другие не ограничивающие примеры «in vitro» относятся к использованию клеточных экстрактов или лизатов.

Термины «пациент» и «субъект» используются здесь взаимозаменяемо и термины включают ссылку на любой человеческий или не относящийся к человеку животный организм (предпочтительно млекопитающее), который должен пройти лечение при использовании настоящего изобретения. Тем не менее, следует понимать, что «пациент» или «субъект» не означает, что симптомы присутствуют. Термин «млекопитающее», используемый здесь, относится к любому члену класса млекопитающих, в том числе, без ограничения, людям и приматам, таким как шимпанзе и другие виды обезьян и мартышек; сельскохозяйственным животным, таким как крупный рогатый скот, овцы, свиньи, козы и лошади; домашним/сопутствующим животным, таким как собаки и кошки; лабораторным животным (например, кролики и грызуны, такие как мыши, крысы и морские свинки и т.п.). Предпочтительно млекопитающим является человек.

Термин «инсульт» относится к внезапной смерти клеток тканей из-за недостатка кислорода, когда кровоток нарушается в результате закупорки или разрыва артерии. Инсульт является острым сосудистым расстройством, которое может произойти в мозгу или в сердечной системе. Последнее состояние известно в медицине как «инфаркт миокарда» и более известно как «инфаркт».

Термин «лечение», используемый здесь, следует толковать широко, он включает ссылку на любые и все применения, которые излечивают болезненное состояние или симптомы (например, уменьшают тяжесть заболевания или симптомы, снижают частоту симптомов и т.д.), предотвращают появление заболевания, или иначе не допускают, препятствуют, задерживают или поворачивают в сторону улучшения заболевание или другие нежелательные симптомы в любой форме, даже если лечение в конечном итоге не увенчается успехом. Лечение может проводиться в отношении пациента, у которого уже наблюдается расстройство, или в отношении пациента, который склонен к появлению расстройства или у которого расстройство необходимо предотвратить. Таким образом, термин «лечение» (и чтобы избежать неясностей, его грамматические варианты, такие как «лечить» и т.д.) может относиться к терапевтическому лечению или к профилактическому или превентивному лечению.

Термины «заболевание», «расстройство» и «состояние» могут использоваться здесь взаимозаменяемо, если из контекста явно не следует иное.

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют то же значение, которое обычно понимается любым специалистом в области техники, к которой относится изобретение.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

В соответствии с первым аспектом настоящего изобретения предлагается применение трех или более (т.е. 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9) компонентов Neuroaid2 для активации К_АТФ каналов, отличающееся тем, что три или более компонентов Neuroaid2 содержат: Chuanxiong, предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong); angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis); и Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali). АТФ-чувствительные калиевые каналы могут открываться (активироваться) in vivo или in vitro (последнее включает применения ex vivo, а также применения in vitro, которые не являются применениями ex vivo). По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления применение in vivo трех или более компонентов Neuroaid2 для активации К_АТФ каналов для лечения заболевания/расстройства у пациента с помощью активации К_АТФ каналов.

В соответствии со вторым аспектом настоящего изобретения предлагается способ лечения заболевания/расстройства у пациента, отличающийся тем, что заболевание/расстройство можно лечить с помощью активации К_АТФ каналов, и тем, что способ содержит введение трех или более компонентов Neuroaid2 пациенту, причем три или более компонентов Neuroaid2 содержат: Chuanxiong, предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong); angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis); и Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

В соответствии с третьим аспектом настоящего изобретения предлагается применение трех или более компонентов Neuroaid2 в способе лечения заболевания/расстройства у пациента, отличающемся тем, что заболевание/расстройство можно лечить с помощью активации К_АТФ каналов, и тем, что три или более компонентов Neuroaid2 содержат: Chuanxiong, предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong); angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis); и Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

В соответствии с четвертым аспектом настоящего изобретения предлагается применение трех или более компонентов Neuroaid2 при изготовлении лекарственного средства для лечения заболевания/расстройства, отличающемся тем, что заболевание/расстройство можно лечить с помощью активации К_АТФ каналов, и тем, что три или более компонентов Neuroaid2 содержат: Chuanxiong, предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong); angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis); и Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

В соответствии с пятым аспектом настоящего изобретения предлагается композиция или смесь, содержащая три или более компонентов Neuroaid2, отличающаяся тем, что три или более компонентов Neuroaid2 содержат: Chuanxiong, предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong); angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis); и Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

Вышеуказанные аспекты изобретения описаны более подробно ниже, в последующих разделах приводится руководство по реализации и объему различных аспектов изобретения и, соответственно, изобретения, как определено в патентной формуле (пункты 1-5, соответствующие аспектам изобретения с 1-го по 5-ый, соответственно).

Активация К_АТФ каналов

Различные аспекты настоящего изобретения относятся к активации К_АТФ каналов с помощью компонентов Neuroaid2. При помощи компонентов Neuroaid2 К_АТФ каналы могут активироваться в одном или нескольких типах клеток. Например, К_АТФ каналы могут активироваться в одном или нескольких из следующих типов клеток: нервные клетки, гладкомышечные клетки (напр., сосудистые гладкомышечные клетки, гладкомышечные клетки мочевого пузыря), кардиомиоциты, панкреатические бета-клетки, клетки жировой ткани и клетки скелетных мышц. По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления различных аспектов настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 предназначены для активации К_АТФ каналов в клетках, которые не являются нервными клетками.

К_АТФ каналы встречаются в различных локализациях клеток, включая плазменную мембрану, митохондрии («mitoК_АТР») и ядерные («nucК_АТР»). Предполагается, что компоненты Neuroaid2 могут применяться для активации К_АТФ каналов в одной или нескольких из этих локализаций. Тем не менее, по меньшей мере, в некоторых вариантах осуществления обеспечивается применение компонентов Neuroaid2 для активации К_АТФ каналов плазменной мембраны. По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается применение компонентов Neuroaid2 для активации сарколеммальных К_АТФ каналов.

Компоненты Neuroaid2 предназначены для применения в различных способах лечения с помощью активации К_АТФ каналов.

Компоненты Neuroaid2

Компоненты Neuroaid2, используемые в различных аспектах изобретения, выбирают из группы, в состав которой входят:

1. Salviae Miltiorrhizae (красный шалфей или Dan Shen), например, его корень (radix) и/или корневище (rhizoma) (в предпочтительных вариантах осуществления, radix, или radix et rhizome);

2. Prunus Persica (персик или Tao ren), предпочтительно его семена;

3. Polygalae (истод тонколистный, Polygala tenuifolia Willd., Polygala sibirica L. или Yuanzhi), предпочтительно его корень (т.е. radix polygalae);

4. acori tatarinowii (аир травянистый или Shichangpu), предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma acori tatarinowii);

5. Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali);

6. Paeoniae Rubra (красный пион, Paeonia lactiflora Pall, Paeonia veitchii Lynch или Chi Shao), предпочтительно корень (т.е. radix paeoniae rubra);

7. Chuanxiong; предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong);

8. Carthamus tinctorius (цветок сафлора красильного или HongHua), предпочтительно его цветы; и

9. angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis).

Три или более компонентов Neuroaid2, выбранные из вышеуказанных 9 компонентов Neuroaid2 и которые содержат Chuanxiong, angelica sinensis и Astragali, в настоящем документе именуются «выбранные компоненты Neuroaid2».

Комбинации компонентов Neuroaid2 могут быть соответственно аддитивными или синергическими. «Аддитивный эффект» относится к благоприятному фармацевтическому эффекту, создаваемому комбинацией, который больше, чем эффект от любого из компонентов комбинации, когда они представлены по отдельности. «Синергический» эффект относится к благоприятному фармацевтическому эффекту, создаваемому комбинацией, который больше, чем сумма эффектов этих компонентов комбинации, когда они представлены по отдельности.

В различных аспектах изобретения используются 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 из вышеупомянутых компонентов Neuroaid2, причем указанные 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 компонентов Neuroaid2 содержат: Chuanxiong, предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong); angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis); и Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

В некоторых вариантах осуществления используются по меньшей мере 4 компонента Neuroaid2, т.е. Chuanxgiong, angelica sinensis, Astragali и по меньшей мере один дополнительный компонент Neuroaid2. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления первого, второго, третьего, четвертого и пятого аспектов изобретения используются по меньшей мере 4 компонента Neuroaid2 и, следовательно, в применениях и способах, как описано здесь, могут использоваться как минимум 4 компонента Neuroaid2, и аналогично этому композиции и смеси, как описаны здесь, могут содержать по меньшей мере 4 компонента Neuroaid2.

В некоторых вариантах осуществления используются по меньшей мере 5 компонентов Neuroaid2, т.е. три или более выбранных компонентов Neuroaid2 представляют собой по меньшей мере 5 компонентов Neuroaid2, которые содержат Chuanxgiong, angelica sinensis и Astragali.

В некоторых вариантах осуществления используются по меньшей мере 6 компонентов Neuroaid2, т.е. три или более выбранных компонентов Neuroaid2 представляют собой по меньшей мере 6 компонентов Neuroaid2, которые содержат Chuanxgiong, angelica sinensis и Astragali.

В некоторых вариантах осуществления используются по меньшей мере 7 компонентов Neuroaid2, т.е. три или более выбранных компонентов Neuroaid2 представляют собой по меньшей мере 7 компонентов Neuroaid2, которые содержат Chuanxgiong, angelica sinensis и Astragali.

В некоторых вариантах осуществления используются по меньшей мере 8 компонентов Neuroaid2, т.е. три или более выбранных компонентов Neuroaid2 представляют собой по меньшей мере 8 компонентов Neuroaid2, которые содержат Chuanxgiong, angelica sinensis и Astragali.

В некоторых вариантах осуществления используются все 9 компонентов Neuroaid2.

В некоторых вариантах осуществления используются только 3 компонента Neuroaid2, т.е. Chuanxgiong, angelica sinensis и Astragali.

В некоторых вариантах осуществления используются только 4 компонента Neuroaid2, т.е. три или более выбранных компонентов Neuroaid2 представляют собой 4 компонента Neuroaid2, содержащих Chuanxgiong, angelica sinensis и Astragali.

В некоторых вариантах осуществления используются только 5 компонентов Neuroaid2, т.е. три или более выбранных компонентов Neuroaid2 представляют собой 5 компонентов Neuroaid2, содержащих Chuanxgiong, angelica sinensis и Astragali.

В некоторых вариантах осуществления используются только 6 компонентов Neuroaid2, т.е. три или более выбранных компонентов Neuroaid2 представляют собой 6 компонентов Neuroaid2, содержащих Chuanxgiong, angelica sinensis и Astragali.

В некоторых вариантах осуществления используются только 7 компонентов Neuroaid2, т.е. три или более выбранных компонентов Neuroaid2 представляют собой 7 компонентов Neuroaid2, содержащих Chuanxgiong, angelica sinensis и Astragali.

В некоторых вариантах осуществления используются только 8 компонентов Neuroaid2, т.е. три или более выбранных компонентов Neuroaid2 представляют собой 8 компонентов Neuroaid2, содержащих Chuanxgiong, angelica sinensis и Astragali.

В некоторых вариантах осуществления используются все 9 компонентов Neuroaid2, т.е. три или более выбранных компонентов Neuroaid2 представляют собой все 9 компонентов Neuroaid2.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления выбранные компоненты Neuroaid2 не содержат Salviae Miltiorrhizae.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления выбранные компоненты Neuroaid2 не содержат Prunus persica (персик или Tao ren)

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления выбранные компоненты Neuroaid2 не содержат Polygalae (истод тонколистный, Polygala tenuifolia Willd., Polygala sibirica L. или Yuanzhi).

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления выбранные компоненты Neuroaid2 не содержат acori tatarinowii (аир травянистый или Shichangpu).

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления выбранные компоненты Neuroaid2 не содержат Paeoniae Rubra (красный пион, Paeonia lactiflora Pall, Paeonia veitchii Lynch или Chi Chao)/

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления выбранные компоненты Neuroaid2 не содержат Carthamus tinctorius (сафлор красильный или HongHua).

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения выбранные компоненты Neuroaid2 содержат (и по выбору состоят из):

i. Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

ii. Chuanxiong; предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong)

iii. angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis);

iv. Polygalae (истод тонколистный, Polygala tenuifolia Willd., Polygala sibirica L. или Yuanzhi), предпочтительно его корень (т.е. radix polygalae);

v. Salviae Miltiorrhizae (красный шалфей или Dan Shen), например его корень (radix) и/или корневище (rhizoma) (в предпочтительных вариантах осуществления, radix или radix et rhizome).

Соответственно, предусматриваются варианты осуществления настоящего изобретения (например, варианты осуществления согласно первому, второму, третьему, четвертому и пятому аспектам изобретения), в которых используются 5, 6, 7, 8 или 9 компонентов Neuroaid2 и в которых 5, 6, 7, 8 или 9 компонентов Neuroaid2 содержат:

i. Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

ii. Chuanxiong; предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong)

iii. angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis);

iv. Polygalae (истод тонколистный, Polygala tenuifolia Willd., Polygala sibirica L. или Yuanzhi), предпочтительно его корень (т.е. radix polygalae);

v. Salviae Miltiorrhizae (красный шалфей или Dan Shen), например его корень (radix) и/или корневище (rhizoma) (в предпочтительных вариантах осуществления, radix или radix et rhizome).

Таким образом, в одном варианте осуществления согласно пятому аспекту настоящего изобретения предлагается композиция или смесь, отличающаяся тем. что указанная композиция или смесь содержит (и, по выбору, в качестве активных ингредиентов состоит из) три или более компонентов Neuroaid2, причем три или более компонентов Neuroaid2 представляют собой 5, 6, 7, 8 или 9 компонентов Neuroaid2, которые содержат (и, по выбору состоят из (т.е., где используются 5 компонентов Neuroaid2)):

i. Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

ii. Chuanxiong; предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong)

iii. angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis);

iv. Polygalae (истод тонколистный, Polygala tenuifolia Willd., Polygala sibirica L. или Yuanzhi), предпочтительно его корень (т.е. radix polygalae);

v. Salviae Miltiorrhizae (красный шалфей или Dan Shen), например его корень (radix) и/или корневище (rhizoma) (в предпочтительных вариантах осуществления, radix или radix et rhizome)

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения выбранные компоненты Neuroaid2 содержат (и по выбору состоят из):

i. Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

ii. Chuanxiong; предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong)

iii. angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis);

iv. Polygalae (истод тонколистный, Polygala tenuifolia Willd., Polygala sibirica L. или Yuanzhi), предпочтительно его корень (т.е. radix polygalae).

Соответственно, предусматриваются варианты осуществления настоящего изобретения (например, варианты осуществления согласно первому, второму, третьему, четвертому или пятому аспекту изобретения), где используются 4, 5, 6, 7, 8 или 9 компонентов Neuroaid2 и где эти 4, 5, 6, 7, 8 или 9 компонентов Neuroaid2 сожержат:

i. Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

ii. Chuanxiong; предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong)

iii. angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis);

iv. Polygalae (истод тонколистный, Polygala tenuifolia Willd., Polygala sibirica L. или Yuanzhi), предпочтительно его корень (т.е. radix polygalae).

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения три или более компонентов Neuroaid2 содержат (и по выбору состоят из):

i. Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

ii. Chuanxiong; предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong)

iii. angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis);

iv. Salviae Miltiorrhizae (красный шалфей или Dan Shen), например его корень (radix) и/или корневище (rhizoma) (в предпочтительных вариантах осуществления, radix или radix et rhizome)

Соответственно, предусматриваются варианты осуществления настоящего изобретения (например, варианты осуществления согласно первому, второму, третьему, четвертому или пятому аспекту изобретения), где используются 4, 5, 6, 7, 8 или 9 компонентов Neuroaid2 и где 4, 5, 6, 7, 8 или 9 компонентов Neuroaid2 содержат:

i. Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

ii. Chuanxiong; предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong)

iii. angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis);

iv. Salviae Miltiorrhizae (красный шалфей или Dan Shen), например его корень (radix) и/или корневище (rhizoma) (в предпочтительных вариантах осуществления, radix или radix et rhizome).

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения выбранные три или более компонентов Neuroaid2 состоят из:

i. Astragali (астрагал сладколистный перепончатый или Huang Qi), предпочтительно корень (т.е. radix astragali).

ii. Chuanxiong; предпочтительно его корневище (т.е. rhizoma chuanxiong)

iii. angelicae sinensis (дудник китайский или DanGui), предпочтительно корень (т.е. radix angelicae sinensis);

Другие ингредиенты средства традиционной китайской медицины

Как упоминалось выше, в различных аспектах настоящего изобретения используются три или более компонентов Neuroaid2 (т.е. 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 компонентов Neuroaid2), содержащих chuanxiong, angelica sinensis и astragali. По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления изобретения никакие другие ингредиенты средства ТКМ не используются в различных аспектах настоящего изобретения. Однако в других вариантах осуществления один или несколько дополнительных ингредиентов средства ТКМ используются дополнительно (например, один или несколько ингредиентов животного происхождения, такие как например, один или несколько ингредиентов животного происхождения, перечисленные ниже). По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения никакие другие растительные материалы или материалы, полученные из растений (например, растительные экстракты), не используются.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления 1, 2, 3, 4 или 5 из следующих ингредиентов средства ТКМ могут использоваться дополнительно:

1. Buthus martensii (скорпион или Quanxie), предпочтительно его тело (например, высушенное тело скорпиона);

2. Eupolyphaga Seu Seteleophaga (жужелица полевая, Eupolyphaga sinensis Walker, Steleophaga plancyi или Tubiechong), предпочтительно ее тело (например, высушенное тело жужелицы);

3. Calculus Bovis Artifactus (природный или искусственный безоар коровы или Rengong Niuhuang).

4. Comu Saigae Tataricae (рог антилопы или Lingyangjiao) и

5. пиявки (Hirudo, Whitmania pigra Whitman, Hirudo nipponica Whitman Whitmania acranulata Whitman или Shuizhi), предпочтительно ее тело (например, высушенные тела пиявок).

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления согласно различным аспектам настоящего изобретения ни один из перечисленных выше 5 ингредиентов средства ТКМ животного происхождения не используется/не присутствует.

Neuroaid и Neuroaid II

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления согласно различным аспектам изобретения (т.е. первый, второй, третий, четвертый и пятый аспект изобретения) используемые компоненты Neuroaid2 представляют собой девять травяных компонентов NeuroAid II (также известные как NurAid II, Neuroaid2 и MLC901). Девять травяных компонентов NeuroAid II следующие:

Соответственно, по меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения используемые компоненты Neuroaid2 представляют собой девять травяных компонентов, перечисленных в приведенной выше таблице. По выбору, девять компонентов NeuroAid II применяются примерно в таких же соотношениях, как и в Neuroaid II.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления согласно первому, второму, третьему, четвертому и пятому аспектам изобретения используется NeuroAid II. Neuroaid II содержит наряду с декстрином или мальтодекстрином в качестве эксципиента:

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления согласно первому, второму, третьему, четвертому и пятому аспектам изобретения используются 14 компонентов NeuroAid™ (MLC601) от Moleac Pte Ltd. По выбору, 14 компонентов NeuroAid используются примерно в таких же соотношениях, как и в Neuroaid. NeuroAid™ является продуктом ТКМ в виде капсулы, содержащим 9 травяных компонентов и 5 компонентов животного происхождения. NeuroAidTM содержит Radix Astragali (корень астрагала сладколистного перепончатого или Huang Qi), Radix et Rhizoma Salviae Miltiorrhizae (корень красного шалфея или Dan Shen), Radix Paeoniae Rubra (корень красного пиона, Paeonia lactiflora Pall, Paeonia veitchii Lynch или Chi Shao), корневище Ligusticum Chuanxiong [лигустикум чуаньсионский] (Chuan Xiong), radix angelicae sinensis (корень дудника китайского или DanGui), цветок Carthamus Tinctorius [сафлор красильный] (сафлор или HongHua), Prunus Persica (семя персика или Taoren), Radix Polygalae (корень истода тонколистного, Polygala tenuifolia Willd., Polygala sibirica L. или Yuanzhi) и Rhizoma acori Tatarinowii (корневище авира травянистого или Shichangpu), Buthus martensii (высушенное тело скорпиона или Quanxie), высушенные тела пиявок (Hirudo, Whitmania pigra Whitman, Hirudo nipponica Whitman, Whitmania acranulata Whitman или Shuizhi), Eupolyphaga Seu Seteleophaga (высушенное тело жужелицы, Eupolyphaga sinensis Walker, Steleophaga plane yi или Tubiechong), Calculus Bovis Artifac tus (природный или искусственный безоар коровы или Rengong Niuhuang) и Cornu Saigae Tataricae (рог антилопы или Lingyangjiao).

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления согласно первому, второму, третьему, четвертому и пятому аспектам изобретения применяется MLC601. Композиция MLC601 представлена в таблице ниже. MLC601 содержит наряду с декстрином в качестве эксципиента.

Препарат NeuroAid, который может быть зарегистрирован под разными названиями в разных странах (например, Nuraid, Nu-raid, в Южной Африке он продается под названием Strocaid™, или Dangi Piantan Jiaonang™), производится и доступен в продаже в КНР от производителя Tianjin Shitian Pharmaceutical Group Co., Ltd (местонахождение в Китае по адресу: Jianxin Industrial area, Wangwenzhuang town, Xiqing district, Tianjin City, China; Postal Code 300381). Он также поставляется компанией Moleac Pte Ltd (бывшее название Molecular Acupuncture Pte Ltd), являющейся основным обладателем лицензии за пределами КНР (11 Biopolis Way, Helios #09-08 Singapore 138667).

Чтобы избежать неясностей, NeuroAid™ и NeuroAid II не только включает NeuroAid и NeuroAid II соответственно в формах, в которых имеется в настоящее время на рынке, но также включает будущие составы NeuroAid™ и NeuroAid II соответственно, которые могут, например, поставляться на рынок компаниями Tianjin Shitian Pharmaceutical Group Co., Ltd или Moleac Pte Ltd. Такие будущие составы могут, например, отличаться по количествам дозировки или концентрации активных ингредиентов и т.д.

NeuroAid™ также известен как MLC 601 и термины «NeuroAid™» и «MLC 601» могут использоваться взаимозаменяемо. Аналогично NeuroAid II также известен под названием MLC 901, Neuroaid2, NurAid II, NeuroAid II, Regenaid и Nu-rAid II и эти термины могут быть взаимозаменяемыми.

Применения компонентов Neuroaid2

В данной области описаны различные применения в отношении Neuroaid и соответствующих композиций. Смотри, например, WO 2007/106049, WO 2010/053456 и WO 2010/110755 (все принадлежат Moleac Pte. Ltd.), содержание всех трех документов включены в полном объеме, в частности в отношении применений, описанных в них в отношении Neuroaid и соответствующих композиций.

В WO 2007/106049 и WO 2010/053456 описывается применение Neuroaid и соответствующих композиций для лечения инсульта (например, мозгового инсульта и сердечно-сосудистого заболевания (приступ стенокардии, главным образом вследствие инфаркта коронарной артерии)), неврологических расстройств, лечения пациентов с церебральным инфарктом, травмы головного мозга, травмы нервной системы, состояний, связанных с нейропластичностью, травмы головы, остановки сердца, субарахноидального кровоизлияния, апоплексического удара, а также применения в качестве пищевой добавки для обеспечения питания здоровых людей, а также пациентов, перенесших инсульт или страдающих неврологическими расстройствами.

Неврологические расстройства - это расстройства, которые действуют на центральную нервную систему, периферическую нервную систему и вегетативную нервную систему, такие как нейродегенеративные заболевания (например, болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона), эпилепсия, пароксизм, демиелинизирующие заболевания (например, рассеянный склероз), церебральный паралич, травматические повреждения или опухоли головного мозга, спинного мозга и периферических нервов.

Нейропластичность (также именуемая как пластичность мозга или кортикальная пластичность) относится к изменениям, которые происходят в организации головного мозга и его цепей нейронов, в частности, изменения, которые происходят в локализации функций обработки специфической информации. Этот процесс поддерживает изучение новых функций как результат опыта, полученного в процессе развития во взрослое животное, и создания новой информации, при этом здоровые нейроны обходят поврежденные нейроны, пострадавшие от травмы или медицинского состояния.

WO 2010/110755 содержит экспериментальные данные, относящиеся к MLC601 и MLC901. В этом документе демонстрируются положительные эффекты на жизнеспособность клеток, высвобождение ЛДГ, ишемическое повреждение головного мозга, нейропролиферацию и рост аксонов в отношении MLC601 и MLC901.

В WO 2010/110755 предлагается применение Neuroaid и соответствующих композиций, способствующих росту нейронов и пролиферации нейронов или стволовых клеток, например, в травмированных или пораженных болезнью тканях. Термин «рост нейронов» относится к общему направленному наружу росту аксонов и дендритов. Рост нейронов играет важную роль в формировании или развитии синапса.

В WO 2010/110755 предлагается лечение пациентов, имеющих состояние, выбранное из группы, в состав которой входят: психиатрические показания, такие как тревожные расстройства, шизофрения, депрессия и послеродовая депрессия, естественное старение, травматическая гибель клеток головного мозга и другие неврологические проявления, такие как амнезия, боль в спине, головокружение, потеря сознания, фантомная конечность, расстройства обоняния, боли в шее, головные боли, мигрени, спазм и расстройства речи. Другие предлагаемые применения включают лечение: нейродегенерации; травм или заболеваний нервной системы (например, боковой амиотрофический склероз (ALS) и старческое слабоумие); неврологические заболевания, дегенеративные заболевания; инсульт; ревматоидный артрит, дегенеративные мышечные расстройства, заболевания почек, а также заболевания печени.

В WO 2010/110755 также предлагается применение Neuroaid и соответствующих композиций для: общего хорошего состояния нейронов; содействия выживаемости клеток, пролиферации или дифференцировки клеток (например, тем самым упростить in vitro культуру различных клеток, которая может использоваться для тканевой инженерии или терапевтических применений ex vivo); стимуляции дифференцировки стволовых клеток и рекрутинг в больную или поврежденную ткань; лечения пациента, имеющего больную или поврежденную ткань центральной или периферической нервной системы; стимуляции роста клеток; стимуляции контролируемого роста хондроцитов, клеток скелетных мышц, миокарда, гладкомышечных клеток, гепатоцитов, клеток почек или эпителиальных клеток кожи; задержка процессов старения за счет улучшения пролифераций или функций эпителиальных или эпидермальных клеток; стимуляция выживания клеток и роста нейронов, стволовых клеток, хондроцитов, клеток скелетных мышц, миокарда, гладкомышечных клеток, гепатоцитов, клеток почек, островков лангерганса и эпителиальных клеток кожи.

Компоненты Neuroaid2 (например, в виде MLC901), используемые в различных аспектах настоящего изобретения, могут использоваться для одного или нескольких применений, как перечислено выше в отношении WO 2007/106049, WO 2010/053456 или WO 2010/110755, или как иначе предлагается в WO 2007/106049, WO 2010/053456 или WO 2010/110755. Однако, в других вариантах осуществления изобретения компоненты Neuroaid2 не используются для применения, как предлагается выше в отношении WO 2007/106049, WO 2010/053456 или WO 2010/110755, или не используются для применения, как иначе предлагается в WO 2007/106049, WO 2010/053456 или WO 2010/110755.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления изобретения применение компонентов Neuroaid2 для активации К_АТФ каналов предназначается для обеспечения нейропротекции.

Термин «нейропротекция», используемый здесь, включает ссылку на сохранение нервной ткани при риске смерти, например, во время инсульта или сразу же после инсульта. Термин «нейропротекция» (и чтобы избежать неясностей, его грамматические варианты) может соответственно относится к стимуляции или содействию выживаемости клеток, или предотвращению некроза клеток, когда клетка подвергается риску некроза клеток, например, когда клетка травмирована и будет находиться в нормальных условиях (т.е. без вмешательства/лечения), с высокой вероятностью гибели. Соответственно, следует понимать, что термины «нейропротекция», стимуляция или содействие выживаемости клеток, а также предотвращение некроза клеток могут использоваться как синонимы, если из контекста не следует иное.

Нейропротекция может использоваться для защиты клеток от стресса (например, недостаток кислорода, недостаток глюкозы, глутаматный стресс, свободные радикалы) в нервной системе, например в головном мозге. Кроме того, способствуя выживанию, можно предупредить или замедлить заболевания или предупредить или замедлить дальнейшую дегенерацию нервной системы у лиц, страдающих от дегенеративного расстройства.

Различные факторы могут поставить клетки перед риском гибели, примеры включают: травмы, повреждения, острые заболевания и/или расстройства, хронические заболевания и/или расстройства, такие как нейродегенеративные заболевания. Нейродегенерация может быть вызвана заболеваниями, выбранными из группы: болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (ALS), абсцесс мозга, ишемия мозга, атрофия мозга, связанная с диабетом, мозговая аутосомно-доминантная артериопатия с субкортикальными инфарктами и лейкоэнцефалопатией (CADASIL), цереброваскулярные расстройства, кортикобазальная ганглиозная дегенерация (CBGD), хроническая ишемия, синдром Крейцфельда-Якоба, синдром Денди-Уокера, мышечная дистрофия Дюшенна, старческое слабоумие, деменция, связанная с синдромом приобретенного иммунодефицита (AIDS), энцефаломиелит, эссенциальный тремор, атаксия Фридрейха, болезнь Герстманна-Штройслера-Шейнкера, болезнь Хантингтона, гидроцефалия, гипоксия, семейная фатальная инсомния, преходящая ишемическая атака, куру, синдром Ландау-Клеффнера, болезнь с тельцами Леви, болезнь Мачадо-Джозефа, бактериальный и вирусный менингит, сопутствующие мигрени расстройства, миелит, оливомостомозжечковые атрофии, ассоциированная с пантотенаткиназой нейродегенерация, болезнь Паркинсона, полиомиелит, постполиомиелитный синдром, прионные болезни, ложная опухоль головного мозга, синдром Шая-Дрейджера, болезнь Штейнерта, инфантильные спазмы, прогрессирующий супрануклеарный паралич, сирингомиелия, таламические заболевания, тикозные расстройства, синдром Туретта, синдром увеоменингоэнцефалита, глобальная и фокальная ишемия и другие сердечно-сосудистые заболевания у предрасположенных к ним субъектов.

Внешние факторы также могут поставить клетки перед риском гибели, такие как инфекции, токсическое воздействие (например, связанные с радиацией, химическими веществами или лекарствами), медицинское или хирургическое лечение (например, открытие полости черепа). Диагностические методы могут также поставить клетки перед риском гибели, так как диагностические методы могут привести к образованию свободных радикалов или иным образом имеют цитотоксические эффекты, такие как рентгеновские лучи и химиотерапия. Соответственно, по меньшей мере в некоторых вариантах осуществления клетки подвергаются риску гибели из-за инфекции, токсического воздействия (например, связанного с радиацией, химическими веществами или лекарствами) или в результате медицинского, хирургического или диагностического лечения.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления могут применяться компоненты Neuroaid2 для стимуляции выживания клеток нервной системы, которые подвергаются риску гибели из-за заболевания, расстройства, травмы или состояния центральной (головного или спинного мозга) и/или периферической нервной системы. Примеры включают рак нервной системы, послеоперационное повреждение нерва, травматическое повреждение нерва, например, в результате травмы спинного мозга, нарушение миелинизации нервных волокон, постишемическое повреждение, например, в результате инсульта, мультиинфарктное слабоумие, рассеянный склероз, нервная дегенерации, связанная с сахарным диабетом, нервно-мышечная дегенерация, шизофрения, депрессия (в том числе, например, послеродовая депрессия, биполярное расстройство, глубокая депрессия и т.д.), психические расстройства, естественное старение, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, слабоумие или болезнь Хантингтона, а также мигрени.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления компоненты Neuroaid2 могут применяться для стимуляции выживания клеток нервной системы, которые подвержены риску гибели в результате черепно-мозговой травмы, инсульта, ишемии, мигрени, травмы спинного мозга, нейродегенеративного заболевания/расстройства/состояния, слабоумия (например, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, хорея Гентингтона и спиноцеребеллярная дегенерация) или психическое расстройство, например, депрессия.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 предназначаются для применения в лечении инсульта. У пациента уже случился инсульт (например, в последние 96, 84, 72, 60, 48, 36 или 12 часов) или он может быть подвержен риску инсульта, например, пациент с риском первого инсульта или риском рецидива инсульта. Когда компоненты Neuroaid2 предназначаются для лечения инсульта, компоненты могут по выбору вводиться пациенту в пределах примерно 96, 84, 72, 60, 48, 36, или 12 часов с момента инсульта, например, в пределах примерно от 1 до 12 часов после инсульта; примерно от 2 до примерно 10 часов после инсульта; или более предпочтительно в пределах от примерно 3 до примерно 9 часов после инсульта. По выбору компоненты Neuroaid2 предназначаются для введения пациенту в пределах примерно 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 часа после инсульта. Когда компоненты Neuroaid2 могут применяться для лечения инсульта у пациента с риском рецидива инсульта, компоненты Neuroaid2 могут вводиться пациенту примерно через 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дней после предыдущего инсульта, или, по меньшей мере, примерно через 1, 2, 3, 4, 5 или 6 недель после предыдущего инсульта, или по меньшей мере примерно через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев после предыдущего инсульта.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления изобретения предусматривается, что компоненты Neuroaid2 будут эффективны в отношении применения, описанного в данной области для активаторов АТФ-чувствительных калиевых каналов (также известных как ОКК [PCOs и KCOs]), например, для одного или нескольких из пинацидила, кромакалима и диазоксида. Примеры таких применений приведены ниже и в предпочтительном варианте осуществления различных аспектов настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 используются для применения, указанного ниже.

Различные применения открывателей К_АТФ каналов описаны в заявке WO 2006026469 (содержание которой включено в настоящее описание путем ссылки), и они включают: предупреждение ишемического или реперфузионного повреждения; лечение гиперинсулинемии или гиперинсулинизма; лечение гипогликемии; предупреждение перехода от предиабета к диабету; лечение сахарного диабета II типа; коррекция дефектов секреции инсулина и чувствительности к инсулину, способствующих предиабету и диабету II типа; сохранение функции поджелудочной железы у диабетиков I типа; лечение гиперлипидемии; предупреждение увеличения веса у лиц, которые предрасположены к ожирению; лечение ожирения; лечение метаболического синдрома (или синдрома X); лечение синдрома поликистозных яичников; лечение увеличения веса, дислипидемии, или нарушения толерантности к глюкозе у лиц, получавших антипсихотические препараты; предупреждение увеличения веса, дислипидемии, или нарушения толерантности к глюкозе у лиц, получавших антипсихотические препараты; и лечение любого заболевания, когда гиперлипидемия, гиперинсулинемия, гиперинсулинизм, гиперлипидемия, гиперфагия или ожирение являются факторами, способствующими тяжести или прогрессированию заболевания, включая, но не ограничиваясь этим, синдром Прадера-Вилли, синдром Фрелиха, синдром Коэна, синдром Саммита, синдром Альстрема, синдром Берьесона, синдром Барде-Бидля или гиперлипопротеинемию типа I, II, III и IV.

В патенте US 8053441 (содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки) также описывается ряд заболеваний или состояний, которые можно лечить с помощью открывателей калиевых каналов, в том числе: гипертония, нейродегенерация, инсульт, ишемия, эпилепсия, боль, гиперактивность мочевого пузыря, недержание мочи, синдром раздраженного кишечника, выпадение волос, облысение, алопеция, мужская эректильная дисфункция, женские сексуальные расстройства; преждевременные роды, доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ), дисменорея, заболевания коронарной артерии, стенокардия, а также гиперактивность дыхательных путей, расстройства пищевого поведения. Другие применения открывателей К_АТФ каналов включают: применение в качестве противоопухолевого агента, в частности, для лечения рака головного мозга (US 7705010, содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки), а также лечение заболеваний скелетных мышц, таких как врожденная миотония и гипокалиемический паралич (US 5744594, содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки).

Предпочтительно, компоненты Neuroaid2 используются для применения, описанного в данной области для пинацидила. Применения пинацидила (N-циано-N'-пиридин-4-ил-Nʺ-(1,2,2-триметилпропил)гуанидин) включают: применение в качестве сосудорасширяющего средства, для лечения гипертонии, астмы, недержания мочи, остановка нормального сердцебиения для выполнения кардиологических, аортальных, нервно-сосудистых и кардиопульмональных операций по трансплантации органов и других соответствующих операций (в отношении вышеупомянутых применений пинацидила, см., например, US 5428039, содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки), лечение чувствительной кожи человека (см., например, US 6572848, содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки) и импотенции (например, см. US 7959550, содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки).

Предпочтительно, компоненты Neuroaid2 используются для применения, описанного в данной области для кромакалима. Применения кромакалима ((3R,4S)-3-гидрокси-2,2-диметил-4-(2-оксопирролидин-1-ил)хроман-6-карбонитрил) включают: применение в качестве сосудорасширяющего средства, для лечения гипертонии (см., например, US 7964623, содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки), астмы (см., например, US 7964623), лечение аритмии (см, например, US 7964623), сахарного диабета (например, сахарный диабет I или II типа), ожирения (см., например, US 7964623), метаболического синдрома, синдрома X, инсулинорезистентности, остановка нормального сердцебиения для выполнения кардиологических, аортальных, нервно-сосудистых и кардиопульмональных операций по трансплантации органов и других соответствующих операций (в отношении вышеупомянутых применений кромакалима см. например, US 5428039, содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки), лечение чувствительной кожи человека (см., например, US 6572848), сердечной недостаточности и импотенции (US 7959550).

Предпочтительно компоненты Neuroaid2 используются для применения, описанного в данной области для диазоксида. Диазоксид (торговая марка прогликем, 7-хлор-3-метил-4H-1,2,4-бензотиадиазин 1,1-диоксид). Применения включают: применение в качестве сосудорасширяющего средства, для лечения гипертонии (см., например, US 2986573, содержание которого включено в данное описание путем ссылки), периферических сосудистых расстройств (см., например, патент Великобритании GB 982072, содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки), инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, метаболического синдрома (в отношении этих применений см., например, US 5284845 или US 6197765, содержание которых включено в данное описание путем ссылки), ишемии сетчатки (см., например, US 8063054, содержание которого включено в данное описание путем ссылки), диабет (см., например, US 7799777, содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки), ожирения (смотри, например, US 7799777 и патентной публикации US 2004/0204472, содержание которой включено в настоящее описание путем ссылки), лечение синдрома X (см., например, US 6197765, содержание которого включено в настоящее описание путем ссылки) и сокращение потребления жиросодержащих продуктов (патентная публикация США №2003/0035106, включенная в данное описание путем ссылки), а также гипогликемии.

В патенте US 8101600 (включенном в данное описание путем ссылки) раскрывается, что пинацидил, кромакалим и диазоксид могут применяться для лечения депрессии или связанные с депрессией расстройства настроения (термин «расстройства настроения» используется для охвата тех состояний, которые определяются как расстройства настроения в Диагностическом и Статистическом Руководстве по Психическим Расстройствам, Четвертое издание [Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, Fourth Edition] 1994 ("DSM-IV")). В патенте US 7018979 (включенном в настоящее описание путем ссылки) раскрывается, что пинацидил, кромакалим и диазоксид могут быть полезны в избирательной доставке лекарственного средства к злокачественной опухоли в головном мозге или к опухоли в другом месте в организме млекопитающего.

Предполагается, что компоненты Neuroaid2 можно использовать для применения, как описано выше в отношении ОКК [KCOs], пинацидила, кромакалима или диазоксида. Что касается упомянутых выше применений активаторов К_АТФ каналов и пинацидила, диазоксида и кромакалима, то с этим можно ознакомиться в различных публикациях в этой области, включая, например, US 5744594; WO 2006026469; US 8101600; US 8058264; US 8053441; US 7799777; US 7115620; US 6417207 (каждый из которых включен путем ссылки в полном объеме), а также в публикациях, перечисленные выше.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 применяются для лечения состояния, выбранного из группы: недержание (предпочтительно недержание мочи), ожирение и гипертония.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 применяются для лечения недержания, предпочтительно недержания мочи. Применение открывателей К_АТФ каналов [ОКК] в лечении недержания мочи описано, в частности, в патентах US 8053441, US 7115620 и US 6417207 (каждый из которых включен путем ссылки в полном объеме); и применение пинацидила в лечении недержания описан, в частности, в EP 260790 (включен путем ссылки в полном объеме).

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 применяются для лечения ожирения. Применение ОКК и диазоксида в лечении ожирения описано, в частности, в WO 2006026469 и US 7799777 (каждый из которых включен путем ссылки в полном объеме).

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 применяются для лечения гипертонии. ОКК были охарактеризованы как обладающие сильным антигипертензивным действием in vivo и сосудорасширяющим действием in vitro (Quast, U., et. al., Cellular Pharmacology of Potassium Channel Openers in Vascular Smooth Muscle, Cardiovasc. Res., Vol. 28, p. 805-810 (1994)). В патенте US 8053441 (включен путем ссылки в полном объеме) описывается применение ОКК в лечении гипертонии; в патенте US 7115620 описывается применение пинацидила и кромакалима в лечении гипертонии; в WO 2006026469, US 8063054, US 2986573 и US 7799777 (каждый из которых включен путем ссылки в полном объеме) описывается применение диазоксида в лечении гипертонии; и в патенте US 7964623 (включен путем ссылки в полном объеме) описывается применение кромакалима в лечении гипертонии.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 применяются для нейрокондиционирования или лечения состояния, выбранного из группы: недержание (предпочтительно недержание мочи), ожирение и гипертония.

Термин «нейрокондиционирование», используемый здесь, включает ссылку на фармакологически индуцированные молекулярные события, предупреждающие или уменьшающие возможные будущие повреждения головного мозга. Нейрокондиционирование обеспечивает в результате мозг толерантностью против ишемического, эпилептического или другого опасного события. Эффект подобен прекондиционированию (была продемонстрирована эффективность клинического и экспериментального подхода), но не требует воздействия стрессовых стимулов. Нейрокондиционирование индуцирует профилактически толерантность у пациента, например, с риском инсульта. Примеры таких инсультов включают инсульты в результате состояния, выбранного из группы, в состав которой входят: ишемическое, переходное или перманентное, фокальное или генерализованное; пароксизм, фокальный или генерализованный; воспалительное; токсичное (например, связанное с радиацией, химическими веществами или лекарствами); иммунологическое; инфекционное; метаболическое, пищевое; травматическое; компрессионное; неопластическое; дегенеративное; генетическое, врожденное; и процедурное (включая, например, те, которые требуют общей анестезии, зажима крупных сосудов или открытия полости черепа). Таким образом, по меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 предназначены для введения пациенту, который подвергается риску инсульта, таких как, например, инсульт в результате состояния, выбранного из группы, в состав которой входят: ишемическое, переходное или перманентное, фокальное или генерализованное; пароксизм, фокальный или генерализованный; воспалительное; токсичное (например, связанное с радиацией, химическими веществами или лекарствами); иммунологическое; инфекционное; метаболическое, пищевое; травматическое; компрессионное; неопластическое; инсульт, дегенеративный; генетическое, врожденное; и процедурное (включая, например, те, которые требуют общей анестезии, зажима крупных сосудов или открытия полости черепа).

Получение компонентов Neuroaid2

Как указано выше, Neuroaid2 содержит девять различных растительных компонентов. Растения, используемые для получения растительных компонентов, могут использоваться полностью (т.е. используется все растение) или может использоваться одна или несколько частей растений. Части растений, которые могут использоваться, включают: листья, цветы, стебли, корни, семена, споры, черенки, корневища, плоды, плодовые тела, а также смеси указанных частей растений. Если в контексте не указано иначе, термин «растение» охватывает целые растения, а также одну или несколько их частей, включая листья, цветы, стебли, корни, семена, споры, черенки, корневища, плоды и плодовые тела.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления изобретения, где корневище конкретного растения указывается как предпочтительная часть растения (например, корневище acori tatarinowii и корневище Chuanxiong), корень (radix) может использоваться альтернативно или дополнительно. Подобным образом, по меньшей мере в некоторых вариантах осуществления изобретения, где корень конкретного растения указывается как предпочтительная часть растения (например, radix polygalae, radix astragali, radix paeoniae rubra и radix angelicae sinensis), корневище (rhizoma) может использоваться альтернативно или дополнительно.

Компоненты Neuroaid2 могут быть в их естественной, травяной форме (например, нарезанные на мелкие кусочки или измельченные до получения порошка) или в более рафинированной форме (например, экстракты), или в виде их комбинаций. Исходным материалом для компонентов Neuroaid2 могут быть соответствующие растения в свежем или высушенном виде. Растения, представляющие различные компоненты Neuroaid2, могут быть обработаны по отдельности или они могут быть объединены и обработаны вместе. По выбору, растения могут быть нарезаны на мелкие кусочки и, при необходимости, высушены. Высушенные ингредиенты можно затем, по выбору, измельчить до получения порошка. Растительный материал, обработанный таким образом, можно затем применять в различных аспектах настоящего изобретения.

Подходящие способы получения растительных экстрактов известны специалистам в данной области и включают, например, экстракцию твердого тела жидкостью, экстракцию жидкости жидкостью, сверхкритическую флюидную экстракцию, экстракцию растворителем под давлением, микроволновую экстракцию, субкритическую экстракцию водой, ультразвуковую экстракцию и ускоренную экстракцию растворителем.

Экстракт в соответствии с настоящим изобретением можно получить обычным способом, например путем объединения растительного материала с одним или несколькими растворителями в условиях, подходящих для получения экстракта. После контактирования растительного материала и растворителя в течение времени, подходящего для образования экстракта, растворитель и растительный материал разделяются с помощью подходящего способа, например, такого как фильтрация или центрифугирование. Экстракт (т.е. жидкость, содержащая растворитель) может, по выбору, подвергаться дополнительной обработке, например, путем концентрирования или дегидратации экстракта, объединением экстракта с другими ингредиентами (например, разбавителями, другими травами/экстрактами трав, ингредиентами средства КТМ, консервантами и т.д.) или смесью вышеуказанного и т.д.

Представление компонентов Neuroaid2

Различные аспекты настоящего изобретения относятся к компонентам Neuroaid2 и их применениям. По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления изобретения указанные компоненты Neuroaid2 представлены в виде композиции, например в виде фармацевтической композиции. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления пятого аспекта настоящего изобретения предлагается композиция (например, фармацевтическая композиция), которая содержит (и по выбору состоит в качестве активных ингредиентов из) указанные компоненты Neuroaid2.

Фармацевтическая композиция, как описано в данном документе, может, по выбору, содержать фармацевтически приемлемую добавку, носитель или разбавитель и, кроме того, может включать другие активные ингредиенты, фармацевтические агенты, носители, адъюванты и т.д. Примеры фармацевтически приемлемых добавок включают фармацевтически приемлемые эксципиенты, буферы, адъюванты, стабилизаторы, разбавители, наполнители, буферы, стабилизаторы, консерванты, смазывающие вещества или другие фармацевтически приемлемые материалы, хорошо известные специалистам в данной области, или как описано здесь. По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция, как описано здесь, содержит эксципиент, причем указанный эксципиент является по выбору декстрином или мальтодекстрином.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления композиция по настоящему изобретению (например, фармацевтическая композиция) может содержаться в смеси.

Композиция, содержащая компоненты Neuroaid2, может состоять исключительно из компонентов Neuroaid2 или может включать один или несколько дополнительных компонентов (например, один или несколько дополнительных ингредиентов средства традиционной китайской медицины (например, один или несколько ингредиентов средства ТКМ, перечисленных выше в разделе под названием «Другие ингредиенты средства традиционной китайской медицины»), один или несколько дополнительных активных агентов (например, ингредиент, не относящийся к ТКМ); фармацевтически приемлемую добавку, носитель, разбавитель или адъювант и т.п. По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления композиция, содержащая компоненты Neuroaid2, содержит компоненты Neuroaid2 и эксципиент (например, декстрин или мальтодекстрин). По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 являются единственными активными ингредиентами/активными агентами (эти термины используются здесь взаимозаменяемо). Соответственно, по меньшей мере в некоторых вариантах осуществления композиция или смесь, как описано здесь, состоит, в качестве активных ингредиентов, из компонентов Neuroaid2.

Следует понимать, что композиции, описанные здесь, могут вводиться в чистом виде или в виде соответствующей фармацевтической композиции. В общем, фармацевтические композиции можно получать в соответствии с методами, которые известны специалистам обычной квалификации в данной области. Композиции, содержащие активные компоненты или ингредиенты, представленные здесь, могут включать обычный фармацевтический носитель или разбавитель и дополнительно могут включать другие медицинские агенты, фармацевтические агенты, носители, адъюванты и т.д. Примеры подходящих фармацевтических носителей или разбавителей включают фосфатно-солевые буферные растворы, воду, эмульсии (например, водно-масляные эмульсии), различные типы смачивающих агентов, стерильные растворы и т.д. Примеры эксципиентов, которые могут использоваться, включают, например, сахара, крахмалы, целлюлозы, камеди, белки, декстрин и мальтодекстрин. Различные препараты общеизвестны и подробно описаны в последнем издании Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing, Easton PA).

Композиция может, например, представлять собой раствор, суспензию, жидкость, измельченные травы, порошок, пасту, может быть водной, неводной или любой их комбинацией.

В пятом аспекте настоящего изобретения также предлагается смесь, содержащая (и по выбору состоящая, в качестве активных ингредиентов, из) компоненты Neuroaid2 (т.е., три или более выбранных компонентов Neuroaid2, содержащих Chuanxiong, angelica sinensis и Astragali).

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления смеси по настоящему изобретению могут, дополнительно к компонентам Neuroaid2, содержать инструкции по применению. Смеси в соответствии с изобретением могут рекламироваться, распространяться и/или продаваться как единица для выполнения одного из аспектов настоящего изобретения.

Смесь согласно пятому аспекту настоящего изобретения может, по выбору, состоять из компонентов Neuroaid2, в качестве активных ингредиентов (по выбору, в сочетании с фармацевтически приемлемой добавкой, носителем, разбавителем или адъювантом и т.д.), или может включать один или несколько дополнительных активных агентов, например, таких как один или несколько дополнительных ингредиентов средства традиционной китайской медицины (например, один или несколько ингредиентов средства ТКМ, перечисленных выше в разделе под названием «Другие ингредиенты средства традиционной китайской медицины»)) и/или одного или нескольких дополнительных активных агентов, не относящихся к ТКМ. По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления смесь согласно пятому аспекту настоящего изобретения содержит компоненты Neuroaid2 и эксципиент (например, декстрин или мальтодекстрин).

Смеси и композиции согласно пятому аспекту настоящего изобретения, по выбору, могут применяться в первом, втором, третьем и четвертом аспектах настоящего изобретения. Так, например, в четвертом аспекте настоящего изобретения лекарственное средство может представлять собой композицию или смесь согласно пятому аспекту настоящего изобретения. Кроме того, композиция согласно пятому аспекту настоящего изобретения, может применяться в производстве лекарственного средства, указанного в четвертом аспекте настоящего изобретения.

Как упоминалось выше, лекарственное средство согласно четвертому аспекту настоящего изобретения, по выбору, может представлять собой композицию или смесь согласно пятому аспекту настоящего изобретения. Соответственно, следует понимать, что лекарственное средство согласно четвертому аспекту настоящего изобретения, по выбору, может состоять исключительно из компонентов Neuroaid2 или может включать один или несколько дополнительных компонентов (например, один или несколько ингредиентов средства ТКМ, перечисленных выше в разделе под названием «Другие ингредиенты средства традиционной китайской медицины»), один или несколько дополнительных активных агентов (например, ингредиент, не относящийся к ТКМ); фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или адъювант и т.д. По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления лекарственный препарат согласно четвертому аспекту настоящего изобретения содержит компоненты Neuroaid2 и эксципиент (например, декстрин или мальтодекстрин). По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения компоненты Neuroaid2 являются единственными активными ингредиентами. Соответственно, по меньшей мере в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения лекарственный препарат согласно четвертому аспекту настоящего изобретения состоит из компонентов Neuroaid2, в качестве активных ингредиентов.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления смеси и композиции в соответствии с изобретением содержат меньше, чем 8, 7, 6 или 5 компонентов Neuroaid2.

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления смеси и композиции согласно пятому аспекту изобретения и лекарственные препараты согласно четвертому аспекту настоящего изобретения применяются для нейропротекции, нейрокондиционирования, лечения ожирения, лечения гипертонии или лечения недержания мочи.

Введение компонентов Neuroaid2

Компоненты Neuroaid2, описанные здесь, могут вводиться любым подходящим способом, например, перорально, парентерально, внутривенно, подкожно, внутрикожно, внутрибрюшинно или местно, в жидкой, полужидкой или твердой форме, и составлены соответственно для каждого способа введения. Термин «введение» и варианты этого термина, включая «вводить», включает контактирование, нанесение, доставку или обеспечение композиции в соответствии с изобретением в организм или поверхность с помощью любых подходящих средств.

Компоненты Neuroaid2 должны вводиться в терапевтически эффективном количестве (либо как разовая доза, либо как часть серии доз). Под «эффективным количеством» или «терапевтически эффективным количеством» следует понимать, что вводимое количество является физиологически важным. Агент является физиологически важным, если он присутствует в количестве, которое приводит к детектируемому изменению физиологии реципиента-пациента, например, благотворному или желаемому результату (например, для предупреждения, облегчения или улучшения одного или нескольких симптомов заболевания или медицинского состояния, и/или для продления продолжительности существования субъекта, подвергающегося лечению).

Точное требуемое количество будет варьироваться от субъекта к субъекту в зависимости от таких факторов, как подвергающийся лечению биотип, возраст, вес и общее состояние здоровья субъекта, подвергающегося лечению, а также тяжесть состояния, способ введения, будь то лечение профилактическое или производится лечение существующего состояния, пол субъекта, диета, время и частота введения, комбинация (и) лекарств и толерантность/отклик на терапию и так далее. Таким образом, нельзя определить точное «эффективное количество». Эффективная доза для данной ситуации может быть определена с помощью обычных экспериментов и находится в пределах решения специалиста в данной области. Например, для определения диапазона величин дозировки могут использоваться анализы на клеточных культурах и исследования на животных.

MLC901, как правило, вводится в виде 2 капсул 3 раза в день.

NeuroAid обычно вводится перорально (per os) 3 раза в день и каждый раз четыре капсулы по 0,4 г. Продолжительность лечения, как правило, составляет 3 месяца/3 курса, адаптируется с учетом состояния пациента. Такая дозировка подходит для лечения инсульта. Для других заболеваний лечение может длиться дольше. Для пациентов с трудностью глотания капсулы можно открывать и порошок растворять в воде, в таком виде можно пить, или вводить через желудочный зонд. Следовательно, предусматривается суточная доза примерно 4,8 г. В одном варианте осуществления суточная доза пациента составляет примерно от 1 г до 8 г; от 2 г до 8 г; от 3 г до 7 г; от 4 г до 6 г; от 4,25 г до 5,75 г; от 4,5 г до 5,25 г; от 4,5 г до 5 г; от 4,6 г до 4,10 г; или от 4,7 г до 4,9 г. «Суточная доза» может представлять собой одну таблетку или капсулу и т.п., или несколько таблеток или капсул и т.п. для приема в данный день. Однако, следует понимать, что дозы можно варьировать в зависимости от потребности пациентов и тяжести состояния, лечение которого осуществляется и т.д.

В одном варианте осуществления каждый курс лечения с помощью NeuroAid длится примерно 4 недели. Как правило, назначают 3 курса, обычно один за другим. Терапевтическое окно не требуется, но дополнительные курсы можно добавлять уже через несколько дней после прекращения лечения. Следовательно, в одном варианте осуществления каждое лечение с помощью с помощью NeuroAid длится примерно 12 недель. В другом варианте осуществления курс лечения с помощью NeuroAid составляет примерно от 4 до 24 недель; от 7 до 16 недель; от 9 до 15 недель; от 10 до 14 недель; или от 11 до 13 недель.

Введение с одним или несколькими дополнительными активными агентами

По меньшей мере в некоторых вариантах осуществления компоненты Neuroaid2 могут применяться в сочетании с другими известными лечебными схемами, например с одним или несколькими дополнительными активными агентами. Один или несколько дополнительных активных агентов могут вводится в одно и то же время (например, одновременно) или в разное время (например, последовательно) и в течение различных периодов времени, которые могут быть отделены друг от друга или накладываться. В одном варианте осуществления может быть синергический эффект. Пути введения одного или нескольких дополнительных активных агентов могут быть такими же, что и для компонентов Neuroaid2, или другими.

Один или несколько дополнительных используемых активных агентов и соответствующий путь введения и уровень дозы будут известны специалистам в данной области или могут быть легко определены специалистом в данной области. Обычно, как это хорошо известно в области медицины, режим дозирования может зависеть от различных факторов, включая размер пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретный вводимый состав, пол, время и путь введения, общее состояние здоровья и другие лекарственные препараты, вводимые параллельно. Тогда как индивидуальные потребности различаются, определение оптимальных диапазонов эффективных количеств каждого компонента находится в компетенции специалиста в данной области. Как правило, дозировка одного или нескольких дополнительных активных агентов будет такой же или похожей на дозировку, которая вводится, когда агент применяется без компонентов Neuroaid2.

Когда компоненты Neuroaid2 должны вводиться с одним или несколькими дополнительными активными агентами, один или несколько дополнительных активных агентов могут обеспечиваться в композиции или смеси, которая содержит указанные компоненты Neuroaid2, или один или несколько дополнительных активных агентов могут обеспечиваться отдельно (т.е. не в составе композиции или смеси, обеспечивающих компоненты Neuroaid2).

В других вариантах осуществления изобретения дополнительные активные агенты не применяются. Соответственно, предусматриваются варианты осуществления согласно пятому аспекту настоящего изобретения, когда композиция или смесь не содержит дополнительный активный агент (т.е. активное вещество, которое не является компонентом Neuroaid2). Аналогично предусматриваются варианты осуществления, в которых указанные композиции и смеси согласно пятому аспекту не должны вводиться с одним или несколькими дополнительными активными агентами.

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1

Сообщалось, что NeuroAid (MLC601 и MLC901), средство традиционной медицины, применяемое в Китае для пациентов после инсульта, на преклинических моделях ишемии индуцирует нейропротекцию и нейропластичность. В данной работе демонстрируются действия MLC901 на модели in vitro кислородно-глюкозной депривации (КГД). MLC901 предупреждает гибель нейронов, вызванную двухчасовой КГД, и уменьшает ненормально увеличенное поступление Ca²⁺, вызванное глутаматом в кортикальных нейронах под воздействием КГД в течение 2 часов. Нейропротекторное действие MLC901 связано с большой гиперполяризацией ~20 мВ, которой противодействует глибенкламид, специфический ингибитор К_АТФ каналов. Кроме того, MLC901 усиливает активацию К_АТФ каналов. Прямо показано, что MLC901 действует как активатор К_АТФ каналов, такой же мощный, как и классической открыватель К_АТФ каналов. Способность MLC901 продуцировать большую гиперполяризацию, в частности, в нейронах, которые пострадали от энергетической депривации, вероятно, играет важную роль в нейропротективных действиях этого средства ТКМ, дополняя его ранее продемонстрированные нейрорегенеративные свойства.

МАТЕРИАЛЫ И СПОСОБЫ

Клеточная культура

Кортикальные эмбриональные мышиные нейроны

Первичная культура кортикальных нейронов

Мышей с заданным сроком беременности (E14) C57BL6/J анестезировали изопентаном с последующим смещением шейных позвонков, как описано ранее (Heurteaux et al., 2010). Эмбрионы были удалены и помещены в холодный раствор HBSS⁺. Кору головного мозга рассекли в холодном растворе HBSS⁺ и мозговые оболочки удалили. Кортикальные образцы разрезали на мелкие кусочки и осторожно растерли пастеркой из оплавленного стекла в 8 мл раствора HBSS⁺. Смесь профильтровали (40-μм фильтр) и центрифугировали при скорости 800 об/мин в течение 8 мин. Супернатант удалили, а осадок растворили в 2 мл культуральной среды. Клетки поместили на покрытые поли-D-лизином (Sigma-Aldrich Chimie, Сен-Кантен-Фаллавье, Франция) 12-луночные (диаметром 24 мм) планшеты с покровными стеклами (диаметром 12 мм) (CML, Немур, Франция) с плотностью 1×10⁶ клеток/лунку. Культуры выдерживали при 37°C в инкубаторе с атмосферой увлажненного до 95% воздуха/5% CO₂ в среде Neurobasal, дополненной В27, Glutamax, 100 ед/мл пенициллина и 100 г/мл стрептомицина и использовали для экспериментов до 12 дней. Рост глиальных клеток был подавлен добавлением 5-фтор-2-дезоксиуридина (2 μM) и уридина (2 μM) во второй день культуры.

Культура клеток INS-R9

INS-R9 клетки выдерживали в среде RPMI среде (Coppola et al., 2008), дополненной 5% фетальной телячьей сывороткой, 1 мМ пирувата натрия, 2 мМ глутамата, 5 ОМ 2-меркаптоэтанола, 100 ед/мл пенициллина и 100 г/мл стрептомицина в атмосфере 95% воздуха/5% CO₂.

Модель кислородно-глюкозной депривации (КГД)

Эксперименты с КГД проводились на первичных мышиных кортикальных нейронах, которые высевали с плотностью 1000000 клеток/35-мм чашку через 4 дня культуры (Goldberg and Choi, 1993). После трех промывок с помощью бескислородного безглюкозного сбалансированного солевого раствора Эрла (BSS) клетки выдерживали в той же BSS среде. Состав раствора BSS (в мМ): 140 NaCl; 5,4 KCl; 1,2 CaCl₂; 0,9 MgCl₂; 0,44 KH₂PO₄; 4,17 NaHCO₃ и 0,34 Na₂HPO₄. Перед использованием BSS уравновесили анаэробной газовой смесью (1,2% O₂) барботированием в течение 15 мин, довели до pH 7,4, при необходимости, и нагревали до 37°C. Затем клетки помещали в увлажненный инкубатор при 37°C в анаэробных условиях (1,2% O₂) на два часа. Кортикальные нейроны обрабатывали физиологическим раствором или MLC901 (1 μг/мл). Процедуры проводились в течение двух часов до КГД (пред-КГД состояние), во время КГД (КГД состояние) или в течение двух часов после КГД (пост-КГД состояние).

Электрофизиология

Регистрация токов в целой клетке

Все электрофизиологические эксперименты проводились на трансфицированных клетках INS-R9, которые высевали с плотностью 20000 клеток/35-мм чашку. Трансфицированные клетки использовали через 48-72 ч после трансфекции. Все электрофизиологические записи были выполнены в конфигурации «целая клетка» пэтч-кламп метода (Hamill et al., 1981). Каждый ток оценивали с помощью пэтч-кламп усилителя RK 400 (Axon Instrument, США), подвергали низкочастотной фильтрации при 3 кГц и преобразовали в цифровую форму при 10 кГц с использованием 12-битного аналого-цифрового преобразователя digidata (1322 серия, Axon Instrument, США). Все амплитуды тока выражаются в плотностях тока. Результаты представлены как средняя и стандартная погрешность среднего (SEM). Пэтч-кламп пипетки вытягивали с помощью вертикального съемника (PC-10, Narishige) из капилляров из боросиликатного стекла, сопротивление составляло 3-5 МОм. Для K⁺ токов раствор ванны содержал (в мм) 150 NaCl, 5 KCl, 3,1 MgCl₂, 1 CaCl₂ и 10 HEPES доводили до pH 7,4 с помощью NaOH. Раствор пипетки содержал (в мМ) 155 KCl, 3 MgCl₂, 5 EGTA и 10 HEPES доводили до pH 7,2 с помощью КОН. Для Na⁺ токов раствор ванны содержал (в мм) 150 NaCl, 2 KCl, 1 MgCl₂, 1,5 CaCl₂, 10 глюкозы и 10 HEPES доводили до pH 7,4 с помощью NaOH. Раствор пипетки содержал (в мМ) 135 CsCl, 2 MgCl₂, 2,5 Na₂-ATP, 5 EGTA, 2,1 CaCl₂ и 10 HEPES доводили до pH 7,2 с помощью CsOH. Все эксперименты проводили при комнатной температуре (21-22°C). Протоколы стимуляции и сбор данных выполняли с помощью микрокомпьютера (Dell Pentium) witch, при использовании коммерческого программного и аппаратного обеспечения (pClamp 8.2). K⁺ токи регистрировали по перепадам фиксации напряжения до мембранных потенциалов от -140 до +80 мВ для нейронов или от -100 до +60 мВ для трансфицированных клеточных линий при перепадах 20 мВ от исходного потенциала -80 мВ. Продолжительность импульсов деполяризации составляла 0,825 мс, а частота повторения импульса составляла 5 с. Амплитуды тока оценивали в конце стимулирующих импульсов. Токи Na⁺ регистрировали по перепадам фиксации напряжения до мембранных потенциалов от -80 до +50 мВ при перепадах 5 мВ от исходного потенциала -100 мВ. Продолжительность деполяризации импульса составила 100 мс, а частота повторения импульса составила 2 с. Амплитуды тока оценивали на пике стимулирующих импульсов. Чтобы изолировать нативные токи Na⁺, использовали TEA во внеклеточном растворе для блокировки K⁺ каналов. Наличие кадмия во внеклеточном растворе обеспечило блокаду кальциевых токов в этих нейронах. Клетки непрерывно орошали системой микроперфузии. Для клеток INS-R9 токи регистрировали в контрольных условиях, затем в присутствии MLC901 (1 μг/мл), MLC901 + пинацидил (10 μM) и MLC901 + пинацидил + глибенкламид (10 μM). Также была выполнена контрольная, Pinacil, пинацидил + MLC901 и пинацидил + MLC901 + глибенкламид (10 μM), последовательная перфузия.

Регистрация ооцитов

Дефолликулированные ооциты Xenopus инъецировали 100 нл кРНК при 0,02-0,4 μг/μл для экспрессии Kir 6,2 и SUR 1 и регистрацию проводили через 2-4 дня.

Для электрофизиологии, одиночные ооциты поместили в 0,3-мл перфузионную камеру и в них ввели два стандартных микроэлектрода (сопротивление 1-2,5 МОм), заполненных 3 M KCl и напряжение фиксировалось усилителем Dagan СА-1, в симметричном калиевом растворе, содержащем (в мМ) (90 KCl, 1,8 CaCl₂, 1 мМ MgCl₂, 5 Hepes, pH 7,4 с помощью КОН). Стимуляция получения, сбор данных, а также анализ проводили при помощи программного обеспечения pClamp (Axon Instruments). Токи регистрировали в этом симметричном контрольном состоянии калия. Активность К_АТФ каналов оценивали путем внутриклеточного АТФ истощения с помощью 3 мМ азида натрия. Провели испытания MLC901 (1 μг/мл) и пинацидила (10 μM) до и после АТФ истощения ооцитов. Во всех экспериментах определялось ингибирование глибенкламидом (10 μM) зарегистрированных токов.

Статистические анализы

Данные были представлены как среднее ±S.E.M. Статистический анализ различий между группами проводили с помощью непарного t-критерия или дисперсионного анализа [ANOVA]. Когда F соотношения были значительными, статистические анализы были продлены и были выполнены post-hoc [апостериорные] сравнения с использованием тестов множественного сравнения с помощью критерия Тьюки. Во всех анализах уровень значимости был установлен на значении P<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

MLC901 защищает кортикальные нейроны от гибели, связанной с кислородно-глюкозной депривацией

Эффекты MLC901 были изучены на in vitro модели ишемии, в которой кортикальные нейроны подвергали воздействию кислородно-глюкозной депривации. Для оценки КГД-индуцированной нейронной гибели в культивируемых нейронах было использовано окрашивание Хехстом ядер живых нейронов. Кортикальные нейроны сначала обработали солевым раствором или MLC901 (1 μг/мл). Используемая доза MLC901 была выбрана на основе нашего предыдущего исследования, когда применение 1 μг/мл MLC901 индуцировало наилучшую защиту от гибели клеток на кортикальных нейронах в культуре (Heurteaux et al., 2010). Во время КГД клетки подвергали воздействию трех условий лечения: MLC901 применили 1/в течение двух часов перед КГД (пред-КГД состояние), 2/в течение 2 часов действия КГД (КГД состояние) и 3/в течение двух часов после OGD (пост-КГД состояние). Авторы сравнили защитные эффекты MLC901 против КГД-индуцированной нейродегенерации кортикальных клеток. Тяжелая КГД индуцировала резкое снижение количества живых Хехст-положительных клеток. Лечение с помощью MLC601 до, во время или после КГД привело к значительному увеличению жизнеспособности нейронов по сравнению с соответствующими контрольными образцами (*** P<0,001) (n=12 35-мм чашек в группе) (Фигура 1). Применение MLC901 после КГД показало более высокую защиту (Фигура 1). Применение специфического ингибитора К_АТФ каналов, глибенкламида (Fosset et al., 1988, Bernardi et al., 1988) ингибировало защиту, индуцированную MLC901, что указывает на вовлечение К_АТФ каналов в защитном действии MLC901 против повреждения при КГД (Фигура 1).

Нейропротекторное действие MLC901 может быть связано с открытием каналов К_АТФ.

Авторами были проведены эксперименты на крысиных инсулиномных клетках INS-R9, которые, как известно, экспрессируют глибенкламид-чувствительные К_АТФ каналы, которые важны для секреции инсулина. К_АТФ каналы в клетках INS-R9 были существенно активированы с помощью MLC901 (1 μг/мл), и авторы наблюдали аддитивный эффект при применении 10 μM пинацидила, известного активатора К_АТФ каналов (Edwards and Weston, 1990; Mannhold, 2004; Quasi, 1992) (Фигура 2). Глибенкламид (10 μM) ингибировал К_АТФ ток, активированный MLC901 + пинацидил (Фигура 2). Результаты, полученные в клетках INS-R9, подтверждают, что электрофизиологические эффекты MLC901, по меньшей мере частично, опосредованы К_АТФ каналами.

Две субъединицы, которые составляют нейроны К_АТФ канала, представляют собой SUR₁ и Kir_6⋅2 (Inagaki et al., 1995). Экспрессия ооцитов Xenopus субъединиц SUR₁ и Kir_6⋅2 привела к генерации больших внутренних выпрямляющих токов в ответ на применение азида натрия (3 мМ) для уменьшения внутриклеточного АТФ и увеличения соотношения АТФ/АДФ (Ashcroft and Ashcroft, 1990) (Фигура 3А). Амплитуда индуцированного азидом, чувствительного к глибенкламиду тока К_АТФ каналов тока была амплифицирована за счет применения пинацидила (10 μM) и, как и ожидалось, ингибировалась глибенкламидом (10 μM) (Фигура 3A). Затем авторами были проведены эксперименты того же типа с использованием MLC901. Ясно видно, что MLC901, как пинацидил, активировал К_АТФ каналы, выявленные при лечении азидом (Фигура 3B-C-D). Через двенадцать минут после применения азида средняя амплитуда тока при -120 мВ составила -480±57 нА до и -770±67 после применения MLC901. Такая MLC901-индуцированная активация, подобно активации, которая была произведена пинацидилом, исчезала в присутствии глибенкламида (Фигура 3B-C-D). MLC901 ведет себя аналогично пинацидилу за счет активации К_АТФ канала.

ОБСУЖДЕНИЕ.

Результаты, описанные здесь, показывают, что MLC901 защищает кортикальные нейроны от гибели в модели ишемии in vitro. Модель кислородно-глюкозной депривации имитирует процессы гибели клеток, наблюдаемые в восстанавливаемых (полутеневых) зонах пораженного ишемией мозга in vivo. MLC901 существенно защищает нервные клетки от гибели. Такой нейропротективный эффект блокируется глибенкламидом, специфическим ингибитором К_АТФ каналов.

Активирующий эффект MLC901 на К_АТФ каналы подтверждено электрофизиологическими экспериментами на ооцитах, экспрессирующих рекомбинантные каналы, и инсулиномных клетках. Инсулиномные клетки, естественно, имеют К_АТФ каналы, важные для связывания изменений уровней внеклеточной глюкозы с секрецией инсулина (Lazdunski, 1996). MLC901 индуцирует большую гиперполяризацию в этих обоих типах клеток. Большая гиперполяризация, продуцируемая MLC901, как предполагается, прочно защищает нейроны от гибели. MLC901 вел себя как пинацидил, классический открыватель К_АТФ каналов (Edwards and Weston, 1990; Mannhold, 2004, Heurteaux et al., 1995), и стимулирующие эффекты как MLC901, так и пинацидил были аннулированы глибенкламидом.

Активирующий эффект MLC901 на К_АТФ каналы наблюдается в терапевтических концентрациях, применяемых в моделях ишемии у грызунов (Heurteaux et al., 2010; Quintard et al., 2011). Таким образом, дополнительно к нейрорегенеративным свойствам (Heurteaux et al., 2010), коктейль из активных молекул, присутствующий в данном средстве КТМ, по-видимому, действует через К_АТФ каналы, по меньшей мере благодаря части своих свойств против церебральной ишемии.

ПРИМЕР 2

Регистрация ооцитов

Для экспрессии Kir 6.2 и SUR 1, дефолликулированные ооциты Xenopus инъецировали 100 нл кРНК при 0,02-0,4 μг/μл и токи регистрировали через 2-4 дня. Каждый ооцит поместили в 0,3-мл перфузионную камеру и в них ввели два стандартных микроэлектрода (сопротивление 1-2,5 МОм), заполненных 3 M KCl, и напряжение фиксировалось усилителем Dagan СА-1, в симметричном калиевом растворе, содержащем (в мм) (90 KCl, 1,8 CaCl₂, 1 мМ MgCl₂, 5 HEPES, pH 7,4 с помощью КОН). Стимуляция яйцеклетки, сбор данных и анализ проводили при помощи программного обеспечения pClamp (Axon Instruments). Токи регистрировались в симметричном контрольном состоянии калия. Активность К_АТФ каналов оценивали путем внутриклеточного АТФ истощения с помощью 3 мМ азида натрия.

Протокол перфузии:

Ток был сначала зарегистрирован в контрольном состоянии (симметричный калиевый раствор). Затем активность каналов увеличили на 6 минут 3 мм перфузии азида натрия, которая поддерживалась во время всего эксперимента. MLC901 или другие продукты партии перфузировали через 6 минут после перфузии с азидом натрия. Во всех экспериментах определялось ингибирование зарегистрированных токов глибенкламидом (10 μM).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Результаты приведены на Фигурах 4 и 5. Как NA4A (сочетание Astragalus + Chaunxiong + Sinensis + Polygala), так и NA4B (сочетание Astragalus + Chaunxiong + Sinensis + Salvia) активировали К (АТФ) канал, предварительно активированный азидом. Увеличение тока, индуцированное открытием канала, ингибируется добавлением глибенкламида. 90 K - это ток не обработанной клетки.

ПРИМЕР 3

Действие in vitro обоих образцов (Neuroaid2 и "NA3" (chuanxiong, sinensis, astragalus)) на клонированные калиевые каналы Kir6.2/SUR2A (экспрессированные генами человека KCNJ11 и SUR2A и коэкспрессированные в клетках HEK293) оценивали при комнатной температуре с помощью QPatch HT® (Sophion Bioscience A/S, Дания), автоматическая параллельная пэтч-кламп система. Образцы оценивали при 10 μг/мл, причем каждая концентрация тестировалась в двух или более клетках (n≥2). Каналы были активированы 8-минутным воздействием 10 μM пинацидила и продолжительность воздействия концентрации каждого исследуемого препарата составляла 5 минут.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Результаты приведены на Фигуре 6. Оба образца NeuroAid2 и NA3 способны активировать канал, данные выражены в процентах от активации канала.

Активация канала с помощью обоих образцов ингибируется воздействием глибенкламида.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Amoroso, S., Schmid-Antomarchi, H., Fosset, M., Lazdunski, M., 1990. Glucose, sulfonylureas, and neurotransmitter release: role of ATP-sensitive K+ channels. Science 247, 852-854.

Ashcroft, S.J., Ashcroft, F.M., 1990. Properties and functions of ATP-sensitive K-channels. Cell Signal 2, 197-214.

Bernardi, H., Fosset, M., Lazdunski, M., 1988. Characterization, purification, and affinity labeling of the brain [3H] glibenclamide-binding protein, a putative neuronal ATP-regulated K+ channel. Proc Natl Acad Sci USA 85, 9816-9820.

Blondeau, N., Nguemeni, C., Debruyne, D.N., Piens, M., Wu, X., Pan, H., Hu, X., Gandin, С., Lipsky, R.H., Plumier, J.C., Marini, A.M., Heurteaux, C., 2009. Subchronic alpha-linolenic acid treatment enhances brain plasticity and exerts an antidepressant effect: a versatile potential therapy for stroke. Neuropsychopharmacology 34, 2548-2559.

Blondeau, N., Plamondon, H., Richelme, C., Heurteaux, C., Lazdunski, M., 2000. K (ATP) channel openers, adenosine agonists and epileptic preconditioning are stress signals inducing hippocampal neuroprotection. Neuroscience 100, 465-474.

Blondeau, N., Widmann, C., Lazdunski, M., Heurteaux, C., 2002. Polyunsaturated fatty acids induce ischemic and epileptic tolerance. Neuroscience 109, 231-241.

Catterall, W.A., 2000. From ionic currents to molecular mechanisms: the structure and function of voltage-gated sodium channels. Neuron 26, 13-25.

Chen, C., Venketasubramanian, N., Gan, R.N., Lambert, C., Picard, D., Chan, B.P., Chan, E., Bousser, M.G., Xuemin, S., 2009. Danqi Piantang Jiaonang (DJ), a traditional Chinese medicine, in poststroke recovery. Stroke 40, 859-863.

Choi, D.W., 1988. Glutamate neurotoxicity and diseases of the nervous system. Neuron 1, 623-634.

Coppola, T., Beraud-Dufour, S., Antoine, A., Vincent, J.P., Mazella, J., 2008. Neurotensin protects pancreatic beta cells from apoptosis. Int J Biochem Cell Biol 40, 2296-2302.

Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M.A., 1999. Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view. Trends Neurosci 22, 391-397.

Edwards, G., Weston, A.H., 1990. Structure-activity relationships of K+ channel openers. Trends Pharmacol Sci 11, 417-422.

Enyedi, P., Czirjak, G., 2010. Molecular background of leak K+ currents: two-pore domain potassium channels. Physiol Rev 90, 559-605.

Fosset, M., De Weille, J.R., Green, R.D., Schmid-Antomarchi, H., Lazdunski, M., 1988. Antidiabetic sulfonylureas control action potential properties in heart cells via high affinity receptors that are linked to ATP-dependent K+ channels. J Biol Chem 263, 7933-7936.

Gan, R., Lambert, C., Lianting, J., Chan, E.S., Venketasubramanian, N., Chen, C., Chan, B.P., Samama, M.M., Bousser, M.G., 2008. Danqi Piantan Jiaonang does not modify hemostasis, hematology, and biochemistry in normal subjects and stroke patients. Cerebrovasc Dis 25, 450-456.

Goldberg, M.P., Choi, D.W., 1993. Combined oxygen and glucose deprivation in cortical cell culture: calcium-dependent and calcium-independent mechanisms of neuronal injury. J Neurosci 13, 3510-3524.

Gribkoff, V.K., Winquist, R.J., 2005. Voltage-gated cation channel modulators for the treatment of stroke. Expert Opin Investig Drugs 14, 579-592.

Hamill, O.P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, В., Sigworth, F.J., 1981. Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches. Pflugers Arch 391, 85-100.

Heurteaux, C., Bertaina, V., Widmann, C., Lazdunski, M., 1993. K+ channel openers prevent global ischemia-induced expression of c-fos, c-jun, heat shock protein, and amyloid beta-protein precursor genes and neuronal death in rat hippocampus. Proc Natl Acad Sci USA 90, 9431-9435.

Heurteaux, C., Gandin, С., Borsotto, M., Widmann, С., Brau, F., Lhuillier, M., Onteniente, В., Lazdunski, M., 2010. Neuroprotective and neuroproliferative activities of NeuroAid (MLC601, MLC901), a Chinese medicine, in vitro and in vivo. Neuropharmacology 58, 987-1001.

Heurteaux, С., Guy, N., Laigle, С., Blondeau, N., Duprat, F., Mazzuca, M., Lang-Lazdunski, L., Widmann, С., Zanzouri, M., Romey, G., Lazdunski, M., 2004. TREK-1, a K(+) channel involved in neuroprotection and general anesthesia. Embo J 23, 2684-2695.

Heurteaux, C., Laigle, C., Blondeau, N., Jarretou, G., Lazdunski, M., 2006. Alpha-linolenic acid and riluzole treatment confer cerebral protection and improve survival after focal brain ischemia. Neuroscience 137, 241-251.

Heurteaux, С., Lauritzen, I., Widmann, С., Lazdunski, M., 1995. Essential role of adenosine, adenosine A1 receptors, and ATP-sensitive K+ channels in cerebral ischemic preconditioning. Proc Natl Acad Sci USA 92, 4666-4670.

Inagaki, N., Gonoi, T., Clement, J.P.t., Namba, N., Inazawa, J., Gonzalez, G., Aguilar-Bryan, L., Seino, S., Bryan, J., 1995. Reconstitution of IKATP: an inward rectifier subunit plus the sulfonylurea receptor. Science 270, 1166-1170.

Lauritzen, I., Blondeau, N., Heurteaux, C., Widmann, C., Romey, G., Lazdunski, M., 2000. Polyunsaturated fatty acids are potent neuroprotectors. Embo J 19, 1784-1793.

Lauritzen, I., De Weille, J.R., Lazdunski, M., 1997. The potassium channel opener (-) - cromakalim prevents glutamate-induced cell death in hippocampal neurons. J Neurochem 69, 1570-1579.

Lazdunski, M., 1996. Ion channel effects of antidiabetic sulfonylureas. Horm Metab Res 28, 488-495.

Lee, J.M., Grabb, M.C., Zipfel, G.J., Choi, D.W., 2000. Brain tissue responses to ischemia. J Clin Invest 106, 723-731.

Legos, J.J., Barone, F.C., 2003. Update on pharmacological strategies for stroke: prevention, acute intervention and regeneration. Curr Opin Investig Drugs 4, 847-858.

Lesage, F., 2003. Pharmacology of neuronal background potassium channels. Neuropharmacology 44, 1-7.

Lesage, F., Lazdunski, M., 2000. Molecular and functional properties of two pore domain potassium channels. Am. J. Physiol. 279, 793-801.

Leybaert, L., De Ley, G., de Hemptinne, A., 1993. Effects of flunarizine on induced calcium transients as measured in fura-2-loaded neurons of the rat dorsal root ganglion. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 348, 269-274.

Liss, В., Roeper, J., 2001. Molecular physiology of neuronal К_АТР channels. Mol Membr Biol 18, 117-127.

Mannhold, R., 2004. К_АТР channel openers: structure-activity relationships and therapeutic potential. Med Res Rev 24, 213-266.

Mazighi, M., Amarenco, P., 2011. Reperfusion therapy in acute cerebrovascular syndrome. Curr Opin Neurol 24, 59-62.

Mourre, С., Ben Ari, Y., Bernardi, H., Fosset, M., Lazdunski, M., 1989. Antidiabetic sulfonylureas: localization of binding sites in the brain and effects on the hyperpolarization induced by anoxia in hippocampal slices. Brain Res 486, 159-164.

Obrenovitch, T.P., 1997. Sodium and potassium channel modulators: their role in neuroprotection. Int Rev Neurobiol 40, 109-135.

Obrenovitch, T.P., 2008. Molecular physiology of preconditioning-induced brain tolerance to ischemia. Physiol Rev 88, 211-247.

Plamondon, H., Blondeau, N., Heurteaux, C., Lazdunski, M., 1999. Mutually protective actions of kainic acid epileptic preconditioning and sublethal global ischemia on hippocampal neuronal death: involvement of adenosine A₁ receptors and К_АТР channels. J Cereb Blood Flow Metab 19, 1296-1308.

Quast, U., 1992. Potassium channel openers: pharmacological and clinical aspects. Fundam Clin Pharmacol 6, 279-293.

Quintard, H., Borsotto, M., Veyssiere, J., Gandin, С., Labbal, F., Widmann, С., Lazdunski, M., Heurteaux, С., 2011. MLC901, a traditional Chinese medicine protects the brain against global ischemia. Neuropharmacology 61, 622-631.

Shahripour, R.В., Shamsaei, G., Pakdaman, H., Majdinasab, N., Nejad, E.M., Sajedi, S.A., Norouzi, M., Hemmati, A., Manouchehri, R.H., Shiravi, A., 2011. The effect of NeuroAid (MLC601) on cerebral blood flow velocity in subjects' post brain infarct in the middle cerebral artery territory. Eur J Intern Med 22, 509-513.

Venketasubramanian, N., Chen, C.L., Gan, R.N., Chan, B.P., Chang, H.M., Tan, S.В., Picard, D., Navarro, J.C., Baroque, A.C., 2nd, Poungvarin, N., Dormdn, G.A., Bousser, M.G., 2009. A double-blind, placebo-controlled, randomized, multicenter study to investigate CHInese Medicine Neuroaid Efficacy on Stroke recovery (CHIMES Study). Int J Stroke 4, 54-60.

Young, S.H., Zhao, Y., Koh, A., Singh, R., Chan, B.P., Chang, H.M., Venketasubramanian, N., Chen, C., 2010. Safety profile of MLC601 (Neuroaid) in acute ischemic stroke patients: A Singaporean substudy of the Chinese medicine Neuroaid efficacy on stroke recovery study. Cerebrovasc Dis. 30, 1-6.

Настоящее группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для лечения заболевания или нарушения, выбранного из группы, включающей инсульт, неврологическое расстройство или ишемию, или для нейрокондиционирования с целью профилактического индуцирования толерантности головного мозга к ишемическому, эпилептическому или иному повреждающему событию. Применение комбинации следующих четырех компонентов растительного происхождения: корня истода; корня астрагала; корневища любистока; и корня дудника китайского, в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или нарушения, выбранного из группы, включающей инсульт, неврологическое расстройство или ишемию, или для нейрокондиционирования с целью профилактического индуцирования толерантности головного мозга к ишемическому, эпилептическому или иному повреждающему событию. Набор для применения в способе лечения заболевания или нарушения, выбранного из группы, включающей инсульт, неврологическое расстройство или ишемию, или для нейрокондиционирования с целью профилактического индуцирования толерантности головного мозга к ишемическому, эпилептическому или иному повреждающему событию. Композиция для применения в лечении заболевания или нарушения, выбранного из группы, включающей инсульт, неврологическое нарушение, ишемию, или для нейрокондиционирования с целью обеспечения толерантности головного мозга к ишемическому, эпилептическому или иному повреждающему событию. Вышеописанные средства эффективны для лечения заболевания или нарушения, выбранного из группы, включающей инсульт, неврологическое расстройство или ишемию, или для нейрокондиционирования с целью профилактического индуцирования толерантности головного мозга к ишемическому, эпилептическому или иному повреждающему событию. 3 н. и 19 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 пр.

1. Применение комбинации следующих четырех компонентов растительного происхождения:

i. корня истода;

ii. корня астрагала;

iii. корневища любистока; и

iv. корня дудника китайского

в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или нарушения, выбранного из группы, включающей инсульт, неврологическое расстройство или ишемию, или для нейрокондиционирования с целью профилактического индуцирования толерантности головного мозга к ишемическому, эпилептическому или иному повреждающему событию.

2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что заболевание или нарушение представляет собой инсульт, и предназначенное для лечения пациента с риском инсульта, или для лечения пациента, недавно перенесшего инсульт, или для восстановления после инсульта.

3. Применение по п. 2, отличающееся тем, что заболевание или нарушение представляет собой инсульт головного мозга.

4. Применение по п. 2, отличающееся тем, что заболевание или нарушение представляет собой инфаркт миокарда.

5. Применение по п. 1, отличающееся тем, что лечение направлено на обеспечение нейропротективного действия или на стимулирование роста нейронов и пролиферации нейронов или стволовых клеток.

6. Применение по п. 1, отличающееся тем, что лечение направлено на нейрокондиционирование.

7. Применение по п. 1, отличающееся тем, что неврологическое нарушение представляет собой нейродегенеративное заболевание или травматическое повреждение головного мозга.

8. Набор для применения в способе лечения заболевания или нарушения, выбранного из группы, включающей инсульт, неврологическое расстройство или ишемию, или для нейрокондиционирования с целью профилактического индуцирования толерантности головного мозга к ишемическому, эпилептическому или иному повреждающему событию, где указанный набор состоит из следующих четырех компонентов растительного происхождения:

i. корня истода;

ii. корня астрагала;

iii. корневища любистока; и

iv. корня дудника китайского.

9. Набор для применения по п. 8, отличающийся тем, что заболевание или нарушение представляет собой инсульт, и предназначенный для лечения пациента с риском инсульта, или для лечения пациента, недавно перенесшего инсульт, или для восстановления после инсульта.

10. Набор для применения по п. 9, отличающийся тем, что заболевание или нарушение представляет собой инсульт головного мозга.

11. Набор для применения по п. 9, отличающийся тем, что заболевание или нарушение представляет собой инфаркт миокарда.

12. Набор для применения по п. 8, отличающийся тем, что лечение направлено на обеспечение нейропротективного действия или на стимулирование роста нейронов и пролиферации нейронов или стволовых клеток.

13. Набор для применения по п. 8, отличающийся тем, что лечение направлено на нейрокондиционирование.

14. Набор для применения по п. 8, отличающийся тем, что неврологическое нарушение представляет собой нейродегенеративное заболевание или травматическое повреждение головного мозга.

15. Композиция для применения в лечении заболевания или нарушения, выбранного из группы, включающей инсульт, неврологическое нарушение, ишемию, или для нейрокондиционирования с целью обеспечения толерантности головного мозга к ишемическому, эпилептическому или иному повреждающему событию, состоящая из комбинации следующих четырех компонентов растительного происхождения:

i. корня истода;

ii. корня астрагала;

iii. корневища любистока; и

iv. корня дудника китайского.

16. Композиция по п. 15, отличающаяся тем, что заболевание или нарушение представляет собой инсульт, и предназначенная для лечения пациента с риском инсульта, или для лечения пациента, недавно перенесшего инсульт, или для восстановления после инсульта.

17. Композиция по п. 16, отличающаяся тем, что заболевание или нарушение представляет собой инсульт головного мозга.

18. Композиция по п. 16, отличающаяся тем, что заболевание или нарушение представляет собой инфаркт миокарда.

19. Композиция по п. 15, отличающаяся тем, что лечение направлено на обеспечение нейропротективного действия или на стимулирование роста нейронов и пролиферации нейронов или стволовых клеток.

20. Композиция по п. 15, отличающаяся тем, что лечение направлено на нейрокондиционирование.

21. Композиция по п. 15, отличающаяся тем, что неврологическое нарушение представляет собой нейродегенеративное заболевание или травматическое повреждение головного мозга.

22. Композиция по любому из пп. 15-21, отличающаяся тем, что указанная композиция представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически приемлемую добавку, носитель или растворитель.